Doğrudan Serebral emboli görselleştirme için Kombine Yakın kızılötesi Floresan Görüntüleme ve Mikro bilgisayarlı Tomografi

Özet

Bu protokol serebral emboli görselleştirmek için kombine yakın kızılötesi floresan (NIRF) görüntüleme ve mikro-bilgisayarlı tomografi (mikroBT) uygulanmasını açıklar. Bu teknik trombüs yükü ve evrim ölçümü sağlar. MikroBT'lerin tekniği altın nanopartiküller kullanarak canlı hayvan içinde trombüs görüntüler ise NIRF görüntüleme tekniği floresan, eksize beyinde trombüs etiketli görselleştirir.

Özet

Doğrudan trombüs görüntüleme tromboembolik enfarktüsü kök nedenini görüntüler. Görüntü trombüs edememek doğrudan dolaylı ölçümlere dayanarak daha inme çok daha iyi soruşturma sağlar ve güçlü ve sağlam damar araştırma aracı olacak. Biz bir moleküler görüntüleme trombüs işaretleyici ile trombüs etiketler optik görüntüleme yaklaşımı kullanmak - kovalent pıhtı olgunlaşma sürecinde aktif pıhtılaşma faktörü XIIIa fibrine çapraz bağlama enzimatik etkisi ile trombus fibrin bantlar ile bağlantılı olan bir Cy5.5 yakın kızılötesi flüoresan (NIRF) probu. fibrin: Bir mikro-bilgisayarlı tomografi (MikroBT'lerin) tabanlı bir yaklaşım pıhtı önemli bileşenini hedef fonksiyonalize trombüs arayan altın nanopartiküller (AuNPs) kullanır. Bu çalışma, in vivo mikroBT içinde birleştirildi ve embolik inme, bir fare modelinde, tromboemboli ex vivo NIRF görüntüleme için ayrıntılı bir protokol açıklamaktadır. Bu, in vivo olarak göstermektedir </ em> MikroBT'lerin ve fibrin hedefli glikol-kitosan AuNPs (yalan-GC-AuNPs) in situ trombüs ve serebral emboli trombüs hem görselleştirmek için kullanılabilir. Ayrıca seri doku plazminojen etkinleştirici aracılı trombolitik tedavi etkilerinin izlenmesi için in vivo MikroBT'lerin-bazlı direkt trombüs görüntüleme kullanımını tarif eder. Geçen görüntüleme seansından sonra, biz ex vivo NIRF ölçüde ve beyinde kalıntı tromboemboli dağılımının görüntülenmesi ile göstermektedir. Son olarak, biz niceliksel görüntü MikroBT'lerin ve NIRF görüntüleme verileri analiz açıklar. Doğrudan trombüs görüntüleme kombine teknik trombüs görselleştirme iki bağımsız yöntemler karşılaştırıldığında sağlar: on trombüs ilgili floresan sinyal alan ex vivo olarak NIRF görüntüleme vs in vivo hiperdens MikroBT'lerin trombüslerinin hacmi.

Giriş

6 kişiden biri hayatlarının bir noktasında felç olacak. İskemik inme farkla en yaygın inme tipine göre ve tüm inme vakalarının yaklaşık yüzde 80 oluşturuyor. tromboemboli bu iskemik inme çoğunluğu neden olduğundan, direkt trombüs görüntülemede artan bir ilgi var.

Yaklaşık 2 milyondan fazla beyin hücreleri sloganı "Zaman Brain olduğunu" lider, orta serebral arter tıkanıklığı ¹ her dakika boyunca öldüğü tahmin edilmiştir. Bilgisayarlı tomografi (BT) çalışmaları hızla yapılır ve yaygın olarak mevcuttur edilebilir; Bu nedenle, CT, ilk teşhis ve hiperakut iskemik inme tedavisi için tercih edilen görüntü olmaya devam etmektedir. Trombolitik için doku plazminojen aktivatörü (tPA) uygulanmasını ve / veya endovasküler pıhtı-alma ² triaging: BT kritik erken kararlar bilgilendirme için özellikle değerlidir. Güncel BT tabanlı trombüs görüntüleme, ancak, seri Cerebra'ya izleyemezin vivo l tromboemboli, dolaylı yöntemler kullanır çünkü trombüs göstermek için: İyotlu kontrast kan havuzunun opasifikasyon sonra, trombüs damarlarda dolma defekti olarak gösterilmiştir. Bu şekilde trombüsün görüntüleme tekrarlanan engel iyotlu kontrast tekrarlanan uygulaması ile ilişkili doz limitleri ve riskleri vardır.

