Biz video tasvir otomatik, motorlu tetrode twister cihaz tasarımı ve inşası için Haz Yamamoto kabul etmek istiyorum. Buna ek olarak, mikro-sürücü ve laboratuarda tetrode teknoloji geliştirme katkılarından dolayı tüm geçmiş ve mevcut Wilson Lab üyeleri kabul etmek istiyorum.

1. Tetrodes imalatı <ol><li> Ni-krom tel, yalıtımlı poliimid, 12.5 mikron çaplı çekirdekli, 50 cm uzunluğunda bir elde bir tetrode inşaat başlayın. Yarısında tel katlayın. Onları birbirine yapışmasına çifti boyunca parmaklarınızı çalıştırın. Tel çifti tüm uzunluğu boyunca iyi bir temas var emin olun. </li><li> Çifti, iki ucu bir arada tutarak tekrar katlayın. Bir ucunda oluşan döngü bükülmüş olmadığından emin olun. Dört ipuçları hizalanır ve böylece olmayan ilmekledi ucunda dört tel kesin. </li><li> Bir sonraki adım için, değiştirilmiş bir timsah klibi, motorlu bir dönüm cihaz ve dönüm cihaz üzerinde bir yatay çubuk gerekir. Timsah klibi yapıştırma klibin tabanına bir plastik çubuk ile değiştirilir. Tel uçları maruz kalan yerlerde, değiştirilmiş timsah klibi ile birlikte dört tel kelepçe. Yatay çubuk üzerinde tellerin döngü asın. Motorlu aşamaya timsah klibi yerleştirin. </li><li> Yaklaşık üç dakika boyunca kablo demetine 40 karşı saat yönünde katlanmış takiben 80 saat bilge katlanmış uygulayın. Bu parametreler, kendi ihtiyaçlarınıza göre çeşitli olabilir. </li><li> Tetrode büküm tamamlandıktan sonra, orta-düşük akım kullanılarak, üç farklı açılardan (420 ° C veya 790 ° F) ısı tabancası ile ısıtarak teller birbirine kaynaştırmak. Her açı için yaklaşık 5 saniye boyunca 2 cm mesafeden teller, tel paket böler 1-2 cm başlamak ısı tabancası aşağı koşmak ve. Yüksek sıcaklıklarda izolasyon tamamen erimesini ve kısa devrelere neden olarak dikkatli kullanın. </li><li> Şimdi tellerin birbirine kaynaşmış, hafifçe tetrode gerilimi rahatlatmak için timsah klibi kaldırarak büküm aparatları tetrode kaldırmak ve timsah klibi yakın tetrode kesmek. Diğer ucunda eşit uzunlukta tel dört olmayan gümrüklü ipliklerini olduğu gibi döngü kesti. </li><li> Sonra, yumuşak uçlu bir cımbız ile telleri hafifçe bükerek üst kısmındaki saç tellerini ayırın. </li><li> Tetrode şimdi mikro sürücü diziye yükleme için hazırdır. 21 ila 25 daha fazla tetrodes olun ve tozsuz bir kutuya tetrode yükleme işlemi için zamanı gelene kadar saklayabilirsiniz. </li></ol> 2. Mikro sürücü diziye tetrodes ve toprak kablolarını yükleme <ol><li> Devam etmek için, tam bir mikro-sürücü dizi gerekir. Henüz birini inşa varsa, &#39;Mikro-sürücü dizi kronik in vivo kayıt için: sürücü fabrikasyon&#39; video bakın Tasarım planında, elektrot uçları mikro sürücü dizi temel altında uzatmak gibi mikro-sürücü taşıyıcı tüp poliimid tetrode bağlantı parçaları bir ucunda bağlı olacak ve sonuna kadar devam edecek. </li><li> Başlamadan önce, bir ucunda konektör kuruluna bağlı ve diğer ucunda bir panavise tarafından sıkıştırılmasını edilebilir bir sürücü tutucu oluşturmak. Bu örnekte, sürücü sahibinin, bir X-Acto bıçak sapı (Şekil 1c) bir ucunu yapıştırılmış bir değirmen-max konektörü. </li><li> Tetrode Holding ve yumuşak uçlu bir cımbız ile bir Stereoskop kullanarak tetrode ucu itmek mikro sürücüler bir taşıyıcı tüp poliimid. Bireysel elektrot telleri sürücü dizinin üstündeki konnektör kuruluna kadar tüpe tetrode itin. Teller, kıvırmayın veya viraj, oldukça dik çok bir açı, beyin girmek için tetrode neden olarak, ve tetrode bütünlüğünü zayıflatmak için değil dikkatli olun. </li><li> Yavaşça, yumuşak uçlu bir cımbız kullanarak elektrot arayüz kartı kendi deliklere dört tel diğer ucunu beslenirler. Yine, bükülme veya tel bükme kaçının. Dört tel, pense kısaltılmış bir alt çene bir çift altın iğneli deliklerin içine doğru itin. Pimleri deliğin içine itilir, tel yalıtım bandı ve elektrik bağlantısı oluşturmak. </li><li> Daha sonra başvurmak için, mikro-elektrot arayüz kartı sürücüleri ve pim konumu arasındaki haritalama takip edebilirsiniz. </li><li> 18 tetrodes toplam yükleme devam edin. Dizi kalan üç mikro diskler, referans elektrot evine kullanılır. Her bir referans elektrot Yapışmayan dört tel biter, sadece birini kullanan bir tetrode