Tek bir eritropoietin üreten hepatosellüler reseptör B2 veya FEB2 pozitif bağırsak kök hücresinden organoid üretmek için, FEB2 ekspresyonuna dayalı floresan ile aktive edilmiş hücre sıralaması yapın ve elde edilen hücreleri yüksek, orta, düşük ve negatif olmak üzere dört gruba ayırın. Dört santigrat derecede üç dakika boyunca 390G'de santrifüjleme ile FEB2 yüksek hücreli pelet topladıktan sonra, tek sıralanmış FEB2 yüksek hücrelerini pipetleme yoluyla ECM'ye gömün, ardından hücreleri kuyu başına 40 mikrolitre ECM başına 100 singlet'ta 24 delikli bir plakaya tohumlayın. ECM'nin polimerizasyonu için 24 delikli plakayı 37 santigrat derecede ve% 5 karbondioksitte 15 dakika boyunca inkübe edin.
Daha sonra, ECM'yi, FEB2 yüksek hücrelerini korumak için ilk iki gün boyunca 10 mikromolar sıra ilişkili kinaz veya kaya inhibitörü içeren 500 mikrolitre kültür ortamı ile örtün. Hücreleri 40X büyütmede ters çevrilmiş bir mikroskop kullanarak manuel olarak inceleyin ve küresel oluşum ve kript çıkıntısı olan canlı organoidleri gözlemleyin. Normal ince bağırsağı andıran kendi kendini organize eden kript villa yapıları, tek FEB2 yüksek hücrelerden yeniden oluşturuldu.
Kültürün beşinci gününde, küresel benzeri yapılar oluştu ve yedinci günden dokuzuncu güne kadar, lekelerin kriptler oluşturmak için kaçması meydana geldi.
