LAD-ligasyon murin Model: Miyokard Enfarktüsü

Özet

Bu video, miyokard iskemisi pathobiological ve patofizyolojik süreçleri incelemek için hızlı ve güvenilir bir model nasıl kullanılacağını gösterir.

Özet

Enfarktüsü ve miyokardiyal iskemi Araştırma modelleri, miyokard iskemisi, akut ve kronik pathobiological ve patofizyolojik süreçleri incelemek ve gelecekteki tedavi geliştirmek ve optimize etmek için gerekli.

Miyokard iskemisi oluşturma İki farklı yöntemler laboratuar kemirgenler gerçekleştirilir. İlk yöntem oluşturmak için cryo enfarktüsü, hızlı ama yanlış bir tekniği, bir cryo-kalem (1-3) kalp yüzeyine uygulanır. Bu yöntemi kullanarak, bilim adamı cryo yara izi de geniş bir miyokard hasarı, miyokard enfarktüsü ile ilgili patofizyolojik yan etkileri gösterir oluşturulur, iskemi yol açar garanti edemeyiz. İkinci yöntem, sol ön inen arter (LAD) daimi ligasyonu. İşte LAD hemen görülebildiği bir iskemi oluşturan tek bir dikiş ile bağlandı. LAD kapatarak, daha fazla kan akımı, miyokard doku çevresindeki neredeyse etkilenmez iken bu alanda izin verilir. Bu cerrahi işlem, enfarktüs ilgili miyokard iskemisi meydana pathobiological ve patofizyolojik yönlerini taklit eder.

Bu video tanıtılan yöntem LAD ligating bir fare enfarktüsü modeli cerrahi işlem göstermektedir. Bu model, kalp enfarktüsü pathobiological ve patofizyolojik yanı sıra Bağışıklık çalışmaları için uygundur. Gösterilen teknik, yüksek doğruluk sağlar ve histolojik bölümleri ile de ilişkilidir.

Protokol

20g en az 8 ila 12 hafta arasında bir yaş ağırlığında Balb / C fareler Charles River (Sandhofer Weg 7, D-97.633 Sulzfeld) satın alınır.
Fare, geleneksel koşulları, beslenen standart fare pelet ve su ad libitum altında muhafaza edilir . Indüksiyon odasına kullanarak (% 2) izofluran anestezisi fare ile.

1. Boyun bölgesi ve göğüs kafesinin sol tarafında Tıraş ve% 80 etanol kullanılarak dezenfekte edin.
2. Sırtında fare koyun ve anestezi tutmak için burun ve ağız içinde bir facemask yerde.
3. Fare anesthesized yeterli olduğundan emin olmak için, kuyruğu ve arka ayaklarının kısma refleksleri kontrol edin.
4. Mikroskopik görünümü altında trakea kaplayan deri, kas ve doku ayıran orta hat servikal insizyon gerçekleştirin.
5. Trakea, glottis altında iki kartuş halkaları arasında doku içine endotrakeal tüp (Şekil 1) eklemek için küçük bir delik maruz kaldığında. Mikro cerrahi forecepts ile trakea kafatası parçası tutan endotrakeal tüp yerleştirin. Torasik hareketin her iki akciğerde iyi havalandırılmış olduğundan emin olmak için kontrol edin.
6. Solunum hızı (RR), 17 - _{18cm H} 2 O bir inspiratuar basınç ile, yaklaşık 110 dakikada olmalıdır Sağ tarafta uzanan, sol yan bakan, fareyi dikkatli bir şekilde açın. ^3. ve ^4. kaburga arasındaki leftsided torakotomi gerçekleştirin ve kanamayı önlemek için bir cauter kullanarak, dikkatli bir şekilde doku ve kas disseke.
7. Toraks dikkatle açın toraks açıldıktan sonra, herhangi bir keskin bir nesne ile akciğer dokunmadan, kalp bulmak. Şimdi perikardiyal kese kalp kapsayan bölümü kaldırmak.
8. LAD, pulmoner arter ve sol kulak kepçesi arasında yer alır. Tek sütür (Şekil 2) ile proksimal LAD Arter bir 8-0 Prolen sütür (Ethicon, Norderstedt, Almanya) kullanın.
9. ^4. ve ^5. kaburga arasındaki bir göğüs tüpü (28G, rüşvet kateter) yerleştirin.
10. Cilt kapatmak için kaburga ve 4-0 Prolen çalışan dikişler (Ethicon, Norderstedt, Almanya) uyum için 6-0 Prolen çalışan dikişler (Ethicon, Norderstedt, Almanya) kullanarak katmanlar halinde torasik insizyon kapatın.
11. Dikkatli bir şekilde (Şekil 3) 2 ml şırınga yardımı ile toraks boşaltın. Sırtında fare yerleştirin. Şimdi endotrakeal tüp ve 7-0 Prolen dikişler (Ethicon, Norderstedt, Almanya) kullanarak tek bir dikiş ile trakeal kartuş halkaları uyum.
12. Fare üzerinde yüz maskesi koyun ve dikişler (Ethicon, Norderstedt, Almanya) 4-0 Prolen kullanarak cilt yakın.

Onaylama

LAD-ligasyonu başarısını teyit etmek için farklı olasılıklar vardır.

Hayvan euthanize gerek kalmadan sadece 150 lt kan troponin testi, cerrahi sonrası 6 ila 18 saat olabilir. Kan özelleştirilmiş bir troponin test kiti (TROP T Hassas, Roche, Mannheim) (Şekil 4) uygulanır. Troponin kas hücre aktin filamentler bir düzenleyici protein, kas üç tip farklı isotypes vardır. CTnI ve cTnT isotypes kalp bulunur ve doku hasarı olarak yayımlanır. Troponin T (cTnT) için standart bir test iki kalp spesifik monoklonal antikorlar, bir tuzakları kan örneği troponin dayalı, ikinci bir belirteçtir.

Enfarkte alanda, 3 gün sonra (Şekil 5) makroskopik tespit edilebilir.

Infarkt TTC (2,3,5-triphenyltetrazolium chloride) ile boyanarak önlemler dokusunun canlılığını değerlendirmek için kullanılır. Evans mavi boya (% 1,5, 1.0mL) fosfat tamponlu salin (PBS), iskemik miyokard alanını ölçmek için sol ventrikül boşluğuna enjekte edilir. Fare ötenazi ve kalp dilimler halinde hasat ve kesitli. Doku dilimleri 20dk, 37 ° C'de% 1 TTC PBS solüsyonu, pH 7.4 inkübe edilir. Dokular 2-8 gecede PBS-tamponlu formalin% 10 sabit ° C TTC boya Evans mavi-negatif alanlarda (Şekil 6) ex vivo yönetilmektedir.

Histoloji için fare ötenazi olmalı ve kalbin daha fazla işlem için gömülü olması gerekir. Kesitler yaptıktan sonra, slaytlar, H & E (hematoksilen ve eozin) ile boyanmış veya fibrotik doku (Şekil 7) görselleştirmek için trikrom.

Şekil 1: Trakeal tüp.
1A: Açık trakea, ventral servikal insizyon sonrası.
1B: Trakea gırtlak kaudal iki kıkırdak halkaları açıldı.
1C: Trakeal tüp trakea içine sokulur.

Şekil 2: kalp sol taraflı torakotomi yoluyla maruz LAD bağlandı.

t ">
Şekil 3: Toraks kapatıldıktan sonra, plevra drenaj yapılır. Fare anestezi altında devam etmektedir.

Şekil 4: troponin testi pozitif olduğu zaman iki satır bir kaç dakika sonra ortaya çıkar.

Şekil 5: eksplante kalp gösterir.
5A: iskemik alana sahip bir soluk beyaz renk ile kalbin makroskopik görünümü.
5B: enfarkte kalp Kesit, iskemik alanı sağ üst köşesinde gösterir.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Tartışmalar

Özetle, bu video LAD-ligasyonu modeli, adım-adım görselleştirir ve kolay uygulanabilir cerrahi işlemler olarak farelerde LAD-ligasyonu tanımlar.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.