yapılır. , Referans elektrotlar eklemek yükleme prosedürü takip edin ama sadece bir dört elektrot konnektörü tümleşik ilgili referans elektrot pin eklemek için. </li><li> Multi-site kayıtları planlıyorsanız, bunu tetrodes vaktinden konektörü, kartın bağlantıları planlamak için yararlı olabilir. Bu deneyler sırasında yanlış tetrode ayarlama olasılığını en aza indirmek gerekir. </li><li> Tetrode yükleme tamamlandıktan sonra, iki zemin teller, bir hayvan için bir koruyucu koni olun. 6 &#39;uzun yalıtımlı çelik tel (metin: 0.005&#39; çapı) kesin ve telin her iki ucunda, metal cımbız kullanarak, 3 mm izolasyon kaldırmak. Sonra 4 kesmek&#39;Uzun yalıtımlı çelik tel (metin: 0.005&#39; çapı). Bir ucundan diğer ucunda 1 cm 3 mm yalıtım çıkarın. </li><li> Route 6 &#39;topraklama kablosu, mikro-sürücü dizi tarafındaki delikten ve arayüz kartı doğru. Belirlenen yere delik altın iğne ile elektrot arayüz kartı maruz tel bağlayın. Bu tel hayvanın kafatası bağlanacaktır. </li><li> Önceden yüklenmiş topraklama kablosu Rota 4 &#39;topraklama kablosu paralel. Belirlenen başka bir yere delik bir altın iğne kullanarak elektrot arayüz kartı için 3 mm elimden sonuna bağlayın. Bu tel, gürültü azaltmak için küçük bir Faraday kafesi olarak hareket edecek bir koruyucu koni, daha sonra bağlı olacaktır. Şimdi bağlantı telleri bitmiş ve tetrodes rafine devam edebilirsiniz. </li></ol> 3. Tetrodes uzunluğu ayarlama <ol><li> Amacımız, bu süreçte, onlar hedef beyin yapısı derinliği daha biraz daha uzun, böylece tüm tetrodes kesmek için. Bizim örneğimizde, mikro diskler, 5-6 mm, birçok neokortikal alanlar ve yetişkin bir sıçan dorsal hipokampus ulaşmak için yeterli bir maksimum seyahat için tasarlanmıştır. Birincisi, düşük tetrodes maksimum maruz kalmayacak şekilde tüm mikro-sürücüler. Aynı zamanda bir çift keskin ince makas kullanarak istediğiniz son uzunluğu yaklaşık 5 mm daha uzun olan uzunlukları tetrodes kesti. </li><li> Son kesim için bir panavise tırtıklı makas bir çift hazırlayın. Sarkan diğer kolu çıkarken, hafif bir açıyla aşağı ve yukarı bakacak şekilde çentikler bir kolu Kelepçe. </li><li> Şimdi mikro-sürücüler kadar çevirerek tamamen kendi kılavuz kanül tüm tetrodes çekebilirsiniz. </li><li> Stereoskop kullanarak, tamamen kendi kanül bir tetrode dışarı uzanır. Kılavuz kanül istenen mesafe bir cetvel, pozisyon tırtıklı makas kullanma. Yavaşça ve nazikçe bir düz hareketi ile tetrode kesti. Bu tetrode kesim edildikten sonra, 3-4mm kadar mikro sürücü çekebilirsiniz. Tüm kesilmiş kadar her tetrode için bu işlemi tekrarlayın. Bu noktada altın kaplama için hazır. </li></ol> 4. Tetrodes Altın kaplama ve kalite kontrol Nikrom tetrode tel kaplama altın uzun vadeli istikrarlı kayıtları için kritik öneme sahiptir. Korozyon ve geliştirir biyouyumluluk önler. <ol><li> Dış modunda empedans ölçer ve mevcut jeneratör, ses çıkışı (Şekil 1d) DC kontrol modunda Kur. Her tetrode içinde kanalları altı olası çiftleri mevcut jeneratör iki yol açar dokunun ve çiftleri arasındaki şort varsa belirlemek için ses görüşlerinizden yararlanacağız. Kısa bir süre varsa, tırtıklı makas ve testi ile tekrar tetrode yeniden kesmek. Sorun devam ederse, tetrode atmak ve değiştirin. </li><li> Tüm tetrodes içinde herhangi bir şort var, bildiğim kadarıyla mümkün tetrodes uzanan, tüm mikro-sürücüler aşağı hareket ettirin. </li><li> Elektrot empedansı (Şekil 1e) kontrol etmek için donanım yapılandırması değiştirin. Şimdi tüm tetrodes uçları, altın kaplama standart çözüm banyo içine batırın. Altın banyo elektriksel empedansı metre olumlu kurşun bağlanır. Elektrot empedansı ilgili pin konnektörü tümleşik negatif empedans metre kurşun dokunarak kontrol edin. </li><li> Ölçü ve mikro sürücü dizi her tel empedansı kayıt. Normal değerler 1-3 MOhm aralığı. </li><li> Mevcut jeneratör, 1-3 uA arasındaki mevcut ayarlayın. Sonra, güvenli konektörü, kartın üzerindeki pin negatif empedans metre kurşun takın. Ekipman galvanik yapılandırma (Şekil 1f) içine yerleştirin. Empedans ölçer, hızlı modunu atlayacak, normal modda geçiş ve geri. Bypass modunda iken, cari tetrode ve altın çözümü üzerinden geçecek ve elektrot