Dolaşım ölümünden sonra kardiyak bağış öncesi klinik model

Özet

Bu protokol, yeni Klima ajanları veya dolaşım ölümünden sonra kardiyak bağış fizibilitesi artırmak için stratejiler değerlendirilmesi için basit ve esnek bir yaklaşım gösterir.

Özet

Kardiyak transplantasyon talebi yükselişte; Yine de, organ mevcudiyeti uygun bağış nedeniyle sınırlıdır. Dolaşım ölümünden sonra organ bağış (DCD) bu sınırlı kullanılabilirliği gidermek için bir çözümdür, ancak uzun süreli sıcak iskemi ve doku yaralanması riski nedeniyle, kardiyak transplantasyon rutin kullanımı nadiren görülür. Bu yazıda, kalp fonksiyonunun sürekli izlenmesi ile DCD bağlamında mevcut klinik uygulamaları yakından taklit eden ayrıntılı bir protokol sağlıyoruz, yeni kardiyokoruyucu stratejilerin değerlendirilmesine ve müdahalelerin azalmasına izin verme iskemi-reperfüzyon hasarı.

Bu modelde, DCD protokol dolaşım ölümü teşvik etmek için havalandırma durdurularak anestezi Lewis fareler başlatılır. Sistolik kan basıncı 30 mmHg 'ye düştüğünde sıcak iskemik zaman başlatılır. Önceden ayarlanan sıcak iskemik döneminden sonra, kalpler bir normothermic kardiyoplegik solüsyon ile boşaltılır, temin edilir ve bir Langendorff ex vivo kalp perfüzyon sistemine monte edilir. İlk reperfüzyon ve stabilizasyonu 10 dk sonra, kalp yenileme intraventriküler basınç izleme kullanarak 60 dk için sürekli olarak değerlendirilir. Kalp hasarı, kardiyak troponin T ölçümüne göre değerlendirilir ve infarkıt büyüklüğü histolojik lekelenme ile ölçülebilir. Sıcak iskemik zaman modülasyonlu ve yapısal ve fonksiyonel hasar istenen miktarda geliştirmek için uyarlanmış olabilir. Bu basit protokol kardiyoplegia, ilk reperfüzyon ve/veya ex vivo perfüzyon sırasında sunulan farklı kardiyokoruyucu Klima stratejilerinin değerlendirilmesi için izin verir. Bu protokolden elde edilen bulgular büyük modellerde yeniden üretilerek klinik çeviriyi kolaylaştırabilir.

Giriş

Genel ve kalp transplantasyonunda katı organ nakli özellikle dünya çapında^1,2' de yükselir. Organ alımı standart yöntemi beyin ölümünden sonra bağış (DBD). DBD katı dahil kriterleri göz önüne alındığında, sunulan kalplerin% 40 daha az kabul edilir³, böylece artan talep karşısında teklif sınırlandırmak ve organ bekleme listesini uzatmak. Bu sorunu gidermek için, dolaşım ölümü (DCD) sonrasında bağışlanan organların kullanımı potansiyel bir çözüm olarak kabul edilir⁴.

DCD bağış, ancak, bakım ve resüsitasyon önce korunmasız sıcak iskemi bir süre geri çekilmesi aşağıdaki bir agonal faz kaçınılmaz⁵. Dolaşım ölümünden sonra potansiyel organ hasarı organ fonksiyon bozukluğu neden olabilir, rutin DCD kalp nakli benimsemeye isteksizlik açıklayan. Bu sadece 4 merkezleri klinik olarak, çok kısa sıcak iskemi kez ve kronik patolojiler olmadan genç bağış içeren sıkı kriterler ile DCD Hearts kullanmak bildirilmiştir^5/6. Etik ve yasal nedenlerden dolayı, dolaşım ölümü^5,8,9öncesinde bağışçılardan sınırlı veya hiçbir kardiyokoruyucu müdahaleler uygulanabilir. Böylece, iskemi-reperfüzyon (IR) yaralanmasını hafifletmek için herhangi bir azaltma kardiyoplegik çözümler ile erken reperfüzyon sırasında başlatılan kardiyokoruyucu tedaviler ile sınırlıdır ve uygun fonksiyonel değerlendirme için izin vermez. Ex vivo kalp perfüzyon (evhp) ve özel platformlar kullanarak DCD kalp yenileme alternatif bir çözüm olarak önerilen ve çeşitli akademisyenler tarafından okudu^10,11,12,13 . EVHP fonksiyonel kurtarma geliştirmek için DCD kalpleri sonrası Klima ajanlar sunmak için benzersiz bir fırsat sunuyor. Ancak, verimli klinik çeviri için, birçok teknik ve pratik sorunlar ele alınması için, ve bu daha fazla perfüzyon ve fonksiyonel kriterler bir dizi üzerinde uzlaşma eksikliği tarafından transplantability belirlemek için bileşik^{6, 8}' den itibaren.

Burada, ilk reperfüzyon sırasında, satın alma sırasında başlatılan organ sonrası Klima araştırması için kullanılabilecek bir ex vivo kalp perfüzyon sistemi ile birlikte tekrarlanabilir öncesi klinik küçük hayvan DCD protokolünün gelişmesini bildiriyoruz ve /veya EVHP boyunca.

Protokol

Laboratuar hayvanlarının bakımı ve kullanımı kılavuzu 'na uygun tüm hayvan bakımı ve deneysel protokoller, Centre Hospitalier de l 'Université de Montréal araştırma merkezi 'nin kurumsal hayvan bakımı ve kullanım Komitesi tarafından onaylanmıştır.

1. ön preparatlar

1. Kardiyoplegia teslimat sistemini (Şekil 1a) ve Langendorff ex vivo perfüzyon sistemini (Şekil 1B) ısıtmak için su banyosunu açın. 37 °C çözüm sıcaklığı için su sıcaklığını 38,5 °C ' ye ayarlayın. Kurulum fotoğrafları ek Şekil 1a, B'de görülebilir.
2. 1 L kardiyoplegik solüsyon hazırlayın. 1 ml% 2 lidokain hidroklorür ve 10 ml 2 mm KCL (son konsantrasyon 20 mm) ile 1 L plazma-Lyte A (140 mm na, 5 mm K, 1,5 mm mg, 98 mm CL, 27 mm asetat, 23 mm glukonat) ekleyin. 6 N HCl kullanarak 7,4 için doğru pH.
   Dikkat: Bu model pH 'ye son derece duyarlıdır. Yanlış pH düzeltmesi (7.3-7.4 fizyolojik aralığı dışında) veya pH kararsız çözümler deneyden ödün verebilir veya güvenilir olmayan veriler sağlayabilir.
3. Hazırlamak 4 L Krebs çözeltisi (113 mM NaCl, 4,5 mM KCl, 1,6 mM NaH₂Po₄, 1,25 mm CAcl₂, 1 mm MgCl₂∙ 6h₂O, 5,5 mm D-glikoz, 25 mm NaHCO₃). 1 L çözüm başına substrat kütleleri aşağıdaki gibi olmalıdır: 6,1 g NaCl, 0,3355 g KCl, 0,2035 g MgCl₂∙ 6h₂O, 0,192 g Nah₂Po₄, 0,1387 g CAcl₂, 0,99 g D-glikoz, 2,1 g NaHCO₃ , ultra saf deiyonized suda 1 L son hacmi. NaHCO ekleyin ₃ ' ü yağış önlemek için son. Solüsyonu bir 0,22 μm filtre kullanarak filtreleyin ve bir gecede saklayın. Çözelti 37 °C ' de ve% 5 CO₂/95% O₂Ile kabarcık 7,4 için pH düzeltin.
4. Krebs çözeltisi ile Langendorff devresi doldurun ve sistem pompası başlatın. Tüpün içinde hiçbir kabarcıkların bırakıltığınızdan emin olun. Peristaltik pompa hızını 80 RPM 'ye ayarlayın (1 L/dak 'ye eşdeğerdir). İki yönlü durdurma horoz kullanarak, kalp bağlı olana kadar aort kanül aracılığıyla yavaş bir damla korumak için akışını ayarlamak (Şekil 1B). Kalp taşımacılığı için buzda 50 mL konik tüpte Krebs çözeltisi (15 mL) örneği tutun.
5. Kardiyoplegia teslimat sistemini kardiyoplegik çözelti ile doldurun. Kabarcıklar kaldırıldıktan sonra, 3 yol durdurma horoz kullanarak devre tuzlu geçiş (Şekil 1a). Damla hızını ayarlayın. Tuz, hiçbir kardiyoplegik çözümün hayvanın ölümünden önce enjekte edilmesini sağlamak için kateterin ucundan yavaşça damlatılması gerekir.

2. hayvan hazırlama

1. Bir inhalasyon odası kullanarak,% 3 Isoflurane ile anestezi neden. Hayvan yanıt vermemeye başladıktan sonra, prosedürün geri kalanı için anestezi korumak için, yerel yönetmeliklere göre, ketamin (75 mg/kg) ve xylazine (5 mg/kg) veya benzer şekilde uygun anestezik bir intraperitoneal enjeksiyon gerçekleştirin. Ayak tutam ve palpebral refleks hiçbir reaksiyon ile anestezi derinliği emin olun.
2. Hayvanı 14 G, 2 inçlik bir IV kateter kullanarak entüat. Hava yolu basıncı 20 cmH₂O ile sınırlı olan dk başına 50 nefes at havalandırma başlayın.
3. "Orta" olarak ayarlanan bir ısıtma yastığı üzerine hayvan yerleştirin ve vücut sıcaklığını korumak için bir emici Pad ile kapak. Bir rektal sıcaklık sondasını takın ve ayaklarından birine transdermal Nabız oksimetre sensörü takın. Prosedür boyunca 37 °C ' de rektal sıcaklığını koruyun.
4. Vasküler erişim
   1. Makas kullanarak boynunda 3 ila 4 cm orta çizgi cilt kesi yapın. Künt ucu kavisli makas kullanarak, künt subkutan doku incelemek ve sağ sternohyoid kas maruz. Olmayan travmatik forseps kullanarak, sağ karotis arter kadar yanal kas hareket (titreşimli), juguler ven (non-titreşimli) ve Vagus sinir (beyaz) görsel olarak tanımlanır (Tamamlayıcı Şekil 2a). Dikkatle karotis arter künt uçlu eğri makas kullanarak Vagus sinir ayırın.
   2. Sağ juguler ven yoluyla heparin (2.000 ıU/kg) enjekte. Kan kaçağı önlemek için iğne retraksiyon sonra enjeksiyon site basıncı uygulayın.
   3. Kavisli forseps kullanarak, karotis arter etrafında iki 5-0 ipek sütürler geçirin. Maruz arter üstün açıdan karotis arter okclude için bir distal sütür sıkıca takın. Proksimal sütür çözülmüş tutun. Bir sonraki adımda kanama kontrolü için proksimal sütür çekme kullanılır (Tamamlayıcı şekil 2B). Dikişler arasındaki mesafe yaklaşık 2 cmolmalıdır.
   4. Daha iyi görselleştirme için mikroskoptan kullanarak, dikkatle karotis arter ön duvarı üzerinde mikrocerrahi makas ile 1 mm kesi yapmak. Aort kemerine doğru 22 G, 1 inç kapalı bir IV kateter takın. Kateter, kardiyoplegia teslimat sistemi yoluyla tuz veya kardiyoplegia enjekte etme olasılığı ile, sürekli izleme için bir basınç dönüştürücü bağlantısına izin veren 2 yönlü stop penisine bağlanır (Şekil 1a).

3. dolaşım ölümü (DCD) protokolünden sonra kardiyak bağış başlatılması

Not: Tam bir protokol zaman çizelgesi Şekil 2' de görülebilir.

1. Bir ayak tutam yaparak ve palpebral refleks değerlendirerek anestezik derinliği Re-asses. Reaksiyon gözlenirse, ketamin (37,5 mg/kg) ve xylazine (2,5 mg/kg) intraperitoneal enjeksiyon gerçekleştirin. 5 dakika sonra yeniden değerlendir. Hiçbir yanıt gözlemlenirse, prosedüre devam edin. Trakeal kelepçe sadece yeterli anestezileşen hayvanlarayapılmalıdır.
2. Vantilatörü kapatın ve hayvanı uzatın. Sivrisinek forseps kullanarak, trakea kelepçe. Bu an, agonal fazın başlangıcı olarak kabul edilir. En yüksek sistolik kan basıncı 30 mmHg 'ye düştüğünde veya asistanda veya ventriküler fibrilasyon görünüyorsa, öncelikle ne olursa olsun (Şekil 3) fonksiyonel sıcak iskemik zamanı (WIT) saymaya başlayın.
   Not: Hasar kapsamı, WıT ile orantılı olmalıdır. Deneyler kullanılan anestezik, hayvan gerinim, cinsiyet ve ağırlık seçilen göre WıN zaman optimize etmek için gereklidir. Kontrol hayvanlarında, karotis vasküler erişim güvenli olduktan hemen sonra, kardiyoplegia enjekte edilir ve kalp bir sonraki adımda açıklandığı gibi temin edilir (Şekil 2). Kardiyoplegia ile perfüzyon başlangıcı WıN sonu olarak kabul edilir.
3. WıT sonunda, bir medial sternotomy gerçekleştirin. Bir ALM Retraktörü kullanarak toraks açık tutun. Makası kullanarak, inferior vena cava ve her iki Atria miyokard distansiyonu veya kardiyoplegia devridaim önlemek için açık (tamamlayıcı şekil 3). Aort diyaframın üzerine kelepçe. Daha önce kateterize karotis arter aracılığıyla, kardiyoplegik solüsyonu 60 mmHg 'nin sürekli basıncında, kardiyopilgia teslimat sistemini kullanarak 5 dakika boyunca infeksiyonla kullanın. Infüzyon basıncı su sütununun yüksekliğini değiştirerek değiştirilebilir.
4. Kardiyoplegik infüzyon sonunda, kavisli forseps kullanarak pulmoner arter artan proksimal aort incelemek (Tamamlayıcı Şekil 4A). Sol subklavian arter distal aort kes. Langendorff aparatı için kanülasyon için en az 0,5 cm aort uzunluğuna sahip olun.
5. Kalp aort tutarak, pulmoner venler ve diğer torasik yapılardan kalp ayırarak kardiyektomi tamamlayın (Tamamlayıcı Şekil 4b). Hızla, ex vivo sisteme hızlı ulaşım için buzdan soğuk Krebs çözümü için kalp batıyor. Diseksiyon ve taşıma sürelerini mümkün olduğunca kısa tutun (5 dakika).

4. ex vivo kalp perfüzyon sistemi (EVHP) ve kardiyak fonksiyonel değerlendirme

1. Forseps kullanarak aort lümeni açın. Koroner damarlara kabarcıklar zorlamaktan kaçınmak için damlama Krebs çözeltisi ile lümeni doldurarak aort deair. Aort içine aşağı kanül, aortu kök veya zarar aort kapak broşürler geçmek için dikkat alarak. Küçük bir kelepçe ile kurulumu düzeltin.
2. 2 yol stopcock kullanarak, aort olası sızıntıları aramak için akışını artırın. Hiçbiri algılanmazsa, 2-0 ipek sütür kullanarak aort 'u kanula sıkıca sabitleyin. Tam olarak kanül akışını açın. 60-70 mmHg 'nin fizyolojik basıncında aort basıncını koruyun (sistemin yüksekliğini değiştirerek ayarlanır). Şu anda ilk reperfüzyon ve istikrar süresi başlatılır. Aort basıncı, müfettişin deneysel planına göre değiştirilebilir.
3. Kalp (Atria) tabanı basınç sensörü karşı karşıya böylece kalp döndürün. Pulmoner damarları keserek sol ventrikül atriyal açılışını genişletin. Bir basınç sensörüne bağlı lateks balonu takın. Balon tamamen görsel muayene ile ventrikül içinde konumlandırılmış olduğundan emin olun. Son Diyastolik basınç (EDP) 15 mmHg 'ye ayarlanıncaya kadar balonu tuz ile yavaşça doldurun. EDP sabiti (önceden belirlenmiş FIZYOLOJIK EDP) tutmak için gerektiği şekilde ayarlayın. EDP, her müfettişlerin deneysel hedeflerine göre ayarlanabilir.
4. Kalp (sağ ventrikül çıkış yolu) ön yüzüne pacing elektrot takın. Koroner damarları delmemek. Spontan dayak gözlendikten sonra, dk başına 300 Beats at pacing başlatın. gerekli voltaj deneyler ve sıçan suşları arasında farklılık gösterebilir .
5. 10 dakika stabilizasyon işleminden sonra, sürekli intraventriküler basınç ölçüm kaydını başlatın. Bu an, 1 h (Şekil 2) için son verecek olan yenileme ve değerlendirme aşamasının (saat 0) başlangıcı olarak kabul edilir. Yenileme süresi uzun olabilir, ancak tüm kalplerinde zaman bağımlı bir kontrazlık düşüşü bekleniyor.
6. Reconditioning başlangıcında, kalp damarlarından kalp damarları, temel koroner akış değerlendirmesi ve biyokimyasal analizler için 5 dakika bırakarak toplayın. Troponin T için tekrar her 15 dakika (kez 0, 15, 30, 45 ve 60 dk). Diğer analizler için toplama süreleri bireyselleştirme gereklidir (Şekil 2).

5. deneyim sonu

1. Langendorff cihazının kalbini çıkarın.
2. Düz yüksek karbon çelik bıçak (Microtome Blade veya benzeri) kullanarak, kalbin tabanı (aort ve pulmoner arter dahil) çıkarın.
3. Sağ ventrikül aşağı bakacak şekilde, 1-2 mm kalınlığında transvers ventriküler slaytlar kesti. Bir temsilcilik bölümünde (normalde üçüncü) sağ ventrikül tüketim ve Snap sol ventrikül dondurmak. Bu örnek, biyokimyasal analizler için kullanılabilir.
4. Kalan bölümleri yeni hazırlanmış 5% 2, 3, 5-Triphenyl-tetrazolium klorür ticari fosfat tampon tuz pH 7,4 için 10 dk 37 °C ' de altbirleştirme. Uygulanabilir dokular kırmızı tuğla renkli.
5. Fosfat tampon tuzlu pH 7,4 ile iki kez yıkayın ve 4 °C gecede% 10 formalin ile düzeltin. İki kez fosfat tamponlu tuz pH 7,4 ile yıkayın ve her dilim daldırma tutun.
6. Her slayt aşırı sıvı ve ağırlık çekin. Her iki tarafın dijital renk görüntülerini alın. Yüzde infarkt boyutunu hesaplamak ve dilim ve Total ventriküler ağırlık için doğru planimetrik analizler kullanın. Coloration zaman ile kaybolur. Fotoğraflar mümkün olduğunca çabuk alınmalıdır.

6. veri analizleri

1. Tüm basınç verilerini hayvan başına yeni bir dosyada kaydedin.
2. Basınç analizleri için zaman noktaları başına en az 200 basınç döngüsü seçin. Analizler, özel yazılım (örn., LabChart) kullanılarak off-line (denemenin tamamlandıktan sonra) yapılabilir. Mevcut ortak kardiyovasküler parametreler şunlardır: maksimal üretilen basınç, end diyastolik basınç, + dP/DT (basınç eğrisinin yükseliş sırasında en yüksek eğim, ventriküler kontril yetenek göstergesi),-dP/DT ( basınç eğrisinin çalıştırılmaktadır, ventriküler gevşeme kapasitesi bir göstergesi) diğerleri arasında.
   Not: Troponin analizleri Için, reperfüzyon sırasında troponin salınımı artışı bekleniyor. EVHP sistemindeki reperfüzyon 1 h sonra, troponin seviyeleri taban çizgisine düşebilir, bu numunelerin toplanması ve işlenmesi konusunda dikkatli zamanlama ihtiyacını vurguladı.

Sonuçlar

Uzama sonrasında kan basıncı öngörülebilir bir desenle hızla düşer (Şekil 3). Beklenen ölüm süresi 5 dakikadan az.

Şekil 4 , 0, 10 ve 15 dk. WIN sonrasında yeniden yenileme başlangıcında ortalama bir basınç/zaman eğrisi gösterir. Kontril fonksiyonu zamanla gelişecektir. WıN kısa sürelerinin kullanımı kontrazlığın normale dönmesini sağlar ve morfolojik hasar algılanamaz (Şekil 5

Tartışmalar

Burada sunulan protokol kalp DCD basit, rahat ve çok yönlü bir model tanıttı, kalp fonksiyonel kurtarma değerlendirmek için fırsat sunan, doku hasarı ve donör kurtarma geliştirmek için sonrası Klima kardiyokoruyucu ajanlar kullanımı kalp nakli için aksi atılır. Ex vivo kalp perfüzyon sistemleri (EVHP) sistemleri, kardiyak fonksiyonun değerlendirilmesi için bir platform sağlamak üzere optimize edilmiştir ve post-Conditioning farmakolojik ajanlar ile tamamlayıcı olarak değiştirilmiş çözümler...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.9% Sodium Chloride. 1 L bag	Baxter		Electrolyte solution for flushing in the modified Langendorff system.
14 G 2" I.V catheter	Jelco	4098	To act as endotracheal tube.
2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride	Milipore-Sigma	T8877	Vital coloration
22 G 1" I.V catheter	BD	383532	I.V catheter with extension tube that facilitates manipulation for carotid catheterization
Adson Dressing Fcp, 4 3/4", Serr	Skalar	50-3147	Additional forceps for tissue manipulation
Alm Self-retaining retractor 4x4 Teeth Blunt 2-3/4"	Skalar	22-9027	Tissue retractor used to maintain the chest open.
Bridge amp	ADinstruments	FE221	Bridge amp for intracarotid blood pressure measurement
Calcium chloride	Milipore-Sigma	C1016	CaCl2 anhydrous, granular, ≤7.0 mm, ≥93.0% Part of the Krebs solution
D-(+)-Glucose	Milipore-Sigma	G8270	D-Glucose ≥99.5% Part of the Krebs solution
DIN(8) to Disposable BP Transducer	ADinstruments	MLAC06	Adapter cable for link between bridge amp and pressure transducer
Disposable BP Transducer (stopcock)	ADinstruments	MLT0670	Pressure transducer for intracarotid blood pressure measurement
dPBS	Gibco	14190-144	Electrolyte solution without calcium or magnesium.
Eye Dressing Fcp, Str, Serr, 4"	Skalar	66-2740	Additional forceps for tissue manipulation
Formalin solution, neutral buffered, 10%	Milipore-Sigma	HT501128	Fixative solution
Heating Pad	Sunbean	756-CN
Heparin sodium 1,000 UI/mL	Sandoz		For systemic anticoagulation
Hydrochloric Acid 36,5 to 38,0%	Fisher scientific	A144-500	Diluted 1:1 for pH correction
Ketamine	Bimeda		Anesthetic. 100 mg/mL
LabChart	ADinstruments		Control software for the Powerlab polygraph, allowing off-line analyses. Version 7, with blood pressure and PV loop modules enabled
Left ventricle pressure balloon	Radnoti	170404	In latex. Size 4.
Lidocaine HCl 2% solution	AstraZeneca		Antiarrhythmic for the cardioplegic solution
Magnesium Chloride ACS	ACP Chemicals	M-0460	MgCl2+6H2O ≥99.0% Part of the Krebs solution
Micro pressure sensor	Radnoti	159905	Micro pressure sensor and amplifier connected to the intraventricular balloon
Pacemaker	Biotronik	Reliaty	Set to generate a pulse each 200 ms for a heart rate of 300 bpm.
pH bench top meter	Fisher scientific	AE150
Physiological monitor	Kent Scientific	Physiosuite	For continuous monitoring of rodent temperature and saturation during the procedure
Plasma-Lyte A	Baxter		Electrolyte solution used as base to prepare cardioplegia
Potassium Chloride	Milipore-Sigma	P4504	KCl ≥99.0% Part of the Krebs solution
Potassium Chloride 2 meq/ml	Hospira		Part of the cardioplegic solution
PowerLab 8/30 Polygraph	ADinstruments		Electronic polygraph
Silk 2-0	Ethicon	A305H	Suture material for Langendorff apparatus
Silk 5-0	Ethicon	A302H	Suture material for carotid
Small animal anesthesia workstation	Hallowell EMC	000A2770	Small animal ventilator
Sodium bicarbonate	Milipore-Sigma	S5761	NaHCO3 ≥99.5% Part of the Krebs solution
Sodium Chloride	Milipore-Sigma	S7653	NaCl ≥99.5% Part of the Krebs solution
Sodium Hydroxide pellets	ACP chemicals	S3700	Diluted to 5 N (10 g in 50 mL) for pH correction
Sodium phosphate monobasic	Milipore-Sigma	S0751	NaH2PO4 ≥99.0% Part of the Krebs solution
Stevens Tenotomy Sciss, Str, Delicate, SH/SH, 4 1/2"	Skalar	22-1240	Small scisors for atria and cava vein opening
Tissue slicer blades	Thomas scientific	6727C18	Straight carbon steel blades for tissue slicing at the end of the protocol
Tuberculin safety syringe with needle 25 G 5/8"	CardinalHealth	8881511235	For heparin injection
Veterinary General Surgery Set	Skalar	98-1275	Surgery instruments including disection scisors and mosquito clamps
Veterinary Micro Set	Skalar	98-1311	Surgery instruments with microscisors used for carotid artery opening
Working Heart Rat/Guinea Pig/Rabbit system	Radnoti	120101BEZ	Modular working heart system modified for the needs of the protocol. Includes all the necesary tubbing, water jacketed reservoirs and valves, including 2 and 3 way stop cock
Xylazine	Bayer		Sedative. 20 mg/mL