Gli autori desiderano ringraziare Andrew J. Dunn, uno studente eccezionale di ricerca universitari nel nostro laboratorio, per la sua assistenza tecnica e la cura per gli animali. L&#39;Istituto Nazionale di Salute concedere HD058834 e l&#39;Università del Missouri Scienze della Vita Compagnia finanziato questo lavoro.

Pre-Chirurgia Strumenti / Materiali <ul><li> Tagliafili / pinze </li><li> Garza 2 x 2 &quot;pastiglie </li><li> Riscaldamento pad </li><li> Bastoncini di nitrato d&#39;argento </li><li> Guanti chirurgici sterili </li><li> Isoflurano anestetiche per via inalatoria </li><li> Clorexidina gluconato 4% (antisettico lavaggio chirurgico) </li><li> Sterile 2-0 sutura acciaio chirurgico </li><li> 25 X 5 / 8 A gauge (autoclavato) </li><li> Hemostat (autoclavato) </li><li> Acciaio sutura chirurgica </li></ul> Procedura di chirurgia <ol><li> Creare un campo sterile. Seguire la procedura sterile. </li><li> Anestetizzare il mouse con 2 - 3% isoflurano. </li><li> Posizionare il mouse sul pad riscaldamento. </li><li> Scrub coda con una soluzione di clorexidina. </li><li> Individuare 5, 6 o 7 ° spazio intervertebrale (tra due gobbe ossea sulla coda, inizia a contare dalla fine di peli sul corpo, alla base della coda). </li><li> Usa hemostat e ago 25G per fare un foro pilota tra due vertebre, nello spazio intervertebrale. </li><li> Utilizzare i tronchesi per tagliare la sutura in acciaio 10 cm. </li><li> Rimuovere l&#39;ago ed inserire sutura in acciaio attraverso il foro, 5 cm di sutura su entrambe le estremità della coda. </li><li> Ogni lato della coda dovrebbe avere + 5 cm di sutura. </li><li> Luogo punta del pollice sulla coda. </li><li> Usa la tua mano libera e il vento la sutura in acciaio sulla punta del pollice e ruotare le estremità per formare un grande anello. La parte ferita o circolare deve essere + 3 mm di lunghezza. </li><li> Rimuovere il pollice. </li><li> Morsetto un filo di sutura con la hemostat e piegare in un ciclo più piccolo, alla fine del quale è collegato il più vicino possibile alla torsione sul circuito originale di grandi dimensioni. </li><li> Tagliare il cavo in eccesso, e piegare il filo intrecciato dietro. </li><li> Se c&#39;è un eccesso di sanguinamento, è possibile fermare con i bastoni nitrato d&#39;argento. </li><li> Spegnere il mouse isoflurano e posto in una gabbia singola casa a recuperare per 5-7 giorni prima di scarico degli arti posteriori. Gli anelli di coda rimanere impigliato se più di un topo è alloggiato insieme. </li></ol> 1. Procedura di scarico degli arti posteriori Materiale <ul><li> Dimensioni 10-24 x 4 viti, una per ogni animale. </li><li> Nylon Dado di blocco dimensioni 10-24, uno per ogni animale. </li><li> Dado di ala misura 10 x 24, due per ogni animale. </li><li> Rondella ¼ X 1, due per ogni animale. </li><li> Girevole di pesca con dimensioni moschettone # 6, 1-11/16 &quot;, e un animale per. </li><li> Metallo macchina da cucire bobina. Un animale per. </li><li> Graffetta piccola per S a forma di gancio, una per ogni animale </li><li> Pinze. </li><li> 2 x &quot;garza 2. </li><li> 2 &quot;nero carta legante morsetti. </li><li> Duct tape / lab nastro. </li><li> 1-3/8 &quot;bar in acciaio placcato scanalato che si estende leggermente oltre la lunghezza della gabbia </li><li> 50cm X 40cm x 20cm gabbia (gabbia di ratto). </li><li> Bottiglia d&#39;acqua con tubo piegato. </li><li> Filo di acciaio inossidabile, a forma di U per supportare bottiglia d&#39;acqua. </li></ul> Gabbia di installazione <ol><li> Posare il &quot;1-38 bar in acciaio placcato scanalato sopra la parte superiore della gabbia, e nastro temporalmente giù con del nastro adesivo. </li><li> Vite 1 galletto alla vite della macchina, inserire una rondella, e inserire la vite attraverso la macchina in lamiera di acciaio scanalato ± 15 cm dal bordo della gabbia. </li><li> Aggiungere un altro rondella e dado ad alette. Stringere entrambi galletti, ma non serrare, in quanto sarà necessario fare aggiustamenti successivi. </li><li> Inserire la vite di macchina attraverso il foro centrale della bobina. </li><li> Per evitare che la bobina di cadere, avvitare il dado di bloccaggio in nylon fino alla fine della vite di macchina. La bobina deve girevole liberamente. </li><li> Inserire il gancio girevole dalla pesca attraverso la parte inferiore della bobina. </li><li> Utilizzare pinze a formare una S a forma di gancio dalla graffetta. (Tagliare due centimetri dalla clip di carta a formare un gancio). </li><li> Inserire un&#39;estremità del S a forma di uncino nel foro della pesca girevole e un pizzico si chiuse con le pinze. </li><li> Posizionare il filo a forma di U, parallelamente alla vite della macchina, sulla parte interna del lato della gabbia, e piegare il back end per supportare una bottiglia piena d&#39;acqua. </li><li> Inserire l&#39;acqua in bottiglia a forma di U a filo, con il spicket rivolto verso il basso, ma non toccare il fondo. </li><li> Piegare le 2 &quot;legante morsetto aperto, in modo che non può chiudere chiudere. Basta tensione sufficiente per contenere 3 a 4 pezzi di cibo in esso senza cadere. Questo è prevenire la forza della pinza da schiacciare il cibo, o reprimere il il mouse naso. </li><li> Posto 3 a 4 pezzi di roditore chow nel morsetto legante. </li></ol> Arti posteriori di scarico di Mouse <ol><li> Inserire l&#39;estremità aperta del S a forma di uncino attraverso l&#39;anello più piccolo dell&#39;anello di coda. </li><li> Regolare l&#39;altezza del mouse svitando o avvitando il dado sulla vite inferiore della macchina. Le estremità inferiori non deve essere carico. Una volta che l&#39;altezza ottimale si ottiene serrare il dado superiore dell&#39;ala. </li><li> Riposizionare la bottiglia d&#39;acqua, e U filo in modo che il topo non può salire sul spicket con le sue arti posteriori.