ucuna altın kaplama olacak. Kaplama her turdan sonra empedans öncesine göre daha az olmalıdır. Empedansı 1 Mohm altına düştüğü olmasaydı akım darbesi tekrarlayın. Kabul empedanslar bir muhafazakar aralığı 350 kOhm 250kOhm. Empedansı 200 kOhm altına düşerse, bu bir kısa devre gösterebilir. </li><li> Tekrarlanan darbeler sonra empedans yeterince bırak değilse, elektrot ucu tıkalı olabilir. Tetrode Re-cut, şort kontrol edin ve altın kaplama işlemi tekrarlayın. Yeniden kesme yardımcı olmazsa, tetrode değiştirin ve tekrar başlayın. </li><li> Tüm tetrodes kaplama sonra, etanol, kısaca tetrode ipuçları daldırma ve 3 ila 5 dakika süreyle kurumaya bırakın. </li><li> Havaya maruz tetrode ipuçları mevcut jeneratör kullanarak tetrodes içinde kısa devre test edin. Bir tetrode iki veya daha fazla elektrot arasındaki DC bağlantısı varsa, tetrode ve altın plaka tekrar tekrar kesilmiş. </li><li> Tüm tetrodes altın kaplama işlemi tamamlandıktan sonra, her tetrod arasındaki arayüz için orta kalınlıkta siyano-akrilat yapıştırıcı bir damla eklemeke ve onun boru poliimid. Bu, mikro-sürücü, tetrode güvenli ve tetrode uzunluğu koruyacaktır. </li><li> Son bir adım olarak, tüm vidaları çevirerek tüm tetrodes sürücüye taşıyın. </li></ol> 5. Koruyucu koni takma Koruyucu koni amacı çevre mikro sürücüler ve maruz tetrode tel kalkan. Aynı zamanda bir deney sırasında kullanım için destek sağlar ve elektriksel gürültü azaltır. Biz bir 3-D baskılı plastik konisi (: sürücü imalat Referans Bölüm I) kullanın. Ancak, soda bükük bir parça gibi diğer malzemeler koni yapmak mümkündür. <ol><li> Plastik koni ve iç veya dış yüzeyine bazı alüminyum folyo bant düzeltmek. </li><li> Sonra, koni ile küçük bir delik delme (çapı 1.5 mm) ve gevşek konisi içinde bir pul ve somun ile vida takın. Bu elektrik topraklama kablosu için bir geçit olarak görev yapacak. Biz 0-80 boyutu vida ve pul kombinasyonu kullanmanızı öneririz. </li><li> İlk olarak, insert ve kısmen koni iki üç 1-72 boyutu vidaları (3 / 16 inç uzunluğunda) açın. Sürücü dizi askıya üzerinde koni, sürücü takın. Her iki toprak kablolarını sürücü dizinin alt uzanan emin olun. 4 &#39;topraklama kablosu açıkta kalan parçası birkaç kez 1-72 vida etrafında sarın ve sıkıca vidayı sıkın. Sürücü tabanı koni kalan iki koni vidaları sıkarak sabitleyin. </li><li> Son olarak, 1 cm kısa zemin tel elimden sonuna almak ve folyo bant ve yıkama arasında, vida çevresinde rüzgar. Vidayı sıkarak yere sabitleyin. Şimdi son olarak cerrahi implantasyon için hazır bir mikro-sürücü dizi var. </li></ol> 6. Temsilcisi sonuçları <ol><li> Micro-sürücü dizi üretimi tamamlandı. Mikro-sürücü dizi, 18 tetrodes ve 3 referans kanalı ile yüklenir. Dayanıklılık için, koruyucu bir koni ve kap kaplı. Koruyucu koni ile bitmiş bir dizi mikro-drive ortalama 25g için 20g ağırlığındadır. </li><li> Bitmiş sürücü dizi standart cerrahi prosedür kullanılarak yerleştirilir. Gördüğünüz gibi, sürücü preamplifikatör çip ve veri toplama donanım ve yazılım için sinyal taşıyan tellerin bir paket eklenir. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/1098/CompositeFigure1_highqualityn.jpg" alt="Şekil 1" /> Şekil 1: A) tetrode büküm yapılandırması şematik. Yatay çubuk otomatik tetrode büküm cihazı üzerinde tetrode Yapışmayan elektrot telleri askıya alır. B) Kurulum tetrode empedansı ölçümü ve elektrot kaplama. C) kısa devreleri kontrol ederken, devre farklıdır: siyah tel, konektörü, kartın üzerindeki başka bir elektrot kanal bağlı olduğu özel bir close-up (yakın çekim) bir dizi mikro-sürücü sahibinin aracı yaptı . Silindirik çubuğu X-Acto bıçak sapı. Konektörü 26-pin, çift sıralı, Mill-max konnektör. Kısa kontrol etmek için iki adet diş akrilik kullanarak birbirine yapıştırılır. D) Yapılandırma. Kanal X ve Kanal Y dört tetrode kanalı herhangi iki farklı kanal E) Yapılandırma elektrot empedansı ölçmek için. Akım kaynağı, &#39;kapalı&#39;. Empedans ölçer &#39;açık&#39; ve &#39;test&#39; F) elektrot ipuçları altın kaplama için yapılandırma. Akım kaynağı &#39;açık&#39;, ses, &#39;açık&#39;, modu &#39;tek kutuplu&#39;, DC Testi &#39;açık&#39;, 2 mikroamper akım ayarlanır.

<ol>
	<li>Gray, C. M., Maldonado, P. E., Wilson, M., McNaughton, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tetrodes+markedly+improve+the+reliability+and+yield+of+multiple+single-unit+isolation+from+multi-unit+recordings+in+cat+striate+cortex.">Tetrodes markedly improve the reliability and yield of multiple single-unit isolation from multi-unit recordings in cat striate cortex.</a> J. Neurosci. Methods. 63 (1-2), 43-54 (1995).</li></ol>

Bu protokol, iki parçalı bir protokolün ikinci taksiti: &quot;Mikro-drive bir dizi kronik in vivo kayıt.&quot; Mikro sürücü dizi ve tetrode kombinasyonu bir uyanık aynı anda birçok nöron kayıtları elde etmek için güçlü bir araçtır, hayvan hazırlık davranıyor. Umarım, biz kendi laboratuvar elektrofizyolojik kayıtlar başlamak ya da geliştirmek için ihtiyaç için tüm gerekli bilgileri vermiş. Motorlu tetrode twister cihaz özel tasarlandı ve üretildi. Biz, benzer...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Panavise</td>
<td>Tool</td>
<td>Panavise</td>
<td>Model 301</td>
<td>Holds either micro-drive array or serrated scissors</td>
</tr>
<tr>
<td>Modified Xcelite 378M Pliers</td>
<td>Tool</td>
<td>Newark</td>
<td>96F8903</td>
<td>For inserting connector board pins. To make, remove 2mm from one tip of the pliers.</td>
</tr>
<tr>
<td>Slow Cure Glue</td>
<td>Material</td>
<td>Great Planes (Champaign, IL)</td>
<td>GPMR6015</td>
<td>To glue the tetrode to the micro-drive</td>
</tr>
<tr>
<td>Gold Plating Solution</td>
<td>Material</td>
<td>Neuralynx</td>
<td>Sifco Selectron Gold NC</td>
<td>Contains gold particles for electroplating</td>
</tr>
<tr>
<td>Current Generator</td>
<td>Tool</td>
<td>World Precision Instruments</td>
<td>A365D-B</td>
<td>A.K.A. Stimulus Isolator. Used to electroplate gold solution onto electrode tips.</td>
</tr>
<tr>
<td>Impedance Meter</td>
<td>Tool</td>
<td>BAK Electronics</td>
<td>IMP-1 / 6662 / 2788</td>
<td>To check impedance of electrodes</td>
</tr>
<tr>
<td>Hot Air Gun</td>
<td>Tool</td>
<td>Steinel (Germany)</td>
<td>HG 3002 LCD</td>
<td>To fuse electrodes together to make tetrode</td>
</tr>
<tr>
<td>Accu-Tek Carbofib Tip Tweezers</td>
<td>Tool</td>
<td>Aven (Ann Arbor, MI)</td>
<td>18768 (Pattern 304)</td>
<td>For handling tetrodes</td>
</tr>
<tr>
<td>Alligator Clip</td>
<td>Tool</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>18050-35</td>
<td>A.K.A. Bulldog serrefine. To clip the tetrodes together during twisting</td>
</tr>
<tr>
<td>Micro Dissecting Scissors</td>
<td>Tool</td>
<td>Biomedical Research Instruments</td>
<td>25-1000</td>
<td>For general cutting of tetrode/electrode wire</td>
</tr>
<tr>
<td>Iris Toughcut Serrated Scissors</td>
<td>Tool</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>14058-09</td>
<td>For final cut of tetrodes</td>
</tr>
<tr>
<td>Teflon Coated Stainless Steel Wire</td>
<td>Material</td>
<td>A-M Systems (Carlsborg, WA)</td>
<td>790500</td>
<td>Ground wire</td>
</tr>
<tr>
<td>12.5 micron nichrome wire</td>
<td>Material</td>
<td>Kanthal Palm Coast</td>
<td>Rediohm-800 1/4 HARD PAC COATING</td>
<td>Polyimide coated micro-wire for making tetrodes.</td>
</tr>
<tr>
<td>Tetrode Twister</td>
<td>Tool</td>
<td>Neuralynx</td>
<td>Tetrode Assembly Station</td>
<td>Increases the speed and consistency of tetrode fabrication.

</td>
</tr>
<tr>
<td>Silver Paint</td>
<td>Material</td>
<td>GC Electronics</td>
<td>22-023</td>
<td>For connecting the micro-electrode wires of the tetrode to the connector pins (see Discussion)</td>
</tr>
<tr>
<td>X-Acto Knife Handle</td>
<td>Material</td>
<td>MSC Direct</td>
<td>X3001</td>
<td>For constructing a micro-drive holding device.</td>
</tr>
<tr>
<td>26 Pin, 2 Row Connector</td>
<td>Material</td>
<td>Mill-max</td>
<td>852-10-026-30-001000</td>
<td>For constructing a micro-drive holding device.</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

micro-drive array for chronic in vivo recording: tetrode assembly

Tetrode dört elektrot, bir paket, in vivo çoklu nöronların eş zamanlı kayıt için değerli bir araç olduğunu kanıtlamıştır. Bir tetrode kanallar üzerinden aksiyon potansiyeli imzaları diferansiyel genlik çoklu ünite sinyalleri tek birim faaliyet izolasyonu sağlar. Tetrode stereotaksik yeri ve derinliği tam olarak kontrol edebilme beyin bölgeleri arasında koordineli sinirsel aktivite eğitimi için kritik öneme sahiptir. Bir mikro-drive bir dizi ile birlikte, bu hafta gün boyunca hassas yerleştirme ve birçok tetrodes istikrarlı bir kontrol elde etmek mümkündür. Bu protokol, biz imal ve temel araçları ve malzemeleri kullanarak durumu tetrodes, kronik bir çok sürücü tetrode diziye tetrodes yüklemek nasıl göstermek in vivo sıçan kayıt, mikro sürücü dizi topraklama kablosu bağlantıları yapmak, ve çevre ile fiziksel temas tetrodes korumak için koruyucu bir koni mikro sürücü dizi üzerine takın.

Watch this Scientific Journal Video about Micro-drive Array for Chronic in vivo Recording: Tetrode Assembly at JoVE.com

Micro-drive Array for Chronic in vivo Recording: Tetrode Assembly

Bu protokolde sıçanlarda kronik elektrofizyolojik kayıtlar için tasarlanmış bir mikro-sürücü dizi ile kullanılmak için imal ve durumu tetrodes nasıl göstermektedir. Buna ek olarak, mikro-sürücü yüklemeden yer teller ve koruyucu bir koni içeren dizi inşaat, son aşamaya göstermektedir.

Micro-sürücü Kronik Array In vivo Kayıt: Tetrode Meclisi

The tetrode, a bundle of four electrodes, has proven to be a valuable tool for the simultaneous recording of multiple neurons in-vivo.  The differential ...

micro-drive-array-for-chronic-in-vivo-recording-tetrode-assembly

Research

JoVE Journal

Biology

Micro-drive Array for Chronic in vivo Recording: Tetrode Assembly

33.1K Görüntüleme.  MIT - Massachusetts Institute of Technology. Bu protokolde sıçanlarda kronik elektrofizyolojik kayıtlar için tasarlanmış bir mikro-sürücü dizi ile kullanılmak için imal ve durumu tetrodes nasıl göstermektedir. Buna ek olarak, mikro-sürücü yüklemeden yer teller ve koruyucu bir koni içeren dizi inşaat, son aşamaya göstermektedir.

Video: Micro-drive Array for Chronic in vivo Recording: Tetrode Assembly

Application of Light-cured Dental Adhesive Resin for Mounting Electrodes or Microdialysis Probes in Chronic Experiments

In chronic recording experiments, self-curing dental acrylic resins have been used as a mounting base of electrodes or microdialysis-probes. Since these acrylics do not bond to the bone, screws have been used as anchors. However, in small experimental animals like finches or mouse, their craniums are very fragile and can not successfully hold the anchors. In this report, we propose a new application of light-curing dental resins for mounting base of electrodes or microdialysis probes in chronic experiments. This material allows direct bonding to the cranium. Therefore, anchor screws are not required and surgical field can be reduced considerably. Past experiences show that the bonding effect maintains more than 2 months. Conventional resin's window of time when the materials are pliable and workable is a few minutes. However, the window of working time for these dental adhesives is significantly wider and adjustable.

In this report, we propose a new application of light-curing dental resins for mounting base of electrodes or microdialysis probes in chronic experiments. This material allows direct bonding to the cranium.

Kronik Deneyleri Montaj Elektrotlar veya mikrodiyaliz Problar Işık tedavi Diş Yapıştırıcı Reçine Uygulama

In chronic recording experiments, self-curing dental acrylic resins have been used as a mounting base of electrodes or microdialysis-probes. Since these ...

Biyoloji

Micro-drive Array for Chronic in vivo Recording: Drive Fabrication

Chronic recording of large populations of neurons is a valuable technique for studying the function of neuronal circuits in awake behaving rats. Lightweight recording devices carrying a high density array of tetrodes allow for the simultaneous monitoring of the activity of tens to hundreds of individual neurons. Here we describe a protocol for the fabrication of a micro-drive array with twenty one independently movable micro-drives. This device has been used successfully to record from hippocampal and cortical neurons in our lab. We show how to prepare a custom designed, 3-D printed plastic base that will hold the micro-drives. We demonstrate how to construct the individual micro-drives and how to assemble the complete micro-drive array. Further preparation of the drive array for surgical implantation, such as the fabrication of tetrodes, loading of tetrodes into the drive array and gold-plating, is covered in a subsequent video article.

Micro-drive Array for Chronic in vivo Recording: Drive Fabrication

In this protocol we demonstrate how to fabricate a micro-drive array for chronic electrophysiological recordings in rats.

Micro-sürücü Kronik Array In vivo Kayıt: Sürücü Fabrikasyon

Chronic recording of large populations of neurons is a valuable technique for studying the function of neuronal circuits in awake behaving rats. ...

Electrophysiological Recording in the Drosophila Embryo

Drosophila is a premier genetic model for the study of both embryonic development and functional neuroscience. Traditionally, these fields are quite isolated from each other, with largely independent histories and scientific communities. However, the interface between these usually disparate fields is the developmental programs underlying acquisition of functional electrical signaling properties and differentiation of functional chemical synapses during the final phases of neural circuit formation. This interface is a critically important area for investigation. In Drosophila, these phases of functional development occur during a period of &lt;8 hours (at 25&deg;C) during the last third of embryogenesis. This late developmental period was long considered intractable to investigation owing to the deposition of a tough, impermeable epidermal cuticle. A breakthrough advance was the application of water-polymerizing surgical glue that can be locally applied to the cuticle to enable controlled dissection of late-stage embryos. With a dorsal longitudinal incision, the embryo can be laid flat, exposing the ventral nerve cord and body wall musculature to experimental investigation. Whole-cell patch-clamp techniques can then be employed to record from individually-identifiable neurons and somatic muscles. These recording configurations have been used to track the appearance and maturation of ionic currents and action potential propagation in both neurons and muscles. Genetic mutants affecting these electrical properties have been characterized to reveal the molecular composition of ion channels and associated signaling complexes, and to begin exploration of the molecular mechanisms of functional differentiation. A particular focus has been the assembly of synaptic connections, both in the central nervous system and periphery. The glutamatergic neuromuscular junction (NMJ) is most accessible to a combination of optical imaging and electrophysiological recording. A glass suction electrode is used to stimulate the peripheral nerve, with excitatory junction current (EJC) recordings made in the voltage-clamped muscle. This recording configuration has been used to chart the functional differentiation of the synapse, and track the appearance and maturation of presynaptic glutamate release properties. In addition, postsynaptic properties can be assayed independently via iontophoretic or pressure application of glutamate directly to the muscle surface, to measure the appearance and maturation of the glutamate receptor fields. Thus, both pre- and postsynaptic elements can be monitored separately or in combination during embryonic synaptogenesis. This system has been heavily used to isolate and characterize genetic mutants that impair embryonic synapse formation, and thus reveal the molecular mechanisms governing the specification and differentiation of synapse connections and functional synaptic signaling properties.

Electrophysiological Recording in the Drosophila Embryo

Electrophysiological recordings from Drosophila embryos allow analyses of developing muscle and neuron electrical properties, as well as characterization of functional synaptogenesis at the glutamatergic neuromuscular junction and central cholinergic and GABAergic synapses.

Elektrofizyolojik Kayıt Drosophila Embriyo

Drosophila is a premier genetic model for the study of both embryonic development and functional neuroscience. Traditionally, these fields are quite ...

Assembly, Loading, and Alignment of an Analytical Ultracentrifuge Sample Cell

The analytical ultracentrifuge (AUC) is a powerful biophysical tool that allows us to record macromolecular sedimentation profiles during high speed centrifugation. When properly planned and executed, an AUC sedimentation velocity or sedimentation equilibrium experiment can reveal a great deal about a protein in regards to size and shape, sample purity, sedimentation coefficient, oligomerization states and protein-protein interactions.
This technique, however, requires a rigorous level of technical attention. Sample cells hold a sectored center piece sandwiched between two window assemblies. They are sealed with a torque pressure of around 120-140 in/lbs. Reference buffer and sample are loaded into the centerpiece sectors and then after sealing, the cells are precisely aligned into a titanium rotor so that the optical detection systems scan both sample and reference buffer in the same radial path midline through each centerpiece sector while rotating at speeds of up to 60, 000 rpm and under very high vacuum
Not only is proper sample cell assembly critical, sample cell components are very expensive and must be properly cared for to ensure they are in optimum working condition in order to avoid leaks and breakage during experiments. Handle windows carefully, for even the slightest crack or scratch can lead to breakage in the centrifuge. The contact between centerpiece and windows must be as tight as possible; i.e. no Newton s rings should be visible after torque pressure is applied. Dust, lint, scratches and oils on either the windows or the centerpiece all compromise this contact and can very easily lead to leaking of solutions from one sector to another or leaking out of the centerpiece all together. Not only are precious samples lost, leaking of solutions during an experiment will cause an imbalance of pressure in the cell that often leads to broken windows and centerpieces. In addition, plug gaskets and housing plugs must be securely in place to avoid solutions being pulled out of the centerpiece sector through the loading holes by the high vacuum in the centrifuge chamber. Window liners and gaskets must be free of breaks and cracks that could cause movement resulting in broken windows.
This video will demonstrate our procedures of sample cell assembly, torque, loading and rotor alignment to help minimize component damage, solution leaking and breakage during the perfect AUC experiment.

The analytical ultracentrifuge (AUC) sample cell holds sample and reference buffer and during experiments and is exposed to high vacuum and rotor speeds up to 60,000 rpm. This video will demonstrate the rigorous attention to detail necessary for assembly, loading and alignment of this very important component of an AUC experiment.

Kurul, Yükleme ve Analitik ultrasantrifüjdeki Örnek Hücre Hizalama

The analytical ultracentrifuge (AUC) is a powerful biophysical tool that allows us to record macromolecular sedimentation profiles during high speed ...

In vivo-like Organotypic Murine Retinal Wholemount Culture

Targeted ablations of genes and analysis of animal models is the classical strategy for enrolling specific retinal gene function. However, transgenic, retina-specific or conditional knockout mouse models often display early lethality or suffer from severe malformations, preventing an analysis beyond embryonic or early postnatal stages.
Primary cell culture is an alternative to investigate the effects of exogenously applied recombinant factors, overexpression of genes or siRNA-mediated gene knockdown in a controlled environment. Dissociated cell culture has the advantage that the endogenous signals reaching the target cells are reduced, thereby facilitating the identification of exogenously triggered effects after pharmacological manipulation. However, important cell-cell interactions are initially destroyed by enzymatic digestion or mechanical dissociation, even if re-aggregated retinospheroid cultures1 are used.
By contrast, organotypic retinal wholemount cultures provide a system close to the physiological in vivo situation with neuronal interactions and connections still preserved2-5.
In this video article we provide a step by step demonstration of (1) the establishment of in vivo-like organotypic retinal wholemount cultures including dissection peculiarities of embryonic, postnatal and adult murine eyes and (2) a dissociation and cytospin procedure for analysis of neuronal apoptosis and retinal cell proliferation in organotypic wholemounts, e.g. after culture in the presence of exogenously applied recombinant factors.

In vivo-like Organotypic Murine Retinal Wholemount Culture

This video article demonstrates the establishment of organotypic retinal wholemount cultures and a cytospin procedure for analysis of exogenously induced effects. Organotypic retinal wholemount cultures mimic the in vivo situation and significantly facilitate the accessibility of murine retinas for experimental manipulations while circumventing the disadvantages of classical murine animal models.

Organotipik murin Retina Wholemount Kültür in vivo

Targeted ablations of genes and analysis of animal models is the classical strategy for enrolling specific retinal gene function. However, transgenic, ...

Ambulatory ECG Recording in Mice

Telemetric ECG recording in mice is essential to understanding the mechanisms behind arrhythmias, conduction disorders, and sudden cardiac death. Although the surface ECG is utilized for short-term measurements of waveform intervals, it is not practical for long-term studies of heart rate variability or the capture of rare episodes of arrhythmias. Implantable ECG telemeters offer the advantages of simple surgical implantation, long-term recording of electrograms in ambulatory mice, and scalability with simultaneous recordings of multiple animals. Here, we present a step-by-step guide to the implantation of telemeters for ambulatory ECG recording in mice. Careful adherence to aseptic technique is required for favorable survival results with the possibility of implantation and recording from weeks to months. Thus, implantable ECG telemetry is a valuable tool for detection of critical information on cardiac electrophysiology in ambulatory animal models such as the mouse. 

Telemetric ECG has emerged as an essential tool in evaluating animal models for cardiac arrhythmias and sudden cardiac death. Here, we present a stepwise guide to telemetric ECG recordings for application in long-term ambulatory ECG monitoring in mice.

Farelerde ambulatuvar EKG Kaydı

Telemetric ECG recording in mice is essential to understanding the mechanisms behind arrhythmias, conduction disorders, and sudden cardiac death. Although ...

One-channel Cell-attached Patch-clamp Recording

Ion channel proteins are universal devices for fast communication across biological membranes. The temporal signature of the ionic flux they generate depends on properties intrinsic to each channel protein as well as the mechanism by which it is generated and controlled and represents an important area of current research. Information about the operational dynamics of ion channel proteins can be obtained by observing long stretches of current produced by a single molecule. Described here is a protocol for obtaining one-channel cell-attached patch-clamp current recordings for a ligand gated ion channel, the NMDA receptor, expressed heterologously in HEK293 cells or natively in cortical neurons. Also provided are instructions on how to adapt the method to other ion channels of interest by presenting the example of the mechano-sensitive channel PIEZO1. This method can provide data regarding the channel&#8217;s conductance properties and the temporal sequence of open-closed conformations that make up the channel&#8217;s activation mechanism, thus helping to understand their functions in health and disease.

Described here is a procedure for obtaining long stretches of current recording from one ion channel with the cell-attached patch-clamp technique. This method allows for observing, in real time, the pattern of open-close channel conformations that underlie the biological signal. These data inform about channel properties in undisturbed biological membranes.

Tek kanallı bir hücre-bağlı Patch-clamp kayıt

Ion channel proteins are universal devices for fast communication across biological membranes. The temporal signature of the ionic flux they generate ...

Array Comparative Genomic Hybridization (Array CGH) for Detection of Genomic Copy Number Variants

Array CGH for the detection of genomic copy number variants has replaced G-banded karyotype analysis. This paper describes the technology and its application in a clinical diagnostic service laboratory. DNA extracted from a patient&#8217;s sample (blood, saliva or other tissue types) is labeled with a fluorochrome (either cyanine 5 or cyanine 3). A reference DNA sample is labeled with the opposite fluorochrome. There follows a cleanup step to remove unincorporated nucleotides before the labeled DNAs are mixed and resuspended in a hybridization buffer and applied to an array comprising ~60,000 oligonucleotide probes from loci across the genome, with high probe density in clinically important areas. Following hybridization, the arrays are washed, then scanned and the resulting images are analyzed to measure the red and green fluorescence for each probe. Software is used to assess the quality of each probe measurement, calculate the ratio of red to green fluorescence and detect potential copy number variants.

Array Comparative Genomic Hybridization Array CGH for Detection of Genomic Copy Number Variants

Array CGH for the detection of genomic copy number variants has replaced G-banded karyotype analysis. This paper describes the technology and its application in a diagnostic service laboratory.

Genomik Kopya Sayısı Variantların Algılama için dizi Karşılaştırmalı Genomik Hibridizasyon (CGH Array)

Array CGH for the detection of genomic copy number variants has replaced G-banded karyotype analysis. This paper describes the technology and its ...

Measuring DNA Damage and Repair in Mouse Splenocytes After Chronic In Vivo Exposure to Very Low Doses of Beta- and Gamma-Radiation

Low dose radiation exposure may produce a variety of biological effects that are different in quantity and quality from the effects produced by high radiation doses. Addressing questions related to environmental, occupational and public health safety in a proper and scientifically justified manner heavily relies on the ability to accurately measure the biological effects of low dose pollutants, such as ionizing radiation and chemical substances. DNA damage and repair are the most important early indicators of health risks due to their potential long term consequences, such as cancer. Here we describe a protocol to study the effect of chronic in vivo exposure to low doses of &#947;- and &#946;-radiation on DNA damage and repair in mouse spleen cells. Using a commonly accepted marker of DNA double-strand breaks, phosphorylated histone H2AX called &#947;H2AX, we demonstrate how it can be used to evaluate not only the levels of DNA damage, but also changes in the DNA repair capacity potentially produced by low dose in vivo exposures. Flow cytometry allows fast, accurate and reliable measurement of immunofluorescently labeled &#947;H2AX in a large number of samples. DNA double-strand break repair can be evaluated by exposing extracted splenocytes to a challenging dose of 2 Gy to produce a sufficient number of DNA breaks to trigger repair and by measuring the induced (1 hr post-irradiation) and residual DNA damage (24 hrs post-irradiation). Residual DNA damage would be indicative of incomplete repair and the risk of long-term genomic instability and cancer. Combined with other assays and end-points that can easily be measured in such in vivo studies (e.g., chromosomal aberrations, micronuclei frequencies in bone marrow reticulocytes, gene expression, etc.), this approach allows an accurate and contextual evaluation of the biological effects of low level stressors.

Measuring DNA Damage and Repair in Mouse Splenocytes After Chronic In Vivo Exposure to Very Low Doses of Beta- and Gamma-Radiation

A protocol to evaluate changes in DNA damage levels and DNA repair capacity that may be induced by chronic in vivo low dose irradiation in mouse spleen lymphocytes, by measuring phosphorylated histone H2AX, a marker of DNA double-strand breaks, using flow cytometry is presented.

Kronik sonra fare dalak DNA hasar ve Onarım Ölçme<em&gt; In Vivo</em&gt; Beta ve gamma-Radyasyonun Çok Düşük Doz Maruz Kalma

Low dose radiation exposure may produce a variety of biological effects that are different in quantity and quality from the effects produced by high ...

The Assembly and Application of 'Shear Rings': A Novel Endothelial Model for Orbital, Unidirectional and Periodic Fluid Flow and Shear Stress

Deviations from normal levels and patterns of vascular fluid shear play important roles in vascular physiology and pathophysiology by inducing adaptive as well as pathological changes in endothelial phenotype and gene expression. In particular, maladaptive effects of periodic, unidirectional flow induced shear stress can trigger a variety of effects on several vascular cell types, particularly endothelial cells. While by now endothelial cells from diverse anatomic origins have been cultured, in-depth analyses of their responses to fluid shear have been hampered by the relative complexity of shear models (e.g., parallel plate flow chamber, cone and plate flow model). While these all represent excellent approaches, such models are technically complicated and suffer from drawbacks including relatively lengthy and complex setup time, low surface areas, requirements for pumps and pressurization often requiring sealants and gaskets, creating challenges to both maintenance of sterility and an inability to run multiple experiments. However, if higher throughput models of flow and shear were available, greater progress on vascular endothelial shear responses, particularly periodic shear research at the molecular level, might be more rapidly advanced. Here, we describe the construction and use of shear rings: a novel, simple-to-assemble, and inexpensive tissue culture model with a relatively large surface area that easily allows for a high number of experimental replicates in unidirectional, periodic shear stress studies on endothelial cells.

The Assembly and Application of &#039;Shear Rings&#039;: A Novel Endothelial Model for Orbital, Unidirectional and Periodic Fluid Flow and Shear Stress

Different levels and patterns of fluid shear are known to modulate endothelial gene expression, phenotype and susceptibility to disease. We discuss the assembly and use of 'shear rings': a model that produces unidirectional, periodic shear stress patterns. Shear rings are simple to assemble, economical and can produce high cell yields.

Montaj ve &#39;Kayma Rings&#39; Uygulama: Orbital tek yönlü ve Periyodik Akışkan Akışının ve Kayma Stres için Yeni Bir Endotel Modeli

Deviations from normal levels and patterns of vascular fluid shear play important roles in vascular physiology and pathophysiology by inducing adaptive as ...