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Este protocolo demonstra um modelo único de acidente vascular cerebral em camundongo com um infarto de tamanho médio e uma excelente taxa de sobrevida. Esse modelo permite que os pesquisadores pré-clínicos do AVC estendam a duração da isquemia, usem camundongos envelhecidos e avaliem os resultados funcionais a longo prazo.
Na pesquisa experimental de AVC, a oclusão da artéria cerebral média (ACM) com um filamento intraluminal é amplamente utilizada para modelar o acidente vascular cerebral isquêmico em camundongos. O modelo de MCAO filamentar tipicamente exibe um infarto cerebral maciço em camundongos C57Bl/6 que às vezes inclui tecido cerebral no território suprido pela artéria cerebral posterior, o que é em grande parte devido a uma alta incidência de atresia da artéria comunicante posterior. Este fenômeno é considerado um dos principais contribuintes para a alta taxa de mortalidade observada em camundongos C57Bl/6 durante a recuperação de AVC a longo prazo após MCAO filamentar. Assim, muitos estudos de AVC crônico exploram modelos de MCAO distais. No entanto, esses modelos geralmente produzem infarto apenas na área do córtex e, consequentemente, a avaliação de déficits neurológicos pós-AVC poderia ser um desafio. Este estudo estabeleceu um modelo de MCAO transcraniana modificada no qual a MCA no tronco é parcialmente ocluída permanente ou transitoriamente através de uma pequena janela craniana. Como o local de oclusão é relativamente próximo à origem da ACM, esse modelo gera dano cerebral tanto no córtex quanto no estriado. A extensa caracterização deste modelo demonstrou uma excelente taxa de sobrevida a longo prazo, mesmo em camundongos envelhecidos, bem como déficits neurológicos prontamente detectáveis. Portanto, o modelo de camundongo MCAO descrito aqui representa uma ferramenta valiosa para a pesquisa experimental de AVC.
Quase 800.000 pessoas sofrem um acidente vascular cerebral nos EUA a cada ano, e a maioria desses acidentes vasculares cerebrais é de natureza isquêmica1. A restauração oportuna do fluxo sanguíneo cerebral com ativador do plasminogênio tecidual (tPA) e/ou trombectomia é atualmente o tratamento mais eficaz para pacientes com AVC; entretanto, a recuperação completa das funções neurológicas em longo prazo é rara 2,3. Assim, a busca por novas terapias para AVC que visem a melhora funcional é uma área intensa de pesquisa que requer modelos animais clinicamente relevantes de AVC.
Todos os procedimentos descritos neste trabalho são conduzidos de acordo com as diretrizes do NIH para o cuidado e uso de animais em pesquisa, e o protocolo foi aprovado pelo Duke Institute Animal Care and Use Committee (IACUC). Camundongos C57Bl/6 machos jovens (8-10 semanas de idade) e com idade (22 meses) foram utilizados para o presente estudo. Uma visão geral desse protocolo é ilustrada na Figura 1.
1. Preparo cirúrgico
Com uma visão direta sob um microscópio cirúrgico, pode-se confirmar visualmente que o fluxo sanguíneo da ACM está bloqueado durante a isquemia. Nosso estudo prévio demonstrou redução de >80% do fluxo sanguíneo na área isquêmica com o uso do monitor laserDoppler6. Para determinar as alterações do fluxo sanguíneo pós-MCAO, o LSCI pode ser usado para confirmar ainda mais o insulto isquêmico e a reperfusão (Figura 1). De fato, na Fig.......
O primeiro modelo de oclusão transcraniana da ACM foi estabelecido em ratos em 1981 11,12 e substituído pelo modelo de MCAO sem craniectomia em1989 4. A oclusão transcraniana inicial da ACM tinha um campo cirúrgico amplo, de modo que todo o arco zigomático foi removido e os músculos tracionados lateralmente. Os tecidos locais ficaram inchados após a cirurgia, causando estresse e diminuição da ingestão alimentar dos animais. Em no.......
Todos os autores não têm conflitos de interesse.
Os autores agradecem a Kathy Gage por seu apoio editorial. As figuras do esquema foram criadas com BioRender.com. Este estudo foi financiado pelo Departamento de Anestesiologia (Duke University Medical Center) e por subsídios do NIH (NS099590, HL157354, NS117973 e NS127163).
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
0.25% bupivacaine | Hospira | NDC 0409-1159-18 | |
0.9% sodium chloride | ICU Medical | NDC 0990-7983-03 | |
2,3,5-Triphenyltetrazolium Chloride (TTC) | Sigma or any available vendor | ||
20 G IV catheter | BD | 381534 | 20 GA 1.6 IN |
30 G needle | BD | 305106 | |
4-0 silk suture | Look | SP116 | Black braided silk |
8-0 suture with needle | Ethilon | 2822G | |
Alcohol swabs | BD | 326895 | |
Anesthesia induction box | Any suitable vendor | Pexiglass make | |
Electrical grinder | JSDA | JD 700 | |
High temperature cautery loop tip | Bovie | AA03 | |
Isoflurane | Covetrus | NDC 11695-6777-2 | |
Laser doppler perfusion monitor | Moor Instruments | moorVMS-LDF1 | |
Lubricant eye ointment | Bausch + Lomb | 339081 | |
Mouse rectal probe | Physitemp | RET-3 | |
Nitrous Oxide | Airgas | UN1070 | |
Otoscope | Welchallyn | 728 | 2.5 mm Speculum |
Oxygen | Airgas | UN1072 | |
Povidone-iodine | CVS | 955338 | |
Recovery box | Brinsea | TLC eco | |
Rimadyl (carprofen) | Zoetis | 6100701 | Injectable 50 mg/mL |
Rodent ventilator | Harvard | Model 683 | |
Temperature controller | Physitemp | TCAT-2DF | |
Triple antibioric & pain relief | CVS | NDC 59770-823-56 | |
Vaporizer | RWD | R583S |
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