Интратекальная катетеризация широко применяется в экспериментах на животных, особенно на нейропатических болях. Тем не менее, традиционные методы все еще имеют несколько ограничений. Несмотря на то, что некоторые исследователи пытались усовершенствовать традиционные методы, имеющиеся методы все еще нуждаются в модификации.
В данной работе мы представляем модифицированный метод интратекальной катетеризации у крыс, который представляет собой простой, удобный и надежный подход к повторному интратекальному введению лекарственных препаратов. Подготовьте трубку из ПЭ10 длиной 15 сантиметров. Вставьте проволоку из нержавеющей стали длиной 20 сантиметров с двумя полированными концами в трубку PE10 в качестве опоры и отметьте трубку в двух сантиметрах от одного конца.
Разрежьте острый кончик иглы 22G и заклейте дистальный конец парой щипцов. Разрежьте эпидуральный катетер на фрагменты по одному сантиметру. Затем вставьте эти фрагменты в иглу 22G без острых наконечников и запечатайте дистальный конец парой нагретых прямых щипцов.
Этот аппарат назывался трубчатым уплотнительным колпачком. Приготовьте ножницами противоаллергическую ленту размером 0,3 сантиметра умножить на 0,5 сантиметра. Подготовьте инструменты для интратекальной катетеризации, которая была стерилизована перед операцией.
В комплекте зубчатые щипцы, ножницы, газональный аппарат, рукоятка скальпеля и лезвия No 10. Простерилизуйте трубку PE10 и направляющую проволоку этанолом в течение примерно двух часов. Обезболивайте крыс 3%-ным изофлураном со скоростью потока три литра в минуту.
Положите крысу на операционный стол и подрежьте заднюю лапу парой щипцов. Отсутствие движения заднего полюса в ответ на стимуляцию подтвердило успешную анестезию. Адекватную и анальгезию вводили путем внутримышечного введения одного миллиграмм на килограмм мелоксикама перед интратекальной катетеризацией.
Удаляет волосы на поясничном отделе позвоночника, в области спины и в области между двумя ушами с помощью бритвы. Поместите центрифужную трубку под брюшную полость крысы на стыке талии. Трижды простерилизовать места операций раствором повидонейода и раствором этанола.
Накройте крысу асептической повязкой и обнажите места проведения операций. А затем умыться обычным физиологическим раствором перед операцией. Определите расположение межпозвонкового пространства между L5 и L6, локализовав спинномозговой отросток L6 в средней точке между левым и правым двусторонними гребнями подвздошной кости.
Зафиксируйте кожу большим и указательным пальцами левой руки, а затем сделайте разрез по средней линии длиной три-четыре сантиметра чуть выше остистого отростка между L4 и S1. Тупо отделите подкожные ткани ножницами. Снова найдите межпозвоночное пространство между L5 и L6. Зажмите и приподнимите спинной отросток L5 с помощью пары зубчатых щипцов, чтобы расширить межпозвоночное пространство.
Затем тупо отделяет мышцы вокруг тела позвонка с помощью ножниц так, чтобы верхняя часть спинного отростка L6 была полностью обнажена. Когда спинной отросток L5 будет поднят с помощью пары зубчатых щипцов, а межпозвоночное пространство будет расширено еще одной парой щипцов, очистите межпозвоночное пространство от L5 до шести ватным тампоном тампоном до тех пор, пока перевернутая V-образная область не будет полностью обнажена. Проколите позвоночник иглой 23G в области перевернутой V, прямо под верхней частью спинного отростка L6.
Осторожно вставьте трубку PE10, содержащую проволоку из нержавеющей стали, в спинномозговой канал в месте прокола, наклонив его на 30 градусов к хвосту. Угол введения регулировался до тех пор, пока трубка PE10 не могла быть успешно введена без какого-либо сопротивления. Когда отмеченный участок трубки PE10 достигает задней мышцы, катетеризация прекращается.
Медленно извлекает нержавеющую проволоку из трубки ПЭ10, затем подсоединяет трубку ПЭ10 к шприцу, через который вводится 20 микролитров обычного физиологического раствора. После извлечения шприца физиологический раствор мог непрерывно вытекать из трубки PE10, что указывает на успешное введение трубки PE10 в субарахноидальное пространство. Как только будет подтверждено, что PE10 two свободен, сшите мышцы с одной стороны тела позвонка швом четыре нуля и завяжите узел.
Затем завяжите шов вокруг трубки PE10 и завяжите еще один узел. Не режьте шов и не накладывайте шов на мышцы с другой стороны. Снова завяжите шов вокруг трубки PE10.
Сделайте третий узел и разрежьте шов. Сделайте разрез длиной 0,5 сантиметра на один сантиметр чуть ниже середины между ушами. Тупо отделите подкожные ткани ножницами.
И вставьте металлическую зондовую трубку через разрез в сторону хвоста. До тех пор, пока кончик не будет виден в поясничном разрезе. Вставьте дистальный конец трубки PE10 в зондовую трубку до тех пор, пока трубка PE10 не выйдет из другого конца зондовой трубки.
Затем аккуратно вынимает зонд. Когда подтвердится, что трубка PE10 снова свободна, зашите оставшиеся мышцы вокруг поясничного разреза швом с четырьмя нулями. Завяжите шов вокруг трубки PE10 и завяжите еще один узел.
Снова зафиксируйте трубку PE10. Зашить кожу, не допуская повреждения трубки PE10, затем сшить кожу шеи швом с четырьмя нулями. Завяжите шов вокруг трубки PE10 и завяжите узел для фиксации трубки PE10.
После того, как пробирка PE10 снова станет свободной, запечатайте экстракорпоральный конец пробирки PE10 уплотнительным колпачком. Пробирку PE10 высушивали с помощью кусочка ткани и несколько раз обвязывали вокруг пробирки PE10 противоаллергическую ленту, чтобы предотвратить втягивание трубки PE10 во время движения крысы. После операции вернули крысу в клетку и внимательно следят за ней во время восстановления после наркоза, пока она не придет в сознание.
После того, как крыса полностью придет в себя, снимите уплотнительный колпачок и введите 20 микролитров 2% лидокаина в пробирку PE10 со скоростью 0,2 микролитра в секунду через шприц Гамильтона, после чего следует инъекция 10 микролитров обычного физиологического раствора. Герметизируйте трубку PE10 уплотнительным колпачком. Поставьте крысу на стол и внимательно наблюдайте.
Параличи нижних конечностей после интратекального введения лидокаина, свидетельствуют об успешной катетеризации. Паралич задних конечностей обычно длится около 30 минут. Внимательно наблюдайте за крысой в период восстановления до полного восстановления функции конечностей.
Полная параплегия обеих нижних конечностей крыс после интратекального назначения лидокаина свидетельствовала об успешной катетеризации. Сравнение частоты успешной катетеризации между нашими модифицированными методами и ранее описанным методом. Частота успешной интратекальной катетеризации для нашего модифицированного метода составила 95%, что было больше, чем 88%, достигнутые при использовании метода, о котором сообщили Hou et al.
Сравнение частоты катетеров в течение длительного пребывания между нашим модифицированным методом и ранее описанным методом. Частота длительного пребывания катетера на второй, пятый и седьмой дни после интратекальной катетеризации составила 94%, 81% и 65% соответственно, согласно исследованию Storkson et al. Частота длительного пребывания катетера через два, пять и семь дней после интратекальной катетеризации составила 95%, 90% и 85% соответственно для нашего метода.
В заключение следует отметить, что модифицированный метод интратекальной катетеризации может служить полезным инструментом для повторного интратекального введения и введения лекарственных препаратов и представляет собой простой, удобный и надежный способ сокращения продолжительности экспериментов.
