Общая цель этой процедуры заключается в создании воспроизводимой модели мурина полной толщины ожоговой раны реконструированы с аллергической пересадки кожи. Кожа делится на два компонента эпидермиса и дермы. Под дермой находится подкожный жир, который покрывает кости, сухожилия или фасции.
Классификация толщины ожога часто используется для определения степени глубины ожоговой травмы. Поверхностные ожоги включают только эпидермис, поверхностные частичные ожоги толщины включают эпидермис и только позорный столб или верхнюю дерму. Глубокие кожные ожоги частичной толщины включают эпидермис и дерму, ретикулярную дерму, содержащую кровеносные сосуды, волосяные фолликулы, масло и потовые железы.
Ожоги полной толщины характеризуются очевидным участием всей толщины кожи и, возможно, подкожной ткани. Этот тип раны может зажить только путем сокращения или с пересадкой кожи. Общая цель этой процедуры состояла в том, чтобы создать полную толщину ожоговой раны и реконструированы с полной толщиной кожи трансплантата.
Это было достигнуто путем нанесения кругового латунного блока, разогретого до 80 градусов по Цельсию и наносимого на кожу рта в течение 20 секунд. Некротическая ткань была вырезана хирургическим путем через 24 часа после ожога. Полная толщина кожи трансплантатов, собранных из хвоста мыши-донора были заложены над вырезанной ожоговые раны.
Прививки затем обеспечены хирургическим клеем. Как доноры, так и животные-реципиенты исходить от того же инбредного штамма мышей. Биопсия мышей используются в ходе исследования.
Тем не менее, также штамм мышей также могут быть использованы. Это включает в себя иммунокомпетентных лысых мышей, которые особенно полезны в исследованиях заживления ран. Как удаление волос и связанных с ним воспаление бродяга сделал и отрастание волос не мешает цифровой анализ изображения, при измерении области и других видов микроскопической оценки раны.
Это особенно верно в моделях инфекции, где наша подвеска био-организма и бактерий применяется к этому ваше лицо раны и био-организма сигнал измеряется, чтобы указать скорость роста бактерий. Тепловой ожог устройство состоит из изготовленного на заказ кругового латунного блока диаметром 10 миллиметров, разогретого до 80 градусов по Цельсию. Температура латунного блока проверяется с помощью инфракрасной тепловизионной камеры.
Чтобы создать полную толщину ожоговой раны, латунный блок применяется в течение 20 секунд с использованием постоянного давления 0,15 Ньютонов, который контролируется цифровым манометром. Мультимодальная анальгезия является наилучшей практикой для управления болью в инвазивных процедурах исследования животных. Идеальный режим администрирования анальгетики включает упреждающее или упреждающее обезболивающее управление.
Парацетамол по три миллиграмма за прием пищи был добавлен в питьевую воду и поставлялся за 12 часов до и в течение 72 часов после процедуры. Бупренорфин по 0,05 микрограмма на грамм вводили подкожно за 30 минут до процедуры и каждые шесть часов в течение первых 72 часов после процедуры. Лидокаин по пять миллиграммов на килограмм вводился подкожно вокруг спины каждой мыши за 15 минут до процедуры, общий объем 200 микролитров лактации Ringers Solution при 5%декстрозу вводили подкожно перед процедурой, и через шесть часов после процедуры для предотвращения обезвоживания.
Мыши были нисертид с помощью внутриперитонеальной инъекции ксилазина на 10 миллиграммов на килограмм, и кетамин на 100 миллиграммов на килограмм. Анестетическая глубина может быть оценена через щепотку ног. Анестезия отменяет мигающий рефлекс, предотвращая освежение слезоточивой пленки, необходимой для поддержания гидратации роговицы, и глаз, постоянно подвергаемый воздействию воздуха, быстро обезвоживается, на глазах наносится смазка для поддержания гидратации роговицы.
Дорсум каждой мыши обрезается и депиляции крем применяется в течение одной минуты, чтобы удалить волосы. Нисертидное животное расположено на плоском столе, а тепловой ожог создается путем нанесения кругового латунного блока, разогретого до 80 градусов по Цельсию в течение 20 секунд. Мышь, помещается обратно на грелку, чтобы держать его в тепле и предотвратить переохлаждение, частый побочный эффект анестезии.
После выздоровления от анестезии мышь может быть помещена в индивидуальную клетку. Через 24 часа после индукции ожоговой травмы. Некротическая ткань хирургически возбуждает.
