Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Bu iletişim kuralı sentezi, karakterizasyonu ve monomeric amiloid-β42 peptidler amiloid toksisite histolojik analizler ve tespiti takip bir Alzheimer hastalığı modeli kurmak için yetişkin Zebra balığı üretme için enjeksiyon açıklar toplamalardan.

Özet

Alzheimer hastalığı (Ah) bir toksik amiloid-β42 hangi birikimi (Aβ42) peptidler açar sinaptik bozulma, iltihap, nöronal ölüm nörodejeneratif hastalık zayıflatıcı, açıkları öğrenme 's. İnsanlar reklam durumunda kayıp nöronlar kısmen sinir kök/progenitor hücreler (NSPCs) ve düşük neurogenesis Engelli proliferatif kapasitesi nedeniyle yeniden olamaz. Bu nedenle, verimli rejeneratif terapiler de yayılması geliştirmek gerekir ve Nörojenik NSPCs. Zebra balığı (Danio rerio) kapasitesini rejeneratif bir organizmadır ve temel moleküler programlar hangi ile biz tasarım olabilir öğrenebilirsiniz Reklam mücadele için tedavi yaklaşımları. Bu nedenle, Zebra balığı bir reklam gibi modelinde nesil gerekliydi. Bizim metodoloji kullanarak, biz Aβ42 peptid sentetik türevleri doku delici kabiliyetine sahip yetişkin Zebra balığı beynine tanıtmak ve hastalık patoloji ve rejeneratif yanıt analiz. Mevcut yöntemler veya hayvan modelleri üzerinde o Zebra balığı nasıl omurgalı bir beyin doğal olarak yeniden ve böylece insan nörodejeneratif hastalıklar daha iyi endojen NSPCs hedefleyerek tedavisi için bize yardımcı bize öğretebilir avantajdır. Bu nedenle, Yetişkin Zebra balığı beyinde kurulan amiloid-toksisite modeli Nörobilim ve klinik tıp alanında araştırma için yeni yollar açılabilir. Ayrıca, bu yöntem basit yürütülmesi için maliyet-etkin ve verimli deneysel değerlendirme sağlar. Bu el yazması sentezi ve Aβ42 peptidler kod Zebra balığı beyin içine ekleme açıklar.

Giriş

Reklam nöronlar kaybı ile karakterize kronik ilerleyici bir hastalıktır ve serebral korteks1,2,3,4,5' te synapses. Reklam klasik neuropathological işaretlerinden amiloid peptidler birikimi vardır ve neurofibrillary oluşumu (NFTs)6ipliği. Senil plaklar, olarak da bilinen amiloid plaklar, β-Pileli yapıları içinde beyin parankimi5formu amiloid-β (Aβ) peptidler oluşur. Aβ42 birikimi reklam hastalarda, hastalığın ilerlemesinde erken ve kritik bir rol vardır. Sinaptik fonksiyon bozukluğu, Engelli plastisite ve nöronal kayıp7,8,9,10önde gelen olaylar bir çağlayan reklam tetikler.

Teleost Zebra balığı yetişkin beyin düzenleme kök hücre plastisite11,12,13,14,15, , eğitim için mükemmel bir model hizmet veren 16,17,18,19,20 ve21,yılında22,23 de dahil olmak üzere merkezi sinir sistemi (MSS), çeşitli hastalıklarda ,24. Kullanılabilir deneysel yöntemleri19,20,25,26,27,28,29, geniş bir dizi sayesinde 30 , 31, bu çalışmalar bilgilendirici ve uygulanabilir. Zebra balığı CNS13,15,32,33,34,35,36,37doldurmak, kısmen aktif nöron kaybı19,39,40,41,42,43sonra, moleküler programları kullanarak, 38, 44. Bu nedenle, nörodejeneratif hastalık modeli içinde Zebra balığı kurulması omurgalı beynindeki rejeneratif yeteneği ve kök hücre biyolojisi ile ilgili yeni soruları adresine yardımcı olabilir.

Son zamanlarda, sentetik Aβ42 peptidler (Tablo 1)39enjekte edilerek yetişkin Zebra balığı beyin amiloid toksisite modelinde geliştirdik. Bu enjeksiyon neden ateş fenotipleri (örneğin, hücre ölümü, mikroglial harekete geçirmek, sinaptik bozulma ve bellek açıkları), insan beyninin patolojinin anımsatan Bu Zebra balığı-ebilmek var olmak kullanılmış için alabilme gösteren ateş Zebra balığı beyinde peptidler immunohistokimyasal stainings ve rejenerasyon CNS olabilir yetişkin Zebra balığı olarak moleküler mekanizmaları ile tespit edilebilir Aβ4239tespit edilmiştir. Bu protokol için biz sentetik amiloid peptidler makarna bir cerebroventricular enjeksiyon (CVMI) yöntemi27,39,45,46 kullanarak Zebra balığı beyin içine enjeksiyon göstermek Amiloid birikimi (şekil 1) taklit etmek için. CVMI enjeksiyon olarak β-sayfa yapıları üzerine toplamak ve toksisite sarfetmek peptidler, teslim yeni bir yol sağlar. Peptidler45tüm rostro Kaudal eksen boyunca ventrikül alan hedefleme beyin boyunca eşit olarak dağıtılır. Ayrıca, bu yöntem amiloid kapanımlar takip yetişkin Zebra balığı beyinde NSPCs morfolojik ve moleküler yanıt analiz için sağlar. Bu tür çalışmalar bize memelilerde başarılı beyin tamir için bir fikir verecek. Bizim yöntem başarılı rejenerasyon yanıt gerekli moleküler mekanizması kayıp neurons ve fonksiyonel iyileşme ikmal ikna etmek için reklam benzeri belirtiler sonra anlamak için kullanılabilir.

Protokol

Bu iletişim kuralı EU kurallar tarafından önerilen bir standart bir uygulamadır (2010/63) ve Avrupa Toplum Biyoloji ve Tıp (EuFishBioMed) yılında Karlsruhe Enstitüsü, Teknoloji (KIT) Balık modelleri için. Sonra burada açıklanan tüm yöntemleri (Landesdirektion Dresden; belge numarası TVV-52/2015) etik Komisyonu tarafından onaylanmış olan.

1. hazırlık Aβ42 peptid

  1. Synthesize peptidler (bkz. Tablo 1) standart 9-fluorenylmethoxycarbonyl (Fmoc) Kimya 2-(1H-benzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-ile kullanma tetramethyluronoiumhexafluorphosphate (HBTU) kaplin reaktif tarihinde bir otomatik katı fazlı peptid synthesizer 52 olarak. Sentez ölçeğini 100 µmol yapıldı.
  2. 500 mg Fmoc korumalı reçine ile otomatik peptid synthesizer (yükleme kapasitesi 0,2 mmol/g) katı faz yükleyin. Çözünmüş Fmoc korumalı amino asit konsantrasyonu 0.5 M, yük hacimli gerekli ve ilgili synthesizer için hesaplanan olarak.
    Not: Her Fmoc korumalı amino asit kavraması her yapı taşı reçine 47 5 kere fazlalığı ile iki kez etkinleştirmek için hesaplamalar yapılır.
  3. Dimethlyformamide (DMF) peptid sentezi için gerekli reaktifler geçiyoruz. Örneğin, Sigara tepki amino grupları kap için belgili tanımlık harekete geçirmek, HBTU, bir konsantrasyon 0,48 m, % 45 v/v N-Methylmorpholine (NMM) (temel) ve % 5 v/v asetik anhidrit (kapatma karışımı) adlı hazırlayın.
  4. Trifluoroacetic asit (TFA) oluşan bir taze hazırlanmış bölünme karışımı bir karıştırıcı kullanarak sağlam destek sürekli karıştırılarak reçine tüm peptidler ayırmak: Triisopropylsilane(TIS): su: Dithiothreitol (DTT) 90 (v/v): 5 (v/v): 2.5 (v/v): 2,5 (m/v), 4 h için kullanın 10 mL 100 µmol sentez ölçek için.
  5. 100 mL buz gibi Dietil eter için bölünme karışımı ekleyerek cleaved ürün çökelti. 0,45 µm gözenek büyüklüğü ile politetrafloroetilin (PTFE) filtre ve yıkama ile 20 mL buz gibi Dietil eter içeren bir filtrasyon ünitesi üzerinden geçmek.
  6. Filtre uygulanmış peptid filtre kağıdı toplamak ve erime 100 mg 5 ml zarlarını peptid deiyonize su distile: Asetonitril 1:1.
  7. Ters fazlı yüksek basınçlı sıvı Kromatografi (HPLC) üzerinde Boncuk boyutu 10 µm gözenekli polistiren divinylbenzene sütun ile donatılmış bir yarı partiye hazırlık HPLC ile arındırmak.
    1. Sütun ön ısı ve 50 ° C cihazı Isıtma bir sütun kullanarak korumak. Degrade % %5 100 solvent B 25 dk 4 mL/dak., uygulayarak bir otomatik kesir toplayıcı kullanarak büyük kesirleri toplamak
      Not: Solvent A % 0,1 olduğunu TFA su ve solvent B % 0,1 olduğunu TFA Asetonitril 52.
    2. 220, Kromatografik izlemek nm, uygun doruklarına toplamak ve LC-Bayan kullanarak analiz
  8. Onayla saflık tarafından analitik ters faz ultra yüksek basınç sıvı Kromatografi (UPLC) vasıl 220 nm UV bulmak ile örnek bir analitik C18 sütun (Boncuk boyutu 1.7 µm) üzerinden geçen süre izleme. Peptid ürün tarafından kütle spektrometresi onaylayın.
    Not: Bir electrospray iyonlaşma kütle spektrometresi (ESI-MS) ve Tandem Quadrupole Dedektör UPLC birleştiğinde.
  9. Bir yuvarlak alt şişesi içinde istenen peptid doğru kesirler için kabarık bir toz 0,052 mbar, bir vakum uygulayarak lyophilize. Vakum pompası süresiz olarak-78 ° C. Store-80 ° C'de tutulan bir dondurucu birimine çift.
  10. Kullanmak lyophilized peptid Asetonitril bir karışımı 1 mM stok çözeltisi hazırlamak için: DMF: analitik sınıf su 1:1:1 deneyler için. Peptidler Bu çözümde toplamak değil gibi bu eriyik-ebilmek var olmak stok en az 6 ay için.

2. Enjeksiyon karışım hazırlanması

  1. lyophilized peptidler seyreltmek için fosfat tamponlu tuz çözeltisi (PBS) (137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na 2 HPO 4, 2 mM KH 2 PO 4, pH 7,4) hazırlayın.
  2. Peptid PBS 20 µM son bir konsantrasyon için geçiyoruz. Bu çözüm taze hazırlayın. İyice karıştırın ve buza enjeksiyon kadar saklayın. Çözüm toplamada önlemek için 30 dk fazla olamaz.

3. Anestezi

  1. hazırla anestezikler, düzenli balık suda dolaşan üzerinden % 0,1 etil-m-aminobenzoate methanesulphonate (MESAB), hisse senedi çözüm sistem. Anestezi çözüm %0.0025 (v/v) son bir konsantrasyon için hazır olun.
  2. Bir taşıma kaba 5 L sistem su ile onların tank balık için istediğiniz sayıyı kaldır.
  3. Yarı-dolgu plastik bir Petri kabına (90 mm) 40 mL anestezi ile. Bu yemek için iğne kullanın.
  4. Opercular hareketi sona erdi kadar anestezi balıkta kuluçkaya.

4. Cerebroventricular mikroenjeksiyon

  1. enjeksiyon aparatı hazırlanması
    1. hazırla cam enjeksiyon kılcal bir iğne çektirmenin aşağıdaki parametreleriyle kullanma: Isıtma döngüsü, 537; çekerek döngüsü, 250; hız, 1,5 s; zaman, 80 Bayan
    2. basınç ayarı için 25 psi basınç kaynağı getirmek.
    3. Microinjector parametreleri şu şekilde ayarlayın: tutun 20 psi basınç; basınç çıkarma 10 PSI; dönem değeri 2.5; gating değeri 100 Bayan
    4. Cam kılcal enjeksiyon çözüm yükleyin. Cam kılcal mikroenjeksiyon yuvasına takın. Enjeksiyon açısını 45 ° için ayarlamak.
      Not: Başvurular 27 , 46 de açıklandığı gibi daha ayrıntılı iletişim kuralları bulunabilir.
  2. Yer bir balık yeni bir petri içine dolu anestezi solüsyonu (aynı derecede içinde adım 3.3).
  3. Balık forseps ve orient enjeksiyon için tutun.
  4. Bir yarık 30 G iğne ucu kafatasında üzerinde optik tectum iki yanal tabak buluştuğu kullanarak oluşturun. İpucu beyin dokusu içine eklemek değil, bu kanama ve hasara neden olur. Bkz: 27 , 45 , 46 ek ayrıntılar için başvurur.
  5. Cam kılcal slit takın.
    1. Sadece iğne kullanmanızı ve kafatası ile daha--dan 1 mm nüfuz değil. Balık tutmaya ve cam kesi site üzerinden kapiller ucunu takın.
    2. Cam telencephalon 45 ° açıyla doğru kapiller ucu gelecek şekilde yönlendirin. Çözüm 1 µL enjekte. Sıvı Enjeksiyon sonra hemen çekilmesini.

5. Kurtarma

  1. balık geri taşıma kapsayıcıya o iyileşene kadar yer. Optimum su kalitesini artırmak amacıyla düzenli olarak dolaşımdaki balık su kapsayıcı bağlanın.
