Наш протокол предлагает новый неинвазивный метод доставки ЛПС из трахеи в легкие, более точно. Люди, которые пробуют этот метод впервые, должны приложить много усилий, чтобы найти положение трахеи. Чтобы подготовить платформу для интубации, пропустите веревку через два отверстия и привяжите ее концы к небольшим выступам в верхней части стояка.
Затем прикрепите две резинки к каждому концу скрепки и прикрепите их к задней части стояка. Наконец, закрепите стояк к основанию под углом 90 градусов. Соберите канюлю на ручку канюли и включите свет ручки.
Затем продезинфицируйте небольшие хирургические щипцы и пипетку Пастера, используя 70% спирт. Чтобы приготовить раствор тестового соединения, добавьте три миллиграмма липополисахарида или ЛПС в один миллилитр pH 7,2 PBS. Затем растворяют 10 миллиграммов пентобарбитала натрия в одном миллилитре физиологического раствора и фильтруют раствор с помощью шприцевого фильтра размером 0,45 микрометра.
Поместите анестезированную мышь на платформу для интубации. Затем зафиксируйте верхние передние зубы струной, а две передние ноги резинками. С помощью пинцета вытащите язык и удерживайте его.
Медленно протолкните канюлю вдоль рта к нижнечелюстному надгортаннику. Найдите трахею с помощью света ручки канюли и медленно вставьте в нее канюлю. Затем извлеките интубационную ручку, оставив канюлю внутри.
Вставьте пипетку Пастера в соединение канюли и нажмите на головку. После успешной эндотрахеальной интубации с помощью микрошприца с плоской головкой закапывают через канюлю приготовленный раствор ЛПС в дозе три миллиграмма на килограмм. Когда закончите, выньте микрошприц и канюлю.
Извлеките мышь из платформы интубации и поместите ее в отдельную клетку для восстановления. Наблюдайте за состоянием дыхания мыши до тех пор, пока она не придет в себя и не придет в сознание. Через 12 часов после инстилляции трахеи ЛПС оценивали экспрессию воспалительного цитокина, ФНО-альфа и соотношение массы сухого и влажного легких и сравнивали с другими методами инстилляции.
Уровни ФНО-альфа в сыворотке крови в группе неинвазивной орофарингеальной интубации были значительно увеличены по сравнению с холостой контрольной группой. Соотношение сухого и влажного веса легких также было увеличено, достигнув того же уровня, что и в группе хирургической интубации трахеи. Важно не почесать трахею в процессе нахождения места расположения трахеи.
Этот метод также может быть использован для доставки других лекарств, которые должны достичь легких неинвазивным способом.
