A Cultura 3D de Organoides de Criptas Intestinais Murinas e uma Única Célula-Tronco para Pesquisa de Organoides

Nossa pesquisa se concentra na biologia de células-tronco, especialmente células-tronco intestinais, presentes no fundo da cripta intestinal. O objetivo é responder como a homeostase é mantida pelas células-tronco no intestino. Esta cultura de órgãos 3D derivada de células-tronco intestinais fornece uma ferramenta poderosa para estudar a proliferação, diferenciação e manutenção de células-tronco.

A tecnologia de órgãos auxilia a cultura de células-tronco intestinais por um longo tempo, mantendo o potencial de auto-renovação e diferenciação. O organoide tem sido amplamente utilizado para estudos de pesquisa básica e translacional sobre fragilidade intestinal e fragilidade passada. Nosso desafio atual é compreender o sistema coronariano envolvido nas células epiteliais intestinais e células-tronco.

A compreensão dos processos biológicos desencadeados pela clonagem objetiva é de fundamental importância. Um de nossos achados significativos é que a sinalização através da clonagem mantém a homeostase do crescimento e diferenciação epitelial intestinal. Nosso protocolo descreve um método para isolar consistentemente criptas do intestino delgado e subsequente cultura de organoides 3D para melhorar a taxa de liberação criptica.

Estabelecemos um método de isolamento mecânico envolvendo agitação vigorosa, após tratamento com EDTA. EDTA e dissociação mecânica podem ser combinados para melhorar o rendimento criptográfico. Além disso, a habilidade adequada pode reduzir a contaminação por vírus ao mínimo, aumentando o número de criptas.

Nossos achados sugerem que a sinalização através dos receptores musculares e do organismo parece trabalhar em conjunto para manter a homeostase do crescimento e diferenciação epitelial intestinal. Isso nos encoraja a levantar a hipótese de que o sistema não-neurocoronario-arterítico desempenhou um papel importante na moderação do nicho de células-tronco intestinais.