Dolaşım Ölümlü Donör Kalplerin Kullanıldığı Heterotopik Bir Sıçan Kalp Nakli Modeli

Özet

Burada, dolaşım ölümü donör kalbi kullanılarak yapılan murin heterotopik kalp naklinin hazırlanışını ve teknik detaylarını anlatıyoruz.

Özet

Bu protokolün amacı, dolaşım ölümü sonrası bağış (DCD) donör kalpleri ile sıçan heterotopik kalp nakli modeli oluşturmaktır. Bu protokol için iki kurulum vardır: kalp donörü kurulumu ve alıcı kurulumu. Kalp donörü kurulumunda, Sprague Dawley sıçanları anestezi altına alınır, endotrakeal olarak entübe edilir ve havalandırılır. Sağ karotis arter, heparin ve paralitik ajan vekuronyum-bromür vermek için kanüle edilir. Ventilasyonun sonlandırılmasıyla DCD işlemi başlatılır. 20 dakika sonra kalp açığa çıkarılır ve brakiyosefali dalının distalindeki aort klemplenir. Ventilatörün sonlandırılmasından 25 dakika sonra, buz gibi Wisconsin Üniversitesi (UW) solüsyonu, kalbi yıkamak için karotis kateterinden perfüze edilir. Kalp, aort, pulmoner arter, vena kava ve pulmoner venlerin bölünmesiyle sağlanır ve implantasyon için UW solüsyonunda saklanır. Alıcı kurulumunda, Lewis faresi izofluran ile uyuşturulur. Yavaş salınan buprenorfin, ameliyat sonrası sorunsuz bir iyileşmeyi kolaylaştırmak için deri altına uygulanır. Orta hat abdominal insizyonu ile infrarenal aort ve inferior vena kava izole edilir ve atravmatik vasküler klemp ile klemplenir. Donör kalp aortu ve pulmoner arter, sırasıyla alıcı abdominal aort ve vena kava'ya 8-0'lık bir koşu ile dikilir. Prolen. Kalbi yeniden perfüze etmek için vasküler klemp çıkarılır. Karın duvarı kapatılır ve sıçan kurtarılır. Belirli bir aralıktan sonra (24 saat ila 2 hafta), alıcı sıçan uyuşturulur, nakledilen kalp açığa çıkarılır ve bir veri toplama sistemi kullanılarak geliştirilen basıncı ve dP/dt'yi kaydetmek için apeks yoluyla sol ventriküle bir balon uçlu kateter yerleştirilir. Kalp dokusu histoloji, immünoloji veya moleküler analiz için toplanır. Başarılı bir DCD donör sıçan kalp nakli modeli, DCD donörlerinden kalp nakli sonuçlarını iyileştirmek için kardiyoprotektif yaklaşımlar üzerinde daha fazla çalışmaya izin verecektir.

Giriş

Kalp naklinin (HTx) küçük bir hayvan modeli, nakledilen kalbi etkileyen patofizyolojik durumları inceleyen araştırmalar yapmak için kritik öneme sahiptir. Oto ve Lindsey tarafından tarif edildiği gibi bir fare modelindeki heterotopik HTx, araştırmacıların iskemi ve reperfüzyon¹ koşullarında gözlenen patofizyolojik değişiklikleri incelemelerine izin vermiştir. Geleneksel olarak, nakil için donör kalpler, beyin ölümünden sonra bağış (DBD) donörleri olarak da bilinen atan kalp donörlerinden temin edilmiştir; bununla birlikte, HTx^2'ye ihtiyaç duyan hasta sayısında orantısız bir artış olmuştur. Daha yakın zamanlarda, dolaşım ölümü (DCD) bağışçılarından sonra bağış olarak da bilinen dolaşım ölümü bağışçılarından alınan kalpler, deneysel ortamlarda nakil için kullanılmıştır³. DBD ve DCD donör kalpleri arasındaki temel fark, ikincisinde, kalplerin rutin HTx uygulamasında kullanımlarını engelleyerek değişen iskemi sürelerine maruz kalmasıdır.

Murin heterotopik HTx ile ilgili daha önce açıklanan literatür sadece atan kalp donör koşullarını ^{kullanmıştır 4,5,6}. Heterotopik DCD kalp nakli, nakledilen kalbin^{atmayacağı ince} modifikasyonlar gerektirir 7. Bu protokol, sıçanlarda rafine edilmiş bir DCD HTx tekniğini okuyucularla paylaşmayı amaçlamaktadır. Global miyokardiyal iskemi, DCD organ bağışına doğuştan gelir. Global miyokard iskemisini taklit eden deneysel bir düzenek sadece ex vivo düzenekte incelenmiştir⁵. Ex vivo çalışmalardan elde edilen bulgular, in vivo (DCD) ve ex vivo global iskemi modelleri arasında önemli farklılıklar bulunduğundan, DCD HTx çalışması için geçerli olmayabilir⁵. Reperfüzyon miyokard iskemisini ex vivo modellerde hafifletmek için yapılan müdahalelerden elde edilen sonuçlar veya bunların eksikliği DCD HTx modelinde tekrarlanabilir olmayabilir. Bu nedenle, insan DCD HTx'ini, bulguları daha yüksek bir translasyon değerine sahip olabilen bir hayvan modelinde simüle etmek önemlidir. Burada açıklanan DCD HTx modeli, araştırmacının klinik DCD HTx'i yakından simüle etmesine ve hem donör kalbine hem de alıcıya yapılan müdahaleler yoluyla reperfüzyon hasarını hafifletme fırsatı sağlayacaktır. Alıcı sıçanın iyileşmesinden sonra, nakledilen kalbin işlevi, histopatolojisi ve immünolojisi, nakil zamanından itibaren değişen aralıklarla incelenebilir.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protokol

Tüm hayvan deneyleri, Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından yayınlanan kurumsal yönergelere ve Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu'na uygun olarak gerçekleştirilmiştir (NIH Yayın No. 86-23, 2011'de revize edilmiştir)⁸. Aşağıdaki prosedürler Virginia Commonwealth Üniversitesi'nin Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından onaylanmıştır. Tüm prosedürler OSHA (Mesleki Güvenlik ve Sağlık İdaresi) yönergelerine ve önerilen steril tekniklere^{uygun olarak gerçekleştirildi 9}. Sprague Dawley sıçanları, 23 ° C sıcaklıkta ve 12 saat karanlık / aydınlık döngülerde kontrollü nem altında barındırıldı.

1. Laboratuvarın kurulumu

NOT: Ameliyat mikroskobu ile steril kemirgen sağkalım ameliyatları yapmak için özel bir alan atayın. Ameliyathanenin ortam sıcaklığını sıcak tutun; Hem ameliyat hem de iyileşme süreci için ısıtma pedlerinin kullanılması, alıcı farenin vücut ısısını korumak için çok önemlidir.

1. Şırıngalar, normal salin% 0.9 (NaCl), anestezik maddeler (izofluran, ketamin / ksilazin), heparin, vekuronyum bromür, koruma solüsyonu, bir buz kovası ve analjezik ajan (buprenorfin yavaş salımlı) dahil olmak üzere temel malzemeleri (Malzeme Tablosu) stoklanmış ve hazır bulundurun.
2. Mikrocerrahi aletlerini (Şekil 1A, B) cerrahi alana düzgün bir şekilde yatırın. Kirlenmiş temel aletleri hemen temizlemek için bir flaş sterilizasyon kitini hazır bulundurun.