Четыре болезни кожи трансплантата собирают из усыпания донорской мыши хвост. Хотя другая сторона так есть под хвостом также может быть с помощью мыши модели. Таким образом, степень реакции человека может варьироваться в зависимости от происхождения донорского трансплантата кожи.
Например, кожа уха и спины больше не в продаже по сравнению с хвостовой кожей и спровоцировать более надежную реакцию человека, что может привести к отторжению трансплантата. Толщина трансплантатов кожи также может быть приняты во внимание, поскольку это может играть определяющую роль в успешном прививке кожи принять. Безопасная кожа, например, со спины, имеет более высокую вероятность отказа из-за более высоких метаболических требований ткани.
Следовательно, сообщил успех аллергенных прививки кожи для спины кожи ниже, чем сообщил успех для трансплантата кожи хвоста. Анестезия была вызвана вдыханием 5%Isoflurane в 100%кислорода при скорости потока четыре литра в минуту, а затем поддержание анестезии с использованием 2%Isoflurane на два литра в минуту для обслуживания во время операции. Бупренорфин вводили при инициировании процедуры по обеспечению послеоперационной анальгезии.
Ожоговые раны были подготовлены с Povidone-йод, а затем 70% алкоголя. Некротический ожог выкачивается ножницами, чтобы удалить круговой дефект кожи полной толщины, панникулус карнозный слой гиподермиса удаляется для создания стабильной кровати получателя трансплантата кожи некоторые авторы предлагают сохранить панникулус карнозный слой гиподермиса, как это считается необходимым для реваскуляризации трансплантата. Однако, в этом случае, мобильность этого слоя и в результате потенциальных сил стрижки между трансплантата и получателя кровать может стать проблематичным.
Удаление слоя панникула карноса не отрицательно сказалось на успехе процедуры прививки. Прививки полной толщины, собирают из хвоста усыпанной донорской мыши. Хвост продольно наклонен, что позволяет отделить кожу от лежащей в основе мягкой ткани.
Хвост кожи затем распространяется на чашку Петри заполнены стерильными, нормальный солевой раствор и нарезать круговыми пятнами с помощью линейки. Затем трансплантаты переносятся в чашку Петри со стерильной марлей, пропитанной нормальным солевым раствором, и хранятся четыре градуса до готовности к прививке. Прививки затем обеспечены к кровати получателя с хирургическим клеем.
Зазоры между трансплантатом кожи дарителя и кроватью раны реципиента нежно нажимают для того чтобы выровнять края кожи. Раны одеты в инертную парафиновую марлю и клей вторичной повязки. Цифровые фотографии, привитых ран были сделаны в один, три и семь дней после ожога.
При вскрытии спинные ожоговые раны были хирургически вырезаны в фасции, раны были разделены наполовину зафиксированы в 10%буферном формалине и обработаны для гистологии и иммуногистохимии. Пересадки кожи обеспечивают эшафот системы для клеточной миграции. Успешная интеграция трансплантата зависит от эффективных фибробластов и миграции кератиноцитов из реципиентной ставки в донорский трансплантат, который медленно деградирует и заменяется клетками, способными производить внеклеточную матрицу.
Гистологическое сечение массовых ран подвергалось гематоксилину и окрашиваниям эозина. Репрезентативные изображения гематоксилина и эозинных окрашенных участков ран показали, что длина вблизи эпидермиса, выделенного желтым цветом, значительно увеличивается на седьмой день, по сравнению с тремя днями после ожога. Для оценки скорости повторной эпителилизации, площадь раны, которая была покрыта вблизи эпидермиса была выражена в процентах от всей раны.
Внеклеточная матрица является неклеточным компонентом кожи, который обеспечивает строительные леса для клеточных компонентов. Внеклеточная матрица состоит из волокнистых белков, таких как коллаген и фибронектин. Эти молекулы повышают зрелость ран и поддерживать структурную целостность кожи полуквантимической иммуногистохимии для коллагена типа один, и гистологические пятна, такие как трихром Мейсона могут быть использованы для оказания помощи внеклеточной целостности матрицы от фото микрографа.
Более сложные методы, такие как микроскопия второго гармонического поколения, стали мощным инструментом количественного анализа структуры коллагена. Пересадка кожи Murine обеспечивает отличную потенциальную доклиналогическую модель для исследования интеграции графиков в сторону получателя. Это исследование демонстрирует надежный метод успешного выполнения пересадки кожи в мышиной модели, а также гистологическую оценку заживления ран.
