Biz Dr teşekkür ederim. Retinanın yatay dilim hazırlama prosedürü kurmak için bize değerli tavsiyeleri ve önerileri veren Richard H. Masland ve Akimichi Kaneko.

<ol><li> Agar bloğu (30 mg / ml, yani% 3, distile su) hazırlayın. Çözülür ve mikrodalga ilk ve bir cam tabak içine dökün. 4 ° C&#39;de buzdolabında çanak tutun İpucu: agar blok önceden hazırlanmış olmalıdır. </li><li> Hazırlayın düşük sıcaklık eritme agaroz jel (orta, 25 mg / ml, yani% 2,5 &#39;i,). Çözülür ve mikrodalga. 35 ° C&#39;de sıcak su banyosunda tutun İpucu: agaroz jel çok sıcak NOT tutun. Çok sıcak ise, bu katılaşmış olması için uzun bir süre alır ve jel retinanın öldürebilir . </li><li> Hayvan, aydınlatmak bir göz küresi Euthanize ve Göz yuvası gibi açın. Vitreus mizah sıvılaştırılması için açılan Göz yuvası varsa mutlaka orta hiyalüronidaz 10 dakika (0.07 mg / ml) için ıslatılır. </li><li> Agar (örn., 1 cm x 1,5 cm fare retina) bir blok halinde kesin ve anında yapıştırıcı vibratome bir sahnede sıkıca bağlı. Agar bloğu ıslak tutun. </li><li> Dilimleme makinesi az 5 derece bıçak yerleştirin. Yaklaşık hızda agar bloğu üst yüzeyi hafifçe kesti. 50 mm / sn, frekans. 50 Hz. İpucu: agar blok üst yüzeyi tamamen düz ve pürüzsüz olduğundan emin olun. Bazı kesim (en az 3 kez), agar bloğu, pürüzsüz ve düz bir yüzey elde etmek için gerekli olabilir . </li><li> Göz yuvası hiyalüronidaz olmadan orta ile durulayın. Retina pigment epitel izole etmek ve bir parça filtre kağıdı üzerinde fotoreseptör-tarafı aşağı yerleştirin. Filtre kağıdı sıkıca retina eklemek için, filtre kağıdı birkaç kez retina vakum. İpucu: retina tamamen düz filtre kağıdı takılı olduğundan emin olun. Filtre kağıdı üzerinde bir retina koymak sonra, retina (Fig.2A) çevreleyen fazla filtre kağıdı kesti. Fazla filtre kağıdı, genellikle uygun retina tabakası girecek bir bıçak önler . </li><li> Agar bloğu aşırı orta yavaşça silin ve agar blok dikkatlice filtre kağıdı retina. Agar blok filtre kağıdı sıkıca yerleştirmek için, filtre kağıdı kenarına anında yapıştırıcı takın. İpucu: agar blok üst yüzeyi mümkün olduğunca ön unexpectable çatlak önlemek için, retinanın yerleştirin. </li><li> Düşük sıcaklıkta eriyen agaroz jel retinanın üzerine yavaşça dökün. 1 dakika bekleyin ve yavaşça soğumasını orta dökün. Agaroz jel hızlı katılaşmış olur. İpucu: Çok sıcak agaroz jel retinanın öldürür. </li><li> Agar bloğun üst yüzeyinden birkaç yüz mikron bıçak pozisyonu kaldırın ve yavaşça katılaşmış agaroz jel üst kesim. </li><li> Bıçak konum aşağı indirin. Retinanın iç nükleer tabaka (yaklaşık agar bloğun üst yüzeyinden 200 ila 250 mikron) proksimal üçte biri düzeyinde kesin. İpucu: Çok fazla bıçak hızı ciddi retina zarar verecektir. Yaklaşık. 50 mm / sn (50 Hz) uygun olur. </li><li> Amacrine hücreleri artık yüzü aşağı olduğuna dikkat edin. Dikkatle katılaşmış agaroz jel ile birlikte retina dilim pick up ve yüzü yukarı bir oda ya da bir tabak içinde yerleştirin. İpucu: Fare retinanın küçük ve dalgalı olduğu için, mükemmel bir yatay dilim uygun bir tabaka elde etmek zordur. Bir &quot;eğik&quot; dilim retinanın göreceli düz bir dilim almak için alternatif bir yöntem olabilir . Eğik dilim almak için, filtre kağıdı ve agar bloğu olarak Fig.2B gösterilen retina arasında başka bir filtre kağıdı koyun . Amacrine hücre soma dilim yüzeyinde bazı alanlarda mükemmel bir yatay dilim bekleyemezsiniz rağmen, her zaman vardır. </li></ol>