Böylece, daha hızlı ve daha iyi tedavi kararları izin vermek için inmeli hastalarda serebral trombüs için doğrudan görüntüleme metodolojisi için kritik bir ihtiyaç vardır. Biz bir trombüs arayan nanopamküllü moleküler görüntüleme ajanı kullanımı ile, CT, inme, şu anda kullanılan cephe görüntüleme yöntemi değerini artırarak, bunu gerçekleştirmek için öneriyoruz.

Biz mikro-bilgisayarlı tomografi (MikroBT'lerin), hızlı veri toplama ex vivo ya da in vivo (küçük hayvan) BT görüntüleme sürümü kullanarak bu maddenin kullanımını göstermiştirsup> 3,4. Hatta (insan ölçekli tarayıcılardan mevcut çok daha kötü) küçük hayvan mikroBT için göreceli olarak zayıf yumuşak doku kontrast, görüntüleme ajanı aramak ve BT, moleküler tarafından geliştirilmiş bir 'yoğun damar işareti' üzerine onlara hiperdens yaparak trombüs işaretlemek başardı görüntüleme.

BT tekniği tamamlayan grubumuz serebral trombüs yükü ⁵ görselleştirmek için Cy5.5 yakın kızıl ötesi floresan (NIRF) prob kullanılarak optik direkt trombüs görüntüleme tekniği geliştirdi önce gelmiştir. Bu otopsi beyinleri üzerinde bir ex vivo tekniktir, ancak çok hassas olduğunu ve araştırma ortamında in vivo veriler onaylamak için hizmet vermektedir.

BT ve NIRF hem trombüs arayan görüntüleme teknikleri dayalı olması bizi karşılaştırmak ve iskemik inme gelişim süreci trombüs ve trombüs görüntüleme rolünü son derece bilgilendirici veri elde etmek bu teknikleri kontrast sağlar.

Here, in vivo ve ex vivo mikroBT NIRF görüntüleme birleştirilmiş bir tekniğin ayrıntılı bir protokol doğrudan embolik inme, bir fare modelinde embolisi görselleştirmek için tarif etmektedir. Bu basit ve sağlam yöntemler vermektedir ex vivo veriler, ardından tedavi sırasında in vivo bir istem ve kantitatif olarak trombüs yükü / dağıtım ve dinamik trombüs evrim karakterizasyonu in vivo değerlendirilmesi doğru etkinleştirerek trombotik hastalıkların anlayışımızı ilerletmek için yararlıdır in vivo görüntüleme bulguları teyit için bir kontrol ve referans standardı olarak.

Protokol

Bu protokolde gösterilen tüm hayvan prosedürleri gözden geçirilecek ve Dongguk Üniversitesi İlsan Hastanesi Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından onaylanmış ve Hayvanların Bakım ve Kullanımı için NIH Kılavuzu'nda belirtilen usul ve esaslara uygun olarak yürütülmüştür.

