이 화상 손상 모델은 면역 조절 장애 및 세균 감염과 같은 화상 부상 후 입원한 화상 환자에서 관찰된 임상 상황을 요약할 수 있습니다. 쥐에서 화상을 유도하는이 방법은 배우기 쉽고 화상 상처 및 감염에 대한 새로운 열대 약물의 개발 및 평가에 사용할 수 있습니다. 이 모델은 화상 부위에서 상처 치유와 세균 감염의 진행을 평가하는 데 사용할 수 있습니다.
이 화상 유도 방법은 화상 유도 및 화상 상처의 세균 감염을 연구하기 위해 마우스 및 기타 동물 모델에서도 사용할 수 있습니다. 화상 부상에 대해 마취 된 쥐를 엎드린 자세로 가열 패드 위로 움직여 준비하십시오. 끝이 솜이 있는 어플리케이터를 사용하여 양쪽 눈에 눈 윤활제를 바르면 각막이 건조해지는 것을 방지할 수 있습니다.
어깨 뼈에서 꼬리 밑 부분까지 큰 직사각형의 전기 클리퍼로 쥐의 등 부위를 면도하십시오. 식염수에 적신 티슈를 사용하여 면도한 부위의 느슨한 털을 닦아냅니다. 면봉 어플리케이터를 사용하여 면도한 부위에 제모 로션을 바릅니다.
3 분 후 젖은 거즈 스폰지로 해당 부위를 두 번 닦아 로션을 제거하고 피부 자극을 예방하십시오. 쥐를 회복 케이지에 넣기 전에 이소플루란을 끄고 노즈 콘을 제거하십시오. 화상 실험 당일, 수조 온도를 섭씨 97도로 설정하고 실험 1시간 전에 420g의 구리 막대 4개를 수조에 넣습니다.
쥐가 모든 팔다리의 발가락 꼬집음에 반응하지 않으면 엎드린 자세로 가열 패드에 올려 놓고 통증 관리를 위해 복강 내 또는 IP 뿌리를 통해 체중 kg 당 20mg의 모르핀을 주사합니다. 다음으로 수조 온도를 확인하십시오. 타이머를 설정하고 내열 장갑을 착용하십시오.
수조에서 가열 된 구리 막대 하나를 가져 와서 등쪽 부위에 7 초 동안 만지십시오. 화상 부위당 하나의 막대를 사용하여 다음 세 번의 화상을 차례로 즉시 적용하고 약 20%의 전체 신체 표면적 완전 접촉 화상을 생성합니다. 화상 후, IP 경로를 통해 젖산 링거 용액의 체중 그램 당 0.1 밀리리터를 주입하여 동물을 소생시킵니다.
완료되면 이소플루란을 끕니다. 노즈 콘을 제거하고 열 매트 위에 쥐를 놓습니다. 화상 및 감염 당일에, 녹농균 또는 황색포도상구균 배양액을 별도로 4, 000 배 g에서 5 분 동안 원심 분리한다.
식염수를 사용하여 펠릿을 600 나노미터에서 0.1 광학 밀도로 희석하기 전에 펠릿을 일반 식염수로 세척합니다. 200 마이크로 리터의 박테리아 현탁액을 800 마이크로 리터의 식염수로 희석하고 2 x 10의 원하는 박테리아 접종 물을 7 번째 콜로니 형성 단위 또는 밀리리터 당 CFU로 얻습니다. 화상 15분 후, 29 게이지 바늘을 사용하여 화상 부위 근처에 희석된 박테리아 접종물 50마이크로리터를 피하 주사합니다.
회복을 위해 가열 패드에 쥐를 놓습니다. 15 분에서 20 분 후에 회수 된 동물을 깨끗한 케이지로 옮깁니다. 화상 손상 직후, 피부손상을 형태학적으로 색과 여백으로 평가한다.
안락사 후 전체 혈구 수를 분석하여 숙주 면역 체계에 대한 화상 유도 효과를 확인합니다. 안락사된 쥐의 조직을 10밀리리터 수집 튜브에 수집합니다. 조직 균질화기를 사용하여 샘플을 균질화하고 조직 균질액을 생리 식염수로 연속적으로 희석합니다.
희석되지 않은 균질액 100 마이크로리터 및 녹농균에 감염된 래트로부터 채취한 각 조직 샘플의 모든 희석액을 세트리미드 한천 플레이트에 플레이트한다. 인큐베이터에서 섭씨 37도에서 16-18 시간 동안 플레이트를 배양 한 후 플레이트의 박테리아 콜로니를 세십시오. 희석 비율을 곱하여 밀리리터 당 CFU 수를 얻고 조직의 무게로 정규화하여 CFU 프로그램 조직을 계산합니다.
이 재현성이 높은 프로토콜은 쥐에서 3도 전층 화상 손상을 초래했습니다. 화상 후 24 시간에서 72 시간 만에 화상의 색이 흰색에서 갈색으로 변했습니다. 조직학적 분석에서, 화상을 입은 동물의 피부 샘플은 화상 후 24, 48 및 72시간에 모든 층에 걸쳐 손상을 보인 반면, 화상을 입지 않은 피부는 표피, 진피 및 피하 조직층의 명확한 구별을 보였다.
화상을 입은 피부 샘플에서 표피층의 파괴와 피하 지방 및 골격근에 의한 진피의 전체 두께 손상이 관찰되었습니다. 연소 후 24시간 동안 전층 연소의 깊이는 2.61mm 이상이었습니다. 박테리아 제거 평가에서, 박테리아 회복은 모든 화상 손상 래트에서 관찰되었다.
녹농균 PAO1 감염 동안, 화상을 입은 쥐의 피부로부터 감염 후 24시간 후에 회복된 박테리아의 수는 초기 접종 1 내지 10 내지 6 CFU보다 적었다. 그러나 감염 후 48 시간과 72 시간이 증가했습니다. S.aureus에서, ATC25923 감염에서, 초기 접종물에 비해 피부에서 2 log 10 증가가 관찰되었으며, 이는 S.aureus 감염의 확립이 조직에서의 활성 복제로 인해 발생했음을 시사한다.
피하 조직과 근육은 폐와 비장보다 더 높은 박테리아 부하를 보였다. 데이터에 따르면 화상을 입은 쥐는 녹농균 접종 후 24시간, 황색포도상 접종 후 48시간 후에 전신 감염이 발생했습니다. 쥐 등쪽의 털을 완전히 제거하고 프로토콜에 언급 된대로 온도와 화상 유도 시간을 유지하십시오.
남은 머리카락과 구리 막대의 온도가 다르면 화상의 질에 영향을 줄 수 있습니다. 쥐 화상 모델은 화상 상처 감염의 치료 및 다양한 상처 드레싱을 평가하기 위한 새로운 국소 치료제를 평가하기 위해 탐색될 수 있습니다.
