Лад-Лигирование: мышиной модели инфаркта миокарда

Резюме

В этом видео показано, как использовать быстрые и надежные модели для изучения патобиологические и патофизиологические процессы ишемии миокарда.

Аннотация

Исследование моделей миокарда и ишемии миокарда имеют важное значение для расследования острых и хронических патобиологические и патофизиологические процессы в ишемия миокарда и для разработки и оптимизации будущего лечения.

Два разных метода создания ишемии миокарда осуществляется в лабораторных грызунов. Первый способ заключается в создании крио миокарда, быстро, но неточной техники, где крио-пера наносится на поверхность сердца (1-3). Используя этот метод ученый не может гарантировать, что крио-шрам, приводит к ишемии, а также огромные повреждения миокарда создается, который показывает патофизиологические побочные эффекты, которые не связаны с инфарктом миокарда. Второй метод заключается в постоянном перевязки левой передней нисходящей артерии (LAD). Здесь ЛАД лигируют с помощью одного стежка, образуя ишемии, которые можно увидеть практически сразу. При закрытии LAD, не далее кровотока разрешается в этой области, в то время как окружающие ткани миокарда почти не влияет. Это хирургическая процедура, имитирующая патобиологические и патофизиологические аспекты происходящих в инфаркт-связанной ишемии миокарда.

Метод, представленных в этом видеоролике показано, хирургической процедуры, модели миокарда мышей путем лигирования ЛАД. Эта модель удобна для патобиологические и патофизиологические, а также иммунобиологических исследований инфаркт миокарда. Показал метод обеспечивает высокую точность и хорошо коррелирует с гистологических срезов.

протокол

Balb / C мышей весом менее 20 г в возрасте от 8 до 12 недель закупаются у Charles River (Sandhofer Weg 7, Д-97633 Sulzfeld).
Мыши размещаются в обычных условиях, кормили гранул стандартной мыши и без ограничений воды объявление. Обезболить мышь с изофлуран (2%) с помощью индукции камеры.

1. Бритье области шеи и левой части грудной клетки и дезинфекции с использованием 80% этанола.
2. Наведите на спину и положите маску на нос и рот, чтобы не отставать анестезии.
3. Проверить рефлексы щипать хвост и задние лапы, чтобы быть уверенным, что мыши достаточно anesthesized.
4. Под микроскопический взгляд выполнять средней линии шейки разрез разделения кожу, мышцы и ткани, покрывающей трахеи.
5. Когда трахеи подвергается вырезать небольшое отверстие в ткани между двух патронных кольца ниже голосовой щели, чтобы вставить эндотрахеальной трубки (рис. 1). Вставьте эндотрахеальной трубки проведения черепная часть трахеи с использованием микро хирургической forecepts. Проверьте грудной движения, чтобы убедиться, что оба легких, хорошо проветривается.
6. Частота дыхания (RR) должна быть около 110 в минуту, при вдохе давление от 17 до 18 см H ₂ O. Включите мышь тщательно, лежа на правом боку, лицом ее левой стороне. Выполните leftsided торакотомия между ^3-й и ^4-го ребра, и рассекать ткани и мышцы тщательно, используя термокаутер чтобы предотвратить кровотечение.
7. Открытое грудной клетки тщательно, как только грудная клетка открыта, найти сердце, не касаясь легких с любым острым предметом. Теперь удалите часть перикард, что покрывает сердце.
8. LAD находится между легочной артерии и левой ушной раковины. Используйте 8-0 Prolene шва (Ethicon, Нордерштедт, Германия), чтобы перевязывать ЛАД проксимальных с одним швом (рис. 2).
9. Место грудь трубки (28G, продажный катетер), между ^4-й и ^5-го ребра.
10. Закрыть грудной разрез в слоях, используя 6-0 Prolene работает швов (Ethicon, Нордерштедт, Германия) адаптировать ребрами и 4-0 Prolene работает швов (Ethicon, Нордерштедт, Германия), чтобы закрыть кожи.
11. Слейте грудной клетки с помощью 2 мл шприца аккуратно (рис. 3). Наведите на спине. Теперь возьмите эндотрахеальной трубки и приспособление кольца трахеи картридж с помощью одного стежка использованием 7-0 Prolene швов (Ethicon, Нордерштедт, Германия).
12. Место маску на мыши и закрыть кожу с помощью 4-0 Prolene работает швов (Ethicon, Нордерштедт, Германия).

Проверка

Существуют различные возможности, чтобы подтвердить успех ЛАД-труб.

Тест тропонин могут быть выполнены с 6 до 18 часов после операции, используя только 150 л крови без необходимости усыпить животное. Крови применяется для индивидуальных комплект тест тропонина (Троп Т Чувствительный, Roche, Мангейм) (рис. 4). Тропонин является регулятивный белка актина в мышечных клеток, Существуют различные изотипов в три вида мышц. Изотипов cTnI и CTnT находятся в сердце и выпускаются в повреждения тканей. Стандартизированный тест на тропонин Т (CTnT) базируется на двух сердце специфическими моноклональными антителами, один ловушки тропонина в крови, а второй является маркером.

Инфаркта области можно выделить макроскопически через 3 дня (рис. 5).

TTC (2,3,5-Triphenyltetrazolium хлорид) окрашивание меры жизнеспособности тканей используется для оценки размера инфаркта. Эванс синего красителя (1,5%, 1,0 мл) в фосфатно-солевом буфере (PBS) вводится в полость левого желудочка для оценки ишемических инфарктов области. Мышь эвтаназии и сердца собирают и подразделяются на ломтики. Срезы тканей инкубируют в 1% TTC PBS растворе, рН 7,4 при 37 ° С в течение 20 минут. Ткани фиксировали в 10% PBS-буферном растворе формалина в течение ночи при температуре 2-8 ° C. ТТС находится в ведении бывшего естественных условиях, чтобы окрасить Эванс сине-отрицательных областях (рис. 6).

Для гистологии мышь должна быть умерщвлены, а сердце должно быть встроен для дальнейшей обработки. После выполнения парафиновых срезах, окрашенных слайды с H & E (гематоксилином и эозином) или trichrome визуализировать фиброзной ткани (рис. 7).

Рисунок 1: трахеи трубки.
1А: Exposed трахеи, после вентральной шейки разрез.
1В: трахеи открыл два хряща кольца каудально по отношению к гортани.
1С: трахеи трубки вставляется в трахею.

Рисунок 2: сердце предоставляется через левосторонний торакотомия, ЛАД лигируют.

т ">
Рисунок 3: После грудной клетки закрыт, утечка плевры не выполняется. Мышь все еще ​​под наркозом.

Рисунок 4: Две линии появляются через несколько минут, когда тест тропонина является положительным.

Рисунок 5: Показывает эксплантированных сердце.
5А: Макроскопические зрения сердце зоне ишемии с выцветшим беловатый цвет.
5B: Сечение инфаркта сердца, ишемической область показывает в верхнем правом углу.

Обсуждение

В целом, это видео визуализирует ЛАД-перевязка модель шаг за шагом, и определяет ЛАД-перевязку у мышей, так же легко, возможно хирургических процедур.