Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.
Method Article
Bu protokol, silikon, naylon sütürler ve şırınga iğneleri kullanılarak farelerde orta serebral arter tıkanıklığı (MCAO) modeli için kaplanmış filamentler oluşturmak için basit bir yöntemi açıklar. Bu yöntem, deneysel ihtiyaçlara göre uyarlanmış tutarlı bir çapa ve çeşitli silikon kaplama uzunluklarına sahip filamentlerin üretilmesine izin verir.
Küresel nüfus yaşlandıkça, iskemik inme dünya çapında sakatlık ve mortalitenin ikinci önde gelen nedeni haline geldi ve hem toplum hem de aileler üzerinde büyük bir yük oluşturdu. İntravenöz tromboliz ve endovasküler girişimler gibi tedaviler akut iskemik inmeli hastalar için sonuçları önemli ölçüde iyileştirebilse de, bireylerin sadece küçük bir yüzdesi bu tedavilerden fayda görmektedir. Hastalık hakkındaki anlayışımızı ilerletmek ve daha etkili tedaviler keşfetmek için araştırmacılar sürekli olarak hayvan modelleri geliştirmekte ve iyileştirmektedir. Bunlar arasında orta serebral arter tıkanıklığı (MCAO) modeli, serebrovasküler hastalık araştırmalarında en sık kullanılan model olarak öne çıkmaktadır. Bu modelde kullanılan filament, geliştirilmesi için çok önemlidir. Bu protokol, tutarlı çaplara ve değişen uzunluklarda silikon kaplamaya sahip filamentler oluşturmak için bir yöntemi ana hatlarıyla belirtir. C57 farelerinde bu yöntem kullanılarak üretilen MCAO modeli, iskemik serebrovasküler hastalıklara yönelik özel araştırmalar için değerli bir araç sunarak yüksek başarı ve tutarlılık göstermiştir.
İnme, dünya çapında en yaygın mortalite ve sakatlık nedenlerinden biridir. İskemik ve hemorajik inmeler, serebrovasküler olayın birincil tipleridir ve iskemik inmeler vakaların yaklaşık% 87'sini oluşturur 1,2,3. Günümüzde iskemik inmeli hastalar için rekombinant doku plazminojen aktivatörü (rtPA) ile farmakolojik tedavi ve mekanik trombektomi olmak üzere iki tedavi yöntemi vardır. Bununla birlikte, dar terapötik pencere ve kapsamlı dışlama kriterleri, bu tedavilerin uygulanmasını sınırlamakta ve hastaların sadece küçük bir kısmına fayda sağlamaktadır. Bu, iskemik inme tedavilerini iyileştirmeye yönelik sürekli çabalara duyulan ihtiyacın altını çizmektedir 4,5. İn vitro modeller, inme sonrası karmaşık patofizyolojik yanıtları tekrarlamak için yetersizdir ve bu da hayvan modellerini klinik öncesi inme araştırmalarının vazgeçilmez bir bileşeni haline getirir. İnsan fokal serebral iskemisi en sık orta serebral arterin (MCA) trombotik veya embolik oklüzyonundan kaynaklanır, bu da MCA oklüzyonunu (MCAO) simüle etmek için tasarlanmış kemirgen modellerini son derece alakalı hale getirir6.
İnme araştırmalarında en yaygın olarak benimsenen filament kaynaklı MCAO modeli, orta serebral arterin (MCA) başlangıcında tıkanmayı ve ardından reperfüzyonu kolaylaştırarak beynin subkortikal ve kortikal bölgelerinde geniş enfarktüslere yol açar. Bu modelin avantajı, fokal iskemiyi indükledikten sonra kan akışını eski haline getirme kabiliyetinde yatmaktadır, böylece insan inmesindegözlenen patofizyolojik süreçlere paralel olarak 7. Ek olarak, model, hasarın boyutunda kritik bir faktör olanreperfüzyon hasarını simüle eder 8. Bununla birlikte, MCAO modelinin, enfarktüs hacmindeki değişkenlik de dahil olmak üzere sınırlamaları vardır ve standart sapma, bazı çalışmalarda potansiyel olarak ortalama değerin %64'üne kadar çıkmaktadır9. Otuz yılı aşkın bir süredir kullanılmasına rağmen, modelin güvenilirliğini artırma çabaları devam etmektedir, ancak iskemik lezyon hacmindeki önemli farklılıklar çalışmalar ve laboratuvarlar arasında devam etmektedir 10,11,12.
Bu makale, nörolojik defisit skorlarını ve serebral enfarktüs alanlarını değerlendiren indükleyici modeller için kendi ürettiği bir filamenti tanıtmaktadır. Silikon ile kaplanmış filament uzunlukları ile MCAO modelinin başarısı ve kararlılığı arasındaki korelasyonu inceler. Bu üretim tekniği, övgüye değer tutarlılığa sahip filamentler verir ve nispeten kararlı bir MCAO modelinin geliştirilmesine katkıda bulunur.
Tüm hayvan prosedürleri, Shanxi İl Halk Hastanesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylanan deneysel prosedürlere ve standartlara uygundur (onay numarası: 2024 İl Tıbbi Etik Kurulu No. 64). Bu deneyde kullanılan fareler, 8-10 haftalık, 24-26 g ağırlığında erkek C57BL / 6 fareleriydi. Kullanılan reaktiflerin ve ekipmanın ayrıntıları Malzeme Tablosunda listelenmiştir.
1. Filament hazırlama
2. MCAO modeli
NOT: Cerrahi aletler otoklavlama ile sterilize edildi (60 dakika boyunca 15 psi'de 121 °C). Ameliyat masası ve diğer ekipmanlar %75 etanol kullanılarak sterilize edildi. Fareler ameliyat öncesi 8 saat aç bırakıldı, ancak suya serbest erişime izin verildi.
3. Sahte operasyon
4. Sinir puanı
5. Transkardiyak perfüzyon
6. TTC boyama ile enfarktüs hacmi değerlendirmesi
MCAO modelinin oluşturulmasında, filamentleri ve bitmiş filamentleri imal etmek için kullanılan birincil araçlar Şekil 3'te gösterilmektedir. Filament üretimini takiben, filamentin dış karotis arterden sokulmasıyla MCAO modeli oluşturulur ve operasyon süresi kaydedilir. Başarılı modelleme, filamentin çekilmesinden 4 saat sonra 1-3 Longa skoru ile tanımlanır. Ameliyattan sonra vücut ağırlığı günlük olarak takip edilir. Nörolojik d...
Bu çalışma, filament üretimi için basit ve uygun maliyetli bir yöntem göstermekte ve bir MCAO modeli oluşturmada fizibilitesini doğrulamaktadır. Filamentin silikon kaplamasının uzunluğu, deneysel ihtiyaçlara göre ayarlanabilir ve ek esneklik sunar. 5 mm'lik bir filament embolinin hazırlanması, farelerde herhangi bir subaraknoid kanama (SAK) oluşumu olmadan% 100 başarı oranı elde etti. 10 mm filament emboli kullanan grupta, SAK vakaları vardı, farelerin geri kalanı...
Yazarların beyan edebilecekleri herhangi bir çıkar çatışması yoktur.
Bu çalışma Wu Jieping Tıp Vakfı (320.6750.161290) tarafından desteklenmiştir.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
10 mL Syringe | Haidike Medical Products Co., Ltd. | Instrument for making filaments | |
2,3,5-Triphenyltetrazolium Chloride (TTC) | Sigma-Aldrich | G3005 | Dye for TTC staining |
24-well culture plate | Corning | CLS3527 | Vessel for TTC staining |
26 G syringe needle | Haidike Medical Products Co., Ltd. | Instrument for making filaments | |
4% paraformaldehyde | Servicebio | G1101 | Tissue fixation |
6-0 nylon suture | Haidike Medical Products Co., Ltd. | Materials for making filaments | |
Anesthesia system for isoflurane | Rwd Life Science Co., Ltd. | R610 | Anesthetized animal |
Bipolar electrocoagulation generator | Yirun Medical Instrument Co., Ltd. | ZG300 | Equipment for surgery |
Constant temperature water bath | Spring Instrument Co., Ltd. | HH-M6 | TTC staining |
Eye ointment | Guangzhou Pharmaceutical | H44023098 | Material for surgery |
Heat blanket | ZH Biomedical Instrument Co., Ltd. | Maintain body temperatur | |
Isoflurane | Rwd Life Science Co., Ltd. | R510-22-10 | Anesthetized animal |
Meloxicam | Boehringer-Ingelheim | J20160020 | Analgesia for animal |
Microsurgical artery clamp | Shanghai Jinzhong Surgical Instruments Co., Ltd. | W40130 | Instrument for surgery |
Microsurgical hemostatic clamp forceps | Shanghai Jinzhong Surgical Instruments Co., Ltd. | M-W-0022 | Instrument for surgery |
Microsurgical instruments set | Rwd Life Science Co., Ltd. | SP0009-R | Equipment for surgery |
Mouse thermometer | Hubei Dasjiaer Biotechnology | FT3400 | Intraoperative temperature monitoring |
Pentobarbital sodium | Sigma-Aldrich | P3761 | Euthanized animal |
Shaver | Joyu Electrical Appliances | PHC-920 | Equipment for surgery |
Silicone Sealant | Kafuter | K-704 | Materials for making filaments |
Stereomicroscope | Rwd Life Science Co., Ltd. | 77001S | Equipment for surgery |
Suture thread with needle (3-0) | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd. | F404SUS302 | Equipment for surgery |
Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi
Izin talebiThis article has been published
Video Coming Soon
JoVE Hakkında
Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır