Этот протокол помогает создать модели ATC и HNSCC PDX, которые лучше отражают гетерогенность опухоли, молекулярное разнообразие и прогнозируют клинические результаты. Техника проста в эксплуатации, имеет высокий уровень успеха, а также может подходить для других моделей PDX. Этот метод может быть распространен на скрининг чувствительности к противораковым препаратам, чтобы направлять персонализированное лечение больного раком.
Человек, который никогда не выполнял эту технику, может столкнуться с некоторыми трудностями, и рекомендуется обращать внимание на каждую деталь схемы. После получения образцов опухолей ATC и HNSCC в 50-миллиметровой центрифужной пробирке, содержащей стерильный раствор HTK, продезинфицируйте их 75%-ным спиртом. С помощью стерилизованных глазных щипцов перенесите опухолевую ткань в шестисантиметровую чашку Петри, наполненную физиологическим раствором, и разрежьте их на мелкие кусочки с помощью лезвия.
Затем переложите кусочки в новую шестисантиметровую чашку Петри, содержащую физиологический раствор, и оберните ее герметизирующей пленкой. Поместите завернутую посуду в ящик для льда, отнесите ее в комнату для животных, свободных от патогенов, с ножницами, щипцами и прививочными иглами. После обезболивания мыши удалите волосы на правой боковой грудной клетке и продезинфицируйте область 75%-ным спиртом.
С помощью ножниц сделайте двухмиллиметровый разрез посередине правой боковой грудной клетки. С помощью щипцов возьмите ткань из чашки Петри и поместите ее в иглу троакара. Зажмите мышь и подтяните кожу в месте прокола.
Вставьте троакар с опухолевым кусочком в разрез в подкожное пространство, затем переместите в заднюю часть плеча и надавите на сердечник троакара. Чтобы сохранить оставшуюся ткань с помощью стерильной марли, удалите физиологический раствор с поверхности опухоли, убедившись, что она не слишком влажная. Поместите от четырех до шести кусочков ткани в двухмиллилитровую пробирку для криоконсервации клеток и добавьте в пробирку один миллилитр раствора для криоконсервации.
Затем поместите трубку в градиентную охлаждающую камеру и заморозьте ее при температуре минус 80 градусов по Цельсию на ночь. Наконец, переведите его на жидкий азот. Для реанимации опухолей модели PDX используйте штангенциркуль для измерения длины и ширины подкожной опухоли один раз в неделю.
Рассчитайте объем опухоли и нарисуйте кривую роста опухоли. Затем с помощью ножниц разрежьте усыпленную кожу мыши, окружающую опухоль. Удалите опухоль щипцами и поместите ее в чашку Петри.
Выполняйте трансплантацию опухоли до пятого поколения мышей, как было показано ранее. Выберите опухолевую ткань мыши модели ATC PDX поколения P5. Разрежьте его на два-четыре кубических миллиметра.
Прививайте эти кусочки подкожно, как было показано ранее, в правую спину обнаженной четырех-шестинедельной самки мыши BALB/c. Когда опухоль вырастет на 50-150 кубических миллиметров, разделите мышей на три группы. После введения ленватиниба, цисплатина и контроля два раза в неделю измерьте массу тела мыши.
Кроме того, измерьте объем опухоли. Корреляционный анализ показал, что успешность построения модели ATC PDX не зависела от возраста, пола, диаметра опухоли, степени опухоли и дифференцировки. Скорость захвата опухоли в построении модели HNSCC PDX показала, что степень дифференцировки была связана с вероятностью успеха модели, в то время как другие параметры не влияли на скорость захвата опухоли.
Кривые роста опухоли для каждой модели PDX показали, что образцы ATC стабильно передавались поколению P3, в то время как в двух случаях образцы HNSCC не смогли сформировать опухоли после перехода к поколению P1. Скорость роста опухоли поколения P0 для большинства моделей PDX была относительно медленнее, чем для более поздних пассажей, вероятно, из-за адаптации микроокружения мыши. Гистопатологическое исследование показало, что опухоли PDX сохраняют морфологические характеристики первичных опухолей.
Лечение ленватинибом значительно ингибировало рост опухоли и показало меньшую массу опухоли в модели ATC PDX по сравнению с контрольной группой. Кроме того, у мышей, получавших ленватиниб, не наблюдалось заметных изменений в общем весе. Чрезмерная дозировка цисплатина приводила к значительной токсичности, о чем свидетельствует потеря веса и даже смерть.
Свежие опухоли необходимо несколько раз промыть обычным физиологическим раствором, прежде чем разрезать на кусочки. Смешивание биопсийных образцов опухоли с ними и их инокуляция, скорее всего, приведет к образованию опухоли. Эта модель может быть использована для исследования биологии опухоли, скрининга лекарств, персонализированной терапии.