<html> Fissare la bottiglia d&#39;acqua con del nastro adesivo al lato della gabbia. </li><li> Posizionare il morsetto legante con il cibo sul fondo della gabbia in modo che il mouse non si può salire su di essa; nastro giù con del nastro adesivo. </li><li> Ripetere la stessa procedura se più di un animale è scaricato arti posteriori sul lato opposto della gabbia. Casa di due animali per gabbia, spazio agli animali in modo che possano quasi si toccano. </li><li> Utilizzare il X 2 2 garza per avvolgere liberamente la coda del mouse sul girevole pesce. Utilizzare un piccolo pezzo di nastro per avvolgere la garza, la garza di fissaggio alla coda. Questo passo è importante per evitare la coda da cadenti verso il basso, portando ad una pozza di sangue nella punta della coda e che la coda di divenire necrotico. </li><li> Aggiungere una piccola quantità di biancheria da letto pannocchia alla gabbia. Non aggiungere letto troppo altrimenti il ​​mouse da un cumulo di biancheria da letto e cerca di caricare arti posteriori sul letto. </li></ol> 2. Rappresentante dei risultati: Per stabilire il successo della coda-ring tecnica HU abbiamo misurato peso corporeo degli animali prima della chirurgia anello coda, e prima e dopo HU e recupero; massa muscolare soleo e massa surrenalica in tutti i gruppi. Del peso corporeo dei topi per tutto l&#39;esperimento sono mostrati in Figura 1. Del peso corporeo dei topi prima dell&#39;intervento anello di coda (24,7 ± 3,5 g) non sono risultati significativamente differenti dopo 5 giorni di recupero da un intervento chirurgico anello coda (24,3 ± 2.9g) prima di HU. Né il peso corporeo in modo significativo declino subito dopo 14 giorni di HU (22,7 ± 1.9g), 28 giorni di HU (21,3 + 2,1 g) o dopo 3 giorni dalla ripresa HU (24,0 ± 1,8 g). Anche se HU per 14 e 28 giorni ha comportato una piccola perdita (-6,8% e il 12%) ma non significativo in massa corporea, i topi completamente recuperato alla loro pre-HU del peso corporeo dopo 3 giorni di recupero. Consumo di cibo per topi di controllo ambulatoriale e topi HU è mostrata in Figura 3. Media giornaliera di cibo non era differente nei topi HU nell&#39;arco di 28 giorni rispetto ai controlli. Abbiamo osservato significativa atrofia muscolo soleo seguenti HU per il 14 e 28 giorni (-39,1% e -46,6%) che indica una procedura efficace HU (Figura 2). Inoltre questo grado di atrofia è coerente con i valori attesi letteratura per 2-4 settimane di HU 2, 7, 8. A seguito di 3 giorni di recupero da HU soleo di massa significativamente aumentata al 74% dei valori di controllo. Soleo di massa nel gruppo di recupero era significativamente maggiore rispetto ai due gruppi HU, ma ancora significativamente inferiore rispetto agli animali di controllo ambulatoriale. Surrenali pesi sono stati misurati come indicatore dello stress degli animali, sia le ghiandole surrenali a destra e sinistra sono stati asportati e pesato. I pesi medi erano paragonabili per il controllo e topi HU topi in tutti i gruppi (Figura 4). In precedenza nei ratti abbiamo dimostrato che il tasso di successo per il numero di animali all&#39;inizio del HU rispetto al numero di animali che hanno completato HU senza uscire di apparecchi sospensione (a causa di animali masticazione attraverso la coda di trazione del nastro) è stato 10 su di 12 con il Morey-Holton tecnica 1. Nessuno dei topi (n = 54) in questo studio mai sceso dal sospensione prima del completamento del periodo di HU. Abbiamo fatto comunque, hanno un mouse che ha sviluppato una coda severamente infiammate. Quando l&#39;infiammazione è diventato evidente, abbiamo rimosso l&#39;anello di coda per consentire la zona infiammata di guarire, e successivamente immesse un&#39;altra coda-ring per completare la durata di HU. In passato, quando abbiamo usato la Morey-Holton metodo di HU, di solito 1-2 eliminare i topi / gruppo perché escono dell&#39;apparato sospensione. Con il sentiero ad anello metodo non ci sono stati episodi di topi inavvertitamente uscendo dell&#39;apparato HU durante il periodo di HU per 14 o 28 giorni (n = 54 topi). <img src="/files/ftp_upload/2467/2467fig1.jpg" alt="Figura 1" /> Figura 1. Cambiamenti del peso corporeo (media ± DS). Abbreviazioni: CON: peso-cuscinetto topi di controllo (n = 76); Pre-HU: tutti i topi prima di HU (n = 54); HU14: arti posteriori topi scaricati per 14 giorni (n = 34); HU28: arti posteriori topi scaricati per 28 giorni (n = 20); REC: topi arti posteriori scaricato permesso di recuperare gabbia per 3 giorni (n = 22). Nessuna differenza significativa nel peso corporeo è stata osservata tra i gruppi. <img src="/files/ftp_upload/2467/2467fig2.jpg" alt="Figura 2" /> Figura 2. Soleo atrofia muscolare (media ± DS). Abbreviazioni: CON: peso-cuscinetto topi di controllo (n = 76); HU14: arti posteriori topi scaricati per 14 giorni (n = 34); HU28: arti posteriori topi scaricati per 28 giorni (n = 20); e REC: topi arti posteriori scaricato permesso per recuperare gabbia per 3 giorni (n = 22). * Significativamente diversi (p &lt;0,001) rispetto al peso-cuscinetto di controllo (CON). δSignificantly differenti (p &lt;0,01) di entrambi i gruppi HU. 467fig3.jpg &quot;alt =&quot; Figura 3 &quot;/&gt; Figura 3. Consumo alimentare (media ± DS). Media giornaliera di alimenti (g / die) durante peso-cuscinetto e lo scarico degli arti posteriori. Abbreviazioni: peso-cuscinetto topi di controllo (n = 76); HU: topi arti posteriori unloaded14 - 28 giorni. Nessuna differenza significativa tra i gruppi HU CON e sono stati osservati. <img src="/files/ftp_upload/2467/2467fig4.jpg" alt="Figura 4" /> Figura 4. Messa surrenale (media ± DS). Abbreviazioni: CON: peso-cuscinetto topi di controllo (n = 76); HU14: arti posteriori topi scaricati per 14 giorni (n = 34); HU28: arti posteriori topi scaricati per 28 giorni (n = 20); e REC: topi arti posteriori scaricato permesso per recuperare gabbia per 3 giorni (n = 22). Nessuna differenza significativa è stata osservata tra i gruppi.

<ol>
	<li>Brown, M., Foley, A. M., Hasser, E. M., Foley, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+alternative+method+for+hindlimb+unweighting.">An alternative method for hindlimb unweighting.</a> J Gravitational Physiol. 12, 43-50 (2005).</li><li>Fitts, R. H., Metzger, J. M., Riley, D. A., Unsworth, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+disuse:+a+comparison+of+hindlimb+suspension+and+immobilization.">Models of disuse: a comparison of hindlimb suspension and immobilization.</a> J Appl Physiol. 60, 1946-1953 (1986).</li><li>Ingalls, C. P., Warren, G. L., Armstrong, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+Ca2++transients+in+mouse+soleus+muscle+after+hindlimb+unloading+and+reloading.">Intracellular Ca2+ transients in mouse soleus muscle after hindlimb unloading and reloading.</a> Journal of Applied Physiology. 87, 386-390 (1999).</li><li>Morey, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spaceflight+and+bone+turnover:+correlation+with+a+new+rat+model+of+weightlessness.">Spaceflight and bone turnover: correlation with a new rat model of weightlessness.</a> BioScience. 29, 168-172 (1979).</li><li>Morey-Holton, E. R., Globus, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hindlimb+unloading+of+growing+rats:+a+model+for+predicting+skeletal+changes+during+space+flight.">Hindlimb unloading of growing rats: a model for predicting skeletal changes during space flight.</a> Bone. 22, 83-88 (1998).</li><li>Morey-Holton, E. R., Globus, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hindlimb+unloading+rodent+model:+technical+aspects.">Hindlimb unloading rodent model: technical aspects.</a> J Appl Physiol. 92, 1367-1377 (2002).</li><li>Thomason, D. B., Booth, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atrophy+of+the+soleus+muscle+by+hindlimb+unweighting.">Atrophy of the soleus muscle by hindlimb unweighting.</a> J Appl Physiol. 68, 1-12 (1990).</li><li>Thomason, D. B., Herrick, R. E., Surdyka, D., Baldwin, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+course+of+soleus+muscle+myosin+expression+during+hindlimb+suspension+and+recovery.">Time course of soleus muscle myosin expression during hindlimb suspension and recovery.</a> J Appl Physiol. 63, 130-137 (1987).</li></ol>

Nessun conflitto di interessi dichiarati.

Abbiamo valutato un metodo alternativo di topi scarico degli arti posteriori, che abbiamo deciso di essere di grande successo. La coda-ring metodo descritto qui è stato usato a lungo termine della sospensione degli arti posteriori, e di studiare HU recupero successivo. In ognuna di queste condizioni, non vi era alcuna evidenza di mancato adeguamento, come evidenziato dalla assunzione di cibo stabile, peso corporeo, e pesi surrenali dei topi. Questa coda anello tecnica HU è facile da eseguire e può facilmente essere incorporato con pochissima pratica chirurgica. Ci sono diversi vantaggi di coda-ring metodo rispetto al tradizionale Morey-Holton 5, 6 metodo. In primo luogo, la pelle e l&#39;impianto sito anello sulla coda che sono sempre visibili, per cui in caso di problemi è evidente subito, non solo alla fine del periodo di sospensione. In secondo luogo, gli animali non sono in grado di uscire dell&#39;apparato sospensione in qualsiasi momento durante HU, ovviando alla necessità di fare una determinazione di se mantenere un mouse o non nel set di dati. Inoltre, i topi non si preoccupano l&#39;apparato ring e quando vengono rilasciate da HU per il recupero, non manomettere le loro code, consentendo una fase di ripresa senza soluzione di continuità dopo HU. Infine, arti posteriori topi scariche, con la coda anello metodo di mantenere il proprio peso corporeo meglio di arti posteriori topi scaricato dal Morey-Holton coda trazione tecnica. Nelle nostre mani dopo 14 giorni di HU abbiamo osservato una piccola perdita (-6,8%) ma non significativo di massa corporea. Mentre Ingalls et al. Osservata una diminuzione significativa -12% del peso corporeo nei topi dopo 14 giorni di HU dal Morey-Holton metodo 3. Anche se Ingalls non ha segnalato pesi surrenali, sembra che la nostra coda anello metodo conferisce meno stress sul mouse (pesi surrenalica nei nostri topi HU non sono differenti rispetto ai controlli) e una migliore manutenzione del peso corporeo durante tutto il periodo di scarico degli arti posteriori. In sintesi, un metodo anello coda degli arti posteriori di scarico è stato sviluppato e testato su topi HU per 14 e 28 giorni, e su topi restituito al recupero gabbia per 3 giorni dopo HU. Sulla base dei pesi surrenali, massa corporea e l&#39;assunzione di cibo, i topi sembrano essere adattato bene alla coda-ring apparato. La coda-ring scarico degli arti posteriori è un metodo utile, semplice alternativa al tradizionale Morey-Holton tecnica di scarico degli arti posteriori.

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Wire cutters/pliers</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Ace Hardware </td>
<td>84-056</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Gauze</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>22-037-901</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Heating pad</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sunbeam</td>
<td>Z-1228-001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Silver nitrate applicators</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>ARZOL</td>
<td>0001-2</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Isoflurane,USP</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Novaplus</td>
<td>NDC 0409-3292-49</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Chlorhexidine Gluconate 4%</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Purdue Products L.P</td>
<td>NDC 67618-200-01</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sterile 2-0 surgical steel suture</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Ethicon</td>
<td>SS-28</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>25 X 5/8 A gauge needle</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Terumo</td>
<td>NN 2516R</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hemostat/ needle holder</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>12500-12</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Size 10-24 X 4 machine screws</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hillman The Fastener Center</td>
<td>90272</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Nylon lock nut size 10 X 24</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hillman The Fastener Center</td>
<td>180141</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Wing nut size 10 X 24</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hillman The Fastener Center</td>
<td>180243</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fender Washer size &frac14; X 1</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hillman The Fastener Center</td>
<td>290012</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fishing swivel with snap hook size #6, 1-11/16&#x201D;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bass Pro Shop</td>
<td>38-481-554-01</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Metal sewing machine bobbin.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Singer</td>
<td>45785</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Paper clip</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Office Depot</td>
<td>221720</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>2&#x201D; black paper binder clamps.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Office Depot</td>
<td>308957</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Scotch Multi-Use Duct Tape</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Office Depot</td>
<td>790710</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1-3/8&#x201D; Plated slotted steel bar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Home Depot</td>
<td>548932</td>
<td>Extends slightly beyond the full length of the cage</td>
</tr>
<tr>
<td>50cm X 40cm X 20cm cage (rat cage</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Alternative Design Manufacturing</td>
<td>RC88D-PC</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Water Bottle</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Alternative Design Manufacturing</td>
<td>WB16FS</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Stainless Steel wire</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Small Parts, Inc</td>
<td>SWX-4029</td>
<td>U-shaped wire to support water bottle</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

an alternant method to the traditional nasa hindlimb unloading model in mice

Il Morey-Holton arti posteriori scarico (HU) è un metodo ampiamente accettato National Aeronautics and Space Administration (NASA) con base a terra modello per lo studio disuso-atrofia nei roditori 4-6. Il nostro studio ha valutato un metodo alternant al gold-standard Morey-Holton HU coda trazione tecnica nei topi. Cinquantaquattro topi di sesso femminile (4-8 mesi). HU sono stati per 14 giorni (n = 34) o 28 giorni (n = 20). Recupero da HU è stata valutata dopo 3 giorni di deambulazione normale gabbia seguenti HU (n = 22). Di età compresa tra i topi abbinati (n = 76) è servito come peso-cuscinetto controlli. Prima di HU un anello di coda si è formata con un filo di 2-0 sterile acciaio chirurgico che è stato passato attraverso il 5 °, 6 ° o 7 ° inter-vertebrali spazio disco e racchiusi in un anello da cui sono stati sospesi i topi. Posizione vertebrale per la coda-anello è stato scelto per bilanciare opportunamente il peso corporeo dell&#39;animale senza interferire con la defecazione. Abbiamo determinato il successo di questa nuova tecnica HU, valutando il peso corporeo prima e dopo HU, il grado di atrofia soleo, e HU massa surrenalica seguente. Il peso corporeo dei topi prima di HU (24,3 ± 2.9g) non in modo significativo declino subito dopo l&#39;14 quinquies del HU (22,7 ± 1.9g), 28d di HU (21,3 + 2,1 g) o dopo tre giorni di recupero (24,0 ± 1,8 g) . Massa muscolare soleo significativamente diminuito (-39,1% e -46,6%) a seguito HU per 14 giorni e 28 giorni rispettivamente (p &lt;0,001). A seguito di 3 giorni di massa recupero soleo significativamente aumentata al 74% dei valori di controllo. Pesi surrenali di topi HU non erano differenti rispetto ai topi di controllo. Il successo del nostro metodo romanzo di HU è evidenziato dal mantenimento del peso dell&#39;animale, paragonabile pesi ghiandola surrenale, e l&#39;atrofia soleo seguenti HU, corrispondenti ai valori attesi letteratura 2, 7, 8. I vantaggi principali di questo metodo HU includono: 1) la facilità d&#39;esame coda durante la sospensione, 2) ha ridotto la probabilità di code cianotico, infiammato, e / o necrotiche frequentemente osservati con la coda-taping e HU, 3) senza possibilità di topi masticare la trazione nastro e in uscita dell&#39;apparato sospensione e 4) e un rapido recupero dell&#39;attività gabbia normale subito dopo l&#39;HU.

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An Alternant Method to the Traditional NASA Hindlimb Unloading Model in Mice

Abbiamo sviluppato un modello di scarico degli arti posteriori alternant nei topi. Il vantaggio principale del nostro arti posteriori scarico coda anello metodo più convenzionale Morey-Holton coda trazione tecnica è una procedura semplice semplice che riduce al minimo lo stress sull&#39;animale.

Un metodo alternant al tradizionale modello della NASA arti posteriori di scarico in topi

The Morey-Holton hindlimb unloading (HU) method is a widely accepted National Aeronautics and Space Administration (NASA) ground-based model for studying ...

an-alternant-method-to-traditional-nasa-hindlimb-unloading-model

Research

JoVE Journal

Biology

20.1K Views.  University of Missouri, Columbia. Abbiamo sviluppato un modello di scarico degli arti posteriori alternant nei topi. Il vantaggio principale del nostro arti posteriori scarico coda anello metodo più convenzionale Morey-Holton coda trazione tecnica è una procedura semplice semplice che riduce al minimo lo stress sull'animale.

Video: An Alternant Method to the Traditional NASA Hindlimb Unloading Model in Mice

Murine Model of Hindlimb Ischemia 

In the United States, peripheral arterial disease (PAD) affects about 10 million individuals, and is also prevalent worldwide. Medical therapies for symptomatic relief are limited. Surgical or endovascular interventions are useful for some individuals, but long-term results are often disappointing. As a result, there is a need for developing new therapies to treat PAD. The murine hindlimb ischemia preparation is a model of PAD, and is useful for testing new therapies. When compared to other models of tissue ischemia such as coronary or cerebral artery ligation, femoral artery ligation provides for a simpler model of ischemic tissue. Other advantages of this model are the ease of access to the femoral artery and low mortality rate. 
In this video, we demonstrate the methodology for the murine model of unilateral hindimb ischemia. The specific materials and procedures for creating and evaluating the model will be described, including the assessment of limb perfusion by laser Doppler imaging. This protocol can also be utilized for the transplantation and non-invasive tracking of cells, which is demonstrated by Huang et al.1.

Murine Model of Hindlimb Ischemia

The surgical procedure for induction of unilateral hindlimb ischemia is demonstrated, with confirmation of ischemia by laser Doppler perfusion imaging.

Modello murino di ischemia degli arti posteriori

In the United States, peripheral arterial disease (PAD) affects about 10 million individuals, and is also prevalent worldwide.  Medical therapies for ...

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Biologia

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the function and regulation of protein folding was studied in vitro, in isolated tissue culture cells and in unicellular organisms. Recent studies have uncovered links between protein homeostasis (proteostasis), metabolism, development, aging, and temperature-sensing. These findings have led to the development of new tools for monitoring protein folding in the model metazoan organism Caenorhabditis elegans. In our laboratory, we combine behavioral assays, imaging and biochemical approaches using temperature-sensitive or naturally occurring metastable proteins as sensors of the folding environment to monitor protein misfolding. Behavioral assays that are associated with the misfolding of a specific protein provide a simple and powerful readout for protein folding, allowing for the fast screening of genes and conditions that modulate folding. Likewise, such misfolding can be associated with protein mislocalization in the cell. Monitoring protein localization can, therefore, highlight changes in cellular folding capacity occurring in different tissues, at various stages of development and in the face of changing conditions. Finally, using biochemical tools ex vivo, we can directly monitor protein stability and conformation. Thus, by combining behavioral assays, imaging and biochemical techniques, we are able to monitor protein misfolding at the resolution of the organism, the cell, and the protein, respectively.

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Hybrid-Cut: An Improved Sectioning Method for Recalcitrant Plant Tissue Samples

Maintaining plant section integrity is essential for studying detailed anatomical structures at the cellular, tissue, or even organ level. However, some plant cells have rigid cell walls, tough fibers and crystals (calcium oxalate, silica, etc.), and high water content that often disrupt tissue integrity during plant tissue sectioning.
This study establishes a simple Hybrid-Cut tissue sectioning method. This protocol modifies a paraffin-based sectioning technique and improves the integrity of tissue sections from different plants. Plant tissues were embedded in paraffin before sectioning in a cryostat at -16 &#176;C. Sectioning under low temperature hardened the paraffin blocks, reduced tearing and scratching, and improved tissue integrity significantly. This protocol was successfully applied to calcium oxalate-rich Phalaenopsis orchid tissues as well as recalcitrant tissues such as reproductive organs and leaves of rice, maize, and wheat. In addition, the high quality of tissue sections from Hybrid-Cut could be used in combination with in situ hybridization (ISH) to provide spatial expression patterns of genes of interest. In conclusion, this protocol is particularly useful for recalcitrant plant tissue containing high crystal or silica content. Good quality tissue sections enable morphological and other biological studies.

This protocol describes a simple Hybrid-Cut tissue sectioning method that is useful for recalcitrant plant tissues. Good quality tissue sections enable anatomical studies and other biological studies including in situ hybridization (ISH).

Hybrid-Cut: Un metodo sezionamento migliorato per Recalcitrante tessuti vegetali Campioni

Maintaining plant section integrity is essential for studying detailed anatomical structures at the cellular, tissue, or even organ level. However, some ...

A Method to Assess Bacteriocin Effects on the Gut Microbiota of Mice

Very intriguing questions arise with our advancing knowledge on gut microbiota composition and the relationship with health, particularly relating to the factors that contribute to maintaining the population balance. However, there are limited available methodologies to evaluate these factors. Bacteriocins are antimicrobial peptides produced by many bacteria that may confer a competitive advantage for food acquisition and/or niche establishment. Many probiotic lactic acid bacteria (LAB) strains have great potential to promote human and animal health by preventing the growth of pathogens. They can also be used for immuno-modulation, as they produce bacteriocins. However, the antagonistic activity of bacteriocins is normally determined by laboratory bioassays under well-defined but over-simplified conditions compared to the complex gut environment in humans and animals, where bacteria face multifactorial influences from the host and hundreds of microbial species sharing the same niche. This work describes a complete and efficient procedure to assess the effect of a variety of bacteriocins with different target specificities in a murine system. Changes in the microbiota composition during the bacteriocin treatment are monitored using compositional 16S rDNA sequencing. Our approach uses both the bacteriocin producers and their isogenic non-bacteriocin-producing mutants, the latter giving the ability to distinguish bacteriocin-related from non-bacteriocin-related modifications of the microbiota. The fecal DNA extraction and 16S rDNA sequencing methods are consistent and, together with the bioinformatics, constitute a powerful procedure to find faint changes in the bacterial profiles and to establish correlations, in terms of cholesterol and triglyceride concentration, between bacterial populations and health markers. Our protocol is generic and can thus be used to study other compounds or nutrients with the potential to alter the host microbiota composition, either when studying toxicity or beneficial effects.

Bacteriocins are believed to play a key role in defining microbial diversity in different ecological niches. Here, we describe an efficient procedure to assess how bacteriocins affect gut microbiota composition in an animal model.

Metodo per valutare gli effetti del batterioiocinio sul microbiota di gatti dei topi

Very intriguing questions arise with our advancing knowledge on gut microbiota composition and the relationship with health, particularly relating to the ...

A Simple and Efficient Method for In Vivo Cardiac-specific Gene Manipulation by Intramyocardial Injection in Mice

Gene manipulation specifically in the heart significantly potentiate the investigation of cardiac disease pathomechanisms and their therapeutic potential. In vivo cardiac-specific gene delivery is commonly achieved by either systemic or local delivery. Systemic injection via tail vein is easy and efficient in manipulating cardiac gene expression by using recombinant adeno-associated virus 9 (AAV9). However, this method requires a relatively high amount of vector for efficient transduction, and may result in nontarget organ gene transduction. Here, we describe a simple, efficient, and time-saving method of intramyocardial injection for in vivo cardiac-specific gene manipulation in mice. Under anesthesia (without ventilation), the pectoral major and minor muscles were bluntly dissected, and the mouse heart was quickly exposed by manual externalization through a small incision at the fourth intercostal space. Subsequently, adenovirus encoding luciferase (Luc) and vitamin D receptor (VDR), or short hairpin RNA (shRNA) targeting VDR, was injected with a Hamilton syringe into the myocardium. Subsequent in vivo imaging demonstrated that luciferase was successfully overexpressed specifically in the heart. Moreover, Western blot analysis confirmed the successful overexpression or silencing of VDR in the mouse heart. Once mastered, this technique can be used for gene manipulation, as well as injection of cells or other materials such as nanogels in the mouse heart.

A Simple and Efficient Method for In Vivo Cardiac-specific Gene Manipulation by Intramyocardial Injection in Mice

Here we present a protocol for cardiac-specific gene manipulation in mice. Under anesthesia, the mouse hearts were externalized through the fourth intercostal space. Subsequently, adenoviruses encoding specific genes were injected with a syringe into the myocardium, followed by protein expression measurement via in vivo imaging and Western blot analysis.

Un metodo semplice ed efficace per In Vivo manipolazione del Gene specifico tramite l'iniezione intramiocardica in topi

Gene manipulation specifically in the heart significantly potentiate the investigation of cardiac disease pathomechanisms and their therapeutic potential. ...

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A)

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer progression. How the chromosomal location and function of a centromere (i.e., centromere identity) are determined and participate in accurate chromosome segregation is a fundamental question. CENP-A is proposed to be the non-DNA indicator (epigenetic mark) of centromere identity, and CENP-A ubiquitylation is required for CENP-A deposition at the centromere, inherited through dimerization between cell division, and indispensable to cell viability.
Here we describe mass spectrometry analysis to identify ubiquitylation of EYFP-CENP-A K124R mutant suggesting that ubiquitylation at a different lysine is induced because of the EYFP tagging in the CENP-A K124R mutant protein. Lysine 306 (K306) ubiquitylation in EYFP-CENP-A K124R was successfully identified, which corresponds to lysine 56 (K56) in CENP-A through mass spectrometry analysis. A caveat is discussed in the use of GFP/EYFP or the tagging of high molecular weight protein as a tool to analyze the function of a protein. Current technical limit is also discussed for the detection of ubiquitylated bands, identification of site-specific ubiquitylation(s), and visualization of ubiquitylation in living cells or a specific single cell during the whole cell cycle.
The method of mass spectrometry analysis presented here can be applied to human CENP-A protein with different tags and other centromere-kinetochore proteins. These combinatory methods consisting of several assays/analyses could be recommended for researchers who are interested in identifying functional roles of ubiquitylation.

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A EYFP-CENP-A

CENP-A ubiquitylation is an important requirement for CENP-A deposition at the centromere, inherited through dimerization between cell division, and indispensable to cell viability. Here we describe mass spectrometry analysis to identify ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A) protein.

Analisi della spettrometria di massa per identificare l'ubiquilazione del CENP-A con tag EYFP (EYFP-CENP-A)

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer ...

An Antegrade Perfusion Method for Cardiomyocyte Isolation from Mice

In basic research using mouse heart, isolating viable individual cardiomyocytes is a crucial technical step to overcome. Traditionally, isolating cardiomyocytes from rabbits, guinea pigs or rats has been performed via retrograde perfusion of the heart with enzymes using a Langendorff apparatus. However, a high degree of skill is required when this method is used with a small mouse heart. An antegrade perfusion method that does not use a Langendorff apparatus was recently reported for the isolation of mouse cardiomyocytes. We herein report a complete protocol for the improved antegrade perfusion of the excised heart to isolate individual heart cells from adult mice (8 - 108 weeks old). Antegrade perfusion is performed by injecting perfusate near the apex of the left ventricle of the excised heart, the aorta of which was clamped, using an infusion pump. All procedures are carried out on a pre-warmed heater mat under a microscope, which allows for the injection and perfusion processes to be monitored. The results suggest that ventricular and atrial myocytes, and fibroblasts can be well isolated from a single adult mouse simultaneously.

We developed a simple method for isolating high quality individual mouse heart cells by the antegrade perfusion technique. This method is Langendorff-free and useful for isolating ventricular and atrial myocytes or interstitial cells, such as cardiac fibroblasts or progenitors.

Un metodo di perfusione antegrada per l'isolamento dei cardiomiociti dai topi

In basic research using mouse heart, isolating viable individual cardiomyocytes is a crucial technical step to overcome. Traditionally, isolating ...

Imaging Molecular Adhesion in Cell Rolling by Adhesion Footprint Assay

Rolling adhesion, facilitated by selectin-mediated interactions, is a highly dynamic, passive motility in recruiting leukocytes to the site of inflammation. This phenomenon occurs in postcapillary venules, where blood flow pushes leukocytes in a rolling motion on the endothelial cells. Stable rolling requires a delicate balance between adhesion bond formation and their mechanically-driven dissociation, allowing the cell to remain attached to the surface while rolling in the direction of flow. Unlike other adhesion processes occurring in relatively static environments, rolling adhesion is highly dynamic as the rolling cells travel over thousands of microns at tens of microns per second. Consequently, conventional mechanobiology methods such as traction force microscopy are unsuitable for measuring the individual adhesion events and the associated molecular forces due to the short timescale and high sensitivity required. Here, we describe our latest implementation of the adhesion footprint assay to image the P-selectin: PSGL-1 interactions in rolling adhesion at the molecular level. This method utilizes irreversible DNA-based tension gauge tethers to produce a permanent history of molecular adhesion events in the form of fluorescence tracks. These tracks can be imaged in two ways: (1) stitching together thousands of diffraction-limited images to produce a large field of view, enabling the extraction of adhesion footprint of each rolling cell over thousands of microns in length, (2) performing DNA-PAINT to reconstruct super-resolution images of the fluorescence tracks within a small field of view. In this study, the adhesion footprint assay was used to study HL-60 cells rolling at different shear stresses. In doing so, we were able to image the spatial distribution of the P-selectin: PSGL-1 interaction and gain insight into their molecular forces through fluorescence intensity. Thus, this method provides the groundwork for the quantitative investigation of the various cell-surface interactions involved in rolling adhesion at the molecular level.

This protocol presents the experimental procedures to perform the adhesion footprint assay to image the adhesion events during fast cell rolling adhesion.

Imaging dell'adesione molecolare nel laminaggio cellulare mediante analisi dell'impronta di adesione

Rolling adhesion, facilitated by selectin-mediated interactions, is a highly dynamic, passive motility in recruiting leukocytes to the site of ...

Bioluminescent Monitoring of Graft Survival in an Adoptive Transfer Model of Autoimmune Diabetes in Mice

Type 1 diabetes is characterized by the autoimmune destruction of the insulin-producing beta cells of the pancreas. A promising treatment for this disease is the transplantation of stem cell-derived beta cells. Genetic modifications, however, may be necessary to protect the transplanted cells from persistent autoimmunity. Diabetic mouse models are a useful tool for the preliminary evaluation of strategies to protect transplanted cells from autoimmune attack. Described here is a minimally invasive method for transplanting and imaging cell grafts in an adoptive transfer model of diabetes in mice. In this protocol, cells from the murine pancreatic beta cell line NIT-1 expressing the firefly luciferase transgene luc2 are transplanted subcutaneously into immunodeficient non-obese diabetic (NOD)-severe combined immunodeficient (scid) mice. These mice are simultaneously injected intravenously with splenocytes from spontaneously diabetic NOD mice to transfer autoimmunity. The grafts are imaged at regular intervals via non-invasive bioluminescent imaging to monitor the cell survival. The survival of mutant cells is compared to that of control cells transplanted into the same mouse.

This protocol describes a straightforward and minimally invasive method for transplanting and imaging NIT-1 cells in non-obese diabetic (NOD)-severe combined immunodeficient mice challenged with splenocytes purified from spontaneously diabetic NOD mice.

Monitoraggio bioluminescente della sopravvivenza del trapianto in un modello di trasferimento adottivo del diabete autoimmune nei topi

Type 1 diabetes is characterized by the autoimmune destruction of the insulin-producing beta cells of the pancreas. A promising treatment for this disease ...

Establishing a Diaphyseal Femur Fracture Model in Mice

Bones have a significant regenerative capacity. However, fracture healing is a complex process, and depending on the severity of the lesions and the age and overall health status of the patient, failures can occur, leading to delayed union or nonunion. Due to the increasing number of fractures resulting from high-energy trauma and aging, the development of innovative therapeutic strategies to improve bone repair based on the combination of skeletal/mesenchymal stem/stromal cells and biomimetic biomaterials is urgently needed. To this end, the use of reliable animal models is fundamental to better understanding the key cellular and molecular mechanisms that determine the healing outcomes. Of all the models, the mouse is the preferred research model because it offers a wide variety of transgenic strains and reagents for experimental analysis. However, the establishment of fractures in mice may be technically challenging due to their small size. Therefore, this article aims to demonstrate the procedures for the surgical establishment of a diaphyseal femur fracture in mice, which is stabilized with an intramedullary wire and resembles the most common bone repair process, through cartilaginous callus formation.

This protocol describes a surgical procedure for the establishment of a diaphyseal fracture in the femur of mice, which is stabilized with an intramedullary wire, for fracture healing studies.

Stabilire un modello di frattura del femore diafisario nei topi

Bones have a significant regenerative capacity. However, fracture healing is a complex process, and depending on the severity of the lesions and the age ...