マウスにおける非侵襲的気管内リポ多糖点滴

私たちのプロトコルは、気管から肺へのLPSの新しい非侵襲的送達方法をより正確に提案します。この方法を初めて試す人は、気管の位置を見つけることに多くの努力を払う必要があります。挿管プラットフォームを準備するには、ひもを2つの穴に通し、その端をライザー上部の小さな突起に結び付けます。

次に、クリップの両端に2本の輪ゴムを取り付け、ライザーの背面にテープで留めます。最後に、ライザーをベースに90度の角度で固定します。カニューレをカニューレペンに組み立て、ペンのライトをオンにします。

次に、70%アルコールを使用して小型外科用鉗子とパスツールピペットを消毒します。試験化合物溶液を調製するには、1ミリリットルのpH 7.2 PBSに3ミリグラムのリポ多糖(LPS)を加えます。次に、10ミリグラムのペントバルビタールナトリウムを1ミリリットルの生理食塩水に溶解し、0.45マイクロメートルのシリンジフィルターを使用して溶液をろ過します。

麻酔をかけたマウスを挿管プラットフォームに置きます。次に、上部の前歯をひもで固定し、2つの前足を輪ゴムで固定します。ピンセットを使用して、舌を引き抜いて保持します。

カニューレを口に沿って下顎喉頭蓋までゆっくりと押します。カニューレペンのライトで気管の位置を確認し、ゆっくりとカニューレを挿入します。次に、挿管ペンを引き出し、カニューレを内側に残します。

パスツールピペットをカニューレジョイントに挿入し、ヘッドを押します。気管内挿管が成功した後、フラットヘッドマイクロシリンジを使用して、調製したLPS溶液をカニューレを通してキログラムあたり3ミリグラムの用量で注入します。終了したら、マイクロシリンジとカニューレを取り出します。

挿管プラットフォームからマウスを取り外し、別のケージに入れて回復します。マウスが回復して意識を取り戻すまで、マウスの呼吸状態を観察します。LPS気管点眼後12時間で、炎症性サイトカイン、TNF-α、および肺乾湿重量比の発現を評価し、他の点眼法と比較した。

非侵襲的中咽頭挿管群の血清TNF-αレベルは、ブランク対照群と比較して有意に増加した。肺乾湿重量比も増加し、外科的気管挿管群と同じレベルに達した。気管の位置を見つける過程で気管を傷つけないことが重要です。

この技術は、非侵襲的な方法で肺に到達する必要がある他の薬物を送達するためにも使用できます。