Floresan Marker ile Etiketli Eksojen Oluşturulan Clot 1. Hazırlık (Şekil 1)

1. % 30 oksijen (1.5 L / dak% 100 oksijen) ile karıştırılmış% 3 izofluran ile indüksiyon odasında bir fare anestezisi. kas tonusunu gözlemleyerek ve ayak tutam refleks yokluğunu teyit ederek anestezi yeterli derinliği sağlamak.
2. Yüzüstü pozisyonda steril bir örtü üzerinde hayvan koyun ve% 30 oksijen ile karıştırılır bir inhalasyon maskesi ve% 2 izofluran kullanarak anestezi altında tutmak. aseptik teknikleri ve steril önlük / maskeler / eldiven / araçlarını kullanarak aşağıdaki prosedürleri gerçekleştirin. temizlik ve önce% 70 alkol ile deneysel alanının hijyeninin steril koşulları sağlamaknd prosedürlerinden sonra.
3. Kardiyak delme ⁶ sonra yaklaşık 300 ° 1000 ul arter kan toplamak. Floresan pıhtı işaretlemek için, 30 ul C15 sonda ⁵ (20 umol / L konsantrasyon), aktive edilmiş faktör XIII (FXIIIa) pıhtılaştırıcı enzim fibrine çapraz bağlama etkinliğine duyarlı Cy5.5 flüoresan sonda ile 70 | il tam kan karıştırın (Şekil 1A ). 20 cm uzunluğunda polietilen tüp (PE-50, ID 0.58 mm) içine 3 ml şırınga (23 gauge iğne) ile karışık kan enjekte edilir. PE boru sterilize (ya da üretici tarafından steril onaylı) ve pıhtılar bir doku kültürü kaputu aseptik hazırlanmış olmalıdır olmalıdır.
4. solunum ve kalp nabız eksikliği gözlemleyerek hayvanın ölümüne doğrulayın.
5. Daha önce rapor edildiği gibi ^7, 22 saat boyunca 4 ° C 'de, daha sonra 2 saat süre ile, oda sıcaklığında, kan yüklü tüp boş ve aşağıdaki işlemleri yerine getirir.
6. 1.5 cm uzunluğunda parçalar halinde trombüs içeren tüp Cut. Fosfat tamponlu tuz (PBS) ile dolu bir 3 ml hava ile hafifçe tüpün her bir parçaya PBS enjekte edilerek bir PBS içeren 6 oyuklu plaka üzerine trombus dışarı atılması. PBS (Şekil 1B) ile trombüs üç kez yıkayın.
7. Hava kabarcıklarını kaçınarak dikkatli bir şekilde 30 olan bir salin doldurulmuş 1 ml şırınga ile, yıkandı, trombüs çizerek 1,5 cm uzunluğundaki trombüs ile 15 cm uzunluğunda bir PE-10 tüpü (ID 0.28 mm), distal uç bölümünü yük borunun yakın ucuna yerleştirilir gauge iğne.
8. Orta serebral arter (MCA) üzerine yerleştirileceği bir konik uca (İD 200 um) sahip olacak şekilde modifiye 3 cm uzunluğunda PE-50 tüpü (ID 0.58 mm) ile trombüs yüklü PE-10 tüpü geç - serebral anterior embolik inme bir fare modelinde (Şekil 1C) de internal karotis arter (ICA) arter (ACA) çatallanma alanı.

2. tromboembolik inme bir fare modeli Modellenmesi (Şekil 2)

