Почечная симпатическая денервация является потенциальным методом лечения гипертонии, что было доказано многими клиническими испытаниями. Данная методика денервирует свободные почечные нервы без повреждения почечной артерии. Более того, это простая, критическая, воспроизводимая и стандартизированная модель.
Продемонстрировать процедуру будет Мин Ван, лаборант из моей лаборатории. Начните с дезинфекции операционного стола 70% этанолом, затем отрегулируйте температуру грелки до 37 градусов цельсия. Перед операцией стерилизуйте все хирургические инструменты, включая микрохирургические ножницы, тонкие прямые щипцы, тонкие изогнутые щипцы, гемостатические щипцы, стерильные марли и бумагу для взвешивания при 121 градусе Цельсия в течение 30 минут.
После обезболивания 14-недельного самца мыши C57BKL/6 удалите волосы на спине бритвой, затем нанесите ветеринарную мазь на глаза, чтобы предотвратить сухость. Поместите мышь на операционный стол в спинном положении. Смахните и протрите выбритый участок повидоном-йодом, после чего три салфетки с 70% этанолом.
Используя стерильное лезвие скальпеля, сделайте сантиметровый разрез перпендикулярно хвосту за ухом над лопаткой передней ноги. Затем используйте стерильный гемостат, чтобы сделать подкожный туннель под кожей и создать карман для насоса. Аккуратно вставьте осмотический насос, наполненный ангиотензином II, в карман, обеспечивая достаточно свободного пространства для зашивания раны без растяжения кожи.
Зашить мышцу прерванными 6-0 викрильными швами и закрыть кожу прерванными 4-0 нейлоновыми швами. затем взять мазок и протереть место раны повидоном-йодом. Поместите все хирургические инструменты в стерилизатор на 10 секунд и замените стерильные перчатки между операциями.
Следите за мышью до тех пор, пока она полностью не восстановится. Внимательно следите и наблюдайте за заживлением ран, по крайней мере, два раза в день в течение первой недели и один раз в день впоследствии, включая покраснение, отек и инфекцию. Немедленно выполните рассечение, если мышь погибает во время инфузии ангиотензина II.
Измеряют артериальное давление на исходном уровне и каждую неделю после инфузии ангиотензина II методом плетизмографии хвостовой манжеты у сознательных мышей. Через неделю после инфузии ангиотензина II отбирают мышей с повышенным артериальным давлением и записывают их вес. Выбирайте животных с минимальным весом 24 грамма для операции по почечной денервации.
Далее удалите бритвой волоски на животе обезболенной мыши, затем поместите мышь на операционный стол. Держите живот вверх и зафиксируйте конечности скотчем. Продезинфицируйте кожу живота повидон-йодом, после чего три салфетки с 70% этанолом.
Сделав двухсантиметровый вентральный разрез средней линии брюшной полости, оттяните кишечник марлей, пропитанной физиологическим раствором 37 градусов Цельсия, чтобы обнажить левую почечную артерию. Осторожно, но прямо рассечение жира от почечной артерии с помощью изогнутого пинцета. Используя стерильные острые ножницы, разрежьте бумагу для взвешивания на прямоугольник того же размера, что и почечная артерия.
Вырежьте несколько кусочков бумаги для взвешивания за раз, чтобы сохранить одинаковую форму. Окуните бумагу для взвешивания в 10%-ный раствор фенолэтанола не менее чем на 30 секунд. Накройте поверхность левой почечной артерии и оберните сосуд бумагой для взвешивания на две минуты.
Используйте марлю для защиты окружающих тканей, чтобы бумага для взвешивания не касалась почек и кишечника. Повторите ту же процедуру для правой почечной артерии. После операции переместите мышцы в исходное положение и закройте брюшину 6-0 викрильными швами в прерванном виде шва, затем закройте кожу прерванными 4-0 нейлоновыми швами.
Контролируйте всех мышей до полного выздоровления. Значительное повышение систолического АД наблюдалось через неделю после инфузии ангиотензина II. Почечная симпатическая денервация, или RDN, группа ангиотензина II показала значительное снижение систолического артериального давления по сравнению с фиктивной группой ангиотензина II через 21 день после процедуры RDN.
Через две недели после процедуры RDN не наблюдалось существенных различий между фиктивными группами и группами RDN. Здесь показано окрашивание гематоксилина и эозина почечного симпатического нерва и почечной артерии. Утолщения слоя интимы почечной артерии в четырех группах не наблюдалось.
По сравнению с группой shams, фрагментированными и пикнотическими ядрами, пищеварение и отек эндоневральной ткани наблюдались в обеих группах RDN. Иммуногистохимия нервных пучков показала, что экспрессия тирозингидроксилазы была значительно снижена в группе RDN и RDN ангиотензина II по сравнению с обеими группами shams. Содержание почечного кортикального норадреналина в денервированных почках как в нормотензивной, так и в гипертонической группе было значительно снижено по сравнению с иннервируемой почкой.
Окрашивание Массона не показало заметного увеличения intima media брюшной аорты среди групп. Здесь показаны репрезентативные изображения миокарда в разных группах. Ангиотензин II инфузионно-индуцированная гипертрофия сердца была улучшена лечением RDN за счет уменьшения интерстициального фиброза и размера кардиомиоцитов.
Во время процедуры не прикасайтесь фенол к окружающим тканям, за исключением почечной артерии, потому что это может вызвать кишечную непроходимость, абдоминальную инфекцию и стеноз почечной артерии. Этот метод может установить стандартизированную модель RDN, чтобы помочь изучить механизмы, которые контролируют гипертонию. Будущие применения этого метода могут способствовать расширению путей, которые подчеркивают процесс гипертонии и гипертрофии сердца.
