Количественный анализ пищевых метаболитов витамина А в глазных и неглазных тканях мышей с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии

Наша лаборатория исследует два важнейших транспортера витамина А, STRA6 и Rbpr2. Эти мембранные белки способствуют поступлению витамина А из крови в такие ткани, как глаза и печень. С помощью ВЭЖХ мы можем исследовать физиологические функции этих транспортеров, создавая системный профиль витамина А у трансгенных мышей.

Другой метод, используемый в нашей области, - это поверхностный плазмонный резонанс, SPR, который исследует аффинность и кинетику связывания белка по его вкусу, и мы применили SPR для исследования связывания между STRA6 или Rbpr2, комплексом связывания ретинола RBP4. Одной из текущих проблем этого метода является пропускная способность выборки. Этап испарения растворителя является основным узким местом в этом протоколе, и будущие исследователи должны экспериментировать с методами сушки, такими как испарение с продувкой азотом, которые имеют гораздо большую пропускную способность по сравнению с вакуумным испарением.

Мы определили роль Rbpr2 как важного фактора, способствующего поддержанию системного гомеостаза витамина А через его функцию в печени. Нарушение экспрессии Rbpr2 у трансгенных мышей привело к значительному нарушению уровня витамина А во всех исследуемых системных тканях, что количественно определено с помощью ВЭЖХ. Большинство других протоколов определения витамина А на основе ВЭЖХ используют методы обратной поверхности и, как правило, не позволяют изомерам ретиноидов растворяться отдельно.

Наш протокол нормального распознавания лица позволяет разрешать как ретиналдегид, так и изомеры сетчатки, что позволяет нам создать подробный профиль витамина А, что имеет решающее значение, учитывая важность фотоизомеризации витамина А в каскаде фототрансдукции.