Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.
Method Article
Biz refah farelerde genel anestezi kullanılarak işlemler sırasında değerlendirmek için bir iletişim kuralı geliştirilmiştir. Davranış parametreleri glukokortikoid metabolitleri analiz edildi yanı sıra refah düzeyini gösteren bir dizi. Protokol bilimsel, hayvan-merkezci bir şekilde önem derecesini tahmin etmek için genel bir yardım olarak hizmet verebilir.
İlke (değiştirme, azaltma, arıtma) geliştirilen 3R doğrultusunda Russel ve Burch, bilimsel araştırma seçimli-e doğru hayvan deneme mümkün olduğunda kullanmalısınız. Hayvan deney için hiçbir alternatif olduğunda kullanılan Laboratuvar hayvanlarının toplam sayısı değerli veri almak için gerekli en az olmalıdır. Ayrıca, ağrı, acı ve sıkıntı deneysel işlemin eşlik eden en aza indirmek için uygun arıtma tedbirleri uygulanmalıdır. Ağrı, acı ve sıkıntı derecesini sınıflandırmak için kullanılan olmayan-kurtarma, hafif, orta veya şiddetli (Avrupa Birliği yönetmeliği uyarınca 2010/63) kategorilerdir. Özel durumlarda hangi Kategoriler uygulamak belirlemek için bilimsel olarak ses araçları kullanmak çok önemli.
Burada sunulan iyi being değerlendirme protokolü genel anestezi sırasında kullanılan yordamlar için tasarlanmıştır. Protokol tavşan çukuru ve davranış refah göstergeleri olarak bina yuva gibi eve kafes etkinlik, fare yüz buruşturma ölçek ve lüks davranışları üzerinde duruluyor. Ayrıca ücretsiz keşif paradigma için özellik anksiyete ile ilgili davranışı kullanır. Fekal corticosterone metabolitleri akut stres belirtileri olarak 24 saat sonrası anestezik süre içinde ölçülür.
İletişim kuralı iyi olmak genel anestezi takip fareler üzerinde bilimsel olarak sağlam bilgi sağlar. Basitliği nedeniyle protokol kolayca adapte ve planlı bir çalışma entegre. Kategorilerine göre Avrupa Birliği yönetmeliği uyarınca 2010/63 tehlikede sınıflandırmak için bir ölçek sağlamasa da, araştırmacılar bilimsel olarak ses verileri kullanarak bir yordam önem derecesini tahmin yardımcı olabilir. Su kuyusu-varlık değerlendirilmesi bilimsel, hayvan-merkezci bir şekilde geliştirmek için bir yol sağlar.
AB yönergesi 2010/631 Russel ve Burch2 tarafından geliştirilen 3R prensibi (yerine, azaltma, arıtma) hayvan deney gerekli olduğunda uygulanacak olması öngörülüyor. AB direktifi, nihai hedefi tüm hayvan aşama için ama şu an için bazı hayvan deneyleri hala insan ve hayvan sağlığını korumak araştırma yapmak üzere ihtiyaç vardır, Direktifin kabul eder. Böylece, bir hayvan deney alternatif herhangi bir yöntemle değiştirilemez, laboratuvar hayvanlarının yalnızca az sayıda güvenilir sonuçlar elde etmek için kullanılacak tek. Ayrıca, ağrı, acı ve sıkıntı deneysel prosedürler eşlik eden miktarı uygun arıtma yöntemlerle indirilmelidir. AB yönergesi 2010/63 bir yordam şiddeti prospektif kurtarma olmayan, hafif, orta veya şiddetli1sınıflandırılmış gerekir öngörülüyor. Önem derecesi sınıflandırma bir harf tarafından ayrı ayrı karar verdi gibi belirli bir yordamı şiddetini tahmin etmek için bilimsel olarak ses araçları olması önemlidir.
Skor yaprak3 Morton ve Griffith tarafından önerilen olarak normal durum, su kuyusu-varlık4üzerinde olumsuz etkileri de dahil olmak üzere herhangi bir sapma tespit gerekli bir araç vardır. Skor çarşaf geriye dönük olarak ağrı, acı, belirlemek için kullanılır ve sıkıntı neden tarafından bir deney ve odak üstünde görünür değişiklikleri (örneğin, vücut ağırlığı, kürk, yürüyüş) bireysel hayvanın fiziksel durumda. Rağmen ek VIII ve AB direktifi 2010/63 her önem Kategori örnekleri sağlar, veri tabanlı araştırmacılar hala eksikliği araçları bilimsel olarak kullanarak belirli bir yordamı önem derecesini tahmin etmek için.
Devamsızlığın göstergelerin olumsuz refahını gösterilen hayvan durumunu belirlemek için tek yol değildir; Göstergeler olumlu esenlik işaret varlığı da önemli5,6,7,8' dir. Örneğin, hayvan tavşan çukuru gibi lüks davranışları görüntülemek ve tüm önemli ihtiyaçlarını karşılandığında bina davranış iç içe. Su kuyusu-varlık azalır, lüks davranışları ilk5,7düşüş vardır. Su kuyusu-varlık değerlendirmede kullanılacak iletişim kurallarını göstergeleri fiziksel, fizyolojik/biyokimyasal ve psikolojik durumlarını hayvan için onların refahını detaylı ve kapsamlı bir şekilde9değerlendirmek için işaret içermelidir.
Arıtma bağlamı içinde bir protokol fareler10refahı üzerinde genel anestezi içeren bir yordam etkilerini değerlendirmek için ve bu gereksinimleri karşılamak için geliştirilmiştir. Aynı zamanda, belirli bir deney kolay entegrasyon iletişim kuralı etkinleştirmek için herhangi bir ek yük en aza indirmek için hedefi oldu. Protokol davranış, etkinlik, gıda alımı ve iç içe geçirme gibi eve kafes davranış ve özellik anksiyete ile ilgili davranışı burrowing dikkate alır. Buna ek olarak, bu fare yüz buruşturma ölçek (MGS) ve non-invaziv analizi corticosterone metabolitleri, dışkı içerir. Protokol Refah değerlendirilmesi bilimsel ve hayvan-merkezci bir şekilde kolaylaştırmak için ve önem derecesi sınıflandırılması destekler refahı üzerinde bilgi sağlamak için tasarlanmıştır. Skor sayfalarını ek olarak, bir yordam önem sınıflandırılması için yararlı bilgiler sağlayabilir. Protokol yapmak kolaydır ve kapsamlı ekipman gerektirmez gibi bu devam eden bir deney bir çalışmanın sonuçlarını etkileyen olmadan entegre edilebilir. Bu unutulmamalıdır bu hayvan araştırma: Raporlama, In Vivo deneyler (varış) kılavuz11 yaşında hayvan deneyleri, tasarım, analiz, iyileştirilmesi ve raporlama amacı ile ilgili tüm çalışmalarda dikkat edilmelidir.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Çalışma Alman hayvan refah Yasası tarafından ortaya konan esaslarına göre gerçekleştirilmiş ve Berlin Devlet yetkilisi tarafından kabul edildi ("Landesamt für Gesundheit und Soziales", izni numarası: G0053/15).
Not: Ana amacı bu iletişim kuralı, glukokortikoid metabolitleri tekrarlanan Anestezi etkisini araştırmak için yapıldı. Bir örnek boyutu hesaplama kullanılmak üzere hayvan sayısını belirlemek için gerçekleştirildi: n ≥ 2 × (s/μ1- μ2)2 × (zα + zβ)2. µ1- μ2 hangi güç ve örnek boyutu hesaplamalar yapılır popülasyon ortalamaları arasındaki fark nedir (α = %5, β = %80); zα 1,96 ve zβ = = 0,84 çoğu standart normal dağılım quantil. Bu iletişim kuralı time line şekil 1 gösterir. Bir parametre iletişim kuralı Denetim düzeyi ile bir fark gösteriyorsa, hayvan yakından izlenmeli ve parametre daha uygun bir süre sonra ölçülmelidir. Özellik anksiyete ile ilgili davranışı arttırılırsa, örneğin, bu davranış daha bir hafta sonra zamanına kadar tam kurtarma belirlemenize yardımcı olması için test edilmelidir. Zaman puan ve bu iletişim kuralında tanımlanan dönemleri ile diğer yordamları kullanmak için adapte edilebilir. Zaman Puan değiştirirken, habituation dönemleri iletişim kuralında tanımlandığı gibi tutulmalıdır. Fareler'ın davranışlarını etkilemek faktörler azaltmak için daha fazla düzenleme gerektiren testleri farelerin normal bir davranış rahatsız etmeyin testlerden sonra yapılmalıdır. Şekil 2 bir Özet puanlama sayfasını kullanarak iletişim kuralının tüm testleri özetlenmiştir. Şekil 3 test sonuçlarını yorumlamak bakış Basitleştirilmiş ölçekler refah, notu sağlar.
1. habituating fareler deneyci tarafından işleme için
2. davranışsal test Oda ve çizgisel hazırlanması
Not: test, ideal bir konuma sahip hayvanlar saklandığı Oda için ayrı bir oda sağlar. Yordamı yürütülen önce test Oda en az 60 dk ev onların kafes farelerde taşıma. Mümkünse, bu protokol aynı test odada nereye yordamı yürütülen tüm testler yapmak.
3. fare yüz buruşturma ölçek
Not: MGS gözlem kafes üç saat noktalarda alınır için Fotoğraflar: (i) 2 gün önce kayıt temel MGS düzeyleri, (ii) 30 dakika sonra prosedür ve (iii) 150 dk sonra yordamı yordam. Su kuyusu-varlık Engelli olduğunu, MGS puanları artırmak. Eğer artan MGS puanları hala 150 dk sonra izlenmektedir, daha sonraki bir aşamada ek fotoğraf çekmek.
4. burrowing davranış8,15,16
5. 24 saat gözlem süresi
Not: Fareler tek tek, 2.2 içinde açıklandığı gibi yerleştirilmiştir. (Şekil 5), bir 24 saat boyunca yiyecek ölçmek amacıyla alımı, eve kafes etkinlik, iç içe bina davranış ve FCM düzeyleri. 24 saat gözlem iki kez gerçekleşir: (i) 2 gün önce yordamı temel seviyeler (II) üzerinde işlem yapıldığı gün.
6. ücretsiz keşif paradigma
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Bu protokol was orijinal gelişmiş-esenlik isoflurane anestezi bir deneyimi takip C57BL/6JRj farelerin değerlendirmek için (bir 45 dk anestezi oturum, n = 13 kadın) veya tekrarlanan isoflurane anestezi (altı 45 dk anestezi oturumlarıyla 3-4 gün n anestezi oturumları arasında 13 kadın =) refah kontrol fare ile karşılaştırıldığında (n = 6 kadın)10hangi anestezi aldı ama aynı önlemler göre test edildi,. Biz bir deneyimi isoflurane anestezi ve iy...
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Protokol was orijinal gelişmiş-esenlik bir tek anestezi veya tekrarlanan isoflurane anestezi alınan C57BL/6JRj farelerin değerlendirmek için. Sonuçları esenlik değerlendirmek için hassas yöntemleri vardı bu testleri lüks davranışların yanı sıra diğer önlemler (örneğin ücretsiz keşif paradigma, MGS, tavşan çukuru gıda alımı) onaylayın. Tekrarlanan isoflurane anestezi özellik anksiyete ile ilgili davranışı, MGS ve tavşan çukuru davranış kısa vadeli etkileri nedeniyle. Ayrıca,...
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Yazarlar ifşa gerek yok.
Sabine örnek derlemesiyle, Edith Klobetz-Rassam FCM, çözümlenmesi için yardım için Jacobs sayesinde PD Dr. med. veteriner. Habil. Roswitha istatistiksel analizi ile yardım için Merle ve Wiebke için el yazması yazım denetleme Gentner. Çalışma, Berlin-Brandenburg araştırma platformu BB3R (www.bb3r.de) bir parçasıdır ve Alman Federal Bakanlığı Eğitim ve araştırma tarafından finanse edildi (sayı vermek: 031A262A) (www.bmbf.de/en/index.html).
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Isofluran | CP-Pharma Handelsgesellschaft mbH | 1214 | |
InfraMot - Sensore Units | TSE Systems | 302015-SENS | |
InfraMot - Control Units | TSE Systems | 302015-C/16 | |
InfraMot - Software | TSE Systems | 302015-S | |
Nestlet N | Ancare - Plexx | NES3600 | |
Camera EOS 350D | Canon |
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi
Izin talebiThis article has been published
Video Coming Soon
JoVE Hakkında
Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır