Activación y conjugación de polisacáridos solubles utilizando 1-ciano-4-dimetilaminopiridina tetrafluoroborato (CDAP)

Las vacunas conjugadas son avances notables en vacunología. Para la preparación de vacunas conjugadas de polisacáridos, los polisacáridos se pueden funcionalizar convenientemente y vincularse a proteínas portadoras de vacunas utilizando tetrafluoroborato de 1-ciano-4-dimetilaminopiridina (CDAP), un reactivo cianilante fácil de manejar. CDAP activa los polisacáridos reaccionando con los grupos hidroxilo de carbohidratos a pH 7-9. La estabilidad y la reactividad de CDAP son altamente dependientes del pH. El pH de la reacción también disminuye durante la activación debido a la hidrólisis de CDAP, lo que hace que un buen control del pH sea la clave para la activación reproducible. El protocolo de activación original de CDAP se realizó a temperatura ambiente en soluciones de pH 9 sin búfer.

Debido a la rápida reacción bajo esta condición (<3 min) y la rápida caída de pH que la acompaña de la hidrólisis rápida de CDAP, fue difícil ajustar y mantener rápidamente el pH de reacción objetivo en el corto período de tiempo. El protocolo mejorado descrito aquí se realiza a 0 °C, lo que ralentiza la hidrólisis de CDAP y extiende el tiempo de activación de 3 min a ~15 min. La dimetilaminopiridina (DMAP) también se utilizó como tampón para preajustar la solución de polisacáridos al pH de activación objetivo antes de agregar el reactivo CDAP. El mayor tiempo de reacción, junto con la hidrólisis CDAP más lenta y el uso de tampón DMAP, facilita el mantenimiento del pH de activación durante todo el proceso de activación. El protocolo mejorado hace que el proceso de activación sea menos frenético, más reproducible y más susceptible de ampliación.