Альтернативные методы определения образования супероксид-анионов в тромбоцитах

Цель нашего исследования — понять, как генерация активных форм кислорода регулирует функцию тромбоцитов и модулирует гемостатическую реакцию. Для нашей работы важно надежно определить ключевую активную форму кислорода – супероксид-анион. Наиболее распространенным методом обнаружения супероксид-аниона является проточная цитометрия с DCFDA в качестве флуоресцентного зонда.

В качестве ограничений он вызывает высвобождение активных форм кислорода, что приводит к ненадежным данным. Это не позволяет различать различные активные формы кислорода, а также не позволяет количественно определить активные формы кислорода тромбоцитов. В этом видео представлены два альтернативных метода обнаружения супероксидных анионов тромбоцитов.

Первый метод использует DHE на живых тромбоцитах для обнаружения супероксид-аниона с высокой кинетикой и разрешением для отдельных клеток. Второй метод использует спиновой зонд, CMH, для количественной оценки скорости образования супероксид-анионов тромбоцитами. В целом, методы, представленные в этом видео, имеют значительные преимущества по сравнению с большинством существующих методов и представляют собой значительный прогресс в экспериментальных инструментах, имеющихся в нашем распоряжении для изучения редукс-зависимой регуляции тромбоцитов.