Эта модель ожоговой травмы способна воспроизвести клинические ситуации, наблюдаемые у госпитализированных пациентов с ожогами после ожоговых травм, таких как иммунная дисрегуляция и бактериальные инфекции. Этот метод индуцирования ожога у крыс прост в освоении и может быть использован для разработки и оценки новых тропических препаратов для лечения ожоговых ран и инфекций. Эта модель может быть использована для оценки заживления ран, а также прогрессирования бактериальной инфекции в месте ожога.
Этот метод индукции ожога также может быть использован на мышах и других животных моделях для индукции ожогов и для изучения бактериальной инфекции ожоговых ран. Начните подготовку анестезированной крысы к ожоговой травме, перемещая ее по грелке в положении лежа. Используя аппликатор с ватным наконечником, нанесите смазку для глаз на оба глаза, чтобы предотвратить высыхание роговицы.
Побрейте спинную область крысы электрической машинкой для стрижки в большом прямоугольнике от лопаток до основания хвоста. Сотрите выпавшие волоски с выбритого участка, используя салфетку, смоченную в физиологическом растворе. Нанесите лосьон для удаления волос на выбритую область с помощью аппликатора с ватным наконечником.
Через три минуты дважды протрите участок влажной марлевой губкой, чтобы удалить лосьон и предотвратить раздражение кожи. Выключите изофлуран и удалите носовой конус, прежде чем помещать крысу в клетку для восстановления. В день эксперимента с ожоговой травмой установите температуру водяной бани на 97 градусов по Цельсию и за час до эксперимента поместите 420 граммов четырех медных стержней в водяную баню.
Как только крыса перестает реагировать на ущипывание пальцев ног на всех конечностях, поместите ее на грелку в положении лежа и введите 20 миллиграммов морфина на килограмм массы тела через внутрибрюшинный или IP-корень для обезболивания. Далее проверьте температуру водяной бани. Установите таймер и наденьте термостойкие перчатки.
Возьмите один нагретый медный стержень с водяной бани и прикоснитесь им к спинной области в течение семи секунд. Немедленно нанесите следующие три ожога один за другим, используя по одному стержню на место ожога, и произведите примерно 20% полного контактного ожога общей площади поверхности тела. После ожога реанимируйте животное, введя 0,1 миллилитра на грамм массы тела лактатного раствора Рингера через ИП-маршрут.
После этого выключите изофлуран. Снимите носовой конус и положите крысу на нагревательный коврик. В день ожога и инфекции центрифугируют культуру Pseudomonas aeruginosa или Staphylococcus aureus отдельно по 4 000 г в течение 5 минут.
Промойте гранулу обычным физиологическим раствором, прежде чем разбавлять гранулу физиологическим раствором до оптической плотности 0,1 на 600 нанометре. Разбавьте 200 микролитров бактериальной суспензии 800 микролитрами физиологического раствора и получите желаемый бактериальный инокулят 2 на 10 до 7-х колониеобразующих единиц или КОЕ на миллилитр. Через 15 минут после ожога подкожно введите 50 микролитров разбавленного инокулята бактерий рядом с областью ожога с помощью иглы 29 калибра.
Поместите крысу на грелку для восстановления. Через 15-20 минут переведите выздоровевшее животное в чистую клетку. Сразу после ожога оцените повреждение кожи морфологически с точки зрения цвета и края.
После эвтаназии проанализируйте общий анализ крови, чтобы определить влияние индукции ожога на иммунную систему хозяина. Соберите ткань усыпленной крысы в 10-миллилитровую пробирку для сбора. Гомогенизируют образцы с помощью тканевого гомогенизатора и последовательно разбавляют тканевые гомогенаты в нормальном физиологическом растворе.
Планшет 100 микролитров неразбавленного гомогената и все разведения каждого образца ткани, собранного у крыс, инфицированных P.Aeruginosa, на пластинах цетримидного агара. После инкубации планшетов в течение 16-18 часов при температуре 37 градусов Цельсия в инкубаторе подсчитайте колонии бактерий на пластинах. Умножьте их на коэффициент разбавления, чтобы получить количество КОЕ на миллилитр, и нормализуйте его с весом ткани, чтобы рассчитать программную ткань КОЕ.
Этот высоковоспроизводимый протокол привел к ожоговой травме третьей степени на всю толщину у крыс. Цвет ожоговой травмы изменился с белого на коричневый через 24 часа до 72 часов после ожога. В гистологическом анализе образцы кожи обожженных животных показали повреждение всех слоев через 24, 48 и 72 часа после ожоговой травмы, тогда как неожоговая кожа показала четкое различие слоев эпидермиса, дермы и подкожной клетчатки.
В образцах обожженной кожи наблюдалось разрушение эпидермального слоя и повреждение дермы на всю толщину подкожно-жировой клетчаткой и скелетными мышцами. В течение 24 часов после сжигания глубина ожога на всю толщину составляла более 2,61 миллиметра. При оценке бактериального клиренса бактериальное восстановление наблюдалось у всех крыс с ожоговыми травмами.
Во время инфекции P.aeruginosa PAO1 количество бактерий, извлеченных через 24 часа после заражения с кожи обожженной крысы, было меньше, чем при первоначальном посеве 1 на 10 к 6-й КОЕ. Однако он увеличился через 48 и 72 часа после заражения. При инфекции S.aureus, ATC25923, увеличение на 2 log 10 наблюдалось во всех точках времени в коже по сравнению с исходным инокулятом, что позволяет предположить, что установление инфекции S.aureus произошло из-за активной репликации в тканях.
Подкожная клетчатка и мышцы показали более высокую бактериальную нагрузку, чем легкие и селезенка. Данные показали, что у обожженных крыс развилась системная инфекция через 24 часа после прививки P.aeruginosa и через 48 часов после инокуляции S.aureus. Полностью удалите волосы на спине крысы и поддерживайте температуру и время индукции ожога, как указано в протоколе.
Оставшиеся волосы и разная температура медных стержней могут повлиять на качество ожога. Модель ожога крыс может быть изучена для оценки новых местных терапевтических средств для лечения инфекций ожоговых ран и для оценки различных раневых повязок.