    Not: Kurtarma normalde 1 dk sürer. Daha uzun sürerse, Balık anestezikler için daha kısa bir defa (Bu deneyci tarafından optimize edilmiş olması gerekir) tutulmalıdır.

6. Doku hazırlık ve Sectioning

  1. balık ödün önce istenen bir süre için bekleyin.
    Not: Bu deneysel soruda bağlıdır. Amiloid birikimi 1 gün sonra enjeksiyon gibi erken görülebilir.
  2. Bağlı olarak etik kurallara uygun yöntemi kullanarak balık kurban (örneğin, 0.1 M MESAB balıkla tedavi).
  3. Sivri forcep dorsal tarafta kullanarak optik tectum Kurukafa ikiye ayıracağım ve kafa sadece arkasında bir neşter kullanarak göğüs fin teşrih.
  4. Tamir % 2 paraformaldehyde (PFA) kullanarak kafalarını gecede, İngiltere'de yılın 4 ° C. kullanım 3 mL plastik tüp içinde başına bir vidalı kapaklı.
    Uyarı: uygun kişisel koruyucu ekipman PFA işleme giyerler.
  5. İçin üç kez 0.1 M kafaları cryoprotection yıkayıp, kalsiyumun, fosfat tampon (pH 7,4), sonra onları % 20 sucrose/20% ethylenediaminetetraacetic (EDTA) çözüm aktarmak ve gecede 4'te kuluçkaya ° C.
    6. Doku reçine, kesit içine gömmek için
  6. plastik Histoloji kalıpları kuru buz (yaklaşık 3-5 bir blok dondurmak için min) % 7.5 gelatin/20% Sükroz çözümde kafaları dondurmak. -80 ° C'de örnekleri depolamak veya sonraki adıma (cryosectioning) devam.
  7. Bir cryostat açıklanan 28 , 42 kullanarak 12 µm kalınlığında cryosections içine başları bölüm. Cryosections cam slayta doğrudan aktarın ve uzun vadeli kullanım için-20 ° C'de depolayın.

7. İmmunohistokimyasal boyama ve mikroskopi

Not: oksijen odasında tüm kuluçka adımları gerçekleştirin. Ve tüm çamaşır 10 dk her adımlardır.

  1. Kuru oda sıcaklığında 30 dk için bölümler. Çözdürme sonra iki kez PBS ve bir kez PBSTx bölümleri yıkayın (PBS % 0.03 ile Triton-X-100).
  2. Incubate, 4 ° C gece. birincil antikoru (anti-Aβ42 antikor; PBSTx 1:500 seyreltme) ile gün yıkamak bir kez PBS ve iki kez PBSTx.
  3. İkincil antikor (floresan birleştiğinde algılama, 1:500 seyreltme) ile birlikte DAPI bölümlerle kuluçkaya (1 μg/mL) içinde oda sıcaklığında 2 h için PBSTx.
  4. Yıkama üç kez PBSTx. Son yıkandıktan sonra bir coverslip 100 μL % 70 gliserol kullanarak slaytları mount.
  5. Edinme floresan görüntüleri confocal mikroskop (örneğin 20 X PL APO N.A. 0,7 amacı ile 488 uyarma aralığı ve bir standart yeşil filtre; ile kullanma Şekil 2) 39.

