Rapamisin ile Düzenlenmiş Tirozin Fosfatazların Geliştirilmesi ve Uygulanması

Çalışmamız, tirozin fosfatazların aktivitesini düzenleyen araçların geliştirilmesine odaklanmaktadır. Rapamisin tarafından düzenlenen sistemi birkaç fosfataza uyguladık ve ilgilendiğimiz proteinin spesifik ve zamansal düzenlemesini sağladığını gösterdik. SHIP-2 fosfatazın aktivasyonu ile indüklenen morfolojik değişiklikleri belirlemeyi amaçladık.

RapR aracı, hücrelerdeki fosfataz aktivasyonunun geçici etkilerini belirlememize izin verdi ve hücre yayılması ve göçünde yer alan bir fosfatazın karmaşık spesifik aşağı akış etkilerini belirledik. Ek olarak, aynı fosfatazın etki alanı odaklı davranışlarını belirledik. Bu, hücre morfodinamiğini ve aşağı akış sinyalizasyonunu düzenlemede fosfataz mekanizmalarını anlamamıza katkıda bulunmuştur.

RapR aracımız, ilgilenilen bir fosfatazı spesifik ve geçici olarak düzenleme yeteneği sunar. Fosfataza yerleştirildikten sonra, iFKBP alanı, bir kez rapamisine bağlandıktan sonra, fosfataza aktiviteyi geri yükleyen ve bir açma anahtarı görevi gören allosterik bir anahtar görevi görür. Sinyal komplekslerini yeniden yapılandırmak için rapamisin tarafından düzenlenen sistemi de kullanabiliriz.

RapR aracını kullanarak elde ettiğimiz bulgular, SHIP-2'nin interaktomunun hücre aktivitesini düzenleme yeteneği üzerindeki etkilerini belirlemek için kapıyı açtı. SH2 alan bağlanmasındaki SHIP-2'lerin hücre geri çekilmesinde çok önemli olduğunu bulduk. RapR aracını kullanarak, bu düzenlemeden hangi bağlayıcı ortakların sorumlu olabileceğini daha fazla araştırabiliriz.