Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Representative Results
Discussion
Acknowledgements
Materials
References
Immunology and Infection
Растущая заболеваемость лекарственно-устойчивыми Candida albicans является серьезной проблемой здравоохранения во всем мире. Антимикробная фотодинамическая терапия (aPDT) может предложить стратегию борьбы с лекарственно-устойчивыми грибковыми инфекциями. Настоящий протокол описывает опосредованную розой бенгальскую эффективность aPDT на штамме C. albicans in vitro с множественной лекарственной устойчивостью.
Инвазивная инфекция Candida albicans является значительной оппортунистической грибковой инфекцией у людей, потому что она является одним из наиболее распространенных колонизаторов кишечника, рта, влагалища и кожи. Несмотря на доступность противогрибковых препаратов, смертность от инвазивного кандидоза остается ~50%. К сожалению, заболеваемость лекарственно-устойчивымИ C. albicans растет во всем мире. Антимикробная фотодинамическая терапия (aPDT) может предложить альтернативное или адъювантное лечение для ингибирования образования биопленки C. albicans и преодоления лекарственной устойчивости. Роза бенгальская (RB)-опосредованная aPDT показала эффективное уничтожение клеток бактерий и C. albicans. В данном исследовании описана эффективность RB-aPDT на C. albicans с множественной лекарственной устойчивостью. Самодельный зеленый светодиодный (LED) источник света предназначен для выравнивания с центром колодца 96-луночной пластины. Дрожжи инкубировали в колодцах с различными концентрациями RB и освещали различными колебаниями зеленого света. Эффекты уничтожения были проанализированы методом разбавления пластин. При оптимальном сочетании света и RB было достигнуто 3-логарифмическое торможение роста. Был сделан вывод о том, что RB-aPDT может потенциально ингибировать лекарственно-устойчивые C. albicans.
C. albicans колонизируется в желудочно-кишечном тракте и мочеполовом тракте здоровых людей и может быть обнаружен как нормальная микробиота примерно у 50 процентов лиц1. Если между хозяином и патогеном создается дисбаланс, C. albicans способен вторгаться и вызывать заболевание. Инфекция может варьироваться от локальных инфекций слизистой оболочки до полиорганной недостаточности2. В многоцентровом обсервационном исследовании в США около половины изолятов пациентов с инвазивным кандидозом в период с 2009 по 2017 год составляют C. albicans3. Кандидемия может быть связана с ....
1. Подготовка системы aPDT
На рисунке 1 показана система aPDT, используемая в настоящем исследовании. Поскольку высокие температуры могут вызвать значительную гибель клеток, светодиодная решетка охлаждается электрическим вентилятором, а во время облучения используется радиатор для поддержания п.......
Обнадеживающие результаты клинического применения RB-PDT при грибковом кератите были зарегистрированы недавно19. Пик поглощения RB находится на уровне 450-650 нм. Для успешного aPDT важно определить скорость флюенса источника света. Высокая флюенс (обычно >100 Дж /см2) требуетс?.......
Эта работа получила финансирование от Центра прикладной наномедицины, Национального университета Ченг Кунг от Программы Исследовательского центра избранных областей в рамках проекта «Ростки высшего образования» Министерства образования (MOE) и Министерства науки и технологий Тайваня [MOST 109-2327-B-006-005] до TW Wong. J.H. Hung признает финансирование от Национальной университетской больницы Чэн Кунг, Тайвань [NCKUH-11006018] и [MOST 110-2314-B-006-086-MY3].
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
1.5 mL microfuge tube | Neptune, San Diego, USA | #3745.x | |
5 mL round-bottom tube with cell strainer cap | Falcon, USA | #352235 | |
96-well plate | Alpha plus, Taoyuan Hsien, Taiwan | #16196 | |
Aluminum foil | sunmei, Tainan, Taiwan | ||
Aluminum heat sink | Nanyi electronics Co., Ltd., Tainan, Taiwan | BK-T220-0051-01 | |
Centrifuge | Eppendorf, UK | 5415R | disperses heat from the LED array |
Graph pad prism software | GraphPad 8.0, San Diego, California, USA | graphing and statistics software | |
Green light emitting diode (LED) strip | Nanyi electronics Co., Ltd., Tainan, Taiwan | 2835 | |
Incubator | Yihder, Taipei, Taiwan | LM-570D (R) | Emission peak wavelength: 525 nm, Viewing angle: 150°; originated from https://www.aliva.com.tw/product.php?id=63 |
Light power meter | Ophir, Jerusalem, Israel | PD300-3W-V1-SENSOR, | |
Millex 0.22 μm filter | Merck, NJ, USA | SLGVR33RS | |
Multidrug-resistant Candida albicans | Bioresource Collection and Research CenterBioresource, Hsinchu, Taiwan | BCRC 21538/ATCC 10231 | http://catalog.bcrc.firdi.org.tw/BcrcContent?bid=21538 |
OD600 spectrophotometer | Biochrom, London, UK | Ultrospec 10 | |
Rose Bengal | Sigma-Aldrich, MO, USA | 330000 | stock concentration 40 mg/mL = 4%, prepare in PBS, stored at 4 °C |
Sterilized glass tube | Sunmei Co., Ltd., Tainan, Taiwan | AK45048-16100 | |
Yeast Extract Peptone Dextrose Medium | HIMEDIA, India | M1363 |
ABOUT JoVE
Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved