המחברים מבקשים להודות אנדרו J דאן, תלמידה מצטיינת לתואר מחקר במעבדה שלנו, לקבלת סיוע טכני שלו ודואג לבעלי החיים. מכון הבריאות הלאומי מענק HD058834 של אוניברסיטת מיזורי מדעי החיים המלגה במימון העבודה הזאת.

טרום ניתוח מכשירים / חומרים <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חוט חותכי / צבת </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גזה 2 x 2 &quot;רפידות </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כרית חימום </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקלות כסף חנקתי </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כפפות מנתחים סטרילית </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שאיפה Isoflurane הרדמה </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Chlorhexidine gluconate 4% (לקרצף כירורגית אנטיספטי) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פלדה סטרילי 2-0 כירורגי תפר </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 25 X 5 / 8 מחט מד (Autoclaved) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Hemostat (Autoclaved) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פלדה תפר כירורגי </li></ul> ניתוח נוהל <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יצירת שדה סטרילי. בצע הליך סטרילי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדימי עכבר עם 2 - 3% isoflurane. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המקום העכבר על כרית חימום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשפשף עם זנב פתרון chlorhexidine. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אתר 5, 6, 7 או ה החלל חולייתי (בין שני גרמי בליטות על הזנב, מתחילים לספור מהקצה של שיער הגוף, בבסיס הזנב). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש Hemostat ו 25 גרם מחט לעשות חור טייס בין שתי חוליות, לחלל חולייתי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במספרי תיל כדי לחתוך את תפר פלדה 10 ס&quot;מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את המחט והכנס תפר פלדה דרך חור, 5 ס&quot;מ על תפר צד של הזנב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כל צד של הזנב צריך + 5 ס&quot;מ של תפר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המקום קצה האגודל על הזנב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש יד חופשית שלך והרוח תפר פלדה על קצה האגודל ולסובב את הקצוות כדי ליצור לולאה גדולה. החלק פצע עגול או צריך להיות + 3 מ&quot;מ אורך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את האגודל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קלאמפ קווצת שיער של תפר עם hemostat לבין לכופף אותו לתוך לולאה קטנה יותר, סוף המצורף ככל האפשר על מנת לסובב את הלולאה גדול המקורי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חתוך חוט עודף, לכופף את החוט וסובב בחזרה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם יש דימום יתר, ניתן לעצור אותו עם מקלות כסף חנקתי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כבה את העכבר isoflurane ומקום בכלוב בית אחד כדי להתאושש במשך 5-7 ימים לפני hindlimb פריקה. הטבעות זנב להסתבך אם יש יותר מאחת עכבר שוכן יחד. </li></ol> 1. Hindlimb נוהל פריקה חומרים <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גודל 10-24 X 4 ברגים במכונה, אחד לכל חיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אגוז לנעול ניילון בגודל 10-24, אחד לכל חיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אגף אגוז 10 בגודל 24 X, שניים לכל בעלי החיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גודל Washer ¼ 1 X, שתי לכל בעלי החיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דייג המסתובב עם גודל הצמד וו # 6, 1-11/16 &quot;, ואף אחד לכל חיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכונת תפירה מתכת סיסה. אחת לכל חיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נייר קליפ קטן עבור וו בצורת האות S, אחד לכל חיה </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פלייר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 2 x 2 &quot;גזה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 2 &quot;קלסר שחור מהדק נייר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סרט דביק קלטת / מעבדה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 1-3/8 &quot;בר מצופים פלדה מחוררת המשתרע מעט מעבר באורך מלא של הכלוב </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 50 ס&quot;מ X 40 ס&quot;מ X 20 ס&quot;מ כלוב (כלוב חולדה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בקבוק מים עם צינור bended. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נירוסטה תיל פלדה, בצורת U לתמוך בקבוק מים. </li></ul> קייג&#39; ההתקנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את &quot;1-38 פלדה מצופים בר מחוררת מעל הכלוב, ואת קלטת אותה temporally למטה עם סרט דביק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בורג 1 אגוז כנף לדפוק את המכשיר, להוסיף מכונת כביסה, והכנס את השוקת בורג במכונה פלדה מחוררת ± 15 ס&quot;מ מהקצה של הכלוב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף מכונת כביסה אגוז כנף. הדקו הן אגוזים כנף, אך לא להדק באופן מלא, שכן יהיה צורך לעשות התאמות מאוחר יותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את בורג במכונה דרך החור במרכז של סיסה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי למנוע את הסליל מליפול, לדפוק את אגוז לנעול ניילון לסוף בורג במכונה. סיסה אמור להסתובב בחופשיות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את הצמד וו מן המסתובב הדיג דרך החלק התחתון של סיסה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש צבת להקים וו בצורת האות S מ מהדק. (גזור מן 2cm קליפ נייר בצורת וו). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס קצה אחד של וו בצורת האות S דרך החור של המסתובב הדיג ולצבוט אותו בחוזקה עם צבת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את החוט בצורת U, במקביל בורג במכונה, על החלק הפנימי של הצד כלוב, לכופף את הקצוות חזרה לתמוך בקבוק מים מלא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את בקבוק מים לתוך חוט בצורת U, עם spicket פונה כלפי מטה, אבל לא נוגע בתחתית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בנד 2 &quot;קלסר מהדק פתוחים, כך שהם לא יכולים לסגור קרוב. פשוט מתח מספיק כדי להחזיק 3-4 חתיכות של מזון זה בלי זה נושר. זה מונע את הכוח של מהדק מן ריסוק המזון, או שתסגור על האף העכבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקום 3-4 חתיכות של מכרסם האוכל לתוך מהדק את הקלסר. </li></ol> Hindlimb פריקה של עכבר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את הקצה הפתוח של וו בצורת האות S דרך טבעת קטנה יותר של טבעת הזנב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאם את גובה העכבר על ידי הידוק או התרופפות אגוז כנף נמוכה על בורג במכונה. הגפיים התחתונות לא צריך להיות נשיאת משקל. לאחר גובה אופטימלי מושגת להדק את האום האגף העליון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מיקום מחדש של בקבוק מים, בצורת חוט, כך העכבר לא יכול לטפס על spicket עם hindlimbs שלה.<html> אבטח את בקבוק המים בנייר דבק בצד הכלוב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקמו את מהדק קלסר עם אוכל על תחתית הכלוב, כך העכבר לא יכול לטפס על זה, קלטת אותו עם סרט דביק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על אותו הליך, אם אחד או יותר של בעלי חיים היא פרקו hindlimb בצד השני של הכלוב. בית שתי חיות לכל כלוב; בחלל בעלי חיים, כך שהם יכולים כמעט לגעת זה בזה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש 2 X 2 גזה כדי רופף לעטוף את הזנב של העכבר על המסתובב הדגים. השתמש פיסה קטנה של סרט כדי לעטוף התחבושת, הבטחת גזה את הזנב. שלב זה חשוב כדי למנוע את הזנב שמוט כלפי מטה, המוביל דם נקווה קצה הזנב כי הזנב הופך נמקי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת כמות קטנה של מצע קלח לכלוב. אל תוסיף יותר מדי מצעים אחרת העכבר יהיה מן תלולית של מצעים ניסיון לטעון hindlimbs על מצע. </li></ol> 2. נציג תוצאות: כדי להקים את ההצלחה של הטכניקה HU זנב טבעת מדדנו משקל גוף החיה לפני הניתוח טבעת הזנב, ולפני ואחרי HU והתאוששות; מסה soleus שריר, ומסת הכליה בכל הקבוצות. משקולות גוף של עכברים במשך הניסוי מוצגות באיור 1. משקולות גוף של עכברים לפני הניתוח זנב טבעת (24.7 ± 3.5G) לא היו שונים משמעותית אחרי 5 ימים של התאוששות מהניתוח זנב טבעת (24.3 ± 2.9g) לקראת האוניברסיטה. גם לא ירידה משמעותית במשקל הגוף מיד לאחר 14 ימים של האוניברסיטה העברית (22.7 ± 1.9g), 28 ימים של האוניברסיטה העברית (21.3 + 2.1g) או לאחר 3 ימי התאוששות מן האוניברסיטה העברית (24.0 ± 1.8g). למרות האוניברסיטה העברית עבור 14 ו 28 ימים הביא להפסד קטן (-6.8% ו 12%) אך לא משמעותי המוני הגוף, העכברים התאושש באופן מלא מראש HU שלהם משקולות הגוף אחרי 3 ימים של התאוששות. צריכת מזון עכברים שליטה אמבולטורי ועכברים האוניברסיטה העברית מוצגת באיור 3. מזון ממוצע הצריכה היומית לא היה שונה בעכברים HU על 28 ימים בהשוואה לקבוצת הביקורת. צפינו ניוון שרירים משמעותי soleus הבאים האוניברסיטה העברית במשך 14 ו - 28 ימים (-39.1% ו -46.6%) המציין הליך יעיל HU (איור 2). יתר על כן זו דרגת ניוון עולה בקנה אחד עם הערכים בספרות הצפוי 2-4 שבועות של האוניברסיטה העברית 2, 7, 8. לאחר 3 ימים של התאוששות מן האוניברסיטה העברית soleus מסה משמעותית ל -74% של ערכים שליטה. מסה Soleus בקבוצה התאוששות משמעותית יותר מאשר בשתי הקבוצות האוניברסיטה העברית, אבל עדיין משמעותית פחות חיות בקרת אמבולטורי. משקולות הכליה נמדדו אינדיקטור ללחץ בעלי חיים, הן את בלוטת יותרת הכליה מימין ומשמאל היו נכרת ומשקלו. משקולות הממוצע היה דומה לבקרה HU עכברים עכברים בכל הקבוצות (איור 4). בעבר היינו אצל חולדות הראו כי שיעור ההצלחה עבור מספר בעלי חיים בתחילת HU לעומת מספר החיות השלימה HU בלי יוצא של מנגנון ההשעיה (עקב חיות לעיסה באמצעות קלטת זנב המתיחה) היה 10 מתוך של 12 בטכניקה מורי הולטון-1. אף אחד העכברים (n = 54) במחקר זה מעולם לא ירדה מן ההשעיה לפני השלמת תקופת האוניברסיטה העברית. עשינו זאת, יש עכבר אחד שהתפתח זנב מודלק קשות. כאשר דלקת התברר, הסרנו את הטבעת הזנב כדי לאפשר את האזור מודלק לרפא, ולאחר מכן להציב עוד זנב טבעת כדי להשלים את משך הזמן של האוניברסיטה העברית. בעבר, כאשר השתמשנו בשיטת מורי-הולטון של האוניברסיטה העברית, אנו בדרך כלל לחסל 1-2 עכברים / קבוצה, כי הם באים מתוך מנגנון ההשעיה. בשיטה שובל, הטבעת לא היו פרקים של עכברים בשוגג יוצא של המנגנון האוניברסיטה העברית בתקופת האוניברסיטה העברית במשך 14 או 28 ימים (n = 54 עכברים). <img src="/files/ftp_upload/2467/2467fig1.jpg" alt="איור 1" /> באיור 1. משקל גוף שינויים (ממוצע ± SD). קיצורים: CON: נושאת משקל העכברים הביקורת (n = 76); Pre-HU: כל העכברים לפני האוניברסיטה (n = 54); HU14: hindlimb עכברים פרקו למשך 14 יום (n = 34); HU28: hindlimb עכברים פרקו עבור 28 ימים (n = 20); REC: עכברים hindlimb פרקו מותר כלוב להתאושש במשך 3 ימים (n = 22). הבדלים משמעותיים במשקל הגוף נצפו בין הקבוצות. <img src="/files/ftp_upload/2467/2467fig2.jpg" alt="איור 2" /> 2. ניוון שרירים איור Soleus (ממוצע ± SD). קיצורים: CON: נושאת משקל העכברים הביקורת (n = 76); HU14: hindlimb עכברים פרקו למשך 14 יום (n = 34); HU28: hindlimb עכברים פרקו במשך 28 ימים (n = 20); ו REC: עכברים hindlimb פרקו מותר לכלוב להתאושש במשך 3 ימים (n = 22). * שונה באופן משמעותי (p &lt;0.001) מאשר השליטה נושאת משקל (CON). שונה δSignificantly (p &lt;0.01) מאשר שתי הקבוצות האוניברסיטה העברית. 467fig3.jpg &quot;alt =&quot; איור 3 &quot;/&gt; איור 3. צריכת מזון (ממוצע ± סטיית תקן). ממוצע צריכת המזון היומית (גרם / יום) במהלך נושאות משקל ו hindlimb פריקה. קיצורים: נושאת משקל העכברים הביקורת (n = 76), האוניברסיטה העברית: עכברים hindlimb unloaded14 - 28 ימים. אין הבדלים משמעותיים בין CON וקבוצות HU נצפו. <img src="/files/ftp_upload/2467/2467fig4.jpg" alt="איור 4" /> איור 4. המוניים הכליה (ממוצע ± SD). קיצורים: CON: נושאת משקל העכברים הביקורת (n = 76); HU14: hindlimb עכברים פרקו למשך 14 יום (n = 34); HU28: hindlimb עכברים פרקו במשך 28 ימים (n = 20); ו REC: עכברים hindlimb פרקו מותר לכלוב להתאושש במשך 3 ימים (n = 22). הבדלים משמעותיים נצפו בין הקבוצות.

<ol>
	<li>Brown, M., Foley, A. M., Hasser, E. M., Foley, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+alternative+method+for+hindlimb+unweighting.">An alternative method for hindlimb unweighting.</a> J Gravitational Physiol. 12, 43-50 (2005).</li><li>Fitts, R. H., Metzger, J. M., Riley, D. A., Unsworth, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+disuse:+a+comparison+of+hindlimb+suspension+and+immobilization.">Models of disuse: a comparison of hindlimb suspension and immobilization.</a> J Appl Physiol. 60, 1946-1953 (1986).</li><li>Ingalls, C. P., Warren, G. L., Armstrong, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+Ca2++transients+in+mouse+soleus+muscle+after+hindlimb+unloading+and+reloading.">Intracellular Ca2+ transients in mouse soleus muscle after hindlimb unloading and reloading.</a> Journal of Applied Physiology. 87, 386-390 (1999).</li><li>Morey, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spaceflight+and+bone+turnover:+correlation+with+a+new+rat+model+of+weightlessness.">Spaceflight and bone turnover: correlation with a new rat model of weightlessness.</a> BioScience. 29, 168-172 (1979).</li><li>Morey-Holton, E. R., Globus, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hindlimb+unloading+of+growing+rats:+a+model+for+predicting+skeletal+changes+during+space+flight.">Hindlimb unloading of growing rats: a model for predicting skeletal changes during space flight.</a> Bone. 22, 83-88 (1998).</li><li>Morey-Holton, E. R., Globus, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hindlimb+unloading+rodent+model:+technical+aspects.">Hindlimb unloading rodent model: technical aspects.</a> J Appl Physiol. 92, 1367-1377 (2002).</li><li>Thomason, D. B., Booth, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atrophy+of+the+soleus+muscle+by+hindlimb+unweighting.">Atrophy of the soleus muscle by hindlimb unweighting.</a> J Appl Physiol. 68, 1-12 (1990).</li><li>Thomason, D. B., Herrick, R. E., Surdyka, D., Baldwin, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+course+of+soleus+muscle+myosin+expression+during+hindlimb+suspension+and+recovery.">Time course of soleus muscle myosin expression during hindlimb suspension and recovery.</a> J Appl Physiol. 63, 130-137 (1987).</li></ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

