Generazione di ratti ipoparatiroidei tramite paratiroidectomia assistita da nanoparticelle di carbonio

L'obiettivo generale di questo protocollo è quello di generare un modello di ratto di ipoparatiroidismo acquisito che sia facile da stabilire, stabile nel carattere e innocuo per le ghiandole tiroidee. Il principale vantaggio di questo modello è la rimozione precisa delle ghiandole paratiroidi con l'assistenza di nanoparticelle di carbonio. Speriamo che il modello possa aiutare a risolvere alcune domande nel campo dell'ipoparatiroidismo.

Ad esempio, l'uso preoperatorio di calcio e vitamina D per ridurre il rischio di ipocalcemia post-tiroidectomia. Questo metodo può fornire informazioni su come il turnover osseo è influenzato dagli analoghi del PTH e su come gli analoghi del PTH influenzano il corpo nell'uso a lungo termine. Coloro che eseguono questa tecnica per la prima volta possono avere difficoltà a micro-manipolare al microscopio stereo.

Un po 'di pratica al microscopio stereo può essere utile. Per iniziare, posizionare il ratto anestetizzato in posizione supina e radere la pelliccia della regione ventrale del collo. Dopo aver fatto un'incisione come descritto nel manoscritto, individuare i lobi della ghiandola tiroidea.

Utilizzando una siringa da 10 microlitri dotata di un ago smussato da 30 gauge, iniettare un microlitro di sospensione di nanoparticelle di carbonio nella porzione mesiale della membrana della ghiandola tiroidea. Dopo cinque minuti, irrigare la regione con soluzione salina per pulire eventuali sospensioni extra. Assicurarsi che le ghiandole tiroidee siano diventate nere e osservare la ghiandola paratiroidea non macchiata.

Tagliare le ghiandole paratiroidi non macchiate usando un paio di pinze e forbici da microchirurgia, quindi chiudere l'incisione con una sutura orizzontale del materasso interrotta. Dopo l'intervento chirurgico, posizionare i ratti su una coperta elettrica termostatica a 37 gradi Celsius per mantenere la temperatura corporea. Dopo sette giorni, prelevare 10 microlitri di sangue usando la vena della coda.

Misurare il calcio sierico, il fosforo inorganico sierico e l'ormone paratiroideo sierico utilizzando kit commerciali. I ratti paratiroidectomia hanno mostrato ipocalcemia e iperfosfatemia stabili nel periodo di osservazione di quattro settimane. L'ormone paratiroideo sierico non è stato rilevato nei ratti paratiroidectomia sette giorni dopo l'operazione.

L'urea sierica e la creatinina erano comparabili tra i gruppi sham e paratiroidectomia dopo sette giorni dopo l'operazione. Riduzione dei livelli urinari di ioni calcio e fosfato inorganico sono stati osservati due settimane dopo l'operazione. Non sono state osservate differenze significative nel peso corporeo tra i gruppi paratiroidectomia e sham nell'arco di 28 giorni.

Il C-telopeptide sierico è diminuito significativamente nei ratti paratiroidectomia. Non ci sono state differenze significative nei livelli sierici di osteocalcina. Tuttavia, l'iniezione di sospensione di nanoparticelle è la cosa più importante e un'iniezione di successo è fondamentale per l'identificazione e la rimozione presente delle ghiandole paratiroidi.

Altri metodi includono la chirurgia guidata dalla fluorescenza, l'iniezione di tossina difterica di topi transgenici PTHcre-iDTR e la paratiroidectomia sterile che potrebbe aiutare a rispondere alle domande nel campo dell'ipertiroidismo.