<ol>
	<li>Azuma, T., Enoki, R., Iwamuro, K., Kaneko, A., Koizumi, A., Koizumi, A., TC, J. a. k. o. b. s., Masland, R. H., MA, M. a. c. N. e. i. l., RH, M. a. s. l. a. n. d. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+spatiotemporal+patterns+of+dendritic+Ca2++signals+in+goldfish+retinal+amacrine+cells.">Multiple spatiotemporal patterns of dendritic Ca2+ signals in goldfish retinal amacrine cells.</a> Brain Res. , 64-73 (2004).</li></ol>

Tüm deneysel protokolleri hayvan kullanımı için sağlık kuralları National Institutes göre yapılmıştır.

Retinanın yatay dilim hazırlık birçok önemli avantajları vardır. İlk olarak, amacrine hücreleri ve yatay hücreleri gibi, yatay dendritler genişletmek hücrelerin morfolojisi, korunur. Bu hücrelerinin morfolojisi fizyolojik özelliği ile karşılaştırmak için oldukça önemlidir, böylece 20 farklı tipte (MacNeil ve Masland, 1998), retina amacrine hücreleri üzerinde olduğu kanıtlanmıştır. İkincisi, tüm montaj retinada, glial hücre s endfeets geniş kapsama alanı, yama pipetler erişim amacrine hüc...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Agar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>A-1296</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Agarose L</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Wako</td>
<td>317-01182</td>
<td>Low-temperature melting agarose </td>
</tr>
<tr>
<td>Hyaluronidase</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Type I-S, 300 units/mg</td>
</tr>
<tr>
<td>Medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>in mM: 102 NaCl, 3.1 KCl, 2.0 CaCl2, 1.0 MgCl2, 23 NaHCO3, and 10 glucose, maintained at pH 7.8, or, Ames&#x2019; Solution (Sigma)</td>
</tr>
<tr>
<td>Microwave</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hot water bath</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>35 C</td>
</tr>
<tr>
<td>Vibratome slicer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Leica</td>
<td>VT1000S</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MF-Membrane filters</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Millipore</td>
<td>HAWP01300</td>
<td>Filter paper , pore size 0.45 um</td>
</tr>
<tr>
<td>Dissection tools</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>forceps, blade, pinch, twizzer, etc.</td>
</tr>
<tr>
<td>Instant glue</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>eg., Alonalpha, Krazy Glu</td>
</tr>
<tr>
<td>50 ml syringe</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>syringe filter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Millipore</td>
<td>SX0001300</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

horizontal slice preparation of the retina

Geleneksel dikey dilim ve retinanın tüm hazırlık retina devrelerin fonksiyonunu incelemek için kullanılmıştır. Ancak, amacrine hücreleri gibi retinal nöronların, hücrelerin morfolojisi dikey dilimler halinde ağır hasarlı olması gerekiyordu ki, yatay dendritler genişletmek. Bütün montaj hazırlanmasında, özellikle yama klemp kayıtları için, orta tabaka retina nöronlar glial hücre (Müller hücre) ler endfeets geniş kapsama alanı nedeniyle kolayca erişilebilir değildir. Burada, sağlam retina nöronların dendritik morfoloji korumak için yöntem dilimleme roman açıklar. Retina düşük sıcaklık erime agaroz jel gömülü sonra dilim vibratome dilimleme makinesi kullanarak retinanın iç tabakası yatay olarak yapılmıştır. Retinanın bu yatay dilim hazırlanmasında, yama klemp kayıt, kalsiyum görüntüleme tekniği, immünhistokimya ve RT-PCR tek hücreli kullanarak, kendi morfolojisi ile karşılaştırıldığında retinal nöronların fonksiyonu okudu.

Watch this Scientific Journal Video about Horizontal Slice Preparation of the Retina at JoVE.com

Horizontal Slice Preparation of the Retina

Geleneksel dikey dilim ve retinanın tüm hazırlık retina devrelerin fonksiyonunu incelemek için kullanılmıştır. Burada, sağlam retina nöronların dendritik morfoloji korumak için yöntem dilimleme roman açıklar.

Retina Yatay Dilim Hazırlık

Traditionally the vertical slice and the whole-mount preparation of the retina have been used to study the function of retinal circuits. However, many of ...

horizontal-slice-preparation-of-the-retina

Research

JoVE Journal

Biology

15.7K Görüntüleme.  Dalhousie University. Geleneksel dikey dilim ve retinanın tüm hazırlık retina devrelerin fonksiyonunu incelemek için kullanılmıştır. Burada, sağlam retina nöronların dendritik morfoloji korumak için yöntem dilimleme roman açıklar.