2. İn vivo sıçan DCD donör hazırlığı

1. Trakeal entübasyon ve karotis kanülasyonu için sıçanı uyuşturun. Sprague Dawley sıçanını (8-12 haftalık)% 3'lük bir izofluran odasında sakinleştirin, daha sonra ketamin / ksilazin (100/10 mg / kg, kas içi) ile uyuşturun.
2. Trakea ve sağ karotis arteri ortaya çıkarmak için, tamamen anestezi uygulanmış bir sıçan sırtüstü yerleştirin ve boynun ve göğsün ön kısmını alkol ve povidon solüsyonu ile temizleyin. V'nin zirvesi orta hatta sıçanın çenesine yakın ve V'nin her bir uzvu karşılık gelen omza işaret edecek şekilde V şeklinde bir kesi yapın. Cildi deri altı dokusundan ayırın ve boynun askı kaslarını ortaya çıkarmak için cildi göğsün üzerine çevirin (Şekil 2A).
   1. Trakeayı açığa çıkarmak için orta hat kayış kaslarını (sternomastoid ve sternohyoid) forseps ile ayırarak sıçanı entübe edin (Şekil 2B). Soluk borusunu 5-0 ipek ile sarın ve kas dokusunu trakeal halkalar arasında kısmen bölerek açın.
   2. Trakeaya 14 G'lik bir anjiyokat yerleştirin ve 5-0 ipek ile sabitleyin (Şekil 2C). Anjiyokatı bir ventilatöre bağlayın (90 nefes/dk'da 1 mL/kg).
   3. Sağ karotis arter kanülasyonu için, ortak karotis arteri tanımlayın (trakeanın hemen sağ tarafına paralel ve hemen sağ tarafında yer alır), boynun tam uzunluğuna kadar dikkatlice izole edin ve distal (kraniyal) ucunu 5-0 ipek ile bağlayın.
   4. Karotis arterin kanülasyonunu kolaylaştırmak için traksiyon için bağın serbest ucuna bir hemostat takın.
   5. Karotis arterin en proksimal yönünü (boynun tabanına doğru) mobilize edin ve vasküler bir hemostat kullanarak klempleyin. Ameliyat mikroskobu altında, karotis arteri en distal uçta kısmen öne bölerek açmak için mikro iris makası kullanın. Karotis arteri 22 G anjiyokat ile kanüle edin ve 5-0 ipek bağ ile sabitleyin (Şekil 2D).
   6. İlaçların veya kardiyopleji solüsyonunun karotis artere kolay verilmesi için anjiyokata üç bir akış musluk adaptörü takın ve DCD işlemi sırasında kalp atış hızını ve basıncını izlemek için bir basınç sensörüne bağlayın (Şekil 2D). Proksimal vasküler klemp serbest bırakıldığında pulsatil bir kan geri akışı fark edilmelidir.
   7. Sabitlendikten sonra, karotis arter kateterini basınç sensörüne bağlayın ve heparin (1.000 U / Kg) ve vekuronyum bromür (4 mg / kg) verin.
   8. DCD işleminin başlatılması: Vekuronyum bromürün 1 dakika dolaşmasına izin verin. Herhangi bir hayvan sıkıntısı belirtisi olup olmadığına dikkat edin ve gerekirse ek anestezi verin. DCD işlemini başlatmak için ventilatörü (hipoksi/iskemi) durdurun. Solunum aktivitesinin olmadığını gözlemleyin.
      NOT: DCD iskemik süresi, ventilatör desteğinin geri çekildiği andan itibaren başlar. Sıçanlarda, 25 dakikalık iskemi, önemli fakat geri dönüşümlü yaralanma ile sonuçlanan maksimum süre olarak tanımlanmıştır⁷. Basınç izlemeleri, ventilasyon desteğinin ~ 3.5 dakikada kesildiği andan itibaren, sistemik basıncın 50 mmHg'nin altına düştüğünü ve bu basıncın kalbi etkili bir şekilde perfüze etmek için yetersiz olduğunu gösterecektir (Şekil 3).
3. Donör kalp alımı: Kalbi temin etmek ve soğuk kardiyopleji uygulamak için ~ 4-7 dakika ayırın. Hedef iskemi süresi olan 25 dk'ya ulaşmak için, ventilasyon desteğinin sonlandırılmasını takiben 18-21 dk sonra kalbin teminine başlanır.
   NOT: Tedarik süresinin süresini, tedariki gerçekleştiren kişinin deneyimine göre değiştirin.
   1. Karın duvarını ksifoid seviyesinden başlayarak kostal kenar boyunca bölün ve ardından bilateral anterior torakotomiler yapmak için göğüs kafesini sternuma paralel olarak klavikulalara kadar her iki tarafa bölün (Şekil 4A). Bu adımı kolaylaştırmak için düşük büyütme (5x) altında bir ameliyat mikroskobu kullanın.
   2. Köprücük kemiğine bağlı bölünmüş göğüs duvarını başa doğru çevirin ve bir kanama durdurucu ile sabitleyin (Şekil 4B).
   3. İnferior vena kava'yı (IVC) 5-0'lık bir ipek ile çevreleyin, ardından karaciğerin kubbesine yakın bir mikro makasla kısmen bölün (Şekil 4C). Kısmen açılan IVC, kalbin sağ tarafını şişirdiği için kardiyoplejinin çıkışına izin verir.
   4. Çıkan aort ve pulmoner arter (PA) arasındaki düzlemi inceleyin, ardından pulmoner gövdeyi künt uçlu kavisli forseps ile transvers sinüs yoluyla bifurkasyonuna kadar izole edin. Pulmoner arteri mikro makasla bifurkasyon noktasına yakın bir yere dikkatlice bölün (Şekil 4C).
   5. Aort arkını künt diseksiyon ile çevreleyin. Bu, innominat arterin orijinine distal aort arkı boyunca yerleştirilecek küçük bir dik açılı vasküler klempin erişimine izin vermek içindir.
   6. Ventilatörün sonlandırılmasından 25 dakika sonra, aort arkını klempleyin ve karotis kateterinden manuel olarak kardiyopleji (4 ° C'de 10 mL Wisconsin Üniversitesi solüsyonu, 2-3 dakika boyunca) verin (Şekil 4D).
   7. Mikro makas kullanarak çıkan aortu arkus aortundan önce distal olarak bölün (Şekil 4E).
   8. IVC'yi 5-0 ipek ile kalbe doğru bağlayın ve distal olarak bölün.
   9. Pulmoner venleri ve superior vena kavaları (SVC'ler) 5-0 ipek ile birlikte bağlayın (Şekil 4F). Bu bağlar büyük miktarda doku tuttuğu için alet bağı yerine el bağı tercih edilir. Atriyal ekleri bağın içine sokmadan pulmoner ven ligasyonunu kolaylaştırmak için pamuk uçlu bir çubukla kalbi yavaşça karın bölgesine doğru çekin.
   10. Pulmoner damarları mikro iris makası ile bölün, kalbi toplayın ve buz gibi normal tuzlu suya yerleştirin (Şekil 4G).