Sonuçlar

HPLC sentezlenmiş peptid arındırmak için kullanılan ve kütle spektrometresi arıtılmış amiloid β peptidler karakterize etmek için kullanılmıştır. HPLC sütun Aβ peptidler ayrılması geliştirmek için 50 ° C sıcak olduğu ve bütün fraksiyonları toplanmıştır. Doğru sentezlenmiş peptid tanımlamak için kütle spektroskopisi analiz tüm bölümler için gerçekleştirildi. UPLC Kromatografik bileşik saflığı gösterir. UPLC (Yani, gerekli amiloid Beta ...

Tartışmalar

Amiloid peptidler sıra varyasyonları veya çeşitli Etiketler içerecek şekilde değiştirilmiş. Örneğin, şifreli amiloid peptid oluşturulabilir ve peptidler N-terminus peptid sonu itibariyle floresan etiketlerle etiketlenmiş ya da taşıyıcı peptidler39ile Etiketlenmiş. Benzer şekilde, bu protokol için taşıyıcı peptid hücre Penetran peptid TR etkinliğini nakliye kargo derin nedeniyle beyin doku39içine alınır. Ayrıca, bizim yöntem enjeksiyon ve toks...

Açıklamalar

Yazarlar ifşa yoktur

Teşekkürler

Bu eser DZNE ve Helmholtz Derneği (VH-NG-1021), CRTD, tarafından desteklenmiştir TU Dresden (FZ-111, 043_261518) ve DFG (KI1524/6) (C.K.); ve tarafından Leibniz Derneği (SAW-2011-IPF-2) ve BMBF (BioLithoMorphie 03Z2E512) (Y.Z.). Biz de Ulrike Hofmann peptid sentez ve Nandini Asokan, Prayag Murawala ve Elly Tanaka için yordamı çekimleri sırasında yardım için teşekkür etmek istiyorum.

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
Fmoc-protected amino acidsIRIS Biotech GmbH (Marktredwitz, Germany)Fmoc-based amino acids for solid phase peptide synthesis (SPPS)
N,N,N′,N′-Tetramethyl-O-(1H-benzotriazol-1-yl)uronium hexafluorophosphate (HBTU)IRIS Biotech GmbH (Marktredwitz, Germany)RL-1030Activator
OxymaIRIS Biotech GmbH (Marktredwitz, Germany)RL-1180Racemization supressor
N,N-DiisopropylethylamineIRIS Biotech GmbH (Marktredwitz, Germany)SOL-003Base
DimethylformamideIRIS Biotech GmbH (Marktredwitz, Germany)SOL-004Solvent
N-MethylmorpholineThermo Fisher (Kandel) GmbH, GermanyA12158Base
1-Hydroxybenzotriazole hydrate (HOBT)Sigma-Aldrich Co. LLC. (St. Louis, MO, USA)157260 ALDRICHActivator
PiperidineMERCK KGaA (Darmstadt, Germany)822299Fmoc deprotection reagent
Dichlormethane (DCM)MERCK KGaA (Darmstadt, Germany)106050Solvent
Formic acid (FA)MERCK KGaA (Darmstadt, Germany)100264Buffer component for HPLC
Trifluoroacetic acid (TFA)MERCK KGaA (Darmstadt, Germany)808260Clevage Mixture reagent
Triisopropylsilane(TIS)MERCK KGaA (Darmstadt, Germany)233781 ALDRICHClevage Mixture reagent
Acetonitrile (for UPLC/LCMS)Sigma-Aldrich Laborchemikalien GmbH34967-1LSolvent
Acetonitrile (for HPLC)VWR International Ltd, England83639.320Solvent
DiethyletherVWR International Ltd, England23811.326Solvent for peptide precipitation
Dithiotritol (DTT)VWR International Ltd, England0281-25GClevage Mixture reagent
TentaGel S RAM Fmoc rink amide resinRapp Polymere GmbH (Tuebingen, Germany)S30023Solid phase for SPPS
Peptide synthesis 5 ml syringes with included filtersIntavis AG (Cologne, Germany)34.274Reaction tube for SPPS and for clevage from the Solid Phase
Polytetrafluoroethylene (PTFE) filterSartorius Stedtim (Aubagne, France)11806-50-NFilteration of precipitated peptides
Polyvinylidenefluoride (PVDF) syringe filterCarl Roth GmbH + Co. KG KarlsruheKC78.1Pre-filteration for HPLC
Peptide SynthesizerIntavis, Cologne, GermanyResPep SLAutomated solid-phase peptide synthesizer
Water Alliance HPLCWaters, Milford Massachusetts, USAWaters 2998, Waters e2695Semi-preparative reverse-phase high pressure liquid chromatography (HPLC)
PolymerX, bead size 10μm, 250x10 mmPhenomenex Ltd. Germany00G-4328-N0Porous polystyrene divinylbenzene HPLC column
Milli-Q Advantage A10, with a Milli-Q filterEMD Millipore Corporation, Billerica, MA, USALCPAK0001Water purification system
Filtration UnitSartorius Stedtim (Aubagne, France)16307Filtration unit for peptide precipitation
UPLC Aquity with UV DetectorWaters, Milford Massachusetts, USAM09UPA 664MAnalytical reverse phase ultra HPLC for LC-MS
ACQUITY UPLC BEH C18, bead size 1.7 μm, 50x2.1 mmWaters, Milford Massachusetts, USA186002350Analytical C18 column
ACQUITY TQ DetectorWaters, Milford Massachusetts, USAQBB908Electrospray ionization mass spectrometry (ESI-MS)
CHRIST ALPHA 2-4 LD plus + vacuubrand RZ6Martin Christ Gefriertrocknungsanlagen GmbH, Germany16706, 101542Lyophilizer with vaccum pump
Paradigm plate readerBeckman Coulter
MESAB (ethyl-m-aminobenzoate methanesulphonate)Sigma-AldrichA5040
Petri dishesSarstedt821.472
Phosphate-buffered salineLife Technologies, GIBCO10010-056
NeedleBecton-Dickinson305178
Dissecting microscopeOlympus, Leica, ZeissVaries with the manufacturer
Dumont TweezersWorld Precision Instruments501985
Gillies Dissecting ForcepsWorld Precision Instruments501265
Glass injection capillariesWorld Precision InstrumentsTWF10
PicoNozzleWorld Precision Instruments5430-12
Pneumatic PicoPumpWorld Precision InstrumentsSYS-PV820
Ring illuminator; Ring Light GuideParkland ScientificILL-RLG
CryostatLeicaCM1950

Referanslar

  1. LaFerla, F. M., Green, K. N. Animal models of Alzheimer disease. Cold Spring Harb Perspect Med. 2 (11), (2012).
  2. Selkoe, D. J. Alzheimer's disease: genes, proteins, and therapy. Physiol Rev. 81 (2), 741-766 (2001).
  3. Serpell, L. C. Alzheimer's amyloid fibrils: structure and assembly. Biochim Biophys Acta. 1502 (1), 16-30 (2000).
  4. Beyreuther, K., Masters, C. L. Alzheimer's disease. The ins and outs of amyloid-beta. Nature. 389 (6652), 677-678 (1997).
  5. Glenner, G. G., Wong, C. W. Alzheimer's disease: initial report of the purification and characterization of a novel cerebrovascular amyloid protein. Biochem Biophys Res Commun. 120 (3), 885-890 (1984).
  6. Blennow, K., de Leon, M. J., Zetterberg, H. Alzheimer's disease. Lancet. 368 (9533), 387-403 (2006).
  7. Hardy, J. The amyloid hypothesis for Alzheimer's disease: a critical reappraisal. J Neurochem. 110 (4), 1129-1134 (2009).
  8. McGowan, E., et al. Abeta42 is essential for parenchymal and vascular amyloid deposition in mice. Neuron. 47 (2), 191-199 (2005).
  9. Hardy, J., Selkoe, D. J. The amyloid hypothesis of Alzheimer's disease: progress and problems on the road to therapeutics. Science. 297 (5580), 353-356 (2002).
  10. Tincer, G., Mashkaryan, V., Bhattarai, P., Kizil, C. Neural stem/progenitor cells in Alzheimer's disease. Yale J Biol Med. 89 (1), 23-35 (2016).
  11. Diotel, N., et al. Effects of estradiol in adult neurogenesis and brain repair in zebrafish. Horm Behav. 63 (2), 193-207 (2013).
  12. Grandel, H., Brand, M. Comparative aspects of adult neural stem cell activity in vertebrates. Dev Genes Evol. 223 (1-2), 131-147 (2013).
  13. Kizil, C., Kaslin, J., Kroehne, V., Brand, M. Adult neurogenesis and brain regeneration in zebrafish. Dev Neurobiol. 72 (3), 429-461 (2012).
  14. Diotel, N., et al. Cxcr4 and Cxcl12 expression in radial glial cells of the brain of adult zebrafish. J Comp Neurol. 518 (24), 4855-4876 (2010).
  15. Zupanc, G. K. Adult neurogenesis and neuronal regeneration in the brain of teleost fish. J Physiol Paris. 102 (4-6), 357-373 (2008).
  16. Adolf, B., et al. Conserved and acquired features of adult neurogenesis in the zebrafish telencephalon. Dev Biol. 295 (1), 278-293 (2006).
  17. Grandel, H., Kaslin, J., Ganz, J., Wenzel, I., Brand, M. Neural stem cells and neurogenesis in the adult zebrafish brain: origin, proliferation dynamics, migration and cell fate. Dev Biol. 295 (1), 263-277 (2006).
  18. Kaslin, J., Ganz, J., Brand, M. Proliferation, neurogenesis and regeneration in the non-mammalian vertebrate brain. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 363 (1489), 101-122 (2008).
  19. Alunni, A., Bally-Cuif, L. A comparative view of regenerative neurogenesis in vertebrates. Development. 143 (5), 741-753 (2016).
  20. Than-Trong, E., Bally-Cuif, L. Radial glia and neural progenitors in the adult zebrafish central nervous system. Glia. 63 (8), 1406-1428 (2015).
  21. Santana, S., Rico, E. P., Burgos, J. S. Can zebrafish be used as animal model to study Alzheimer's disease?. Am J Neurodegener Dis. 1 (1), 32-48 (2012).
  22. Newman, M., Verdile, G., Martins, R. N., Lardelli, M. Zebrafish as a tool in Alzheimer's disease research. Biochim Biophys Acta. 1812 (3), 346-352 (2010).
  23. Paquet, D., et al. A zebrafish model of tauopathy allows in vivo imaging of neuronal cell death and drug evaluation. J Clin Invest. 119 (5), 1382-1395 (2009).
  24. Xi, Y., Noble, S., Ekker, M. Modeling neurodegeneration in zebrafish. Curr Neurol Neurosci Rep. 11 (3), 274-282 (2011).
  25. Barbosa, J. S., et al. Live imaging of adult neural stem cell behavior in the intact and injured zebrafish brain. Science. 348 (6236), 789-793 (2015).
  26. Dray, N., et al. Large-scale live imaging of adult neural stem cells in their endogenous niche. Development. 142 (20), 3592-3600 (2015).
  27. Kizil, C., Brand, M. Cerebroventricular microinjection (CVMI) into adult zebrafish brain is an efficient misexpression method for forebrain ventricular cells. PLoS One. 6 (11), e27395 (2011).
  28. Chapouton, P., Godinho, L. Neurogenesis. Methods Cell Biol. 100, 73-126 (2010).
  29. Chen, C. H., Durand, E., Wang, J., Zon, L. I., Poss, K. D. zebraflash transgenic lines for in vivo bioluminescence imaging of stem cells and regeneration in adult zebrafish. Development. 140 (24), 4988-4997 (2013).
