Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Representative Results
Discussion
Acknowledgements
Materials
References
Immunology and Infection
L’incidence croissante de Candida albicans résistant aux médicaments est un grave problème de santé dans le monde entier. La thérapie photodynamique antimicrobienne (TDA) peut offrir une stratégie pour lutter contre les infections fongiques résistantes aux médicaments. Le présent protocole décrit l’efficacité de l’aPDT médiée par rose bengal sur une souche multirésistante de C. albicans in vitro.
L’infection invasive à Candida albicans est une infection fongique opportuniste importante chez l’homme, car c’est l’un des colonisateurs les plus courants de l’intestin, de la bouche, du vagin et de la peau. Malgré la disponibilité de médicaments antifongiques, le taux de mortalité de la candidose invasive reste d’environ 50%. Malheureusement, l’incidence de C. albicans pharmacorésistant augmente à l’échelle mondiale. La thérapie photodynamique antimicrobienne (TDA) peut offrir un traitement alternatif ou adjuvant pour inhiber la formation de biofilm de C. albicans et surmonter la résistance aux médicaments. L’aPDT médiée par le bengale rose (RB) a montré une destruction cellulaire efficace des bactéries et de C. albicans. Dans cette étude, l’efficacité de RB-aPDT sur C. albicans multirésistant est décrite. Une source lumineuse à diode électroluminescente verte (DEL) faite maison est conçue pour s’aligner avec le centre d’un puits d’une plaque de 96 puits. Les levures ont été incubées dans les puits avec différentes concentrations de RB et éclairées par des fluences variables de lumière verte. Les effets de destruction ont été analysés par la méthode de dilution des plaques. Avec une combinaison optimale de lumière et de RB, une inhibition de croissance de 3 log a été obtenue. Il a été conclu que RB-aPDT pourrait potentiellement inhiber C. albicans résistant aux médicaments.
C. albicans colonise les voies gastro-intestinales et génito-urinaires des individus en bonne santé et peut être détecté comme un microbiote normal chez environ 50% des individus1. Si un déséquilibre est créé entre l’hôte et l’agent pathogène, C. albicans est capable d’envahir et de causer des maladies. L’infection peut aller d’infections locales des muqueuses à une défaillance de plusieurs organes2. Dans une étude de surveillance multicentrique aux États-Unis, environ la moitié des isolats de patients atteints de candidose invasive entre 2009 et 2017 sont C. albicans3. ....
1. Préparation du système aPDT
La figure 1 montre le système aPDT utilisé dans la présente étude. Étant donné que les températures élevées peuvent provoquer une mort cellulaire importante, le réseau de LED est refroidi par un ventilateur électrique et un dissipateur de chaleur est utilisé pendant l’irradiation pour maintenir une température constante à 25 ± 1 ° C. L’effet de chaleur peut être écarté. Avoir une distribution uniforme de la lumière est également un facteur déterminant important pou.......
Des résultats encourageants des applications cliniques de rb-PDT pour la kératite fongique ont été rapportés récemment19. Le pic d’absorption de RB est de 450-650 nm. Il est essentiel de déterminer le taux de fluence de la source lumineuse pour une APDT réussie. Une fluence élevée (habituellement >100 J/cm2) est nécessaire pour traiter les cellules cancéreuses, tandis qu’une fluence plus faible devrait traiter les lésions infectées6. Une fluence.......
Ce travail a reçu un financement du Centre de nanomédecine appliquée de l’Université nationale Cheng Kung du programme du Centre de recherche Featured Areas dans le cadre du projet Higher Education Sprout du ministère de l’Éducation (MOE) et du ministère des Sciences et de la Technologie de Taïwan [MOST 109-2327-B-006-005] à TW Wong. J.H. Hung reconnaît le financement de l’hôpital universitaire national Cheng Kung, Taïwan [NCKUH-11006018], et [MOST 110-2314-B-006-086-MY3].
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
1.5 mL microfuge tube | Neptune, San Diego, USA | #3745.x | |
5 mL round-bottom tube with cell strainer cap | Falcon, USA | #352235 | |
96-well plate | Alpha plus, Taoyuan Hsien, Taiwan | #16196 | |
Aluminum foil | sunmei, Tainan, Taiwan | ||
Aluminum heat sink | Nanyi electronics Co., Ltd., Tainan, Taiwan | BK-T220-0051-01 | |
Centrifuge | Eppendorf, UK | 5415R | disperses heat from the LED array |
Graph pad prism software | GraphPad 8.0, San Diego, California, USA | graphing and statistics software | |
Green light emitting diode (LED) strip | Nanyi electronics Co., Ltd., Tainan, Taiwan | 2835 | |
Incubator | Yihder, Taipei, Taiwan | LM-570D (R) | Emission peak wavelength: 525 nm, Viewing angle: 150°; originated from https://www.aliva.com.tw/product.php?id=63 |
Light power meter | Ophir, Jerusalem, Israel | PD300-3W-V1-SENSOR, | |
Millex 0.22 μm filter | Merck, NJ, USA | SLGVR33RS | |
Multidrug-resistant Candida albicans | Bioresource Collection and Research CenterBioresource, Hsinchu, Taiwan | BCRC 21538/ATCC 10231 | http://catalog.bcrc.firdi.org.tw/BcrcContent?bid=21538 |
OD600 spectrophotometer | Biochrom, London, UK | Ultrospec 10 | |
Rose Bengal | Sigma-Aldrich, MO, USA | 330000 | stock concentration 40 mg/mL = 4%, prepare in PBS, stored at 4 °C |
Sterilized glass tube | Sunmei Co., Ltd., Tainan, Taiwan | AK45048-16100 | |
Yeast Extract Peptone Dextrose Medium | HIMEDIA, India | M1363 |
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