내사 - 결합 : 심근 경색의 Murine 모델

요약

이 동영상은 심근 국소 빈혈의 pathobiological 및 pathophysiological 프로세스를 연구하기위한 빠르고 안정적​​인 모델을 사용하는 방법을 보여줍니다.

초록

경색 및 심근 국소 빈혈의 연구 모델은 심근 국소 빈혈의 급성 및 만성 pathobiological 및 pathophysiological 프로세스를 조사하고 향후 치료를 개발하고 최적화하는 데 필수적입니다.

심근 국소 빈혈을 만드는 두 가지 방법은 실험실 설치류에서 수행됩니다. 첫 번째 방법은 cryo - 펜은 심장 (1-3)의 표면에 적용 cryo 경색, 빠른 있지만 부정 확한 기술을 만드는 것입니다. 이 방법을 사용 과학자는 cryo - 흉터 또한 광대한 심근 손상은 심근 경색과 관련되지 않은 pathophysiological 부작용을 보여줍 만들어집니다, 국소 빈혈로 연결되는 보장할 수 없습니다. 두 번째 방법은 왼쪽 앞쪽에 내림차순 동맥 (내사)의 영구적인 결합입니다. 여기 내사 거의 즉시 볼 수 있습니다 국소 빈혈을 형성 하나의 스티치와 함께 출혈도 잡았입니다. 주변의 심근 조직이 거의 영향을받지 않는 상태에서 젊은이 폐쇄하여 더 이상 혈액의 흐름이 그 지역에서 허용되지 않습니다. 이 수술은 경색 심근 국소 빈혈 관련에서 발생 pathobiological 및 pathophysiological 측면을 imitates.

이 동영상에서 소개하는 방법은 젊은이 ligating하여 마우스 경색 모델의 수술을 보여줍니다. 이 모델은 심장 경색에 pathobiological 및 pathophysiological뿐만 아니라 immunobiological 연구 편리합니다. 표시 기술은 높은 정확도를 제공하며, histological 부분과 잘 연결합니다.

프로토콜

8~12주의 나이에 20g의 최소 무게 Balb / C 마우스는 찰스 리버 (Sandhofer 웨그 7 D - 97633 Sulzfeld)에서 구입할 수 있습니다.
마우스는 일반 조건, 공급 표준 마우스 알약와 물 광고 libitum 아래에 위치해 있습니다. 유도 챔버를 사용하여 (2 %) isoflurane와 마우스를 마취.

1. 목 지역 ribcage의 왼쪽을 면도하고 80 % 에탄올을 사용하는 소독.
2. 의 뒷면에있는 마우스를 놓고 마취를 유지하기 위해 코와 입을 통해 안면을 넣으십시오.
3. 마우스가 충분 anesthesized되었는지 확인하는 꼬리와 뒷다리를 곤란하게 반사를 확인합니다.
4. 미세한보기에서 호흡 관을 덮고있는 피부, 근육과 조직을 분리 정중선 자궁 절개를 수행합니다.
5. 기관은 endotracheal 튜브 (그림 1)을 삽입하는 성문 밑에 두 카트리지 고리 사이의 조직에 작은 구멍을 뚫고 노출하는 것입니다. 마이크로 외과 forecepts를 사용하여 기관의 두개골 부분을 잡고 endotracheal 튜브를 삽입합니다. 양쪽 폐에서 통풍이 잘되었는지 확인하는 흉부 움직임을 확인합니다.
6. 호흡 속도 (RR)은 17~18센티미터 H ₂ O.의 inspiratory 압력으로 약 110 분당해야합니다 그 왼쪽에 직면하고, 그 오른쪽에 누워, 신중하게 마우스를 켭니다. 3 ^차 및 4 ^번째 갈비뼈 사이 leftsided thoracotomy를 수행하고, 출혈을 방지하기 위해 cauter을 사용하여 조심스럽게 조직 및 근육을 절개하다.
7. 조심스럽게 흉부를 열고 흉부가 열릴되면, 어떤 날카로운 물체로 폐을 건드리지 않고, 마음을 찾으십시오. 이제 마음을 덮고있는 pericardial 색의 일부를 제거합니다.
8. 그 소년은 폐동맥 및 좌측 외이 사이에 위치하고 있습니다. 하나의 봉합사 (그림 2)와 근위 젊은이 ligate에 8-0 Prolene 봉합사를 (Ethicon, Norderstedt, 독일)를 사용합니다.
9. 4 ^일 및 5 ^{일 리브} 사이의 가슴 튜브 (28G, 돈으로 좌우되는 카테터), 놓습니다.
10. 피부를 닫습니다 갈비뼈 4-0 Prolene 실행 봉합 (Ethicon, Norderstedt, 독일) 적응 6-0 Prolene 실행 봉합 (Ethicon, Norderstedt, 독일)를 사용하여, 레이어에서 흉부 절개를 닫습니다.
11. 신중하게 2ml 주사기 (그림 3)의 도움으로 흉부 드레인. 의 뒷면에있는 마우스를 놓습니다. 이제 endotracheal 튜브를 꺼내 7-0 Prolene의 봉합을 (Ethicon, Norderstedt, 독일)를 사용하여 하나의 스티치와 함께 tracheal 카트리지 반지를 적응.
12. 마우스의 얼굴 마스크를 놓고 봉합 (Ethicon, Norderstedt, 독일)을 실행하고 4-0 Prolene을 사용하여 피부를 닫습니다.

확인

내사 - 결합의 성공을 확인하는 다른 가능성이 있습니다.

트로포닌 검사는 동물을 안락사시키려는 필요없이 150 밖에 내 혈액을 사용하여 수술 후 6 때까지 18 시간 수행할 수 있습니다. 혈액은 맞춤 트로포닌 검사 키트 (파악 T 감성적, 로체, 만하임) (그림 4)에 적용됩니다. 트로포닌은 근육 세포의 굴지의 필라멘트에서 규정하는 단백질이며, 근육의 세 가지 유형의 다른 isotypes있다. isotypes cTnI와 cTnT는 심장에서 발견되고 조직 부상에 출시하고 있습니다. 트로포닌 T (cTnT)에 대한 표준 시험은 두 마음이 특정 단클론 항체 하나의 함정 혈액 샘플에서 트로포닌 기반으로, 두 번째는 마커입니다.

infarcted 지역은 삼일 (그림 5) 이후 macroscopically 확인할 수 있습니다.

TTC (2,3,5 - Triphenyltetrazolium 염화) 얼룩 대책 조직 생존이 경색 크기를 평가하는 데 사용됩니다. 에번스 청색 색소 (1.5 %, 1.0mL)에 인산 버퍼 호수 (PBS)가 심근 허혈성 영역을 측정하는 왼쪽 심실 캐비티에 주입합니다. 마우스는 euthanized되고 마음이 조각에 수확하고 sectioned입니다. 조직의 조각은 20 분에 대해 37 ° C에서 1퍼센트 TTC PBS 용액, pH를 7.4에서 incubated입니다. 조직은 2-8에서 하룻밤 PBS 버퍼 포르말린 10 % 해결된 ° C. TTC는 염색 에반스 블루 부정적인 영역 (그림 6) 전 (前) 생체내을 관리합니다.

조직학의 경우 마우스 euthanized 수 있으며 마음이 더 처리를위한 내장되어야한다. 파라핀 섹션을 수행 후, 슬라이드는 H & E (hematoxylin 및 eosin) 물들일 또는 fibrotic 조직 (그림 7)를 시각화하는 trichrome 있습니다.

그림 1 : Tracheal 튜브.
1A : 노출 기관, 복부 자궁 절개 후.
1B : 기관은 후두에 꼬리 두 연골의 고리를 열립니다.
1C : Tracheal 튜브가 기관에 삽입됩니다.

그림 2 : 심장은 왼쪽 단면 thoracotomy를 통해 노출, 그 소년이 출혈도 잡았입니다.

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그림 3 : 흉부가 폐쇄되면 늑막 드레인이 수행됩니다. 마우스가 마취하에 아직도있다.

그림 4 : 트로포닌 검사가 긍정적인 경우 두 라인이 몇 분 후에 나타납니다.

그림 5 : explanted 마음을 표시합니다.
5A : 어두운 약간 흰 색상과 허혈성 면적 마음의 매크로 볼 수 있습니다.
5B : infarcted 마음의 단면, 허혈성 지역은 오른쪽 상단 모서리에 표시됩니다.

토론

요약이 비디오는 소년 - 결합 모델을 단계별로 단계를 시각화하고 쉽게 가능 수술 절차로 생쥐에서 내사 - ligations를 식별합니다.