הערכנו שיטה חלופית של עכברים hindlimb פריקה, אשר אנו נחושים להיות מוצלח ביותר. השיטה זנב טבעת כמתואר כאן שימש ההשעיה לטווח ארוך hindlimb, וכדי ללמוד HU התאוששות הבאים. תחת כל התנאים הללו, לא היתה שום ראיה לכישלון להסתגל כפי שמעידים צריכת מזון יציבה, משקולות הגוף, משקולות הכליה של העכברים. זו טכניקה זנב טבעת HU קל לביצוע והוא יכול בקלות להיות משולב עם תרגול כירורגי מעט מאוד. ישנם מספר יתרונות השיטה זנב טבעת לעומת השיטה המסורתית 6 מורי הולטון-5,. ראשית, את העור ואת ההשתלה אתר טבעת על הזנב, כי הם תמיד נראים לעין, כך שאם מתעוררות בעיות ברור מיד, ולא רק בסוף תקופת ההשעיה. שנית, בעלי חיים אינם מסוגלים לצאת מנגנון ההשעיה בכל עת במהלך האוניברסיטה העברית, obviating את הצורך להכריע האם להמשיך עכבר או לא ערכת הנתונים. יתר על כן, העכברים לא טורחים מנגנון הטבעת כאשר הם משתחררים מן האוניברסיטה העברית להתאוששות, הם לא להתעסק עם הזנבות שלהם, המאפשר לשלב ההתאוששות חלקה הבא של האוניברסיטה העברית. לבסוף, עכברים פרקו hindlimb עם שיטת זנב טבעת לשמור על משקל גוף שלהם טוב יותר מאשר עכברים hindlimb פרקו בטכניקת זנב המתיחה מורי-הולטון. בידיים שלנו לאחר 14 ימים של האוניברסיטה העברית צפינו הפסד קטן (-6.8%) אך לא משמעותי המוני הגוף. בעוד אינגלס et al. נצפתה ירידה משמעותית -12% ממשקל הגוף אצל עכברים לאחר 14 ימים של האוניברסיטה העברית על ידי מורי שיטת-הולטון 3. למרות אינגלס לא דיווחו משקולות יותרת הכליה, נראה כי שיטת זנב טבעת שלנו מעניק פחות לחץ על העכבר (משקולות הכליה בעכברים HU שלנו אינם שונים מאשר שולטת) ותחזוקה טובה יותר של משקל הגוף לאורך כל התקופה hindlimb פריקה. לסיכום, טבעת זנב שיטת hindlimb הפריקה היה שפותחו ונבדקו על עכברים האוניברסיטה העברית עבור 14 ו 28 ימים, על עכברים חזר התאוששות בכלוב במשך 3 ימים אחרי האוניברסיטה העברית. על בסיס משקולות הכליה, מסת הגוף ואת צריכת המזון, עכברים הנראה מותאם היטב מנגנון זנב הטבעת. Hindlimb זנב טבעת פריקה השיטה היא אלטרנטיבה יעילה, פשוטה את הטכניקה המסורתית מורי-הולטון פריקה hindlimb.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Wire cutters/pliers</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Ace Hardware </td>
<td>84-056</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Gauze</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>22-037-901</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Heating pad</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sunbeam</td>
<td>Z-1228-001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Silver nitrate applicators</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>ARZOL</td>
<td>0001-2</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Isoflurane,USP</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Novaplus</td>
<td>NDC 0409-3292-49</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Chlorhexidine Gluconate 4%</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Purdue Products L.P</td>
<td>NDC 67618-200-01</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sterile 2-0 surgical steel suture</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Ethicon</td>
<td>SS-28</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>25 X 5/8 A gauge needle</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Terumo</td>
<td>NN 2516R</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hemostat/ needle holder</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>12500-12</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Size 10-24 X 4 machine screws</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hillman The Fastener Center</td>
<td>90272</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Nylon lock nut size 10 X 24</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hillman The Fastener Center</td>
<td>180141</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Wing nut size 10 X 24</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hillman The Fastener Center</td>
<td>180243</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fender Washer size &frac14; X 1</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hillman The Fastener Center</td>
<td>290012</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fishing swivel with snap hook size #6, 1-11/16&#x201D;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bass Pro Shop</td>
<td>38-481-554-01</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Metal sewing machine bobbin.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Singer</td>
<td>45785</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Paper clip</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Office Depot</td>
<td>221720</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>2&#x201D; black paper binder clamps.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Office Depot</td>
<td>308957</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Scotch Multi-Use Duct Tape</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Office Depot</td>
<td>790710</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1-3/8&#x201D; Plated slotted steel bar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Home Depot</td>
<td>548932</td>
<td>Extends slightly beyond the full length of the cage</td>
</tr>
<tr>
<td>50cm X 40cm X 20cm cage (rat cage</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Alternative Design Manufacturing</td>
<td>RC88D-PC</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Water Bottle</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Alternative Design Manufacturing</td>
<td>WB16FS</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Stainless Steel wire</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Small Parts, Inc</td>
<td>SWX-4029</td>
<td>U-shaped wire to support water bottle</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

an alternant method to the traditional nasa hindlimb unloading model in mice

מורי-הולטון hindlimb פריקה (האוניברסיטה העברית) היא שיטה מקובלת הלאומי לאווירונאוטיקה וחלל המינהל (נאס&quot;א) קרקעיים מודל לחקר ניוון, חוסר שימוש במכרסמים 4-6. המחקר שלנו להעריך שיטה alternant את הטכניקה זהב סטנדרטי מורי-הולטון זנב המתיחה HU בעכברים. חמישים וארבע נקבות עכברים (4-8 מו.) היו האוניברסיטה העברית במשך 14 ימים (n = 34) או 28 ימים (n = 20). השחזור HU הוערכה לאחר 3 ימים של ambulation כלוב נורמלי הבאים HU (n = 22). העכברים מתאימים גיל (n = 76) שימש נושאת משקל שולטת. לפני HU זנב טבעת נוצרה עם חוט פלדה סטרילי 2-0 כירורגית שהועברה דרך ה -5, ה 6 או ה 7 בין השדרה שטח דיסק בצורת לזירה שממנה העכברים הושעו. מיקום החוליות עבור טבעת הזנב נבחר כראוי איזון משקל הגוף החי בלי להתערב עם עשיית הצרכים. אנחנו נקבע את ההצלחה של טכניקה זו על ידי האוניברסיטה העברית רומן בהערכת משקל הגוף לפני ואחרי האוניברסיטה העברית, תואר של ניוון soleus, ו HU מסת הכליה הבאה. משקל גוף של עכברים לפני האוניברסיטה (24.3 ± 2.9g) לא ירידה משמעותית מיד לאחר 14d של האוניברסיטה העברית (22.7 ± 1.9g), 28d של האוניברסיטה העברית (21.3 + 2.1g) או לאחר התאוששות 3 ימים (24.0 ± 1.8g) . מסת שריר Soleus ירד באופן משמעותי (-39.1% ו -46.6%) בעקבות האוניברסיטה העברית במשך 14 ימים ו -28 ימים בהתאמה (p &lt;0.001). לאחר 3 ימים של התאוששות soleus מסה משמעותית ל -74% של ערכים שליטה. משקולות הכליה של עכברים HU לא היו שונים בהשוואה לעכברים שליטה. ההצלחה של השיטה שלנו הרומן HU מתבטא בשמירה על משקל גוף החיה, להשוות משקולות בלוטת יותרת הכליה, וניוון soleus HU הבאים, המתאים לערכים בספרות צפוי 2, 7, 8. היתרונות העיקריים של שיטה זו האוניברסיטה כוללים: 1) להקל על בדיקה הזנב במהלך ההשעיה; 2) ירדה הסבירות זנבות בכחלון, מודלק, ו / או נמקי נצפו לעתים קרובות עם מקליטה זנב HU: 3) כל אפשרות של עכברים ללעוס את המתיחה הקלטת יוצא של מנגנון ההשעיה, ו 4) התאוששות מהירה ופעילות כלוב נורמלי מיד אחרי האוניברסיטה העברית.

Watch this Scientific Journal Video about An Alternant Method to the Traditional NASA Hindlimb Unloading Model in Mice at JoVE.com

An Alternant Method to the Traditional NASA Hindlimb Unloading Model in Mice

פיתחנו hindlimb alternant פריקה מודל בעכברים. היתרון העיקרי של השיטה שלנו hindlimb זנב טבעת פריקה על הטכניקה המקובלת זנב המתיחה מורי-הולטון היא הליך פשוט פשוט זה ממזער הלחץ על החיה.

שיטת Alternant את המודל המסורתי של נאס&quot;א פריקה Hindlimb ב עכברים

The Morey-Holton hindlimb unloading (HU) method is a widely accepted National Aeronautics and Space Administration (NASA) ground-based model for studying ...

an-alternant-method-to-traditional-nasa-hindlimb-unloading-model

Research

JoVE Journal

Biology

20.1K Views.  University of Missouri, Columbia. פיתחנו hindlimb alternant פריקה מודל בעכברים. היתרון העיקרי של השיטה שלנו hindlimb זנב טבעת פריקה על הטכניקה המקובלת זנב המתיחה מורי-הולטון היא הליך פשוט פשוט זה ממזער הלחץ על החיה.

Video: An Alternant Method to the Traditional NASA Hindlimb Unloading Model in Mice

Murine Model of Hindlimb Ischemia 

In the United States, peripheral arterial disease (PAD) affects about 10 million individuals, and is also prevalent worldwide. Medical therapies for symptomatic relief are limited. Surgical or endovascular interventions are useful for some individuals, but long-term results are often disappointing. As a result, there is a need for developing new therapies to treat PAD. The murine hindlimb ischemia preparation is a model of PAD, and is useful for testing new therapies. When compared to other models of tissue ischemia such as coronary or cerebral artery ligation, femoral artery ligation provides for a simpler model of ischemic tissue. Other advantages of this model are the ease of access to the femoral artery and low mortality rate. 
In this video, we demonstrate the methodology for the murine model of unilateral hindimb ischemia. The specific materials and procedures for creating and evaluating the model will be described, including the assessment of limb perfusion by laser Doppler imaging. This protocol can also be utilized for the transplantation and non-invasive tracking of cells, which is demonstrated by Huang et al.1.

