JoVE Logo
Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Burada sunulan izole etmek için optimize edilmiş bir protokoldür, culturing, transfecting, ve HIV enfekte bireyler ve sağlıklı kontroller insan birincil monositayırt.

Özet

İnsan immün yetmezlik virüsü (HIV) 1990'ların ortalarında kombine antiretroviral tedavi (cART) getirilmesine rağmen önemli bir sağlık sorunu olmaya devam etmektedir. Antiretroviral tedavi sistemik viral yükü etkin bir şekilde düşürürken ve normal CD4+ T hücre sayılarını geri getirirken, tamamen işlevsel bir bağışıklık sistemini yeniden oluşturmaz. CART uygulanan HIV-enfekte bireylerde işlevsiz bir bağışıklık sistemi bağışıklık aktivasyonu ile karakterize olabilir, bağışıklık hücrelerinin erken yaşlanma, ya da kalıcı inflamasyon. Bu koşullar, HIV enfeksiyonu ile ilişkili komorbid faktörler ile birlikte, kolayca hücresel ve hayvan modellerinde çoğaltılamaz hastalık, karmaşıklık ekleyin. Bu hastalarda immün disfonksiyonun altında yatan moleküler olayları araştırmak için, insan primer monositlerini in vitro olarak manipüle eden bir sistem sunulmuştur. Özellikle protokol, cART uygulanan HIV bulaşmış bireylerden ve HIV-negatif kontrollerden elde edilen birincil CD14+ monositlerin kültür ve transfeksiyonuna olanak sağlar. Yöntem, monositlerin ve monosit kaynaklı makrofajların izolasyon, kültür ve transfeksiyonu içerir. Ticari olarak mevcut kitler ve reaktifler kullanılırken, protokol miRNA mimikleri ve inhibitörleri ile monositlerin başarılı bir şekilde yapışması ve transfeksiyonu için önemli ipuçları ve optimize edilmiş koşullar sağlar.

Giriş

İnsan immün yetmezlik virüs-1 (HIV-1) enfeksiyonu fırsatçı enfeksiyonlara ve edinsel immün yetmezlik sendromuna (AIDS) yol açabilen ciddi immün fonksiyon bozukluğuna neden olur. Hiv-enfekte hastalar cART geçiren düşük viral yükler ve normal CD4+ T hücre sayıları ile karakterize olmasına rağmen, bağışıklık sisteminin işleyişi bu kişilerde tehlikeye olabilir, kanser gelişme riski ile bağlantılı olan işlevsiz bir bağışıklık yanıtına yol açan1. CART'taki HIV hastalarında immün disfonksiyon mekanizmaları büyük ölçüde bilinmemektedir. Bu nedenle, hasta kaynaklı bağışıklık hücrelerinin karakterize ve biyoloji ve fonksiyon araştırılması mevcut HIV araştırmanın önemli bir bileşenidir.

Monositler ve makrofajlar bağışıklık yanıtlarının temel düzenleyicileridir ve HIV enfeksiyonu2,3,4,5'tetemel rol oynarlar. Heterojen ve plastik doğada makrofajlar klasik olarak aktive (M1) veya alternatif olarak aktive (M2) olarak sınıflandırılabilir. Deneysel koşullar belirlenirken bu genel sınıflandırma gerekli olmakla birlikte, makrofajların polarizasyon durumu çeşitli sitokinler6,7,8,9ile tersine çevrilebilir. Çeşitli çalışmalar monositler ve dendritik hücreler üzerinde HIV enfeksiyonu etkilerini araştırmış olsa da, monosit aracılı yanıtların moleküler detayları büyük ölçüde bilinmemektedir6,7,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19. Bağışıklık hücresi regülasyonu ve fonksiyonu ile ilgili faktörler arasında, mikroRNA'lar (miRNA'lar), transkripsiyon sonrası gen ekspresyonunu düzenleyen kısa kodlamayan RNA'ların, büyük hücresel yollar (yani büyüme, farklılaşma, gelişme ve apoptoz) bağlamında önemli bir rol oynadığı gösterilmiştir20. Bu moleküller, makrofajların fonksiyonel polarizasyonunu dikte etmek için gerekli transkripsiyon faktörlerinin önemli düzenleyicileri olarak tanımlanmıştır21. CART uygulanan HIV enfekte bireylerin monositlerde miRNA potansiyel rolü araştırılmıştır, ancak alanında ilerleme çok daha fazla çalışma gerektirir22,23,24,25,26. Bu makalede, miRNA'ları ve siRNA'ları HIV ile enfekte olmuş hastalardan ve kontrollerden birincil insan monositlerine dönüştürmek için optimize edilmiş bir yöntem tartışılmaktadır.

Bu protokol, teknik prosedürdeki süreklilik klinik numunelerle çalışırken gereksiz deneysel değişkenlerin ortadan kaldırılmasına yardımcı olduğu için, ticari olarak kullanılabilen reaktiflere ve kitlere dayanır. Bununla birlikte, yöntem önemli ipuçları sağlar (yani, plaka hücrelerinin yapışmasını teşvik etmek için serumsuz medya ile kaplanmış veya kısa kuluçka hücre sayısı). Ayrıca, bu protokolde kullanılan polarizasyon koşulları yayınlanan çalışma27,28,29türetilmiştir.

Protokol

Aşağıda açıklanan tüm yöntemler Louisiana State University Sağlık Bilimleri Merkezi New Orleans Kurumsal İnceleme Kurulu tarafından onaylanmıştır. Tüm kan bilgilendirilmiş onam alındıktan sonra toplandı.

NOT: Biyolojik malzemelerin iştininde dikkatli olunması için tüm işlem biyogüvenlik seviyesi 2 (BSL2) tesisinde steril koşullar altında gerçekleştirilir. Özellikle, her adım bir biyogüvenlik kabine altında steril teknikler kullanılarak gerçekleştirilir. Kan, kan ürünleri, hücreler veya hücre ürünü pipetleme içeren her adımdan sonra, uygun bertaraf edilmeden önce kaputun içindeki bir atık kabından %10 çamaşır suyu ile tüm plastik malzemeyi (örneğin, serolojik pipetler, pipet uçları ve tüpler) durulamak önemlidir.

1. Primer insan monositlerinin immünomanyetik negatif seçilim ile izolasyonu

  1. Dört 10 mL ethylenediaminetetraasetik asit (EDTA) vakum tüpleri (tüp başına 10 mL kan) taze, insan tam kan (ya bir HIV+ hasta veya sağlıklı kontrol) 40 mL toplamak. Bir biyogüvenlik kabini altında steril teknikler kullanarak, bir 50 mL konik propilen tüp içine kan tüm 40 mL transfer.
  2. Seçilen insan monosit izolasyon kiti(Malzeme Tablosu)için üreticinin protokolünden sonra, kan tüpüne kitte sağlanan 2 mL monosit izolasyon kokteyli ekleyin. Girdap manyetik boncuklar, ayrıca kiti sağlanan, 30 s, ve kan tüpüne 2 mL ekleyin.
    1. 40 mL'den az kan varsa, eklenen reaktifleri küçültün. Çözeltiyi karıştırmak için pipet yukarı ve aşağı plastik 25 mL serolojik pipet ve oda sıcaklığında 5 dakika kuluçka (RT).
  3. Kan karışımını dört adet 50 mL'lik tüplere eşit olarak ayırın ve her tüpe 1 mM EDTA içeren 30 mL steril fosfat tamponlu salin (PBS) ekleyin. Plastik 25 mL serolojik pipet ile yukarı ve aşağı pipetleme ile karıştırın.
  4. Antikor konjuge manyetik boncukları çıkarmak için tüpleri 10 dk mıknatıs tutuculara yerleştirin. Her kan örneği için tutarlı kuluçka ve izolasyon süreleri sağlamak için aynı anda dört mıknatıs tutucuları kullanın, her tüp için bir.
  5. Onlar hala mıknatıs tutucuları iken, bir pipet kullanarak, her tüpün merkezinden içeriğini çizin. Kırmızı kan hücrelerini (10 mL başlangıç hacminin en fazla %10'u) hazırlamamaya ve içindekileri dört yeni 50 mL tüpten birine yerleştirmemeye dikkat edin.
  6. Her 50 mL tüpe 500 μL girdaplı manyetik boncuk ekleyin. Pipet yukarı ve aşağı 25 mL pipet ve 5 dakika boyunca RT inkübat. Daha sonra tüpleri 5 dk boyunca mıknatıs tutuculara yerleştirin.
  7. Mıknatıs tutucularda yken içindekileri her tüpün merkezinden dört yeni 50 mL tüpten birine dikkatlice aktarın. Doğrudan 5 dakika boyunca mıknatıs tutucularda her yeni 50 mL tüp yerleştirin.
  8. Her tüpün ortasındaki içeriği dikkatlice dört yeni 50 mL tüpten birine aktarın. 5 dk. Süpernatant'ı aspire etmek ve toplam 10 mL steril PBS'de dört hücreli peleti yeniden askıya almak için 300 x g'de tüm yeni 50 mL tüpleri döndürün.
  9. Hemositometre kullanarak hücreleri trypan mavi hariç tutarak sayın.
    NOT: 8-20 x 106 hücre genellikle 40 mL tam kandan elde edilir.

2. Birincil insan monositlerinin culturing

  1. 37 °C'lik su banyosu kullanarak, %1 penisilin-streptomisin (kalem/strep) ile desteklenen sıcak serumsuz RPMI 1640 ortam ve (biyogüvenlik kabini altında steril teknikler kullanmaya devam ederken) bu ortamda izole monositleri 1 x 106 hücre/mL konsantrasyonla askıya alır.
  2. 6 kuyu plakasının her kuyusuna veya 35 mm'lik bir tabağa 1 mL'lik yeniden askıda hücreler ekleyin (son hücre sayısı 1 x 106 hücre/plaka olmalıdır) ve %5 CO2ile 37 °C'lik bir kuluçka makinesine yerleştirin. Hücrelerin yapışması için 0,5-1,0 h bekleyin.
  3. 37 °C su banyosu, sıcak ısı-inaktive (HI) fetal büyükbaş serum (FBS) kullanarak. Her plakaya 100°L (%10 nihai konsantrasyon) FBS ekleyin. Makrofaj farklılaşmasını teşvik etmek için hücrelere büyüme faktörleri ekleyin.
    1. Ortama 25 ng/mL granülosit-makrofaj koloni uyarıcı faktör (GM-CSF) ekleyerek M1 benzeri fenotip için prime makrofajlar. Ortama 50 ng/mL makrofaj koloni uyarıcı faktör (M-CSF) ekleyerek M2 benzeri fenotip için prime makrofajlar28.
      NOT: Hem GM-CSF hem de M-CSF, m1 veya M2 için hücreleri astarlarken, genel bir makrofaj fenotip (M0) için monosit farklılaşmasına izin verir, sırasıyla7,28,30.

3. Kültürde birincil insan monositlerinin dönüştürülmesi

  1. Polimer bazlı transfeksiyon reaktifi(Malzeme Tablosu)içeren bir kit kullanarak miRNA taklitçiveya inhibitörleri veya siRNA ile transfect monositler.
    1. Transfeksiyon kiti için üreticinin protokolüne (ve bir biyogüvenlik kabinesi altında steril tekniklerin kullanımına devam etme) ardından, ilk olarak seçilen miRNA mirna taklitlerini/inhibitörlerini veya siRNA'ları tamponda 1,83 μM'lik son konsantrasyona seyreltin. 1 x 106 hücrenin transfeksiyonu için 10 μL seyreltilmiş mimik/inhibitör hazırlayın.
  2. Sağlanan polimerin 1 μL'sini taze 1,5 mL mikrosantrifüj tüpüne ekleyerek transfeksiyon reaktifini hazırlayın ve hemen ardından 90 μL sağlanan tampon (transfeksiyon başına toplam 91°L reaktif için) ekleyin. Girdap 3-5 s.
  3. Pipet 90 μL transfection çözeltisi içeren tüp içine 10 μL seyreltilmiş miRNA miRNA mi/inhibitörü veya siRNA. Nazik pipetleme ile karıştırın ve RT 15 dakika kuluçka.
  4. 1 x 106 kaplama monositten oluşan bir kuyuya (veya çanak) 100 μL transfeksiyon kompleksi ekleyin. 37 °C'de 4 saat boyunca inkütün hücreleri, daha sonra GM-CF veya M-CF içeren tam ortam (RPMI 1640% 1 penisilin-streptomisin ve% 10 ısı-inaktive FBS ile desteklenmektedir) ile orta değiştirin.

4. M1/M2 farklılaşma ve aktivasyon

  1. Monositler hemen kültürde kaplama üzerine geniş M0 makrofajlar ayırt başlar. Kaplamadan sonraki üçüncü gün, bir biyogüvenlik kabinesi altında steril teknikler kullanmaya devam edin ve ortamı 3 mL taze RMPI 1640 ortamla değiştirin (%1 penisilin-streptomisin, %10 ısı-inaktive FBS ve M1 benzeri polarizasyonu veya M2 benzeri kutuplaşmayı teşvik etmek için 25 ng/mL GM-CSF ile destekleyin). Kültür 37 °C, 5% CO2bir kuvöz de ilk kaplama itibaren 6 gün boyunca bu koşullarda hücreleri .
  2. Astarlanmış hücrelerin M1-makrofaj fenotipine polarizasyonunu ilerletmek için, hücre ortamını %5 ısı yalıtımlı FBS, %1 kalem/strep, 100 ng/mL E. coli-derivedlipopolysaccharide (LPS) ve 20 ng/mL interferon gama (IFN-γ) içeren yeni ortamla değiştirerek hücre ortamını 6.
  3. Astarlanmış hücrelerin M2-makrofaj fenotipine polarizasyonunu ilerletmek için, hücre ortamını %5 ısı yalıtımlı FBS, %1 kalem/strep, 10 ng/mL M-CSF ve 20 ng/mL interleukin 4 (IL-4) içeren yeni ortamla değiştirerek kuluçka gününün 6.
  4. 24 saat sonra, RNA, protein veya akış sitometri analizleri için hücreleri hasat.
    1. Hücreler toplanmaya hazır olduğunda, hücreleri pbs ile çanak 2x yıkayın (RNA ekstraksiyonu için RT'de veya protein ekstraksiyonu için buzda soğutulur). Farklılaşmış makrofajlar artık plakalara sıkıca bağlandığından, plakadaki hücreleri doğrudan RNA ve protein analizleri için malzeme elde etmek için lyse.
    2. Akış sitometrisi için malzeme nin toplanması için, 2 mM EDTA içeren PBS'yi tabağa ekleyin, hücreleri 37 °C'de 10 dakika kuluçkaya yatırın, hücreleri çanaktan nazikçe kazıyın ve standart protokollere geçmeden önce içindekileri 1,5 mL mikrosantrifüj tüpünde toplayın.

5. Akış sitometrisi

  1. Culturing ortamını çıkarmak için PBS'deki hücreleri durula. 100.000 hücreyi (her akış sitometrisi durumu başına) aşağı doğru döndürün ve 2 μL HuFcR bağlayıcı inhibitörü içeren 100 μL PBS'de peleti yeniden askıya alın. 15 dakika RT'de kuluçka.
  2. Önerilen miktarlarda 50 μL boyama tamponu ve istenilen antikorlar (burada CD80, CD83, CD163 ve CD209 kullanılmıştır) ekleyin.
  3. Yavaşça karıştırın ve 30 dakika karanlıkta 4 °C'de kuluçkaya yatırın.
  4. 2 x PBS ile yıkayın ve numuneyi sitoflorimetre de çalıştırmadan önce 150 μL PBS'de lekeli hücreleri yeniden askıya alın.

Sonuçlar

Açıklanan prosedür kullanılarak, HIV ile enfekte bireyler ve sağlıklı donörlerin birincil insan monositleri izole edildi. Burada sunulan tüm veriler düşük (<20 kopya/mL) veya tespit edilemeyen viral yükler ve normal CD4+ T hücre sayıları ile cART uygulanan HIV+ deneklerden elde edilmiştir. İzolasyondan hemen sonra hücreler boyandı ve hücre popülasyonlarının saflığını doğrulamak için akış sitometrisi yapıldı. Sonuçlar, hücrelerin %9...

Tartışmalar

Sunulan protokol, monosit ve makrofajların incelenmesinde bir model olarak HIV ile enfekte olmuş deneklerin birincil hücrelerinin kullanımını göstermektedir. HIV+ cART geçiren hastalar birden fazla yıl enfeksiyon ile yaşamak ve aynı zamanda diğer co-enfeksiyonlar tehlikeye bağışıklık sistemi ile ilgili olabilir. HIV kronik enfeksiyon varlığında immünomodülasyon çalışma için, hücreler doğrudan hastalardan hasat edildi. MiRNA'ların hücre gelişimi ve farklılaşmasında önemli rol ...

Açıklamalar

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Teşekkürler

Yazarlar hiv Klinik / Tümör Biorepozitory Core hasta örnekleri ve hücresel immünoloji metabolizma çekirdek akış sitometri analizi sağlamak için sağlamak için teşekkür etmek istiyorum. Bu proje NIH P20GM121288 ve P30GM114732 tarafından finanse edilmiştir.

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
0.5M EDTAInvitrogenAM9260G
BD Vacutainer Plastic Blood Collection Tubes with K2EDTABD Biosciences366643
Brilliant Stain BufferBD Horizon563794Flow cytometry
CD14 PerCPInvitrogen46-0149-42Flow cytometry- conjugated antibody
CD163 BV711BD Horizon563889Flow cytometry- conjugated antibody
CD209 BV421BD Horizon564127Flow cytometry- conjugated antibody
CD80 FITCBD Horizon557226Flow cytometry- conjugated antibody
CD83 APCBD Horizon551073Flow cytometry- conjugated antibody
Easy 50 EasySep MagnetStemCell Technologies18002
Easy Sep Direct Human Monocyte Isolation KitStemCell Technologies19669
EIF4EBP1 mAbCell Signaling9644Monoclonal antibody for Western blot
EIF4EBP1 siRNASanta Cruzsc-29594
Fetal Bovin Serum Defined Heat InactivatedHycloneSH30070.03HI
Gallios Flow CytometerBeckman CoulterB43618
GAPDH mAbSanta CruzSC-47724Monoclonal antibody for Western blot
HuFcR Binding InhibitoreBiosciences14-9161-73Flow cytometry- blocking buffer
Kaluza Analysis SoftwareBeckman CoulterB16406Software to analyze flow cytometry data
Lipopolysaccharides from Escherichia coli O55:B5SigmaL4524
miRCURY LNA microRNA Mimic hsa-miR-146a-5pQiagenYM00472124
MISSION miRNA Negative ControlSigmaHMC0002Scrambled miRNA conjugated with a near infrared dye
Nunc 35mm Cell Culture DishThermo Scientific150318
PBSGibco20012027
Penicillin-StreptomycinGibco15140122
Recombinant Human GM-CSFR&D Systems215-GM-050
Recombinant Human IFN-γR&D Systems285-IF-100
Recombinant Human IL-4R&D Systems204-IL-010
Recombinant Human M-CSFR&D Systems216-MC-025
RPMI 1640 with L-GlutamineCorning10040CVMP
Scrambled Control siRNASanta Cruzsc-37007
Viromer Blue Transfection Reagent KitLipocalyxVB-01LB-01
WST-1 Cell Proliferation ReagentRoche5015944001Colorimetric assay to assess cell viability

Referanslar

  1. Slim, J., Saling, C. F. A Review of Management of Inflammation in the HIV Population. Biomedical Research International. 2016, 3420638 (2016).
  2. Herskovitz, J., Gendelman, H. E. HIV and the Macrophage: From Cell Reservoirs to Drug Delivery to Viral Eradication. Journal of Neuroimmune Pharmacology. 14 (1), 52-67 (2019).
  3. Machado Andrade, V., Stevenson, M. Host and Viral Factors Influencing Interplay between the Macrophage and HIV-1. Journal of Neuroimmune Pharmacology. 14 (1), 33-43 (2019).
  4. Merino, K. M., Allers, C., Didier, E. S., Kuroda, M. J. Role of Monocyte/Macrophages during HIV/SIV Infection in Adult and Pediatric Acquired Immune Deficiency Syndrome. Frontiers in Immunology. 8, 1693 (2017).
  5. Wacleche, V. S., Tremblay, C. L., Routy, J. P., Ancuta, P. The Biology of Monocytes and Dendritic Cells: Contribution to HIV Pathogenesis. Viruses. 10 (2), (2018).
  6. Davis, M. J., et al. Macrophage M1/M2 polarization dynamically adapts to changes in cytokine microenvironments in Cryptococcus neoformans infection. MBio. 4 (3), e00264 (2013).
  7. Raggi, F., et al. Regulation of Human Macrophage M1-M2 Polarization Balance by Hypoxia and the Triggering Receptor Expressed on Myeloid Cells-1. Frontiers in Immunology. 8, 1097 (2017).
  8. Van Overmeire, E., et al. M-CSF and GM-CSF Receptor Signaling Differentially Regulate Monocyte Maturation and Macrophage Polarization in the Tumor Microenvironment. Cancer Research. 76 (1), 35-42 (2016).
  9. Vogel, D. Y., et al. Human macrophage polarization in vitro: maturation and activation methods compared. Immunobiology. 219 (9), 695-703 (2014).
  10. Almeida, M., Cordero, M., Almeida, J., Orfao, A. Different subsets of peripheral blood dendritic cells show distinct phenotypic and functional abnormalities in HIV-1 infection. AIDS. 19 (3), 261-271 (2005).
  11. Ciesek, S., et al. Impaired TRAIL-dependent cytotoxicity of CD1c-positive dendritic cells in chronic hepatitis C virus infection. Journal of Viral Hepatitis. 15 (3), 200-211 (2008).
  12. Granelli-Piperno, A., Golebiowska, A., Trumpfheller, C., Siegal, F. P., Steinman, R. M. HIV-1-infected monocyte-derived dendritic cells do not undergo maturation but can elicit IL-10 production and T cell regulation. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 101 (20), 7669-7674 (2004).
  13. Hearps, A. C., et al. HIV infection induces age-related changes to monocytes and innate immune activation in young men that persist despite combination antiretroviral therapy. AIDS. 26 (7), 843-853 (2012).
  14. Heggelund, L., et al. Stimulation of toll-like receptor 2 in mononuclear cells from HIV-infected patients induces chemokine responses: possible pathogenic consequences. Clinical and Experimental Immunology. 138 (1), 116-121 (2004).
  15. Hernandez, J. C., et al. Up-regulation of TLR2 and TLR4 in dendritic cells in response to HIV type 1 and coinfection with opportunistic pathogens. AIDS Research and Human Retroviruses. 27 (10), 1099-1109 (2011).
  16. Hernandez, J. C., Latz, E., Urcuqui-Inchima, S. HIV-1 induces the first signal to activate the NLRP3 inflammasome in monocyte-derived macrophages. Intervirology. 57 (1), 36-42 (2014).
  17. Low, H. Z., et al. TLR8 regulation of LILRA3 in monocytes is abrogated in human immunodeficiency virus infection and correlates to CD4 counts and virus loads. Retrovirology. 13, 15 (2016).
  18. Sachdeva, M., Sharma, A., Arora, S. K. Functional Impairment of Myeloid Dendritic Cells during Advanced Stage of HIV-1 Infection: Role of Factors Regulating Cytokine Signaling. PLoS ONE. 10 (10), e0140852 (2015).
  19. Sachdeva, M., Sharma, A., Arora, S. K. Increased expression of negative regulators of cytokine signaling during chronic HIV disease cause functionally exhausted state of dendritic cells. Cytokine. 91, 118-123 (2017).
  20. Bartel, D. P. MicroRNAs: genomics, biogenesis, mechanism, and function. Cell. 116 (2), 281-297 (2004).
  21. Li, H., Jiang, T., Li, M. Q., Zheng, X. L., Zhao, G. J. Transcriptional Regulation of Macrophages Polarization by MicroRNAs. Frontiers in Immunology. 9, 1175 (2018).
  22. Hu, X., et al. Genome-Wide Analyses of MicroRNA Profiling in Interleukin-27 Treated Monocyte-Derived Human Dendritic Cells Using Deep Sequencing: A Pilot Study. International Journal of Molecular Sciences. 18 (5), (2017).
  23. Huang, J., et al. MicroRNA miR-126-5p Enhances the Inflammatory Responses of Monocytes to Lipopolysaccharide Stimulation by Suppressing Cylindromatosis in Chronic HIV-1 Infection. Journal of Virology. 91 (10), (2017).
  24. Lodge, R., et al. Host MicroRNAs-221 and -222 Inhibit HIV-1 Entry in Macrophages by Targeting the CD4 Viral Receptor. Cell Reports. 21 (1), 141-153 (2017).
  25. Ma, L., Shen, C. J., Cohen, E. A., Xiong, S. D., Wang, J. H. miRNA-1236 inhibits HIV-1 infection of monocytes by repressing translation of cellular factor VprBP. PLoS ONE. 9 (6), e99535 (2014).
  26. Riess, M., et al. Interferons Induce Expression of SAMHD1 in Monocytes through Down-regulation of miR-181a and miR-30a. Journal of Biological Chemistry. 292 (1), 264-277 (2017).
  27. Buchacher, T., Ohradanova-Repic, A., Stockinger, H., Fischer, M. B., Weber, V. M2 Polarization of Human Macrophages Favors Survival of the Intracellular Pathogen Chlamydia pneumoniae. PLoS ONE. 10 (11), e0143593 (2015).
  28. Jaguin, M., Houlbert, N., Fardel, O., Lecureur, V. Polarization profiles of human M-CSF-generated macrophages and comparison of M1-markers in classically activated macrophages from GM-CSF and M-CSF origin. Cellular Immunology. 281 (1), 51-61 (2013).
  29. Lacey, D. C., et al. Defining GM-CSF- and macrophage-CSF-dependent macrophage responses by in vitro models. Journal of Immunology. 188 (11), 5752-5765 (2012).
  30. Tarique, A. A., et al. Phenotypic, functional, and plasticity features of classical and alternatively activated human macrophages. American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 53 (5), 676-688 (2015).

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

mm noloji ve EnfeksiyonSay 154primer monositlerinsan monositlerimonosit izolasyonumonosit transfeksiyonumonosit k lt rmonosit farkl la masHIV enfekte monositlerHIV hasta rnekleri

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır