Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Burada, oligodendrositlerin saflaştırılması ve ortak kültür deneyleri için kullanılabilecek oligodendrosit şartlı ortamın üretimi için etkili bir yöntem gösteriyoruz.

Özet

Merkezi sinir sisteminde, oligodendrocytes iyi akson miyelinasyon rolleriyle bilinir, bu tuzlu iletim yoluyla eylem potansiyellerinin yayılmasını hızlandırır. Ayrıca, raporların giderek artan sayıda oligodendrocytes myelination ötesinde nöronlar ile etkileşim öneririz, özellikle çözünür faktörlerin salgılayan yoluyla. Burada, glial hücre kültürlerinden de astrositler ve mikroglial hücreler içeren oligodendroglial soy hücrelerinin saflaştırılmasına izin veren ayrıntılı bir protokol saklıyız. Yöntem, 37 °C'de gece boyunca sallamaya dayanır, bu da üstteki oligodendrogial hücrelerin ve mikroglial hücrelerin seçici ayrılmasına ve mikroglianın diferansiyel adezyon la ortadan kaldırılmasını sağlar. Daha sonra oligodendrocytes kültürünü ve oligodendrocyte-conditioned orta (OCM) üretimi açıklar. Biz de co-kültür deneylerde saflaştırılmış hipokampal nöronlar için OCM tedavi veya oligodendrocytes ek kinetik sağlamak, oligodendrocyte-nöron etkileşimleri çalışma.

Giriş

Oligodendrocytes (OL) merkezi sinir sisteminin glial hücreleridir (CNS) aksonlar etrafında miyelin sarma oluşturmak. OL'ler, embriyonik CNS'nin ventriküler bölgeleri içinde çoğalan ve daha sonra tamamen olgun OL'lere (yani miyelin oluşturanhücrelere)göç eden ve farklılaşan oligodendrocyte öncül hücrelerinden (OPCs) kaynaklanır. OPCs erken gelişim sırasında bol, ama aynı zamanda büyük proliferatif hücre popülasyonu temsil yetişkin beyinde devam2. Tek bir OL, çıkarılabilir olmayan bölümlerde birden fazla aksonları (yani, internodes) ensheathes ve her miyelin döngü kenarı miyelin yalıtım özellikleri için çok önemli olan paranodal etki alanı oluşturan akson bağlanır1,3. Paranodlar arasında Ranvier düğümleri denilen küçük myelinated boşluklar vardır. Bu düğümler voltaj kapılı sodyum kanalları (Nav) açısından zengindir ve tuzatory iletkenlik4ile etki potansiyellerinin yenilenmesine ve hızlı yayılmasına olanak sağlar. Bu sıkı etkileşim aynı zamanda OLs 5 laktat nöronal alımıyoluyla aksonal enerji desteği sağlar5 ,6.

Oligodendroglial soy hücrelerinin olgunlaşması ve miyelinasyon süreci sıkı nöronlar ile etkileşimleri tarafından düzenlenir7. Nitekim, OLs ve OPCs, ayrıca NG2 hücreleri olarak adlandırılan, nörotransmitterler için reseptörlerin bir dizi ifade, ve uyarıcı ve inhibitör nöronlar giriş alabilirsiniz, onları miyelinating hücrelere onların çoğalma ve / veya farklılaşma tetikleyebilir nöronal aktivite algılamak için izin2. Buna karşılık, OPCs / OLs tek başına veya sinerjik nöromodülatif ve nöroprotektif fonksiyonlar8,9,10,11,12aracılık ekstrasellüler uzaya mikroveziküller ve proteinler salgılar . Ancak, oligodendroglial soy hücreleri ve nöronlar arasındaki etkileşimlerin birden fazla modları kontrol moleküler mekanizmalar henüz tam olarak deşifre olmak.

Ayrıca, çeşitli CNS patolojik koşullarda, OLs öncelikle etkilenir, böylece nöronlar ile etkileşimi rahatsız. Örneğin, Multipl Skleroz (MS), nörolojik disfonksiyon CNS fokal demiyelinasyon neden olur, aksonal hasar ve buna bağlı sakatlık birikimine yol açabilir OLs kaybı ikincil. Remiyelinasyon, çoğu durumda yetersiz olsa da13gerçekleşebilir. Son on yılda kaydedilen ilerleme, immünoterapilerin gelişmesi nedeniyle nüks etme oranını azaltmış, ancak remiyelinasyonu teşvik etmek bugüne kadar karşılanmamış bir ihtiyaç olmaya devam etmektedir. Bu nedenle, OL'lerin rolünün, işlevlerinin ve etkilerinin daha iyi anlaşılması, cns koşullarının geniş bir yelpazesi için yeni tedavilerin geliştirilmesiaçısından özellikle ilgi çekicidir.

Burada, OSB'lerin arınma ve kültür yöntemlerini açıklıyoruz. Bu, gelişimlerini ve biyolojilerini düzenleyen içsel mekanizmaların hassas bir şekilde incelenmesini sağlar. Buna ek olarak, bu tür son derece zenginleştirilmiş OL kültürleri oligodendrocyte klimalı orta üretimine izin (OCM), hangi saflaştırılmış nöron kültürleri eklenebilir nöronal fizyoloji ve bağlantı üzerinde OLS gizli faktörlerin etkisi hakkında fikir edinmek için. Ayrıca, saflaştırılmış oligodendrositler ve nöronların bir araya gelerek miyelinasyonu düzenleyen mekanizmaların ele alınmasına olanak tanıyan bir in vitro co-kültür sisteminin nasıl uygulanacağını anlatıyoruz.

Protokol

Bu deneyde farelerin bakımı ve kullanımı kurumsal politika ve yönergelere (UPMC, INSERM ve Avrupa Topluluğu Konseyi Direktifi 86/609/EEC) uygundur. Standart 12 yavru için aşağıdaki protokol oluşturulmuştur.

1. Şişelerin hazırlanması (~5 dk)

NOT: Steril koşullarda laminar akış kaputunda diseksiyondan bir gün önce aşağıdaki adımları gerçekleştirin.

  1. Coat 150 cm2 şişe (T150) filtre kapağı ile (2 yavru için 1 şişe) polietilenin 5 mL kullanarak (PEI, 100 mg / L, Ek Dosya 1protokolüne bakın).
  2. Şişeleri gece boyunca 4 °C'de saklayın.
  3. Diseksiyon gününde steril distile su ile 3 kez durulayın kaplı şişeler.

2. Ortamın hazırlanması (~10 dk)

NOT: Adımları steril koşullarda laminar akış kaputunda gerçekleştirin.

  1. Dulbecco'nun modifiye Kartal ortamından (DMEM) oluşan ve fetal baldır serumunun (FCS) %10'u ve penisilin-streptomisinin (100 IU/mL) %10'u ile desteklenen 500 mL kültür ortamı hazırlayın.
  2. 20 mL DMEM, 200 μL DNase (50 g/mL), 200 μL papain (30 U/mL) ve 200 μL L-sistein (0,24 mg/mL) içeren 50 mL'lik bir tüpte enzim sindirim ortamının 20,6 mL'sini hazırlayın.
  3. 0,22 μm'lik bir filtre kullanarak ortamı filtreleyin.
  4. Medyayı, diseksiyona kadar ortam sıcaklığında (RT) laminar akış kaputunda tutun.

3. Diseksiyon için hazırlık (~10 dk)

NOT: Adımları steril koşullarda laminar akış kaputunda gerçekleştirin.

  1. Kalsiyum ve magnezyum olmadan 100 mL fosfat tamponlu salin hazırlayın (PBS; 1x). 0,22 μm filtre kullanarak filtre sterilize edin.
  2. 50 mL buz gibi 1x PBS çözeltisi ve %45 glikoz 750 μL hazırlayın. 0,22 μm filtre kullanarak filtre sterilize edin.
  3. 100 mm'lik Petri kabını temizleme aletleri için 1x PBS ve doku hasadı için buz gibi PBS-glikoz içeren üç 60 mm Petri kabını doldurun. Petri tabaklarını diseksiyona kadar buza koyun.

4. Diseksiyon

NOT: Diseksiyon doğum sonrası (P) 2'de erkek ve dişi Wistar sıçan yavrularından yapılır.

  1. Steril bir ortam sağlamak için, % 100 etanol ile tezgah temizlemek için emin olun. Tüm cerrahi aletleri %100 etanol ile sterilize edin.
  2. Yavaşça% 70 etanol ile yavrunun boyun sprey.
  3. Hayvanın kafasını kesmek ve başı buz gibi PBS-glikoz içeren 100 mm'lik Petri kabına yerleştirmek için büyük cerrahi makas kullanın.
  4. Göz seviyesinde hayvanın başını korumak için kavisli forceps kullanın. Kafatasının tabanında küçük bir kesi yapmak ve beyin orta hattı aşağıdaki kafatası kesmek için küçük cerrahi makas kullanın.
  5. Kafatasının iki parçasını orta hattan yavaşça soymak için forceps kullanın.
  6. Baş boşluğundan beyin kaldırmak için küçük bir cerrahi kaşık kullanın. Beyni buz üzerinde buz gibi PBS-glikoz içeren 60 mm'lik petri kabına koyun.
  7. Bir steromicroscope altında görüntüleme, beyincik kaldırmak için ince çifenler kullanın, beyin sapı ve koku ampulleri serebral hemisfer.
  8. İki serebral hemisferi ayırmak için ince pratisyen ler kullanın. Menenjitleri soymak için ince forceps kullanın. Serebral kortikülleri buzüzerinde 60 mm'lik bir kabın içine koyun.
    NOT: Buz gibi PBS doğru menenjlerin çıkarılması için çok önemlidir.

5. Doku dissociasyonu

NOT: Adımları steril koşullarda laminar akış kaputunda gerçekleştirin.

  1. Ince serebral korteksleri doğramak için keskin bir neşter kullanın. Kıymalı dokuyu enzim sindirim ortamı içeren 50 mL'lik bir tüpe aktarın.
  2. 37 °C'de %5 CO2'ninaltında nemlendirilmiş bir kuluçka makinesinde 30 dakika kuluçka .
  3. Kortikal dokunun 50 mL tüpün altında kalmasını sağlarken enzim sindirim ortamını nazikçe çıkarmak için p1000 mikropipet kullanın.
  4. 1 mL DMEM-10% FCS eklemek ve dokuyu hafifçe triturate etmek için p1000 mikropipet kullanın.
  5. Kortikal dokuyu 50 mL'lik bir tüpe filtrelemek için 70 m filtre ve 1 mL şırınganın pistonu kullanın.
    NOT: DMEM-10% FCS ile iç tüp duvarında birkaç kez artık doku durulayabilir.
  6. 50 mL'lik tüpü DMEM-%10 FCS ile doldurun. SENTRIFUGE 423 x g 5 dk RT. Dikkatle supernatant kaldırmak ve DMEM-10% FCS 2 mL ile hücre pelet resuspend.
  7. P1000 mikropipet li ve p200 mikropipetli hücre peletini hafifçe triturate. DMEM-10%FCS uygun hacmi ile hücre süspansiyon seyreltmek.
    NOT: İki beyin = bir T150 = 5 mL DMEM-10%FCS.
  8. T150'de 1 x 105 hücre/cm2yoğunlukta hücre süspansiyonunun 5 mL plakası. Her T150'ye 20 mL sıcak DMEM-%10 FCS ekleyin. 37 °C'de %5 CO2'ninaltında nemlendirilmiş bir kuluçka makinesinde kuluçkaya yatırın.
  9. Sıcak DMEM-10% FCS ile 6 gün in vitro (DIV) sonra kültür ortamının yarısını yenileyin.

6. Sallayarak hazırlık

  1. Steril koşullar altında bir laminar akış kaputsal sallayarak önce gün sallayarak hazırlık gerçekleştirin.
  2. Şişeye taze sıcak kültür ortamı ekleyerek kültür ortamının yarısını yenileyin ve %5 CO2'ninaltında 37 °C'de kuluçkaya yatırın.

7. Sallayarak

  1. Pei ile coat üç 100 mm Petri yemekleri. Bir gecede 4 °C'de saklayın.
  2. Parafin film ile şişe kapağı kapağı ve plastik bir torbaya şişeleri koymak. 37 °C'de 250 rpm'de glial hücreleri içeren şişeleri bir gecede çalkalayın.
    NOT: İlk sallayarak 8 DIV yapılır ve bir üç farklı sallayarak kadar gerçekleştirebilirsiniz (zamanlama için Şekil 1'e bakın).

8. OL soy hücreleri hasat ve kültür

NOT: Bu adımlar steril koşullar altında laminar akış kaputunda yapılmalıdır.

  1. Sallayarak sonra gün, Tablo 1göre Bottenstein-Sato (BS) orta hazırlamak.
  2. Steril distile su ile 3 kez durulayın Petri yemekleri.
  3. Hasat şişeleri 'supernatant ağırlıklı OL soy hücreleri içeren değil, aynı zamanda bazı mikroglial hücreler ve kaplamasız 100 mm Petri yemekleri üzerine plaka.
    NOT: Bu adım, mikroglial hücrelerin çanak yüzeyindediral hızlı yapışma yoluyla uzaklaştırılmasına olanak sağlar.
  4. Petri yemeklerini %5 CO2'ninaltında 37 °C'de nemlendirilmiş bir kuluçka makinesinde 15 dakika kuluçkaya yatırın.
  5. Her T150 şişesini 25 mL sıcak taze hazırlanmış kültür ortamı ile doldurun ve 37 °C'de %5 CO2'nin altında nemli bir kuluçka makinesinde ikinci titrene kadar kuluçkaya yatırın.
  6. Petri kaplarından süpernatantı, artık mikroglial hücrelerin yapışmasını sağlamak için kaplamasız yeni 100 mm Petri kaplarına aktarın.
  7. Petri yemeklerini %5 CO2'ninaltında 37 °C'de nemlendirilmiş bir kuluçka makinesinde 15 dakika kuluçkaya yatırın.
  8. Yapışmaz OL soy hücreleri içeren supernatant'ı çıkarın ve 50 mL tüplere aktarın (50 mL tüp için 2 Petri kabından süpernatant). Mikroglia ile kaplanmış Petri tabaklarını atın.
  9. 423 x g5 dk için supernatant santrifüj . 1 mL BS orta ile supernatant ve resuspend hücre peletini dikkatlice çıkarın. Tüm peletleri ortak bir 50 mL tüpte birleştirin ve bs orta ile sesi 10 mL'ye ayarlayın.
  10. Hücre yoğunluğu nu mikroskop altında sayma hücrelerini belirleyin.
    NOT: 3 x 105/mL ile 5 x 105/mL arasında bir hücre yoğunluğu elde edilmelidir.
  11. Hücre yoğunluğu 30 mL'den daha yüksek veya 4 x10 5/mL'den yüksekse 20 mL BS ekleyin veya hücre yoğunluğu 4 x 10 5/mL'den azsa sadece 10 mL BS ekleyin ve 20 mL'lik son bir hacim elde edin.
  12. 10 mL hücre süspansiyonlu iki veya üç önceden kaplanmış 100 mm Petri kabını kaplayın. 37 °C'de %5 CO2'ninaltında nemlendirilmiş bir kuluçka makinesinde kuluçkaya yatırın.
  13. Tüm BS orta 2 saat sonra ferahlatıcı tarafından Petri yemekleri enkaz temizleyin.
    NOT: Hücre yoğunluğunu ve enkaz kaldırma etkinliğini doğrulamak için temizlemeden önce ve sonra mikroskop altında kültürü inceleyin.
  14. %5 CO2'ninaltında 37 °C'de nemlendirilmiş bir kuluçka makinesinde 2 gün BS ortamda kuluçkaya yatırın.
    NOT: Kültürü mikroskop altında inceleyin. Kesişme %70 ila %80 arasında olmalıdır.

9. OCM üretimi

NOT: Bu adımları steril koşullar altında laminar akış kaputunda gerçekleştirin.

  1. Tablo 2'yegöre NB-B27low ortamını hazırlayın.
  2. 10 mL sıcak NB-B27low ortam ile kültür ortamını yenileyin. %5 CO2'ninaltında 37 °C'de nemlendirilmiş bir kuluçka makinesinde 2 gün kuluçkaya yatırın.
  3. Hasat OCM, yani, SUPERnatant OL salgılanan faktörler içeren. 0,22 μm filtre kullanarak OCM'yi filtreleyin.
    NOT: OCM'yi 4 °C'de en fazla 2 ay saklayın.

10. OCM ilavesi

NOT: Adımlar steril koşullar altında laminar akış kaputunda yapılmalıdır. OCM aşağıdaki protokol14uyarınca hazırlanan saflaştırılmış hipokampal nöron kültürleri eklenebilir , ve ekleyerek elde, 24 saat izolasyon sonra, anti-mitotik ajanlar uridine ve 5- fluorodeoxyuridine (5 μM) için 36 h.

  1. 3 DIV'de, anti-mitotik ajanlar içeren tüm nöron kültür ortamını çıkarın ve 500 μL taze sıcak OCM ekleyin.
  2. Taze yapılmış sıcak NB-B27 ile her 3 günde bir orta ortamın yarısını yenileyin.
    NOT: Bu tür kültürler 21 DIV'ye kadar korunabilir.

11. Saflaştırılmış hipokampal nöron kültürüne OL eklenmesi

NOT: Steril koşullarda laminar akış kaputunda aşağıdaki adımları gerçekleştirin. OL'ler yukarıda açıklandığı gibi elde edilen saflaştırılmış hipokampal kültürlere eklenebilir.

  1. Tablo 3'egöre ortak kültür ortamı hazırlayın.
  2. OL kültürünü %70 ile %80 oranında bir araya getirmekle alın. 2 mL ılık 1x PBS ile durula.
  3. Hücreleri ayırmak için, 100 mm Petri kabına %0,25 tripsin 2 mL ekleyin.
  4. %5 CO2'ninaltında 37 °C'de nemlendirilmiş bir kuluçka makinesinde 5 dakika kuluçka .
  5. Enzimatik reaksiyonu engellemek için 2 mL DMEM-10% FCS ekleyin. OL soy hücrelerini içeren süpernatanthas hasat.
  6. Sentrifüj 423 x g 5 dk RT. Dikkatle supernatant kaldırmak ve 1.25 x 105 hücre/mL konsantrasyonu elde etmek için sıcak co-kültür orta hücre pelet resuspend.
  7. 200 μL nöron kültür ortamını çıkararak ve 24 kuyulu bir plakanın her kuyubaşına 200 μL hücre süspansiyonu (2.5 x 104 hücre/kuyu) ekleyerek saflaştırılmış hipokampal nöron kültürüne OL ekleyin.
  8. Her 2-3 günde bir ortak kültür ortamının yarısını yenileyin.
    NOT: Ortak kültürler 24 DIV'ye kadar korunabilir.

Sonuçlar

Bu protokolde, OL soy hücreleri göksitler ve mikroglia kapalı sallayarak glial kültürlerden saflaştırılır. OL kültürlerinin saflık ve fenotipik muayenesi glial belirteçleri ile immünboyama ile değerlendirilebilir15. Farklı belirteçlerin ekspresyonunun analizi, OL kültürlerinin çoğunlukla %90 ± %4'ü O4+ hücre, %85 ± %7 NG2+ hücre ve %4,7 ± % 2,1 PLP+ hücre, %7,2 ± % 2,5'i GFAP+ astrosit (ortala...

Tartışmalar

Burada, daha önce yayınlanmış bir yöntem 16 uyarlanmış karışık glial kültürlerden son derece zenginleştirilmiş oligodendroglial soy hücre kültürleri elde etmek için ayrıntılı bir protokol sağlamak16, ve OL-klimalı orta sonraki üretim. Bu sallayarak tekniği pahalı değildir, üç kez tekrarlanabilir ve saflaştırılmış OL'lerin yüksek miktarda elde etmek için en uygun, Bottenstein-Sato kültürlü hücreler olarak (BS) ortamda PDGFα çoğalır. Glial hücreler P2 Wis...

Açıklamalar

Yazarların hiçbirinin rakip çıkarları veya çelişen çıkarları yoktur.

Teşekkürler

Yazarlar Rémi Ronzano'ya el yazması düzenlemedeki bilge tavsiyeleri için teşekkür etmek isterler. Bu çalışma ICM, INSERM, NSF'ye ARSEP vakfı hibesi ve Bouvet-Labruyère fiyatı ile finanse edilmiştir.

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
5-fluorodeoxyuridineSigmaF0503
B27 supplementThermoFisher17504044
D-(+)-Glucose solutionSigmaG8769
DNase (Deoxyribonuclease I)WorthingtonLS002139
Dulbecco's Modified Eagle MediumThermoFisher31966021
Ethanol 100%Sigma32221-M
Ethanol 70%VWR Chemicals83801.360
Fetal Calf SerumThermoFisher10082147
L-cysteineSigmaC7352
NeurobasalThermoFisher21103049
PapainWorthingtonLS003126
Penicillin-StreptomycinThermoFisher15140122
Phosphate Buffered Saline without calcium and magnesiumThermoFisherA1285601
Polyethylenimine(PEI)SigmaP3143
Tetraborate decahydrateSigmaB9876
TrypsinSigmaSigma
UridineSigmaU3750
Bottenstein-Sato (BS) media
apo-Transferrin humanSigmaT1147
BSA (Bovine Serum Albumin)SigmaA4161
Dulbecco's Modified Eagle MediumThermoFisher31966021
InsulinSigmaI5500
PDGFPeprotechAF-100-13A
Penicillin-StreptomycinThermoFisher15140122
ProgesteroneSigmaP8783
Putrescine dihydrochlorideSigmaP5780
Sodium seleniteSigmaS5261
T3 (3,3',5-Triiodo-L-thyronine sodium salt)SigmaT6397
T4 (L-Thyroxine)SigmaT1775
Co-culture media
apo-Transferrin humanSigmaT1147
B27 supplementThermoFisher17504044
BiotinSigmaB4639
BSA (Bovine Serum Albumin)SigmaA4161
CeruloplasminSigma239799
Dulbecco's Modified Eagle MediumThermoFisher31966021
HydrocortisoneSigmaH4001
InsulinSigmaI5500
N-Acetyl-L-cysteineSigmaA8199
NeurobasalThermoFisher21103049
Penicillin-StreptomycinThermoFisher15140122
ProgesteroneSigmaP8783
PutrescinSigmaP5780
Recombinant Human CNTFSigma450-13
Sodium seleniteSigmaS5261
T3 (3,3',5-Triiodo-L-thyronine sodium salt)SigmaT6397
Vitamin B12SigmaV6629
Tools
0.22 µm filterSartorius514-7010
1 mL syringeTerumo1611127
100 mm Petri dishDutscher193100
15 mL tubeCorning Life Science734-1867
50 mL tubeCorning Life Science734-1869
60 mm Petri dishDutscher067003
70 µm filterMiltenyi Biotec130-095-823
Binocular microscopeOlympusSZX7
Curved forcepsFine Science Tools11152-10
Fine forcepsFine Science Tools91150-20
Large surgical scissorsFine Science Tools14008-14
ScalpelSwann-morton233-5528
ShakerInfors HT
Small surgical scissorsFine Science Tools91460-11
Small surgical spoonBar Naor LtdBN2706
T150 cm2 flask with filter capDutscher190151
Animal
P2 Wistar ratJanvierRjHAn:WI

Referanslar

  1. Zalc, B. The acquisition of myelin: a success story. Novartis Foundation Symposium. 276, 15-21 (2006).
  2. Habermacher, C., Angulo, M. C., Benamer, N. Glutamate versus GABA in neuron-oligodendroglia communication. Glia. 67 (11), 2092-2106 (2019).
  3. Sherman, D. L., Brophy, P. J. Mechanisms of axon ensheathment and myelin growth. Nature Reviews. Neuroscience. 6 (9), 683-690 (2005).
  4. Freeman, S. A., Desmazières, A., Fricker, D., Lubetzki, C., Sol-Foulon, N. Mechanisms of sodium channel clustering and its influence on axonal impulse conduction. Cellular and molecular life sciences: CMLS. 73 (4), 723-735 (2016).
  5. Lee, Y., et al. Oligodendroglia metabolically support axons and contribute to neurodegeneration. Nature. 487 (7408), 443-448 (2012).
  6. Nave, K. A. Myelination and the trophic support of long axons. Nature Reviews. Neuroscience. 11 (4), 275-283 (2010).
  7. Monje, M. Myelin Plasticity and Nervous System Function. Annual Review of Neuroscience. 41, 61-76 (2018).
  8. Birey, F., et al. Genetic and Stress-Induced Loss of NG2 Glia Triggers Emergence of Depressive-like Behaviors through Reduced Secretion of FGF2. Neuron. 88 (5), 941-956 (2015).
  9. Frühbeis, C., et al. Neurotransmitter-triggered transfer of exosomes mediates oligodendrocyte-neuron communication. PLoS Biology. 11 (7), e1001604 (2013).
  10. Jang, M., Gould, E., Xu, J., Kim, E. J., Kim, J. H. Oligodendrocytes regulate presynaptic properties and neurotransmission through BDNF signaling in the mouse brainstem. eLife. 8, (2019).
  11. Sakry, D., et al. Oligodendrocyte precursor cells modulate the neuronal network by activity-dependent ectodomain cleavage of glial NG2. PLoS Biology. 12 (11), e1001993 (2014).
  12. Sakry, D., Yigit, H., Dimou, L., Trotter, J. Oligodendrocyte precursor cells synthesize neuromodulatory factors. PloS One. 10 (5), e0127222 (2015).
  13. Stadelmann, C., Timmler, S., Barrantes-Freer, A., Simons, M. Myelin in the Central Nervous System: Structure, Function, and Pathology. Physiological Reviews. 99 (3), 1381-1431 (2019).
  14. Freeman, S. A., et al. Acceleration of conduction velocity linked to clustering of nodal components precedes myelination. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (3), E321-E328 (2015).
  15. Baumann, N., Pham-Dinh, D. Biology of oligodendrocyte and myelin in the mammalian central nervous system. Physiological Reviews. 81 (2), 871-927 (2001).
  16. McCarthy, K. D., de Vellis, J. Preparation of separate astroglial and oligodendroglial cell cultures from rat cerebral tissue. The Journal of Cell Biology. 85 (3), 890-902 (1980).
  17. Dean, J. M., et al. Strain-specific differences in perinatal rodent oligodendrocyte lineage progression and its correlation with human. Developmental Neuroscience. 33 (3-4), 251-260 (2011).
  18. Domingues, H. S., Portugal, C. C., Socodato, R., Relvas, J. B., Astrocyte, Oligodendrocyte, Astrocyte, and Microglia Crosstalk in Myelin Development, Damage, and Repair. Frontiers in Cell and Developmental Biology. 4, 71 (2016).
  19. Klinghoffer, R. A., Hamilton, T. G., Hoch, R., Soriano, P. An allelic series at the PDGFalphaR locus indicates unequal contributions of distinct signaling pathways during development. Developmental Cell. 2 (1), 103-113 (2002).
  20. Spassky, N., et al. The early steps of oligodendrogenesis: insights from the study of the plp lineage in the brain of chicks and rodents. Developmental Neuroscience. 23 (4-5), 318-326 (2001).
  21. Moyon, S., et al. Demyelination Causes Adult CNS Progenitors to Revert to an Immature State and Express Immune Cues That Support Their Migration. Journal of Neuroscience. 35 (1), 4-20 (2015).
  22. Gardner, A., Jukkola, P., Gu, C. Myelination of rodent hippocampal neurons in culture. Nature Protocols. 7 (10), 1774-1782 (2012).
  23. Thetiot, M., et al. An alternative mechanism of early nodal clustering and myelination onset in GABAergic neurons of the central nervous system. bioRxiv. , 763573 (2019).
  24. Dubessy, A. L., et al. Role of a Contactin multi-molecular complex secreted by oligodendrocytes in nodal protein clustering in the CNS. Glia. 67 (12), 2248-2263 (2019).
  25. Barateiro, A., Fernandes, A. Temporal oligodendrocyte lineage progression: in vitro models of proliferation, differentiation and myelination. Biochimica Et Biophysica Acta. 1843 (9), 1917-1929 (2014).
  26. Thetiot, M., Ronzano, R., Aigrot, M. S., Lubetzki, C., Desmazières, A. Preparation and Immunostaining of Myelinating Organotypic Cerebellar Slice Cultures. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (145), (2019).
  27. Mannioui, A., Zalc, B. Conditional Demyelination and Remyelination in a Transgenic Xenopus laevis. Methods in Molecular Biology (Clifton, N.J.). 1936, 239-248 (2019).

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

N robilimSay 156oligodendrositlerartl ortasalg lanan fakt rlerh cre k lt rn ro glia etkile imlerimerkezi sinir sistemis an

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır