Yazarlar Andrew J Dunn, laboratuvarda olağanüstü bir lisans araştırma öğrenci, teknik yardım ve hayvanlar için bakım teşekkür etmek istiyorum. Sağlık hibe HD058834 ve Missouri Yaşam Bilimleri Fellowship Üniversitesi Ulusal Enstitüsü tarafından finanse edilen bu çalışma.

Ön-Cerrahi Aletler / Malzeme <ul><li> Tel kesiciler / pense </li><li> Tül 2 x 2 &quot;pedleri </li><li> Isıtma yastığı </li><li> Gümüş nitrat çubukları </li><li> Steril cerrahi eldiven </li><li> İsofluranın inhalasyon anestezik </li><li> Klorheksidin glukonat% 4 (antiseptik cerrahi fırçalayın) </li><li> Steril 2-0 cerrahi çelik sütür </li><li> 25 X 5 / 8 iğne (otoklavlı) </li><li> Hemostat (otoklavlı) </li><li> Cerrahi çelik sütür </li></ul> Cerrahi Prosedür <ol><li> Steril bir alan oluşturun. Steril prosedürü takip edin. </li><li> 2 ile fare anestezi -% 3 izofluran. </li><li> Fare ısıtma yastığı yerleştirin. </li><li> Klorheksidin çözümü ile kuyruk fırçalayın. </li><li> Bulun 5, 6 ve 7 inci intervertebral mesafe (kuyruk iki kemik diken diken arasında, kuyruk dibinde, vücut saç sonundan itibaren saymaya başlayın). </li><li> Intervertebral uzaya iki omurları arasında bir pilot delik Hemostat ve 25G iğne kullanın. </li><li> 10 cm uzunluğunda çelik sütür kesmek için tel kesiciler kullanın. </li><li> İğneyi çıkarın ve kuyruk iki ucunda delik, 5 cm dikiş ile çelik sütür eklemek. </li><li> Kuyruk her tarafında dikiş + 5 cm olmalıdır. </li><li> Başparmak ucu kuyruk üzerine yerleştirin. </li><li> Serbest el ve baş parmağınızın ucuna çelik sütür rüzgar ve biter büyük bir döngü oluşturacak şekilde bükün. Yara veya dairesel kısmında uzun + 3 mm olmalıdır. </li><li> Baş parmağınızla çıkarın. </li><li> Hemostat ile sütür bir iplikçik Kelepçe ve daha küçük bir döngü, orijinal büyük bir döngü büküm mümkün olduğunca yakından bağlı olduğu sonuna doğru eğip. </li><li> Fazla tel kesti ve bükülmüş tel geri bükün. </li><li> Herhangi bir aşırı kanama varsa, gümüş nitrat sopalarla onu durduramaz. </li><li> Hindlimb boşaltma 5-7 gün önce kurtarmak için tek bir evin kafes izofluran ve yerde fare kapatın. Eğer birden fazla fare birlikte ev sahipliği yapmaktadır kuyruk halkaları dolaşmış olsun. </li></ol> 1. Hindlimb Boşaltma işlemi Malzemeler <ul><li> Size 10-24 X 4 makine vidaları, hayvan başına biri. </li><li> Naylon somunu boyutu 10 - 24, başına bir hayvan. </li><li> Kelebek somun boyutu 10 X 24, hayvan başına iki. </li><li> Yıkama boyutu ¼ X 1, hayvan başına iki. </li><li> Ek bileşenini kanca boyutu # 6, 1-11/16 &quot;ve tek başına hayvan Balıkçılık döner. </li><li> Bobin Metal dikiş makinesi. Bir hayvan başına. </li><li> S-şekilli kanca için küçük ataş, hayvan başına </li><li> Penseler. </li><li> 2 x 2 &quot;gazlı bez. </li><li> 2 &quot;siyah kağıt bağlayıcı kelepçeler. </li><li> Kanal kaset / laboratuvar bant. </li><li> Kafesin tam uzunlukta biraz ötesine uzanan 1-3/8 &quot;Kaplama oluklu çelik çubuk </li><li> 50cm x 40cm x 20cm kafes (sıçan kafes). </li><li> Bükülmüş boru ile su Şişe. </li><li> Paslanmaz çelik tel, su şişesi destek U-şeklinde. </li></ul> Kafes Kurulum <ol><li> Kanal bant ile bu zamansal aşağı 1-38 &quot;Kaplama oluklu çelik kafesin üstünden bar, ve bant yatırın. </li><li> 1 kanat somun, makine vida vida, bir çamaşır makinesi takın ve makine vida oluğu oluklu çelik levha ± kafesin kenarından 15 cm ekleyin. </li><li> Başka bir yıkama ve kanat somun ekleyin. Her iki kanat fındık sıkın, ancak daha sonra ayarlamalar yapmak için gerekli olacak gibi tamamen sıkmayın. </li><li> Bobin merkezi delikten makine vida yerleştirin. </li><li> Bobin düşmesini önlemek için, makine vida sonuna kadar naylon somunu sıkın. Bobin serbestçe dönebilen olmalıdır. </li><li> Balıkçılık döner bobin alt kısmından gelen ek kanca takın. </li><li> Ataç S şekilli bir kanca oluşturmak için pense kullanın. (Bir kanca formu ataş 2cm Cut). </li><li> S-şekilli kanca bir ucunu balıkçılık döner delikten sokun ve pense ile kapattı tutam. </li><li> Kafes yan iç makine vida paralel U-şeklinde bir tel, koyun ve tam bir su şişesi desteklemek için biter bükün. </li><li> Spicket aşağı bakacak şekilde, ancak alt dokunmadan su şişesi, U-şekilli tel içine yerleştirin. </li><li> Bu gıda parçalamak kelepçe gücünü engelleyerek, ya da üzerinde aşağı sıkma olduğunu bu yüzden onlar yakın kapatmaya değil. Olduğunu. Onu dışarı düşen bu 3 - 4 adet gıda tutmak için Sadece yeterince gerginlik., 2 &quot;bağlayıcı kelepçe açık bükün Fare burun. </li><li> Place 3 - 4 adet bağlayıcı kıskaç içine kemirgen chow. </li></ol> Mouse Hindlimb Boşaltma <ol><li> S-şekilli kanca kuyruk halka küçük halka açık ucuna takın. </li><li> Alt kanat somun sıkma makinesi vida veya gevşeterek fare yüksekliğini ayarlayın. Alt ekstremite ağırlık taşıyan olmamalıdır. Sonra optimum yüksekliği, üst kanat somununu sıkın elde edilir. </li><li> Fare arka ayaklarında spicket tırmanırlar, böylece su şişesi, ve U-şekilli tel konumlandırın.<html> Kanal bant ile kafesinin yan su şişesi sabitleyin. </li><li> Fare üzerine tırmanmaya böylece kafesinin altındaki gıda ile bağlayıcı kelepçe yeri; bantlar ile bant aşağı. </li><li> Birden fazla hayvan hindlimb kafesin diğer tarafta boş ise aynı prosedürü tekrarlayın. House kafes başına iki hayvan alan hayvanların neredeyse birbirine temas böylece. </li><li> Fare kuyruğu gevşek balık döner üzerine sarmak için 2 X 2 gazlı bez kullanın. Tül kuyruk güvenliği, gazlı bez etrafında sarmak için küçük bir parça bant kullanın. Bu adım, kuyruk ucu ve bu kuyruk olma nekrotik havuzu kan önde gelen, aşağı sarkık kuyruğu önlemek için önemlidir. </li><li> Kafesine koçanı yataklar küçük bir miktar ekleyin. Fare, bir höyük yatak ve arka ayaklarında yataklar üzerine yüklemeye çalışmayın aksi takdirde çok fazla yatak katmayın. </li></ol> 2. Temsilcisi Sonuçlar: Kuyruk halka HÜ tekniğin başarı kurmak için kuyruk halka ameliyat öncesi ve öncesinde, HU ve kurtarma hayvan vücut ağırlığı ölçülür; tüm gruplarda ve adrenal kitle; soleus kas kütlesi. Deney boyunca farelerin vücut ağırlıkları Şekil 1&#39;de gösterilmiştir. Kuyruklu halka cerrahisi (24.7 ± 3.5g) önce farelerin vücut ağırlıkları kuyruklu halka cerrahisi (24.3 ± 2.9g), HU için önce 5 gün sonra iyileşme anlamlı bir farklılık yoktu. Ayrıca vücut ağırlığının önemli ölçüde 28 gün HU (21.3 + 2.1g), (22.7 ± 1.9g), HÜ, 14 gün sonra hemen düşüş veya 3 gün sonra kurtarma HU (24.0 ± 1.8g). 14 ve 28 gün boyunca HÜ (-6,8% ve% 12) küçük ama anlamlı olmayan bir beden-kitle kaybına rağmen, farelerin öncesi HÜ vücut ağırlıkları tam iyileşme 3 gün sonra kurtarıldı. Gıda tüketimi ayaktan kontrol fareler ve HÜ fareler için Şekil 3&#39;te gösterilmiştir. Ortalama günlük gıda alımı kontrol grubu ile karşılaştırıldığında 28 gün içinde HÜ farelerde farklı değildi. Biz etkili bir HÜ prosedürü (Şekil 2) gösteren 14 ve 28 gün (-39,1% -46,6%) HÜ aşağıdaki önemli soleus kas atrofi gözlemledi. Ayrıca bu atrofi derecesi HÜ 2, 7, 8, 2-4 hafta boyunca beklenen literatür değerleri ile tutarlı. HÜ soleus kitle toparlanmanın ardından 3 gün kontrol değerleri% 74 oranında önemli ölçüde arttı. Kurtarma grubunda soleus kitle HU grupları hem de önemli derecede daha fazla oldu, ama hala ayaktan kontrol hayvanlara göre önemli ölçüde daha az. Adrenal ağırlıkları hayvan stresin bir göstergesi olarak ölçüldü; sağ ve sol böbreküstü bezleri eksize ve tartıldı hem de. Ortalama ağırlıkları kontrolü ve tüm gruplarda HÜ fareler fareler (Şekil 4) için karşılaştırılabilir. Daha önce sıçanlarda HÜ başında hayvan sayısı için başarı oranı süspansiyon cihazların gelmeden HÜ tamamladı hayvan sayısı (kuyruk çekme bant ile çiğneme hayvanlar nedeniyle) ile karşılaştırıldığında göstermiştir 10 oldu 12 Morey Holton tekniği 1. Bu çalışmada, farelerin hiçbiri (n = 54) hiç HÜ döneminin tamamlanmasından önce süspansiyon indi. Ancak, ağır iltihaplı bir kuyruk geliştirilen bir fare oldu. Inflamasyonu belirgin hale gelince, biz iltihaplı alan iyileşmek için izin kuyruk halka kaldırıldı ve daha sonra HÜ süresini tamamlamak için başka bir kuyruk-ring yerleştirilir. Askı aparat çıkıyor, çünkü geçmişte HÜ Morey Holton yöntemi kullanıldığı zaman, biz genellikle 1-2 fare / grup ortadan kaldırmak. Iz halka yöntemi ile yanlışlıkla döneminde, 14 veya 28 gün (n = 54 fare) HÜ HÜ aparat çıkan fareler hiçbir bölüm vardı. <img src="/files/ftp_upload/2467/2467fig1.jpg" alt="Şekil 1" /> Şekil 1. Vücut Ağırlığı Değişimi (± SD). Kısaltmalar: CON: ağırlık taşıyan kontrol fareler (n = 76); Ön-HU: HU (n = 54) öncesinde tüm fareler; HU14: 14 gün (n = 34) fareler hindlimb boşaltılır; HU28: fareler hindlimb boşaltılır 3 gün (n = 22) 28 gün (n = 20); REC: kafes izin hindlimb boş fareler kurtarabilirsiniz. Vücut ağırlığı gruplar arasında anlamlı bir fark gözlendi. <img src="/files/ftp_upload/2467/2467fig2.jpg" alt="Şekil 2" /> Şekil 2 soleus kas atrofi (± SD). Kısaltmalar: CON: ağırlık taşıyan kontrol fareler (n = 76); HU14: 14 gün (n = 34) fareler hindlimb boşaltılır; HU28: 28 gün (n = 20) fareler hindlimb boşaltılır ve REC: izin hindlimb boş fareler 3 gün (n = 22) kurtarmak için kafes. * Ağırlık taşıyan kontrolü (CON) göre önemli derecede farklılık gösteriyor (p &lt;0,001). HÜ grupları hem de daha δSignificantly farklı (p &lt;0.01). 467fig3.jpg &quot;alt =&quot; Şekil 3 &quot;/&gt; Şekil 3. Gıda Tüketimi (Ortalama ± SD). Ağırlık taşıma ve hindlimb boşaltma sırasında ortalama günlük gıda alımı (g / gün). Kısaltmalar: ağırlık taşıyan kontrol fareler (n = 76), HU: fareler hindlimb unloaded14 - 28 gün. CON ve HU grupları arasında anlamlı bir farklılık gözlenmedi. <img src="/files/ftp_upload/2467/2467fig4.jpg" alt="Şekil 4" /> Şekil 4 Adrenal Kütle (± SD). Kısaltmalar: CON: ağırlık taşıyan kontrol fareler (n = 76); HU14: 14 gün (n = 34) fareler hindlimb boşaltılır; HU28: 28 gün (n = 20) fareler hindlimb boşaltılır ve REC: izin hindlimb boş fareler 3 gün (n = 22) kurtarmak için kafes. Gruplar arasında anlamlı bir fark gözlenmiştir.

<ol>
	<li>Brown, M., Foley, A. M., Hasser, E. M., Foley, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+alternative+method+for+hindlimb+unweighting.">An alternative method for hindlimb unweighting.</a> J Gravitational Physiol. 12, 43-50 (2005).</li><li>Fitts, R. H., Metzger, J. M., Riley, D. A., Unsworth, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+disuse:+a+comparison+of+hindlimb+suspension+and+immobilization.">Models of disuse: a comparison of hindlimb suspension and immobilization.</a> J Appl Physiol. 60, 1946-1953 (1986).</li><li>Ingalls, C. P., Warren, G. L., Armstrong, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+Ca2++transients+in+mouse+soleus+muscle+after+hindlimb+unloading+and+reloading.">Intracellular Ca2+ transients in mouse soleus muscle after hindlimb unloading and reloading.</a> Journal of Applied Physiology. 87, 386-390 (1999).</li><li>Morey, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spaceflight+and+bone+turnover:+correlation+with+a+new+rat+model+of+weightlessness.">Spaceflight and bone turnover: correlation with a new rat model of weightlessness.</a> BioScience. 29, 168-172 (1979).</li><li>Morey-Holton, E. R., Globus, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hindlimb+unloading+of+growing+rats:+a+model+for+predicting+skeletal+changes+during+space+flight.">Hindlimb unloading of growing rats: a model for predicting skeletal changes during space flight.</a> Bone. 22, 83-88 (1998).</li><li>Morey-Holton, E. R., Globus, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hindlimb+unloading+rodent+model:+technical+aspects.">Hindlimb unloading rodent model: technical aspects.</a> J Appl Physiol. 92, 1367-1377 (2002).</li><li>Thomason, D. B., Booth, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atrophy+of+the+soleus+muscle+by+hindlimb+unweighting.">Atrophy of the soleus muscle by hindlimb unweighting.</a> J Appl Physiol. 68, 1-12 (1990).</li><li>Thomason, D. B., Herrick, R. E., Surdyka, D., Baldwin, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+course+of+soleus+muscle+myosin+expression+during+hindlimb+suspension+and+recovery.">Time course of soleus muscle myosin expression during hindlimb suspension and recovery.</a> J Appl Physiol. 63, 130-137 (1987).</li></ol>

Biz, son derece başarılı olduğu belirlendi hindlimb boşaltma farelerin bir alternatif yöntem değerlendirildi. Burada açıklandığı gibi kuyruk halka yöntemi uzun vadeli hindlimb süspansiyon kullanılmış ve kurtarma aşağıdaki HÜ çalışma. Bu koşulların her birinin altında, istikrarlı bir gıda alımı, vücut ağırlıkları ve farelerin adrenal ağırlıkları ile kanıtlandığı gibi uyum başarısızlık herhangi bir kanıt yoktu. Bu kuyruk halka HÜ tekniği gerçekleştirmek için kolay ve çok küçük bir cerrahi uygulama ile kolaylıkla entegre edilebiliyor. Kuyruk halka yöntemi geleneksel Morey-Holton 5, 6 yöntemi ile karşılaştırıldığında pek çok avantajı vardır . İlk olarak, sorunları ortaya eğer öyleyse, sadece askı süresi sonunda hemen belli değildir bu kuyruk deri ve halka implantasyonu sitesi, her zaman görülebilir. İkincisi, hayvanlar, HU sırasında herhangi bir zamanda veri kümesi ya da bir fare tutmak için bir belirlemeyi yapmak için gerek kalmayabilir askı aparat almak mümkün değildir. Ayrıca, farelerin halka aparat rahatsız ve kurtarma için HU yayımlanan, HU sorunsuz bir iyileşme fazı için izin, kuyrukları sabotaj yok. Son olarak, kuyruk-ring yöntemi ile hindlimb boş fareler, farelerin hindlimb Morey-Holton kuyruk çekme tekniği ile boşaltılır daha iyi kendi vücut ağırlığını korumak. HÜ 14 gün sonra elimizde biz küçük (% -6,8), fakat önemli olmayan bir beden-kütle kaybı izlenebilir. Ingalls et al. Morey Holton yöntem 3 HÜ 14 gün sonra, farelerin vücut ağırlığının önemli bir% 12 azalma gözlenen Oysa . Ingalls adrenal ağırlıkları rapor rağmen, bizim kuyruk halka yöntemi fare (HÜ farelerin adrenal ağırlıkları kontrollere göre farklı değildir) ve vücut ağırlığı hindlimb boşaltma süresi boyunca daha iyi bakım, daha az stres sağladığını görünür. Özetle, bir kuyruk hindlimb boşaltma halka yöntemi geliştirilmiş ve test, 14 ve 28 gün boyunca fareleri HU ve fareler üzerinde HÜ sonra 3 gün boyunca kafes geri döndü. Adrenal ağırlıkları, vücut kitle ve gıda alımının temelinde, fare tail-ring aparatı iyi adapte olması görünür. Yöntemi boşaltma kuyruk-ring hindlimb geleneksel Morey Holton hindlimb boşaltma tekniği basit, kullanışlı bir alternatif.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Wire cutters/pliers</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Ace Hardware </td>
<td>84-056</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Gauze</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>22-037-901</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Heating pad</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sunbeam</td>
<td>Z-1228-001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Silver nitrate applicators</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>ARZOL</td>
<td>0001-2</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Isoflurane,USP</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Novaplus</td>
<td>NDC 0409-3292-49</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Chlorhexidine Gluconate 4%</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Purdue Products L.P</td>
<td>NDC 67618-200-01</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sterile 2-0 surgical steel suture</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Ethicon</td>
<td>SS-28</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>25 X 5/8 A gauge needle</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Terumo</td>
<td>NN 2516R</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hemostat/ needle holder</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>12500-12</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Size 10-24 X 4 machine screws</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hillman The Fastener Center</td>
<td>90272</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Nylon lock nut size 10 X 24</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hillman The Fastener Center</td>
<td>180141</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Wing nut size 10 X 24</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hillman The Fastener Center</td>
<td>180243</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fender Washer size &frac14; X 1</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hillman The Fastener Center</td>
<td>290012</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fishing swivel with snap hook size #6, 1-11/16&#x201D;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bass Pro Shop</td>
<td>38-481-554-01</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Metal sewing machine bobbin.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Singer</td>
<td>45785</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Paper clip</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Office Depot</td>
<td>221720</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>2&#x201D; black paper binder clamps.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Office Depot</td>
<td>308957</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Scotch Multi-Use Duct Tape</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Office Depot</td>
<td>790710</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1-3/8&#x201D; Plated slotted steel bar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Home Depot</td>
<td>548932</td>
<td>Extends slightly beyond the full length of the cage</td>
</tr>
<tr>
<td>50cm X 40cm X 20cm cage (rat cage</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Alternative Design Manufacturing</td>
<td>RC88D-PC</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Water Bottle</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Alternative Design Manufacturing</td>
<td>WB16FS</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Stainless Steel wire</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Small Parts, Inc</td>
<td>SWX-4029</td>
<td>U-shaped wire to support water bottle</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

an alternant method to the traditional nasa hindlimb unloading model in mice

Morey-Holton hindlimb boşaltma (HU) yöntemi yaygın olarak kabul edilen Ulusal Havacılık ve Uzay Dairesi (NASA), kemirgenler 4-6 kullanmama atrofisi eğitim için yer tabanlı bir model. Bizim çalışmamızda bir alternant yöntemi farelerde altın standart Morey Holton HÜ kuyruk çekme tekniği değerlendirildi. Elli dört dişi farelerde (4-8 ay), HU (n = 34) 14 gün veya 28 gün (n = 20). Kurtarma HU HU (n = 22) 3 gün sonra normal kafes ambulasyon sonra değerlendirildi. Yaşlı uyumlu fareler (n = 76) ağırlık taşıyan kontrol olarak görev yaptı. HÜ için önce bir kuyruk halka, 5., 6., 7., inter-vertebral disk alanı geçirilir ve farelerin askıya alındığı bir halka içine şekillenen bir 2-0 steril cerrahi çelik tel ile kuruldu. Kuyruk-ring Vertebra konumu uygun dışkılama ile müdahale olmadan hayvan vücut ağırlığı dengelemek için seçildi. Biz, HU, soleus atrofi derecesi, ve adrenal kitle aşağıdaki HÜ öncesi ve sonrası vücut ağırlığı değerlendirerek bu romanı HU tekniği başarısı belirlenir. HU (24.3 ± 2.9g) önce farelerin vücut ağırlığı önemli ölçüde (24.0 ± 1.8g), HÜ 14d (22.7 ± 1.9g), HÜ 28d (21.3 + 2.1g) sonra veya 3 gün kurtarma sonra hemen düşüş vermedi . Soleus kas kütlesi sırasıyla 14 gün ve 28 gün boyunca HU (p &lt;0,001) önemli ölçüde azalmıştır (-39,1% -46,6%). Kurtarma soleus kitle ardından 3 gün kontrol değerleri% 74 oranında önemli ölçüde arttı. HÜ farelerin adrenal ağırlıkları kontrol farelere göre farklı değildi. Beklenen edebiyat değerlerine karşılık gelen HU, 2, 7, 8 hayvan vücut ağırlığı, karşılaştırılabilir böbreküstü bezi ağırlıkları, ve soleus atrofi bakım roman HÜ yöntemin başarısı kanıtlanmıştır. Bu HÜ yöntemin başlıca avantajları şunlardır: 1) kuyruk muayene sırasında süspansiyon kolaylığı; 2) kuyruk-bantlama ve HU ile sık sık görülen siyanotik, iltihaplı ve / veya nekrotik kuyrukları olasılığı azaldı; 3), farelerde hiçbir olasılığı çekiş çiğneme bant ve askı aparat çıkan ve 4), hemen HÜ sonra hızlı iyileşme ve normal kafes aktivite.

Watch this Scientific Journal Video about An Alternant Method to the Traditional NASA Hindlimb Unloading Model in Mice at JoVE.com

An Alternant Method to the Traditional NASA Hindlimb Unloading Model in Mice

Biz farelerde model boşaltma alternant hindlimb geliştirdi. Geleneksel Morey Holton kuyruk çekme tekniği üzerinde hindlimb boşaltma kuyruk halka yöntemi birincil avantajı hayvan üzerine stresi en aza indirir basit bir işlemdir.

Fare Geleneksel NASA Hindlimb Boşaltma Model bir Alternant Yöntemi

The Morey-Holton hindlimb unloading (HU) method is a widely accepted National Aeronautics and Space Administration (NASA) ground-based model for studying ...

an-alternant-method-to-traditional-nasa-hindlimb-unloading-model

Research

JoVE Journal

Biology

20.1K Görüntüleme.  University of Missouri, Columbia. Biz farelerde model boşaltma alternant hindlimb geliştirdi. Geleneksel Morey Holton kuyruk çekme tekniği üzerinde hindlimb boşaltma kuyruk halka yöntemi birincil avantajı hayvan üzerine stresi en aza indirir basit bir işlemdir.

Video: An Alternant Method to the Traditional NASA Hindlimb Unloading Model in Mice

Murine Model of Hindlimb Ischemia 

In the United States, peripheral arterial disease (PAD) affects about 10 million individuals, and is also prevalent worldwide. Medical therapies for symptomatic relief are limited. Surgical or endovascular interventions are useful for some individuals, but long-term results are often disappointing. As a result, there is a need for developing new therapies to treat PAD. The murine hindlimb ischemia preparation is a model of PAD, and is useful for testing new therapies. When compared to other models of tissue ischemia such as coronary or cerebral artery ligation, femoral artery ligation provides for a simpler model of ischemic tissue. Other advantages of this model are the ease of access to the femoral artery and low mortality rate. 
In this video, we demonstrate the methodology for the murine model of unilateral hindimb ischemia. The specific materials and procedures for creating and evaluating the model will be described, including the assessment of limb perfusion by laser Doppler imaging. This protocol can also be utilized for the transplantation and non-invasive tracking of cells, which is demonstrated by Huang et al.1.

Murine Model of Hindlimb Ischemia

The surgical procedure for induction of unilateral hindlimb ischemia is demonstrated, with confirmation of ischemia by laser Doppler perfusion imaging.

Murin Model Hindlimb İskemi

In the United States, peripheral arterial disease (PAD) affects about 10 million individuals, and is also prevalent worldwide.  Medical therapies for ...

Biyoloji

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the function and regulation of protein folding was studied in vitro, in isolated tissue culture cells and in unicellular organisms. Recent studies have uncovered links between protein homeostasis (proteostasis), metabolism, development, aging, and temperature-sensing. These findings have led to the development of new tools for monitoring protein folding in the model metazoan organism Caenorhabditis elegans. In our laboratory, we combine behavioral assays, imaging and biochemical approaches using temperature-sensitive or naturally occurring metastable proteins as sensors of the folding environment to monitor protein misfolding. Behavioral assays that are associated with the misfolding of a specific protein provide a simple and powerful readout for protein folding, allowing for the fast screening of genes and conditions that modulate folding. Likewise, such misfolding can be associated with protein mislocalization in the cell. Monitoring protein localization can, therefore, highlight changes in cellular folding capacity occurring in different tissues, at various stages of development and in the face of changing conditions. Finally, using biochemical tools ex vivo, we can directly monitor protein stability and conformation. Thus, by combining behavioral assays, imaging and biochemical techniques, we are able to monitor protein misfolding at the resolution of the organism, the cell, and the protein, respectively.

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

To study the relationship between protein homeostasis, stress and aging, we monitored changes in protein folding by following protein dysfunction, protein localization in the cell and protein stability at the organismal, cellular and protein levels, using the genetically tractable metazoan Caenorhabditis elegans as a model system.

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the ...

Hybrid-Cut: An Improved Sectioning Method for Recalcitrant Plant Tissue Samples

Maintaining plant section integrity is essential for studying detailed anatomical structures at the cellular, tissue, or even organ level. However, some plant cells have rigid cell walls, tough fibers and crystals (calcium oxalate, silica, etc.), and high water content that often disrupt tissue integrity during plant tissue sectioning.
This study establishes a simple Hybrid-Cut tissue sectioning method. This protocol modifies a paraffin-based sectioning technique and improves the integrity of tissue sections from different plants. Plant tissues were embedded in paraffin before sectioning in a cryostat at -16 &#176;C. Sectioning under low temperature hardened the paraffin blocks, reduced tearing and scratching, and improved tissue integrity significantly. This protocol was successfully applied to calcium oxalate-rich Phalaenopsis orchid tissues as well as recalcitrant tissues such as reproductive organs and leaves of rice, maize, and wheat. In addition, the high quality of tissue sections from Hybrid-Cut could be used in combination with in situ hybridization (ISH) to provide spatial expression patterns of genes of interest. In conclusion, this protocol is particularly useful for recalcitrant plant tissue containing high crystal or silica content. Good quality tissue sections enable morphological and other biological studies.

This protocol describes a simple Hybrid-Cut tissue sectioning method that is useful for recalcitrant plant tissues. Good quality tissue sections enable anatomical studies and other biological studies including in situ hybridization (ISH).

Hibrid-Cut: Dirençli Bir Bitki Doku Örnekleri Bir Geliştirilmiş Kesit Yöntemi

Maintaining plant section integrity is essential for studying detailed anatomical structures at the cellular, tissue, or even organ level. However, some ...

A Method to Assess Bacteriocin Effects on the Gut Microbiota of Mice

Very intriguing questions arise with our advancing knowledge on gut microbiota composition and the relationship with health, particularly relating to the factors that contribute to maintaining the population balance. However, there are limited available methodologies to evaluate these factors. Bacteriocins are antimicrobial peptides produced by many bacteria that may confer a competitive advantage for food acquisition and/or niche establishment. Many probiotic lactic acid bacteria (LAB) strains have great potential to promote human and animal health by preventing the growth of pathogens. They can also be used for immuno-modulation, as they produce bacteriocins. However, the antagonistic activity of bacteriocins is normally determined by laboratory bioassays under well-defined but over-simplified conditions compared to the complex gut environment in humans and animals, where bacteria face multifactorial influences from the host and hundreds of microbial species sharing the same niche. This work describes a complete and efficient procedure to assess the effect of a variety of bacteriocins with different target specificities in a murine system. Changes in the microbiota composition during the bacteriocin treatment are monitored using compositional 16S rDNA sequencing. Our approach uses both the bacteriocin producers and their isogenic non-bacteriocin-producing mutants, the latter giving the ability to distinguish bacteriocin-related from non-bacteriocin-related modifications of the microbiota. The fecal DNA extraction and 16S rDNA sequencing methods are consistent and, together with the bioinformatics, constitute a powerful procedure to find faint changes in the bacterial profiles and to establish correlations, in terms of cholesterol and triglyceride concentration, between bacterial populations and health markers. Our protocol is generic and can thus be used to study other compounds or nutrients with the potential to alter the host microbiota composition, either when studying toxicity or beneficial effects.

Bacteriocins are believed to play a key role in defining microbial diversity in different ecological niches. Here, we describe an efficient procedure to assess how bacteriocins affect gut microbiota composition in an animal model.

Bakteriyosin Etkilerini Farenin Bağırsak Mikrobiyolojisi Üzerine Etkileyen Bir Yöntem

Very intriguing questions arise with our advancing knowledge on gut microbiota composition and the relationship with health, particularly relating to the ...

A Simple and Efficient Method for In Vivo Cardiac-specific Gene Manipulation by Intramyocardial Injection in Mice

Gene manipulation specifically in the heart significantly potentiate the investigation of cardiac disease pathomechanisms and their therapeutic potential. In vivo cardiac-specific gene delivery is commonly achieved by either systemic or local delivery. Systemic injection via tail vein is easy and efficient in manipulating cardiac gene expression by using recombinant adeno-associated virus 9 (AAV9). However, this method requires a relatively high amount of vector for efficient transduction, and may result in nontarget organ gene transduction. Here, we describe a simple, efficient, and time-saving method of intramyocardial injection for in vivo cardiac-specific gene manipulation in mice. Under anesthesia (without ventilation), the pectoral major and minor muscles were bluntly dissected, and the mouse heart was quickly exposed by manual externalization through a small incision at the fourth intercostal space. Subsequently, adenovirus encoding luciferase (Luc) and vitamin D receptor (VDR), or short hairpin RNA (shRNA) targeting VDR, was injected with a Hamilton syringe into the myocardium. Subsequent in vivo imaging demonstrated that luciferase was successfully overexpressed specifically in the heart. Moreover, Western blot analysis confirmed the successful overexpression or silencing of VDR in the mouse heart. Once mastered, this technique can be used for gene manipulation, as well as injection of cells or other materials such as nanogels in the mouse heart.

A Simple and Efficient Method for In Vivo Cardiac-specific Gene Manipulation by Intramyocardial Injection in Mice

Here we present a protocol for cardiac-specific gene manipulation in mice. Under anesthesia, the mouse hearts were externalized through the fourth intercostal space. Subsequently, adenoviruses encoding specific genes were injected with a syringe into the myocardium, followed by protein expression measurement via in vivo imaging and Western blot analysis.

Vivo içinde kalp özel gen manipülasyon farelerde Intramyocardial enjeksiyonla için basit ve etkili bir yöntem

Gene manipulation specifically in the heart significantly potentiate the investigation of cardiac disease pathomechanisms and their therapeutic potential. ...

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A)

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer progression. How the chromosomal location and function of a centromere (i.e., centromere identity) are determined and participate in accurate chromosome segregation is a fundamental question. CENP-A is proposed to be the non-DNA indicator (epigenetic mark) of centromere identity, and CENP-A ubiquitylation is required for CENP-A deposition at the centromere, inherited through dimerization between cell division, and indispensable to cell viability.
Here we describe mass spectrometry analysis to identify ubiquitylation of EYFP-CENP-A K124R mutant suggesting that ubiquitylation at a different lysine is induced because of the EYFP tagging in the CENP-A K124R mutant protein. Lysine 306 (K306) ubiquitylation in EYFP-CENP-A K124R was successfully identified, which corresponds to lysine 56 (K56) in CENP-A through mass spectrometry analysis. A caveat is discussed in the use of GFP/EYFP or the tagging of high molecular weight protein as a tool to analyze the function of a protein. Current technical limit is also discussed for the detection of ubiquitylated bands, identification of site-specific ubiquitylation(s), and visualization of ubiquitylation in living cells or a specific single cell during the whole cell cycle.
The method of mass spectrometry analysis presented here can be applied to human CENP-A protein with different tags and other centromere-kinetochore proteins. These combinatory methods consisting of several assays/analyses could be recommended for researchers who are interested in identifying functional roles of ubiquitylation.

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A EYFP-CENP-A

CENP-A ubiquitylation is an important requirement for CENP-A deposition at the centromere, inherited through dimerization between cell division, and indispensable to cell viability. Here we describe mass spectrometry analysis to identify ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A) protein.

EYFP etiketli CENP-A (EYFP-CENP-A) Ubiquitylation tanımlamak için Kütle Spektrometresi Analizi

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer ...

An Antegrade Perfusion Method for Cardiomyocyte Isolation from Mice

In basic research using mouse heart, isolating viable individual cardiomyocytes is a crucial technical step to overcome. Traditionally, isolating cardiomyocytes from rabbits, guinea pigs or rats has been performed via retrograde perfusion of the heart with enzymes using a Langendorff apparatus. However, a high degree of skill is required when this method is used with a small mouse heart. An antegrade perfusion method that does not use a Langendorff apparatus was recently reported for the isolation of mouse cardiomyocytes. We herein report a complete protocol for the improved antegrade perfusion of the excised heart to isolate individual heart cells from adult mice (8 - 108 weeks old). Antegrade perfusion is performed by injecting perfusate near the apex of the left ventricle of the excised heart, the aorta of which was clamped, using an infusion pump. All procedures are carried out on a pre-warmed heater mat under a microscope, which allows for the injection and perfusion processes to be monitored. The results suggest that ventricular and atrial myocytes, and fibroblasts can be well isolated from a single adult mouse simultaneously.

We developed a simple method for isolating high quality individual mouse heart cells by the antegrade perfusion technique. This method is Langendorff-free and useful for isolating ventricular and atrial myocytes or interstitial cells, such as cardiac fibroblasts or progenitors.

Farelerden Kardiyomiyosit İzolasyonu için Antegrad Perfüzyon Yöntemi

In basic research using mouse heart, isolating viable individual cardiomyocytes is a crucial technical step to overcome. Traditionally, isolating ...

Imaging Molecular Adhesion in Cell Rolling by Adhesion Footprint Assay

Rolling adhesion, facilitated by selectin-mediated interactions, is a highly dynamic, passive motility in recruiting leukocytes to the site of inflammation. This phenomenon occurs in postcapillary venules, where blood flow pushes leukocytes in a rolling motion on the endothelial cells. Stable rolling requires a delicate balance between adhesion bond formation and their mechanically-driven dissociation, allowing the cell to remain attached to the surface while rolling in the direction of flow. Unlike other adhesion processes occurring in relatively static environments, rolling adhesion is highly dynamic as the rolling cells travel over thousands of microns at tens of microns per second. Consequently, conventional mechanobiology methods such as traction force microscopy are unsuitable for measuring the individual adhesion events and the associated molecular forces due to the short timescale and high sensitivity required. Here, we describe our latest implementation of the adhesion footprint assay to image the P-selectin: PSGL-1 interactions in rolling adhesion at the molecular level. This method utilizes irreversible DNA-based tension gauge tethers to produce a permanent history of molecular adhesion events in the form of fluorescence tracks. These tracks can be imaged in two ways: (1) stitching together thousands of diffraction-limited images to produce a large field of view, enabling the extraction of adhesion footprint of each rolling cell over thousands of microns in length, (2) performing DNA-PAINT to reconstruct super-resolution images of the fluorescence tracks within a small field of view. In this study, the adhesion footprint assay was used to study HL-60 cells rolling at different shear stresses. In doing so, we were able to image the spatial distribution of the P-selectin: PSGL-1 interaction and gain insight into their molecular forces through fluorescence intensity. Thus, this method provides the groundwork for the quantitative investigation of the various cell-surface interactions involved in rolling adhesion at the molecular level.

This protocol presents the experimental procedures to perform the adhesion footprint assay to image the adhesion events during fast cell rolling adhesion.

Yapışma Ayak İzi Tahlili ile Hücre Yuvarlanmasında Görüntüleme Moleküler Yapışması

Rolling adhesion, facilitated by selectin-mediated interactions, is a highly dynamic, passive motility in recruiting leukocytes to the site of ...

Bioluminescent Monitoring of Graft Survival in an Adoptive Transfer Model of Autoimmune Diabetes in Mice

Type 1 diabetes is characterized by the autoimmune destruction of the insulin-producing beta cells of the pancreas. A promising treatment for this disease is the transplantation of stem cell-derived beta cells. Genetic modifications, however, may be necessary to protect the transplanted cells from persistent autoimmunity. Diabetic mouse models are a useful tool for the preliminary evaluation of strategies to protect transplanted cells from autoimmune attack. Described here is a minimally invasive method for transplanting and imaging cell grafts in an adoptive transfer model of diabetes in mice. In this protocol, cells from the murine pancreatic beta cell line NIT-1 expressing the firefly luciferase transgene luc2 are transplanted subcutaneously into immunodeficient non-obese diabetic (NOD)-severe combined immunodeficient (scid) mice. These mice are simultaneously injected intravenously with splenocytes from spontaneously diabetic NOD mice to transfer autoimmunity. The grafts are imaged at regular intervals via non-invasive bioluminescent imaging to monitor the cell survival. The survival of mutant cells is compared to that of control cells transplanted into the same mouse.

This protocol describes a straightforward and minimally invasive method for transplanting and imaging NIT-1 cells in non-obese diabetic (NOD)-severe combined immunodeficient mice challenged with splenocytes purified from spontaneously diabetic NOD mice.

Farelerde Otoimmün Diyabetin Evlat Edinilen Transfer Modelinde Greft Sağkalımının Biyolüminesan İzlenmesi

Type 1 diabetes is characterized by the autoimmune destruction of the insulin-producing beta cells of the pancreas. A promising treatment for this disease ...

Establishing a Diaphyseal Femur Fracture Model in Mice

Bones have a significant regenerative capacity. However, fracture healing is a complex process, and depending on the severity of the lesions and the age and overall health status of the patient, failures can occur, leading to delayed union or nonunion. Due to the increasing number of fractures resulting from high-energy trauma and aging, the development of innovative therapeutic strategies to improve bone repair based on the combination of skeletal/mesenchymal stem/stromal cells and biomimetic biomaterials is urgently needed. To this end, the use of reliable animal models is fundamental to better understanding the key cellular and molecular mechanisms that determine the healing outcomes. Of all the models, the mouse is the preferred research model because it offers a wide variety of transgenic strains and reagents for experimental analysis. However, the establishment of fractures in mice may be technically challenging due to their small size. Therefore, this article aims to demonstrate the procedures for the surgical establishment of a diaphyseal femur fracture in mice, which is stabilized with an intramedullary wire and resembles the most common bone repair process, through cartilaginous callus formation.

This protocol describes a surgical procedure for the establishment of a diaphyseal fracture in the femur of mice, which is stabilized with an intramedullary wire, for fracture healing studies.

Farelerde Diafiz Femur Kırığı Modelinin Kurulması

Bones have a significant regenerative capacity. However, fracture healing is a complex process, and depending on the severity of the lesions and the age ...