Генерация крыс с гипопаратиреоидами с помощью паратиреоидэктомии с помощью углеродных наночастиц

Общая цель этого протокола состоит в том, чтобы создать модель приобретенного гипопаратиреоза у крыс, которая легко устанавливается, стабильна по характеру и безвредна для щитовидной железы. Основным преимуществом этой модели является точное удаление паращитовидных желез с помощью углеродных наночастиц. Мы надеемся, что модель поможет решить несколько вопросов в области гипопаратиреоза.

Например, предоперационное использование кальция и витамина D для снижения риска гипокальциемии после тиреоидэктомии. Этот метод может дать представление о том, как аналоги ПТГ влияют на обновление костной ткани и как аналоги ПТГ влияют на организм при длительном использовании. Тем, кто выполняет эту технику впервые, может быть трудно манипулировать под стереомикроскопом.

Некоторая практика под стереомикроскопом может быть полезной. Для начала поместите анестезированную крысу в положение лежа на спине и сбрейте шерсть вентральной области шеи. Сделав разрез, как описано в рукописи, найдите доли щитовидной железы.

Используя шприц объемом 10 микролитров, оснащенный скошенной иглой 30-го калибра, введите один микролитр суспензии углеродных наночастиц в мезиальную часть мембраны щитовидной железы. Через пять минут оросите область солевым раствором, чтобы удалить лишнюю взвесь. Убедитесь, что щитовидная железа почернела, и понаблюдайте за неокрашенной паращитовидной железой.

Разрежьте неокрашенные паращитовидные железы с помощью микрохирургических щипцов и ножниц, а затем закройте разрез прерванным горизонтальным матрасным швом. После операции положите крыс на термостатическое электрическое одеяло при температуре 37 градусов по Цельсию, чтобы поддерживать температуру их тела. Через семь дней возьмите 10 микролитров крови, используя хвостовую вену.

Измерьте уровень кальция в сыворотке, неорганического фосфора в сыворотке крови и паратиреоидного гормона в сыворотке крови с помощью коммерческих наборов. Крысы, перенесшие паратиреоидэктомию, показали стабильную гипокальциемию и гиперфосфатемию в течение периода наблюдения в течение четырех недель. Сывороточный паратиреоидный гормон не был обнаружен у крыс, перенесших паратиреоидэктомию, через семь дней после операции.

Сывороточная мочевина и креатинин были сопоставимы между группами фиктивной и паратиреоидэктомии через семь дней после операции. Снижение уровня ионов кальция и неорганических фосфатов в моче наблюдалось через две недели после операции. Существенных различий в массе тела не наблюдалось между группами паратиреоидэктомии и фиктивной пластики в течение 28 дней.

Сывороточный С-телопептид значительно снизился у крыс с паратиреоидэктомией. Существенных различий в уровнях остеокальцина в сыворотке крови не выявлено. Тем не менее, инъекция суспензии наночастиц является наиболее важной вещью, и успешная инъекция имеет решающее значение для идентификации и настоящего удаления паращитовидных желез.

Другие методы включают хирургию под контролем флуоресценции, инъекцию дифтерийного токсина трансгенным мышам PTHcre-iDTR и стерильную паратиреоидэктомию, которая может помочь ответить на вопросы в области гипертиреоза.