Murine Model of Hindlimb Ischemia

The surgical procedure for induction of unilateral hindlimb ischemia is demonstrated, with confirmation of ischemia by laser Doppler perfusion imaging.

דגם Murine של איסכמיה Hindlimb

In the United States, peripheral arterial disease (PAD) affects about 10 million individuals, and is also prevalent worldwide.  Medical therapies for ...

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the function and regulation of protein folding was studied in vitro, in isolated tissue culture cells and in unicellular organisms. Recent studies have uncovered links between protein homeostasis (proteostasis), metabolism, development, aging, and temperature-sensing. These findings have led to the development of new tools for monitoring protein folding in the model metazoan organism Caenorhabditis elegans. In our laboratory, we combine behavioral assays, imaging and biochemical approaches using temperature-sensitive or naturally occurring metastable proteins as sensors of the folding environment to monitor protein misfolding. Behavioral assays that are associated with the misfolding of a specific protein provide a simple and powerful readout for protein folding, allowing for the fast screening of genes and conditions that modulate folding. Likewise, such misfolding can be associated with protein mislocalization in the cell. Monitoring protein localization can, therefore, highlight changes in cellular folding capacity occurring in different tissues, at various stages of development and in the face of changing conditions. Finally, using biochemical tools ex vivo, we can directly monitor protein stability and conformation. Thus, by combining behavioral assays, imaging and biochemical techniques, we are able to monitor protein misfolding at the resolution of the organism, the cell, and the protein, respectively.

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

To study the relationship between protein homeostasis, stress and aging, we monitored changes in protein folding by following protein dysfunction, protein localization in the cell and protein stability at the organismal, cellular and protein levels, using the genetically tractable metazoan Caenorhabditis elegans as a model system.

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the ...

Hybrid-Cut: An Improved Sectioning Method for Recalcitrant Plant Tissue Samples

Maintaining plant section integrity is essential for studying detailed anatomical structures at the cellular, tissue, or even organ level. However, some plant cells have rigid cell walls, tough fibers and crystals (calcium oxalate, silica, etc.), and high water content that often disrupt tissue integrity during plant tissue sectioning.
This study establishes a simple Hybrid-Cut tissue sectioning method. This protocol modifies a paraffin-based sectioning technique and improves the integrity of tissue sections from different plants. Plant tissues were embedded in paraffin before sectioning in a cryostat at -16 &#176;C. Sectioning under low temperature hardened the paraffin blocks, reduced tearing and scratching, and improved tissue integrity significantly. This protocol was successfully applied to calcium oxalate-rich Phalaenopsis orchid tissues as well as recalcitrant tissues such as reproductive organs and leaves of rice, maize, and wheat. In addition, the high quality of tissue sections from Hybrid-Cut could be used in combination with in situ hybridization (ISH) to provide spatial expression patterns of genes of interest. In conclusion, this protocol is particularly useful for recalcitrant plant tissue containing high crystal or silica content. Good quality tissue sections enable morphological and other biological studies.

This protocol describes a simple Hybrid-Cut tissue sectioning method that is useful for recalcitrant plant tissues. Good quality tissue sections enable anatomical studies and other biological studies including in situ hybridization (ISH).

-Cut ההיברידי: שיטת חתך משופרת עבור דוגמאות רקמות צמח סרבן

Maintaining plant section integrity is essential for studying detailed anatomical structures at the cellular, tissue, or even organ level. However, some ...

A Method to Assess Bacteriocin Effects on the Gut Microbiota of Mice

Very intriguing questions arise with our advancing knowledge on gut microbiota composition and the relationship with health, particularly relating to the factors that contribute to maintaining the population balance. However, there are limited available methodologies to evaluate these factors. Bacteriocins are antimicrobial peptides produced by many bacteria that may confer a competitive advantage for food acquisition and/or niche establishment. Many probiotic lactic acid bacteria (LAB) strains have great potential to promote human and animal health by preventing the growth of pathogens. They can also be used for immuno-modulation, as they produce bacteriocins. However, the antagonistic activity of bacteriocins is normally determined by laboratory bioassays under well-defined but over-simplified conditions compared to the complex gut environment in humans and animals, where bacteria face multifactorial influences from the host and hundreds of microbial species sharing the same niche. This work describes a complete and efficient procedure to assess the effect of a variety of bacteriocins with different target specificities in a murine system. Changes in the microbiota composition during the bacteriocin treatment are monitored using compositional 16S rDNA sequencing. Our approach uses both the bacteriocin producers and their isogenic non-bacteriocin-producing mutants, the latter giving the ability to distinguish bacteriocin-related from non-bacteriocin-related modifications of the microbiota. The fecal DNA extraction and 16S rDNA sequencing methods are consistent and, together with the bioinformatics, constitute a powerful procedure to find faint changes in the bacterial profiles and to establish correlations, in terms of cholesterol and triglyceride concentration, between bacterial populations and health markers. Our protocol is generic and can thus be used to study other compounds or nutrients with the potential to alter the host microbiota composition, either when studying toxicity or beneficial effects.

Bacteriocins are believed to play a key role in defining microbial diversity in different ecological niches. Here, we describe an efficient procedure to assess how bacteriocins affect gut microbiota composition in an animal model.

שיטה להעריך אפקטים Bacteriocin על מיקרוביוטה המעיים של עכברים

Very intriguing questions arise with our advancing knowledge on gut microbiota composition and the relationship with health, particularly relating to the ...

A Simple and Efficient Method for In Vivo Cardiac-specific Gene Manipulation by Intramyocardial Injection in Mice

Gene manipulation specifically in the heart significantly potentiate the investigation of cardiac disease pathomechanisms and their therapeutic potential. In vivo cardiac-specific gene delivery is commonly achieved by either systemic or local delivery. Systemic injection via tail vein is easy and efficient in manipulating cardiac gene expression by using recombinant adeno-associated virus 9 (AAV9). However, this method requires a relatively high amount of vector for efficient transduction, and may result in nontarget organ gene transduction. Here, we describe a simple, efficient, and time-saving method of intramyocardial injection for in vivo cardiac-specific gene manipulation in mice. Under anesthesia (without ventilation), the pectoral major and minor muscles were bluntly dissected, and the mouse heart was quickly exposed by manual externalization through a small incision at the fourth intercostal space. Subsequently, adenovirus encoding luciferase (Luc) and vitamin D receptor (VDR), or short hairpin RNA (shRNA) targeting VDR, was injected with a Hamilton syringe into the myocardium. Subsequent in vivo imaging demonstrated that luciferase was successfully overexpressed specifically in the heart. Moreover, Western blot analysis confirmed the successful overexpression or silencing of VDR in the mouse heart. Once mastered, this technique can be used for gene manipulation, as well as injection of cells or other materials such as nanogels in the mouse heart.

A Simple and Efficient Method for In Vivo Cardiac-specific Gene Manipulation by Intramyocardial Injection in Mice

Here we present a protocol for cardiac-specific gene manipulation in mice. Under anesthesia, the mouse hearts were externalized through the fourth intercostal space. Subsequently, adenoviruses encoding specific genes were injected with a syringe into the myocardium, followed by protein expression measurement via in vivo imaging and Western blot analysis.

שיטה פשוטה ויעילה In Vivo מניפולציה ג'ין ספציפיות הלב באמצעות הזרקת Intramyocardial בעכברים

Gene manipulation specifically in the heart significantly potentiate the investigation of cardiac disease pathomechanisms and their therapeutic potential. ...

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A)

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer progression. How the chromosomal location and function of a centromere (i.e., centromere identity) are determined and participate in accurate chromosome segregation is a fundamental question. CENP-A is proposed to be the non-DNA indicator (epigenetic mark) of centromere identity, and CENP-A ubiquitylation is required for CENP-A deposition at the centromere, inherited through dimerization between cell division, and indispensable to cell viability.
Here we describe mass spectrometry analysis to identify ubiquitylation of EYFP-CENP-A K124R mutant suggesting that ubiquitylation at a different lysine is induced because of the EYFP tagging in the CENP-A K124R mutant protein. Lysine 306 (K306) ubiquitylation in EYFP-CENP-A K124R was successfully identified, which corresponds to lysine 56 (K56) in CENP-A through mass spectrometry analysis. A caveat is discussed in the use of GFP/EYFP or the tagging of high molecular weight protein as a tool to analyze the function of a protein. Current technical limit is also discussed for the detection of ubiquitylated bands, identification of site-specific ubiquitylation(s), and visualization of ubiquitylation in living cells or a specific single cell during the whole cell cycle.
The method of mass spectrometry analysis presented here can be applied to human CENP-A protein with different tags and other centromere-kinetochore proteins. These combinatory methods consisting of several assays/analyses could be recommended for researchers who are interested in identifying functional roles of ubiquitylation.

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A EYFP-CENP-A

CENP-A ubiquitylation is an important requirement for CENP-A deposition at the centromere, inherited through dimerization between cell division, and indispensable to cell viability. Here we describe mass spectrometry analysis to identify ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A) protein.

ניתוח ספקטרומטר המסה כדי לזהות את אוביקווילציה של EYFP-מתויג CENP-A (EYFP-CENP-A)

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer ...

An Antegrade Perfusion Method for Cardiomyocyte Isolation from Mice

In basic research using mouse heart, isolating viable individual cardiomyocytes is a crucial technical step to overcome. Traditionally, isolating cardiomyocytes from rabbits, guinea pigs or rats has been performed via retrograde perfusion of the heart with enzymes using a Langendorff apparatus. However, a high degree of skill is required when this method is used with a small mouse heart. An antegrade perfusion method that does not use a Langendorff apparatus was recently reported for the isolation of mouse cardiomyocytes. We herein report a complete protocol for the improved antegrade perfusion of the excised heart to isolate individual heart cells from adult mice (8 - 108 weeks old). Antegrade perfusion is performed by injecting perfusate near the apex of the left ventricle of the excised heart, the aorta of which was clamped, using an infusion pump. All procedures are carried out on a pre-warmed heater mat under a microscope, which allows for the injection and perfusion processes to be monitored. The results suggest that ventricular and atrial myocytes, and fibroblasts can be well isolated from a single adult mouse simultaneously.

We developed a simple method for isolating high quality individual mouse heart cells by the antegrade perfusion technique. This method is Langendorff-free and useful for isolating ventricular and atrial myocytes or interstitial cells, such as cardiac fibroblasts or progenitors.

שיטת זלוף Antegrade לבידוד קרדיומיוציטים מעכברים

In basic research using mouse heart, isolating viable individual cardiomyocytes is a crucial technical step to overcome. Traditionally, isolating ...

Imaging Molecular Adhesion in Cell Rolling by Adhesion Footprint Assay

Rolling adhesion, facilitated by selectin-mediated interactions, is a highly dynamic, passive motility in recruiting leukocytes to the site of inflammation. This phenomenon occurs in postcapillary venules, where blood flow pushes leukocytes in a rolling motion on the endothelial cells. Stable rolling requires a delicate balance between adhesion bond formation and their mechanically-driven dissociation, allowing the cell to remain attached to the surface while rolling in the direction of flow. Unlike other adhesion processes occurring in relatively static environments, rolling adhesion is highly dynamic as the rolling cells travel over thousands of microns at tens of microns per second. Consequently, conventional mechanobiology methods such as traction force microscopy are unsuitable for measuring the individual adhesion events and the associated molecular forces due to the short timescale and high sensitivity required. Here, we describe our latest implementation of the adhesion footprint assay to image the P-selectin: PSGL-1 interactions in rolling adhesion at the molecular level. This method utilizes irreversible DNA-based tension gauge tethers to produce a permanent history of molecular adhesion events in the form of fluorescence tracks. These tracks can be imaged in two ways: (1) stitching together thousands of diffraction-limited images to produce a large field of view, enabling the extraction of adhesion footprint of each rolling cell over thousands of microns in length, (2) performing DNA-PAINT to reconstruct super-resolution images of the fluorescence tracks within a small field of view. In this study, the adhesion footprint assay was used to study HL-60 cells rolling at different shear stresses. In doing so, we were able to image the spatial distribution of the P-selectin: PSGL-1 interaction and gain insight into their molecular forces through fluorescence intensity. Thus, this method provides the groundwork for the quantitative investigation of the various cell-surface interactions involved in rolling adhesion at the molecular level.

This protocol presents the experimental procedures to perform the adhesion footprint assay to image the adhesion events during fast cell rolling adhesion.

הדמיה הידבקות מולקולרית בתא מתגלגל על ידי הידבקות טביעת רגל אסאי

Rolling adhesion, facilitated by selectin-mediated interactions, is a highly dynamic, passive motility in recruiting leukocytes to the site of ...

Bioluminescent Monitoring of Graft Survival in an Adoptive Transfer Model of Autoimmune Diabetes in Mice

Type 1 diabetes is characterized by the autoimmune destruction of the insulin-producing beta cells of the pancreas. A promising treatment for this disease is the transplantation of stem cell-derived beta cells. Genetic modifications, however, may be necessary to protect the transplanted cells from persistent autoimmunity. Diabetic mouse models are a useful tool for the preliminary evaluation of strategies to protect transplanted cells from autoimmune attack. Described here is a minimally invasive method for transplanting and imaging cell grafts in an adoptive transfer model of diabetes in mice. In this protocol, cells from the murine pancreatic beta cell line NIT-1 expressing the firefly luciferase transgene luc2 are transplanted subcutaneously into immunodeficient non-obese diabetic (NOD)-severe combined immunodeficient (scid) mice. These mice are simultaneously injected intravenously with splenocytes from spontaneously diabetic NOD mice to transfer autoimmunity. The grafts are imaged at regular intervals via non-invasive bioluminescent imaging to monitor the cell survival. The survival of mutant cells is compared to that of control cells transplanted into the same mouse.

This protocol describes a straightforward and minimally invasive method for transplanting and imaging NIT-1 cells in non-obese diabetic (NOD)-severe combined immunodeficient mice challenged with splenocytes purified from spontaneously diabetic NOD mice.

ניטור ביולומינסנטי של הישרדות השתל במודל העברה מאומץ של סוכרת אוטואימונית בעכברים

Type 1 diabetes is characterized by the autoimmune destruction of the insulin-producing beta cells of the pancreas. A promising treatment for this disease ...

Establishing a Diaphyseal Femur Fracture Model in Mice

Bones have a significant regenerative capacity. However, fracture healing is a complex process, and depending on the severity of the lesions and the age and overall health status of the patient, failures can occur, leading to delayed union or nonunion. Due to the increasing number of fractures resulting from high-energy trauma and aging, the development of innovative therapeutic strategies to improve bone repair based on the combination of skeletal/mesenchymal stem/stromal cells and biomimetic biomaterials is urgently needed. To this end, the use of reliable animal models is fundamental to better understanding the key cellular and molecular mechanisms that determine the healing outcomes. Of all the models, the mouse is the preferred research model because it offers a wide variety of transgenic strains and reagents for experimental analysis. However, the establishment of fractures in mice may be technically challenging due to their small size. Therefore, this article aims to demonstrate the procedures for the surgical establishment of a diaphyseal femur fracture in mice, which is stabilized with an intramedullary wire and resembles the most common bone repair process, through cartilaginous callus formation.

This protocol describes a surgical procedure for the establishment of a diaphyseal fracture in the femur of mice, which is stabilized with an intramedullary wire, for fracture healing studies.

ביסוס מודל שבר עצם הירך הדיאפיזי בעכברים

Bones have a significant regenerative capacity. However, fracture healing is a complex process, and depending on the severity of the lesions and the age ...