1. AnesthetizDaha önce% 30 oksijen (/ dk 1.5 L) ile karıştırıldı% 3 izofluran ile indüksiyon odasında ⁷ belirtildiği gibi adet farklı fare konturlu edilmesi. ameliyat sonrası ağrı gidermek için (5 mg / kg) deri altından meloksikam enjekte edilir. kas tonusunu gözlemleyerek ve ayak tutam refleks yokluğunu teyit ederek anestezi yeterli derinliği sağlamak.
2. anestezi sırasında kurumasını önlemek için her göze veteriner merhem küçük bir miktar uygulayın. aseptik teknikleri ve steril önlük / maskeler / eldiven / araçlarını kullanarak aşağıdaki cerrahi prosedürleri gerçekleştirin. sırasında, temizlik ve daha önce% 70 alkol cerrahi alanının hijyeninin steril koşulları sağlamak ve ameliyat sonrası.
3. Bir ameliyat masasına fareyi hareket ettirin. Yüzüstü pozisyonda steril bir örtü üzerinde hayvan koyun ve bir inhalasyon maskesi ve% 2 izofluran kullanarak anestezi altında tutmak. Sonra, bir rektal termometre geribildirim ile bir homeothermic battaniye kullanarak 36.5 ° C vücut ısısını kelepçe.
4. Surgi sonrabetadin ve% 70 alkol ile cal hazırlık, sol kulak ve göz arasındaki kafa derisi üzerinde bir neşter kullanılarak 1 cm dikey bir kesi yapmak. maruz sol temporal kemik yüzeyine bir lazer Doppler debi ölçer fiber optik distal ucunu Tutkal (1 mm sol ve bregma aşağıda 4 mm). Ardından, Doppler izleme (Şekil 2A) başlatın.
5. hayvan uzandım. bir iğne takılı bir dize ile üst ön diş çekerek boyun düzeltin ve boyun alan tıraş. Sonra, açık yayıldı, 3 cm'lik dikey orta hat kesi yapmak ve peri-vasküler yumuşak dokuları keserek sol karotis ampul alanını maruz kalmaktadır. vagus siniri zarar vermemek için dikkatli olun.
6. steril 6-0 siyah ipek sütür kullanılarak sol proksimal karotis arter (CCA) Ligate ve sol ICA ve steril 7-0 siyah ipek sütür ile sol pterygopalatine arteri (KİK) Arter.
7. Sol dış karotid arter usi dalıdır sol üstün tiroid arter, dağlamakng bir monopolar elektrik koter ve sol proksimal dış karotid arter (ECA) gevşek ve sıkı steril 7-0 siyah ipek sütür kullanarak daha fazla uzak siteyi Arter.
8. mikro makas kullanılarak ECA'nın lige siteler arasında küçük bir delik (yaklaşık 0.2 ila 0.25 mikron çaplı) görünür.
9. proksimal ECA ligasyonu gevşetilmesi ise ECA deliğe trombüs içeren kateter yerleştirin. yerinde kateter cinch için CCA içine kateter ilerledikten sonra tekrar proksimal ECA ligasyonu sıkın.
10. Distal ligasyon sitesine uzak olan ECA distal kısmını kesmek için dağlamak ve ücretsiz proksimal ECA CCA gelen kateteri geri çekilirken ICA yönüne hizalamak için saat yönünde çevirin. hemen ICA ligasyonu söküldükten sonra distal ICA ACA çatallanma alanı - Sonra, kateter MCA içine yaklaşık 9 mm ilerlemek. Ardından, ICA ligasyonu sıkın.
11. nazikçe tarafından çatallanma alana trombüs yerleştirinenjektörü 1 ml basarak trombüs enjekte etmek. Trombüs başarıyla damarı (Şekil 2B) tıkalı ise, başlangıca kıyasla% 30 veya daha düşük tarafından düşürülmelidir Doppler beyin kan akımı (CBF), azalmayı kontrol edin.
12. kateteri çıkarın ve hemen ve sıkı ECA proksimal siteyi Arter. Buna ek olarak, AKA ve PPA unligate.
13. 6-0 ipek sütür ile kesi kapatın. (Trombüs enjeksiyondan sonra 30 dakika süreyle, burada) gerekli zamana yayılan Doppler izleme devam sonra anestezi durdurun. Boş bir kafes içinde fare dönün ve bir ısıtma lambası ile sıcak tutmak. sternal yatma korumak için yeterli bilince kazanmıştır kadar fare gözetimsiz bırakmayın.

Serebral Trombüsü in Vivo mikroBT Görüntüleme 3. (Şekil 3)

1. Yeniden uyutmak önceden belirlenmiş bir zaman noktasında adım 2.1 açıklandığı gibi hücumunu takip (burada 1 saat)% 2 izofluran ile fareembolik inme nedeniyle serebral arterde trombüs yerleştirme. ayak tutam refleks yokluğunu teyit ederek anestezi yeterli derinliği sağlamak. anestezi sırasında kurumasını önlemek için her göze veteriner merhem küçük bir miktar uygulayın.
2. 10 mM PBS içerisinde 10 mg Au / ml'lik bir konsantrasyonda, fibrin hedefli altın nano parçacıklar (Fib GC-AuNP ⁴⁾ yeniden süspanse edin, ve nanopartiküllerin çözünme ve dağılma sağlamak için 30 dakika boyunca trombüs görüntüleme maddesi sonikasyon. 300 ul fib-GC-AuNP (10 mg / ml) penil damar içine enjekte edilir.
3. Bir MikroBT'lerin makinesinin yatakta hayvan koyun ve hareket eserler azaltmak için bir iğne takılı bir dize ile üst ön diş çekerek boynunu düzeltin.
4. FIB GC-AuNP enjeksiyonundan 5 dakika sonra da beyin MikroBT'lerin görüntüler elde etmek için başlar. Burada tarif edilen deneyler için, aşağıdaki görüntüleme parametrelerini kullanın: 65 kVp, 60 uA, bakış 26.7 x 26.7 x 27.9 mm ³ alan, 0.053 x 0.053 x 0.054 mm ³ voksel boyutu, kare başına 100 milisaniye, 1 ortalama 360 views, 512 x 512 yeniden matrisi, 600 dilim, 64 sn tarama süresi.
5. Boş bir kafes içinde fare dönün ve bir ısıtma lambası ile sıcak tutmak. sternal yatma korumak için yeterli bilince kazanmıştır kadar fare gözetimsiz bırakmayın.
6. MikroBT'lerin tarayıcı yüklü bir yazılım paketinde 'Yeniden Yapılanma' paneli 'Start' komutunu kullanarak Tıp (DICOM) biçiminde Dijital Görüntüleme ve İletişim içine ham görüntü verileri dönüştürmek.
7. (6. adımda) görüntülerin kantitatif analizleri için, üreticinin talimatlarına göre piyasada bulunan bir yazılım paketi kullanarak TIFF formatında içine DICOM verileri dönüştürmek.
8. nitel hem de nicel bir daha basit ve daha hızlı bir şekilde analiz olarak analizleri için, yeni bir dizi oluşturmak için DICOM formatındaki yazılım paketi ve özgün 0.054 mm kalınlığında görüntüleri kullanmakaşağıdaki gibi, (buradan, 2 mM), 1 veya 2 mm kalınlığa sahip verilen eksenel ve koronal ve görüntüler.
   1. 'Veri Kaynağı' ağaç DICOM klasörü seçin farenin sağ düğmesini tıklayın ve 'MasterDB' veya 'PrivateDB' klasörü almak.
   2. 'Veri Kaynağı' ağacında 'MasterDB' veya 'PrivateDB tıklayın ve ithal klasörü seçin. 'Yükleme Seçenekleri' penceresi açılır zaman soldaki panelde '3D' sekmesini tıkladıktan sonra, 'Tamam'a basın bir yığın olarak klasördeki görüntülerin bir dizi ithal etmek.
   3. Aksiyel ve koronal görüntü pencerelerinde kelimesini 'MRP' tıklayıp açılan menüde 'MIP' seçerek maksimum intensite projeksiyon (MIP) formatına görüntü gösterimini değiştirmek. Aynı pencerelerde: Sonra, '0 [mm] TH' tıkladıktan sonra 2 mm görüntü kalınlığını değiştirmek.
   4. na 2 mm genişlik 3D kullanarakGörüntü yığını keşfetmek ve uygun bir açı ve konumda dilimleme sağlayan vigator bar, trombüs barındıran Willis (İNEK) çemberin, tam kapsama 2 mm kalınlığında eksenel kesit görüntüsünü hazırlamak. 'Çıkış' paneli üzerindeki çekim düğmesine (kamera simgesi) tıklayın. TIFF formatında görüntü kaydetme.
9. Sonra, beş 2 mm beyincik frontal lob bitişik kapak kalın koronal kesit görüntüleri hazırlamak.
   1. ACA trombüs - Birincisi, koronal görüntü iyi MCA görselleştirmek böylece dikkatle eksenel resmin üzerine Navigator çubuğunu hizalayarak ikinci dilim hazırlar.
   2. Sonra, bir bitişik bir şekilde diğer dört dilim hazırlamak. 'Çıkış' paneli üzerindeki çekim düğmesine (kamera simgesi) tıklayın. TIFF formatında görüntü kaydetmek.

4. Tromboliz ve Serebral Trombüsü Vivo mikroBT Görüntüleme (Şekil 3)

1. Hazırlayın 100 cm uzunluğunda PE-1bir ucunda bir 30 gauge iğne ve diğer ucunda bir 1 ml şırınga ile 0 tüpü. tuzlu su (600 ul) ya da tPA (burada 24 mg / kg, 600 ul), hava kabarcıkları kaçınarak ile ya tüp doldurun.
2. Adım 2.1 'de açıklandığı gibi fareyi yeniden uyutmak. hayvanın penis ven içinde iğne ucu takın. MikroBT'lerin makinesinin yatağa dikkatlice hayvan yerleştirin. Daha sonra, hareketsiz ve yatağa bantlayarak kateter sisteminin intravenöz olarak enjekte parçasını stabilize eder.
3. tedavi öncesi temel olarak takip görüntüleme oturumu gerçekleştirin. Ardından, kateter sistemi içine şırınga pistonu basarak 60 ul serum fizyolojik veya tPA ya enjekte. Bu enjeksiyondan sonra süresi (buradan, 30 dakika) bir süre boyunca geriye kalan çözeltisi (540 ul) enjekte etmek için başlar.
4. Önceden belirlenmiş zaman noktalarında adım 3.4 ile aynı parametreler kullanılarak MikroBT'lerin görüntüleri elde edilir: Burada, büyük hap enjeksiyonu sonra 3 ve 24 saat sonra. Aşağıdaki ex vivo olarak NIRF Throm gerçekleştirmek içinBeynin otobüs görüntüleme, servikal dislokasyon ile anestezi altında hayvan euthanize.

5. Ex Vivo NIRF Trombüs Görüntüleme ve Beyin Doku Triphenyl Tetrazolium Klorür (TTC) Boyama (Şekil 4)

1. Hayvanlar öldürüldükten sonra derisini çıkarın ve yukarı sagital sütür doğru foramen magnum gelen makasla kafatası kesti. dikkatle altta yatan beyin yaralanması kaçınarak makas kullanılarak kazıma kafatası kenarlarını yükseltmek, böylece hemisfer çıplak koyarak kranial tonoz çıkarın.
2. onlar NIRF görüntüleme görsel gerektiğini Willis arterlerin daire ile üst üste çünkü, beyin yüzeyine mümkün olduğunca yakın beyin tabanında optik sinirleri kesip. Ardından, açıkça NIRF trombüs görüntüleme için Y-şekil 'MCA / ACA / uzak ICA' görselleştirmek için, hafifçe th maruz serebellar tabanını sıkıştırarak sonra kadarıyla beyin yüzeyine mümkün olduğunca uzak İKA kesipe kesme noktaları (Şekil 4A).
3. NIRF görüntüleme (uyarma / emisyon, 675/690 nm; 1 sn pozlama) gerçekleştirin baz COW arterlerinde floresan etiketli embolisi görüntüler (Şekil 4B, C), yukarı bakacak şekilde kaldırılır beyin dokusu (Şekil 4D) . Ardından, kortikal embolisi görüntüler yukarı bakacak beynin tepe ilave görüntüleme gerçekleştirmek. doku üzerinde tuz birkaç damla koyarak beyin kurumasını önlemek.
4. hızlı koronal 2 mm kalınlığında beyin dilimleri hazırlamak üreticinin talimatlarına göre bir beyin matrisi cihazı kullanılarak: 2 mm 6 adet kalın dilim (2.3, 0.3, -1.7, -3.7, bregmadan -5.7 mm). tuzlu damla kullanarak beyin dilimleri kurumasını önlemek ve ön ve bölümlerin arka yüzeyi hem NIRF görüntüleme gerçekleştirmek.
5. etkisinden sakınılmaktadır ligh için ise, 20 dakika boyunca% 2 trifenil tetrazolyum klorid (TTC) çözelti içinde beyin dilimleri koyunt. Işığa maruz kaçınarak Daha sonra, 4 ° C'de% 4 formaldehit çözeltisi içine dilimleri hareket eder.

MikroBT Görüntüleri ve ImageJ (1.49d) Yazılımı Kullanma 6. Kantitasyonu Trombüs Alanı (Şekil 5)

1. Açık Görüntüler (Şekil 5A).
   1. Açık görüntü sırası dosyalarını 'Dosya> İçe Aktar> Görüntü Sırası' veya 'Dosya> Aç' seçerek bir yığın dosyası oluşturmak için. 'Görüntü> Yazım> 8-bit' ile 8-bit gri tonlama görüntüleri dönüştürün.
2. Milimetre (Şekil 5A) için inç den Birimi dönüştürün.
   1. BT görüntü dosyalarının bir piksel 0.053 mm tekabül zaman kullanmak girmek için '> Set Ölçeği Analiz' '1', '0.053' ve 'piksel cinsinden Mesafe' için 'mm', 'Bilinen mesafe' ve uzunluğu 'Birimi ', sırasıyla.
   2. (Yalnızca) bir ölçek çubuğu mevcuttur,'Düz Çizgi' aracını kullanarak ölçek çubuğu eşit uzunluğu ile bir çizgi çizin. Ardından, milimetre çaplı çubuğun uzunluğunu girmek için '> Set Ölçeği Analiz' kullanın.
3. Arkaplan Çıkarma (Şekil 5B)
   1. Trombüs veya kemik-ilişkili hiperdens bölgelerinde olmadan beyin parankimi bir alana ilgi alanları (ROI) dairesel veya dikdörtgen bölgesini 'belirtin> Düzenle> Seçimi' kullanarak yer ile. Belirtilen ROI yığının her dilim için de geçerlidir, çünkü her dilim hiperdens bölgeleri ile üst üste değilse emin olmak için kontrol edin.
   2. 'Plugin> YG> ROI BG çıkarma' seçin ve 'ortalamadan STDSAPMA Sayısı' için 2.0 girin.
4. Tromboemboliler ilgili hiperdens Lezyonların segmentasyon (Şekil 5C)
   1. '> Eşik Görüntü> Ayarlama' seçin ve Lo 'değerlerini girinwer Eşik seviyesi 've' sırasıyla 22 ve 255 gibi Üst Eşik Seviyesi '. Yeşil üst eşik değerin üzerinde gri tonlarında mavi, eşiklenir piksel alt eşik değerinin altında piksel ve piksel görüntülemek için 'Altında Üzerinde /' seçeneğini seçin.
   2. kemik alanları dahil etmeden tromboemboli ilgili hiperdens lezyonları çevreleyen ROI'leri çizmek için 'Serbest Seçim Aracı' kullanın. Çizim sırasında, eklemek veya sırasıyla, bir bölgeyi kaldırmak için [shift] veya [alt] ya basmaya devam edin.
      Not: hiperdens tromboembolik lezyonlar yerine 'Freehand Seçim Aracı' arasında kemik yapılar uzak ise, 'Değnek Aracı' güvenle 'Hoşgörü' düzeyini değiştirmeden kullanılabilir.
5. Segment Lezyonların miktarının belirlenmesi (Şekil 5D)
   1. Seçmek için 'Alan'> Set Ölçümleri Analiz 'kullanın' Mean Gray Değeri 've' Entegre Yoğunluk (Alan X Ortalama)9 ;. 'Eşik Limiti' ve 'Ekran Etiket': aşağıdaki seçenekleri kontrol edin. Sayısal veri almak için 'Tedbir> Analiz' kullanın. Sonra, bir ".xls" dosyası olarak sonuçları kaydedin.
   2. TIFF biçiminde yığın dosyayı kaydedin. Buna ek olarak, İB'leri kaydetmek için '>> YG yöneticisi Araçlar Analiz' kullanın.

Sonuçlar

Distal internal karotis arter ACA çatallanma alanını (Şekil 6 - Baseline MikroBT'lerin görüntüleri, yalan-GC-AuNP embolik inme sonrası 1 saat sonra (10 mg / ml, 300 ul), açıkça MCA serebral trombüs görüntülendi uygulandıktan sonra in vivo elde edilen ). Takip MikroBT'lerin görüntüleme tuzlu tedavi ile İNEK trombüs hiçbir değişiklik gösterdi. Bununla birlikte, tPA ile yapılan tedavi İNEK trombüs yavaş yavaş kaybolması

Tartışmalar

Bir fibrin in vivo MikroBT'lerin tabanlı görüntüleme için altın nanoparçacık (yalan-GC-AuNP) hedefli ve FXIIIa ex optik görüntüleme prob hedef: Biz embolik inme deneysel modellerde direkt trombüs görüntüleme için birbirini tamamlayan iki moleküler görüntüleme tekniklerinin kullanılması gösterdi floresan görüntüleme vivo.

FIB GC-AuNPs intravenöz uygulanmasından sonra, trombüs konsantrasyona gradyan sonraki (parçacıklarının yüzey...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Machines
microCT	NanoFocusRay, JeonJu, Korea	NFR Polaris-G90
NIRF imaging system	Roper-scientific,Tucson, AZ	coolsnap-Ez
Laser Doppler flowmeter	Perimed, Stockholm, Sweden	PeriFlux System 5000
Surgical microscope	Leica Microsystems, Seoul, Korea	EZ4HD
Inhalation anesthesia machine	PerkinElmer, Massachusetts, USA	XGI-8
Software
NFR control	NanoFocusRay, JeonJu, Korea	NFR Polaris-G90	microCT control software
Lucion	Infinitt, Seoul, Korea	Lucion	3D render imaging software
Lab chart 7	ADInstruments, Colorado, USA	Lab chart 7	rCBF
ImageJ software	Wanye Rasband, NIH, USA	1.49d	imaging analysis
Devices/Instruments
Infusion pump	Harvard, Massachusetts, USA	pump 22(55-2226)
Homeothermic blanket	Panlab, Barcelona, Spain	HB101
Pocket cautery	Daejong, Seoul, Korea	DJE-39
Brain matrice	Ted pella, CA, USA	15003	coronal section
PE-50 tubing	Natsume, Tokyo, Japan	SP-45(PE-50)	I.D. 0.58 mm O.D. 0.96 mm
PE-10 tubing	Natsume, Tokyo, Japan	SP-10(PE-10)	I.D. 0.28 mm O.D. 0.61 mm
30 gauge needle	sungshim-medical, Seoul, Korea
Syringe	CPL-medical, Ansan, Korea		1 & 3 cc
Gauze	Panamedic, Cheonan, Korea
Tape	Scotch, Seoul, Korea	3M-810
Micro forceps	Fine Science Tools, Vancouver, Canada	11253-27	Dumont #L5
Micro scissor	Fine Science Tools, Vancouver, Canada	15000-03	Vannas spring
Scissor	Fine Science Tools, Vancouver, Canada	14084-08	8.5 cm
Black silk suture	Ailee, Busan, Korea	SK6071, SK728	6-0 and 7-0
Reagents
meloxicam	Yuhan, Seoul, Korea
vet ointment	Novartis, Basel, Swiss
10% Povidone-iodine (betadine)	Firson, Cheon-an, Korea
FeCl3	Sigma, Missouri, United States	157740-5G
TTC	Amresco, Ohio, USA	0765-100g
Isoflurane	Hana-Pham, Gyeonggi, Korea	Ifran	100 ml
PBS	Welgene, Daegu, Korea	LB001-02	500 ml
Gold nanoparticles			Synthesis
C15 optical agent			Synthesis
Tissue plasminogen activator	Boehringer Ingelheim, Biberach, Germany	rtPA(actilyse)	20 mg
Normal saline	Daihan Pham, Seoul, Korea	48N3AF3	20 ml