  30. McKenna, A., et al. Whole-organism lineage tracing by combinatorial and cumulative genome editing. Science. 353 (6298), (2016).
  31. Mokalled, M. H., et al. Injury-induced ctgfa directs glial bridging and spinal cord regeneration in zebrafish. Science. 354 (6312), 630-634 (2016).
  32. Kishimoto, N., Shimizu, K., Sawamoto, K. Neuronal regeneration in a zebrafish model of adult brain injury. Dis Model Mech. 5 (2), 200-209 (2012).
  33. Fleisch, V. C., Fraser, B., Allison, W. T. Investigating regeneration and functional integration of CNS neurons: lessons from zebrafish genetics and other fish species. Biochim Biophys Acta. 1812 (3), 364-380 (2010).
  34. Chapouton, P., Jagasia, R., Bally-Cuif, L. Adult neurogenesis in non-mammalian vertebrates. Bioessays. 29 (8), 745-757 (2007).
  35. Becker, T., et al. Readiness of zebrafish brain neurons to regenerate a spinal axon correlates with differential expression of specific cell recognition molecules. J Neurosci. 18 (15), 5789-5803 (1998).
  36. Rothenaigner, I., et al. Clonal analysis by distinct viral vectors identifies bona fide neural stem cells in the adult zebrafish telencephalon and characterizes their division properties and fate. Development. 138 (8), 1459-1469 (2011).
  37. Marz, M., Schmidt, R., Rastegar, S., Strahle, U. Regenerative response following stab injury in the adult zebrafish telencephalon. Dev Dyn. 240 (9), 2221-2231 (2012).
  38. Kroehne, V., Freudenreich, D., Hans, S., Kaslin, J., Brand, M. Regeneration of the adult zebrafish brain from neurogenic radial glia-type progenitors. Development. 138 (22), 4831-4841 (2011).
  39. Bhattarai, P., et al. IL4/STAT6 signaling activates neural stem cell proliferation and neurogenesis upon Amyloid-β42 aggregation in adult zebrafish brain. Cell Reports. 17 (4), 941-948 (2016).
  40. Cosacak, M. I., Papadimitriou, C., Kizil, C. Regeneration, Plasticity, and Induced Molecular Programs in Adult Zebrafish Brain. Biomed Res Int. , (2015).
  41. Kizil, C., et al. The chemokine receptor cxcr5 regulates the regenerative neurogenesis response in the adult zebrafish brain. Neural Dev. 7, 27 (2012).
  42. Kizil, C., et al. Regenerative neurogenesis from neural progenitor cells requires injury-induced expression of Gata3. Dev Cell. 23 (6), 1230-1237 (2012).
  43. Kyritsis, N., et al. Acute inflammation initiates the regenerative response in the adult zebrafish brain. Science. 338 (6112), 1353-1356 (2012).
  44. Katz, S., et al. . Cell Rep. 17 (5), 1383-1398 (2016).
  45. Kizil, C., et al. Efficient cargo delivery using a short cell-penetrating peptide in vertebrate brains. PLoS One. 10 (4), e0124073 (2015).
  46. Kizil, C., Iltzsche, A., Kaslin, J., Brand, M. Micromanipulation of gene expression in the adult zebrafish brain using cerebroventricular microinjection of morpholino oligonucleotides. J Vis Exp. (75), e50415 (2013).
  47. Sewald, N., Jakubke, H. . Peptides: Chemistry and Biology. , (2009).
  48. Beyer, I., et al. Solid-Phase Synthesis and Characterization of N-Terminally Elongated Abeta-3-x -Peptides. Chemistry. 22 (25), 8685-8693 (2016).
  49. Zheng, Y., et al. Kinesin-1 inhibits the aggregation of amyloid-beta peptide as detected by fluorescence cross-correlation spectroscopy. FEBS Lett. 590 (7), 1028-1037 (2016).
  50. Balducci, C., Forloni, G. In Vivo Application of Beta Amyloid Oligomers: a Simple Tool to Evaluate Mechanisms of Action and New Therapeutic Approaches. Curr Pharm Des. 20 (15), 2491-2505 (2013).
  51. Schiffer, N. W., et al. Identification of anti-prion compounds as efficient inhibitors of polyglutamine protein aggregation in a zebrafish model. J Biol Chem. 282 (12), 9195-9203 (2007).
  52. Wieduwild, R., Tsurkan, M., Chwalek, K., Murawala, P., Nowak, M., Freudenberg, U., Neinhuis, C., Werner, C., Zhang, Y. Minimal peptide motif for non-covalent peptide-heparin hydrogels. Journal of the American Chemical Society. 135 (8), 2919-2922 (2013).

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

Neurosciencesorunu 128amiloid 42Zebra balatecerebroventricular mikroenjeksiyonAlzheimer hastalkat faz peptid sentez

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır