LAD-Ligation: einem Mausmodell der Myokardinfarkt

Zusammenfassung

Dieses Video zeigt, wie eine schnelle und zuverlässige Modell nutzen, um pathobiologischen und pathophysiologischen Prozessen der Myokardischämie zu studieren.

Zusammenfassung

Forschung Modelle der Infarkt und Ischämie sind unerlässlich, um die akute und chronische pathobiologischen und pathophysiologischen Prozessen in Myokardischämie zu untersuchen und zu entwickeln und zu optimieren künftige Behandlung.

Zwei verschiedene Methoden zur Erstellung Myokardischämie sind in Labornagern durchgeführt. Die erste Methode ist die Kryo-Infarkt, eine schnelle, aber ungenaue Methode, wo ein Kryo-Stift auf der Oberfläche des Herzens (1-3) angewendet wird, zu schaffen. Mit dieser Methode kann der Wissenschaftler nicht garantieren, dass die Kryo-Narbe Ischämie führt, auch eine große Myokardschäden erstellt, zeigt pathophysiologischen Nebenwirkungen, die nicht auf Herzinfarkt in Zusammenhang stehen. Die zweite Methode ist die permanente Ligation der linken vorderen absteigenden Arterie (LAD). Hier werden die LAD ist mit einem einzigen Stich ligiert und bilden eine Ischämie, die fast sofort gesehen werden kann. Durch das Schließen der LAD, sind keine weiteren Blutfluss in diesem Bereich nicht erlaubt, während die umgebenden Herzmuskelgewebe ist fast nicht betroffen. Dieses chirurgische Verfahren ahmt die pathobiologischen und pathophysiologische Aspekte auftretenden Infarkt-bezogenen Myokardischämie.

Die Methode in diesem Video vorgestellt zeigt den chirurgischen Eingriff einer Maus Infarkt Modell durch Ligation der LAD. Dieses Modell ist für pathobiologischen und pathophysiologischen sowie immunbiologische Studien über Herzinfarkt bequem. Die gezeigten Technik bietet eine hohe Genauigkeit und korreliert gut mit histologischen Schnitten.

Protokoll

Balb / C Mäuse mit einem Gewicht von mindestens 20g im Alter von 8 bis 12 Wochen sind von Charles River (Sandhofer Weg 7, D-97633 Sulzfeld) erworben.
Mäuse sind unter üblichen Bedingungen, gefüttert Standard-Maus-Pellets und Wasser ad libitum untergebracht. Anesthetize Maus mit Isofluran (2%) mit einer Induktion Kammer.

1. Shave Halsbereich und die linke Seite des Brustkorbs und desinfizieren mit 80% Ethanol.
2. Platzieren Sie die Maus auf den Rücken und legen Sie eine Gesichtsmaske über seinen Mund und Nase zu halten die Anästhesie.
3. Überprüfen Sie die Reflexe Einklemmen des Schwanzes und Hinterpfoten, um sicherzustellen, dass die Maus ausreichend narkotisiert ist.
4. Unter mikroskopischer Sicht führen Sie eine Mittellinie zervikale Inzision Trennung der Haut, Muskeln und Gewebe für die Luftröhre.
5. Wenn die Luftröhre freigelegt schneiden ein kleines Loch in das Gewebe zwischen zwei Patronen Ringe unterhalb der Glottis bis zu den Endotrachealtubus (Abbildung 1) einzufügen. Legen Sie die Endotrachealtubus Halten der kraniale Teil der Luftröhre mit mikrochirurgischen forecepts. Überprüfen Sie die Brust Bewegung sicher sein, dass beide Lungenflügel gut belüftet sind.
6. Die Atemfrequenz (RR) sollte etwa 110 pro Minute, mit einer inspiratorischen Druck von 17 bis 18cm H ₂ O. Drehen Sie die Maus vorsichtig, liegt auf der rechten Seite, mit Blick auf die linke Seite. Führen Sie eine leftsided Thorakotomie zwischen dem ^3. und der ^4. Rippe und sezieren das Gewebe und Muskeln vorsichtig mit einem Kauter, um Blutungen zu verhindern.
7. Öffnen Sie den Brustkorb sorgfältig, nachdem der Brustkorb geöffnet wird, finden die Herzen, ohne die Lunge mit einem spitzen Gegenstand. Entfernen Sie nun den Teil der Herzbeutel, die für das Herz ist.
8. Die LAD ist zwischen Lungenarterie und dem linken Vorhof befindet. Verwenden Sie einen 8-0 Prolene Naht (Ethicon, Norderstedt, Deutschland), um die LAD proximal mit einer einzigen Naht (Abb. 2) zu unterbinden.
9. Legen Sie eine Thoraxdrainage (28G, käuflich Katheter), zwischen dem ^4. und dem ^5. Rippe.
10. Schließen Sie die Brust Einschnitt in Schichten mit 6-0 Prolene fortlaufenden Nähten (Ethicon, Norderstedt, Deutschland) an den Rippen und 4:0 Prolene fortlaufenden Nähten (Ethicon, Norderstedt, Deutschland) Adaption auf der Haut zu schließen.
11. Lassen Sie den Brustkorb mit Hilfe einer Spritze 2ml sorgfältig (Abbildung 3). Platzieren Sie die Maus auf dem Rücken. Jetzt nimmt man den Tubus aus und passen Sie die tracheale Patrone Ringe mit einem einzigen Stich mit 7-0 Prolene Fäden (Ethicon, Norderstedt, Deutschland).
12. Legen Sie die Maske auf der Maus und schließen Sie die Haut mit 4-0 Prolene fortlaufenden Nähten (Ethicon, Norderstedt, Deutschland).

Bestätigung

Es gibt verschiedene Möglichkeiten, um den Erfolg des LAD-Ligation zu bestätigen.

Der Troponin-Test kann von 6 bis 18 Stunden nach der Operation durchgeführt werden, mit nur 150 l Blut, ohne die Notwendigkeit, das Tier einzuschläfern. Das Blut wird auf eine individuelle Troponin-Test-Kit (TROP T Sensitive, Roche, Mannheim) (Abbildung 4). Troponin ist ein regulative Protein in der Aktin-Filamente der Muskelzelle, gibt es verschiedene Isotypen in den drei Arten von Muskeln. Die Isotypen cTnI und cTnT sind im Herzen gefunden und sind in Gewebeverletzung freigesetzt. Der standardisierte Test für Troponin T (cTnT) auf zwei Herzen spezifischen monoklonalen Antikörper, einer fängt die Troponin in der Blutprobe basiert, ist der zweite Marker.

Das Infarktareal kann makroskopisch nach 3 Tagen (Abbildung 5) identifiziert werden.

TTC (2,3,5-Triphenyltetrazoliumchlorid) Färbung Maßnahmen Gewebeviabilität zur Infarktgröße zu bewerten. Evans blauen Farbstoff (1,5%, 1,0 ml) in Phosphat-gepufferter Salzlösung (PBS) in den linken Ventrikel injiziert, um den myokardialen ischämischen Bereich zu messen. Die Maus ist eingeschläfert und das Herz wird geerntet und geschnitten in Scheiben schneiden. Die Gewebeschnitte werden in 1% TTC PBS-Lösung, pH 7,4 bei 37 ° C für 20min inkubiert. Die Gewebe werden in 10% PBS-gepuffertem Formalin über Nacht bei 2-8 ° C fixiert TTC wird ex vivo zu färben Evans blue-negative Bereiche (Abb. 6) verabreicht werden.

Für die Histologie der Maus muss eingeschläfert werden und das Herz hat für die weitere Verarbeitung eingebettet werden. Nach der Durchführung Paraffinschnitte werden Objektträger mit H & E (Hämatoxylin und Eosin) gefärbten oder Trichrom zu Bindegewebe (Abb. 7) zu visualisieren.

Abbildung 1: Trachealtubus.
1A: Exposed Luftröhre, nach ventral zervikalen Inzision.
1B: Trachea ist zwei Knorpelspangen kaudal des Kehlkopfes eröffnet.
1C: Trachealtubus in die Luftröhre eingeführt.

Abbildung 2: Das Herz durch eine linksseitige Thorakotomie ausgesetzt ist, die LAD ligiert.

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Abbildung 3: Nach dem Brustkorb geschlossen wird, eine Pleura drain durchgeführt wird. Die Maus ist immer noch unter Narkose.

Abbildung 4: Zwei Linien erscheinen nach ein paar Minuten, wenn die Troponin-Test ist positiv.

Abbildung 5: Zeigt die explantierten Herzen.
5A: Makroskopische Ansicht des Herzens mit den ischämischen Bereich mit einem verschossenen weißliche Farbe.
5B: Querschnitt durch den Infarkt Herz, zeigt den ischämischen Bereich in der oberen rechten Ecke.

Diskussion

Zusammenfassend visualisiert dieses Video der LAD-Ligatur-Modell Schritt-für-Schritt identifiziert und LAD-Ligation in Mäusen als leicht durchführbar chirurgischen Eingriffen.