3. İn vivo sıçan DCD heterotopik kalp nakli

1. Alıcıyı bir izofluran odasında (% 3 indüksiyon) sakinleştirin, saçı karın üzerine klipsleyin ve bölgeyi povidon ve alkolle temizleyin. Alıcıyı antikoagüle etmeyin; Bu, anastomozlardan aşırı kanamaya ve greft yetmezliğine yol açacaktır.
2. Fareyi sırtüstü bir ısıtma yastığının üzerine yerleştirin. Sıcaklığı izlemek için sıçan ile ısıtma yastığı arasına bir prob yerleştirin. Farenin vücut ısısını 38 °C'de tutun. Fareyi sıcak tutmayı kolaylaştırmak için farenin karnının her iki tarafına ılık tuzlu su veya cam boncuklarla doldurulmuş iki adet 50 mL önceden sterilize edilmiş santrifüj tüpü yerleştirin.
3. Yukarıda belirtilen adımlara rağmen, vücut ısısı 37.5 ° C'nin altına düşerse, oda sıcaklığını (RT) artırın ve karın ameliyatı yapmak için yeterli alan bırakmak için otoklavlanmış alüminyum folyo kullanarak vücudun açıkta kalan tüm bölgelerini kaplayın.
4. Bir burun konisi aracılığıyla% 3 izofluran ile genel anesteziyi indükleyin ve% 2'ye düşürün.
5. Karnı linea-alba boyunca açın (Şekil 5A) ve karın duvarı ekartörleri yerleştirerek çalışma alanını ortaya çıkarın (Şekil 5B).
6. Steril pamuk uçlu aplikatörler kullanarak, genişlemiş veya tam kolonu hareket ettirin ve periyodik olarak ılık (38 °C) tuzlu su ile sulama yaparak operatörün soluna ılık nemli bir gazlı bez içine yerleştirin (Şekil 5C). Kolonu kenara çekmek, DCD kalpleri için daha fazla alan sağlar, çünkü çok serttirler ve karın içinde uyum sağlamak için ekstra alan gerektirirler.
7. Pamuk uçlu çubuklar kullanarak künt diseksiyon ile orta hattaki retroperitonu açın. İnfrarenal aort ve IVC'yi ortaya çıkarın.
8. Atravmatik pediatrik çok açılı vasküler klemp kullanarak, anastomoz için infrarenal aort ve IVC'nin 3-5 mm'sini izole edin (Şekil 5D).
9. 100 ünite heparin ile karıştırılmış normal salin ile doldurulmuş 1 cm'lik³ şırınga üzerine monte edilmiş 30 G'lik bir iğne ile aorta girin. 0.2-0.3 mL çözelti ile yıkayın (Şekil 5E). Heparin emilebileceğinden ve dikiş hatlarından kanamaya neden olabileceğinden, fazla solüsyonu steril pamuk uçlu aplikatörlerle kurulayın.
10. Mikro makas kullanarak, donör aort boyutuna uyacak şekilde aortu uzun eksen boyunca açın. IVC bu noktada açılmaz ve IVC ile aort arasında bir düzlem oluşturmaya çalışmayın; Bu kanamaya yol açacaktır.
11. Anastomoz sırasında donörün kalbinin doğru yönlendirilmesi çok önemlidir (Şekil 5F). Verici kalbi, sağ ventrikülün ön yüzeyi tavana bakacak, apeks operatörün sağına bakacak ve donör aort pulmoner arterden biraz daha aşağıda olacak şekilde anastomoz için yönlendirin. Bu oryantasyon, pulmoner arter anastomozunda daha az gerginliğe neden olur.
    1. Aort anastomozu: Mikrovasküler anastomoz için sivri uçlu bir iğne ucu ve hassas cımbız kullanın. 8-0 ile anastomoz yapın Kilitleme ve kilit açma sırasında kazara doku travmasını önlemek için, iğne ucu kilidi çıkarılmış olarak 0,3 mm uçlu bir iğne tutucuya yüklenen konik 4 mm'lik bir iğne üzerinde monofilament sütür.
    2. Aort anastomozu üzerine saat 6 pozisyonunda bir sabit sütür yerleştirin. Bu, simetrik ve hemostatik bir dikiş hattı sağlamak için yapılır. Daha sonra, anastomoza saat 12 pozisyonunda, donör aort üzerinde dıştan içe ve alıcı aortta içten dışa olacak şekilde başlayın (Şekil 6A, B). Sadece 5-7 cm çalışma dikişi tutun ve kalanını kesin.
    3. Saat yönünün tersine hareket edin, saat 6 konumuna doğru kısa mesafelerde seyahat edin ve ardından kalbi sola çevirerek saat 12 konumuna kadar saat tersine bir şekilde anastomozu tamamlayın (Şekil 6C).
    4. Bağlamadan önce herhangi bir gevşek dikiş hattı olup olmadığını kontrol edin.
       NOT: Güvenli bir anastomoz simetrik olmalı ve verici ve alıcı intimasını boşluklar olmadan yaklaştırmalıdır.
    5. Pulmoner arter anastomozu: Pulmoner arteri aorttan serbest bırakın ve anastomoz için bükülme olmadan IVC'ye yönlendirin. Alıcının kan hacmini donörün kalbini dolduracak şekilde hazırlayın ve 3-5 mL deri altı (boynun ense) normal salin enjekte ederek hipotansiyonu önleyin.
    6. Sıçanın solunum paterni izleyin ve pulmoner arter anastomozu tamamlanmak üzere olduğu için izofluranı %2.0'dan %1.5'e düşürün.
    7. Mikro iris makası ile aort anastomozuna göre IVC sefaladını açın (Şekil 6C). IVC'yi yıkamak için 0.2-0.3 mL salin kullanın. Az sayıda kan pıhtısı görülecektir; Onları dikkatlice yıkayın.
    8. Aort anastomozundan farklı olarak, pulmoner anastomozu kalıcı sütür olmadan başlatın; maruziyeti engelleyecektir. İğne donör pulmoner arter üzerinde dışarıdan içeriye ve alıcı IVC'de içeriden dışarıya doğru hareket ederken saat 12 konumunda başlayın. Dikişi bağlayın ve önce arka duvar anastomozunu saat yönünde tamamlayın.
    9. Saat 6 pozisyonuna geldikten sonra, saat 12 pozisyonuna ulaşılana kadar saat yönünde dikiş atmaya devam edin ve ardından önceki bağdan dikişin kısa ucuna bağlayın. Anastomozu sıkıştırmamaya dikkat edin, çünkü herhangi bir daralma kalpten venöz drenajı sınırlayacaktır. Ortalama olarak, her iki anastomozu tamamlamak 30 dakika veya daha az sürer.
    10. İğne deliklerinden kanamayı kontrol altına almak için anastomozun üzerine küçük emilebilir hemostat parçaları yerleştirin.
    11. Damarları açın ve gerektiğinde iğne deliklerinin üzerine daha fazla emilebilir kanama durdurucu ekleyin (Şekil 6E). Nakledilen kalp, ritmik solunuma devam etmeden önce ara sıra fibrilasyonlarla atmaya başlar. Kalp attığı ve belirgin kanama olmadığı sürece emilebilir kanama durdurucuyu 5 dakika yerinde bırakın.
    12. Hemostazdan memnun kaldıktan sonra (~ 3-5 dakika), fazla emilebilir hemostatı çıkarmak için steril pamuk uçlu aplikatörler kullanın, tuzlu su ile yıkayın ve bağırsağı karın boşluğuna geri koyun (Şekil 6F). Hemostaza yardımcı olması için omentumu anastomozun üzerine yerleştirin.
    13. 13 mm'lik bir kesme iğnesi üzerinde 5-0 monokril ile karın duvarını iki tabaka halinde önce linea alba sonra da cildi kapatarak kapatın (Şekil 6G, H).

4. Kurtarma ve izleme

1. Karın kapanışının tamamlanmasının ardından, fareyi iyileşme için ılık bir ped üzerinde karnına çevirin. İzofluranı 5 dakika boyunca% 1'lik bir burun konisi ile devam ettirin, sonra durdurun.
2. Spontan solunum düzenli hale geldiğinde, fareyi temiz bir kurtarma kafesine taşıyın ve iyileşme sürecine devam etmek için ılık bir ped üzerine koyun. Sıçanın ani hareketleri kanama riskine veya anastomozda bir bükülmeye neden olur. Ameliyata başlamadan önce uygulanan uzun etkili bir analjezik, sorunsuz iyileşme sürecini büyük ölçüde kolaylaştırır.

5. Kontrol atan kalbin temini ve nakli

1. İskemi yokluğunda donör kalbin kalitesini değerlendirmek için bir kontrol olarak atan kalp donörü (CBD) kalplerini kontrol edin.
   NOT: CBD donörü, ventilasyon desteğinin sonlandırılması dışında, DCD kalbi için açıklanan tüm adımlardan geçer. CBD kalpleri atarken temin edilir ve bir ventilatörde tam olarak desteklenir. Kardiyoplejinin uygulanması kalbi durdurur ve tedarik ve transplantasyon, DCD kalpleri için tarif edildiği gibi tamamlanır.

6. Nakledilen kalp fonksiyonu değerlendirmesi:

1. Kalp nakli zamanından (24 saat ila 14 gün) önceden belirlenmiş bir aralıkta, alıcı fareyi (% 3 inhalasyon izofluranı) uyuşturun, ılık bir ped sırtüstü üzerine yerleştirin ve nakledilen kalbi ortaya çıkarmak için karın insizyonunu açın.
2. Geliştirilen basıncı (DP), maksimum +dP/dt'yi ve min -dP/dt'yi ölçmek için sol ventrikülün tepesinden bir balon uçlu kateter yerleştirin.
   NOT: Burada kan basıncı kayıtları için veri toplama sistemi olarak bir PowerLab istasyonu kullanılmıştır.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Sonuçlar

Heterotopik kalp naklinden 24 saat ila 14 gün sonra, karın yeniden açılabilir ve kalp, sol ventrikül tarafından geliştirilen basıncı ölçmek için maruz bırakılabilir. Geliştirilen basıncı (DP), maksimum +dP/dt ve min -dP/dt'yi ölçmek için DCD (veya CBD) kalbinin sol ventrikülüne bir balon uçlu kateter yerleştirilir. Şekil 7 , transplantasyondan 24 saat sonra bir CBD kalbine kıyasla bir DCD kalbinin beklenen DP, + dP / dt ve -dP / dt'...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Tartışmalar

Başarılı bir DCD heterotopik sıçan HTx için, deneyin titiz ve düşünceli bir kurulumunun kurulması çok önemlidir. Ayrıntılı kurulum, 1) genç sıçanların DCD donörü olarak seçilmesi, 2) tercih edilen anestezik ajan olarak izofluran kullanılması, 3) kardiyoplejinin donör kalbe etkili bir şekilde verilmesi, 4) donörün kalbinin buz gibi soğuk solüsyonda saklanması, 5) bel damarlarını sadece infrarenal aort ve vena kava'yı açığa çıkarmak için abdominal di...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
5-0 nylon suture polyamide monofilament	Aros Surgical	SP17A05N-45
5-0 silk suture	Surgical Specialties	SP116
8-0 monofilament suture	Aros Surgical	T06A08N14-13
Autoclave	Steris	Amsco Lab 250
BD Insulin Syringe with Detachable Needle 1 mL Syringes	Fisher Scientific	14-820-28
BD Syringe with Luer-Lok Tips (Without Needle) 10 mL Syringes	Fisher Scientific	14-823-16E
Belzer University of Wisconsin cold storage solution	Bridge to Life Northbrook IL USA		Adenosine 1.34 g/L, Allopurinol 0.136 g/L, Glutathione 0.922 g/L, Lactobionic Acid (as Lactone) 35.83 g/L, Magnesium Sulfate heptahydrate 1.23 g/L, Pentafraction 50 g/L, Potassium Hydroxide 5.61 g/L, Potassium Phosphate monobasic 3.4 g/L, Raffinose pentahydrate 17.83 g/L
Buprenorfin SR Lab	Zoopharm LLC
Debakey atraumatic pediatric multi-angle vascular clamp	Aesculap	F341T
Exel International Disposable Safelet I.V. Catheters 14 G	Fisher Scientific	14-841-10
Exel International Disposable Safelet I.V. Catheters 22 G	Fisher Scientific	14-841-20
Fogarty catheter size 4F	Edwands Lifesciences	120404F
Forceps with curved tips	Accurate Surgical & Scientific Instruments Corporation	ASSI.228
Gaymar Heating pump	Braintree Scientific, Braintree, MA, USA	TP700
Germinator-500	Braintree Scientific
Heparin Sodium Injection, USP 1,000 U/mL	Pfizer	NDC 0069-0137-01
Iris micro-scissors with straight tips	Accurate Surgical & Scientific Instruments Corporation	ASSI.5253
Isoflurane USP	Patterson Veterinary	NDC 14043070406
Ketamine HCl 100 mg/mL	Henry Schein	NDC 6745710810
Lidocaine HCl 2%	Aspen Veterinary	07-892-4325
McKesson General Medical 6IN Q-TIPS 2STER WOOD 100/PACK	Fisher Scientific	NC0650323	sterile cotton tip applicators
Micro-scissors, right angle and curved tips	Braintree Scientific	SC-MS 154
Needle holder	Accurate Surgical & Scientific Instruments Corporation	ASSI.BSL158	with the lock mechanism removed
Normal Saline	Baxter Infusion supplies
PowerLab station	AD Instruments, Denver, CO		data acquisition system
Sodium Hydroxide/Hydrochloric Acid			adjust the solution to pH 7.4
Sprague Dawley rats			male, 8–16 weeks of age, <400 g in weight
Surgical Microscope	Leika	Model M525 F40
Surgicel	Ethicon		absorbable hemostat
Temperature probe Therma Waterproof Type T High Precision Thermocouple Meter	Thermoworks	THS-232-107
Tweezers with high precision point	Excelta	17-456-109
Vecuronium Bromide	Sigma-Aldrich	PHR1627	diluted in PBS for 100 mg/mL
Ventelite	Harvard Apparatus, Holliston, MA, USA
Xylazine 100 mg/mL	Pivetal Anased	NDC 04606675002