Métodos alternativos para a detecção da geração de ânions superóxido em plaquetas

O escopo de nossa pesquisa é entender como a geração de espécies reativas de oxigênio regula a função plaquetária e modula a resposta hemostática. Para o nosso trabalho, é essencial detectar de forma confiável as principais espécies reativas de oxigênio, o ânion superóxido. A técnica mais comum para detectar ânion superóxido é a citometria de fluxo com DCFDA como sonda fluorescente.

Como limitações, induz a liberação de espécies reativas de oxigênio, levando a dados não confiáveis. Não permite distinguir entre diferentes espécies reativas de oxigênio e não permite quantificar as espécies reativas de oxigênio plaquetário. Este vídeo apresenta duas técnicas alternativas para a detecção de ânions superóxido plaquetário.

A primeira técnica utiliza DHE em plaquetas vivas para detectar ânion superóxido com cinética rápida e resolução de célula única. A segunda técnica utiliza a sonda de spin, CMH, para quantificar a taxa de geração de ânions superóxido pelas plaquetas. No geral, as técnicas apresentadas neste vídeo oferecem vantagens significativas sobre a maioria das técnicas existentes e representam um avanço significativo nas ferramentas experimentais à nossa disposição para estudar a regulação dependente de redux das plaquetas.