Die Autoren bedanken sich bei Andrew J Dunn, eine hervorragende Undergraduate Research Student in unserem Labor, für seine technische Unterstützung und Fürsorge für die Tiere danken. Das National Institute of Health gewähren HD058834 und der University of Missouri Life Sciences Fellowship finanziert diese Arbeit.

Pre-Chirurgie-Instrumente / Materialien <ul><li> Drahtschneider / Zange </li><li> Gauze 2 x 2 &quot;-Pads </li><li> Heizkissen </li><li> Silbernitrat-Sticks </li><li> Sterile OP-Handschuhe </li><li> Isofluran Inhalationsnarkose </li><li> Chlorhexidingluconat 4% (Antiseptische chirurgische Macchia) </li><li> Sterile 2-0 chirurgischem Stahl Naht </li><li> 25 X 5 / 8 A-Gauge-Nadel (autoklaviert) </li><li> Hemostat (autoklaviert) </li><li> Chirurgischer Stahl Naht </li></ul> Chirurgie Procedure <ol><li> Erstellen Sie einen sterilen Bereich. Folgen Sie sterile Verfahren. </li><li> Anesthetize Maus mit 2 bis 3% Isofluran. </li><li> Bewegen Sie die Maus auf dem Heizkissen. </li><li> Scrub Schwanz mit Chlorhexidin-Lösung. </li><li> Suchen Sie 5, 6, oder 7 th Zwischenwirbelraum (zwischen zwei knöchernen Höcker auf Schwanz, dem Zählen beginnen ab Ende der Körperbehaarung, an der Basis der Schwanz). </li><li> Verwenden Sie Hemostat und 25G-Nadel auf eine Pilotbohrung zwischen zwei Wirbeln zu machen, in den Zwischenwirbelraum. </li><li> Verwenden Sie die Drahtschere auf die Stahl-Naht 10 cm langen Schnitt. </li><li> Entfernen Sie die Nadel und stecken Stahl Naht durch das Loch, 5 cm der Naht auf beiden Seiten des Schwanzes. </li><li> Jede Seite des Schwanzes sollte + 5 cm der Naht. </li><li> Legen Sie Ihren Daumen Spitze auf Schwanz. </li><li> Verwenden Sie Ihre freie Hand und Wind die Stahl-Naht auf die Spitze des Daumens und die Enden zu einem großen Schleife zu bilden. Die Wunde oder kreisförmigen Teil sollte + 3 mm lang sein. </li><li> Nehmen Sie Ihren Daumen. </li><li> Clamp einem Strang der Naht mit dem hemostat und biegen sie in eine kleinere Schlinge, deren Ende so eng wie möglich ist, die Wendung auf die ursprüngliche große Schleife angebracht. </li><li> Cut off überschüssigen Draht und biegen Sie die verdrillten Draht zurück. </li><li> Wenn es einen Überschuss Blutungen, können Sie es mit der Silbernitrat-Sticks zu stoppen. </li><li> Schalten Sie die Isofluran und Ort Maus in einem Einfamilienhaus Käfig für 5-7 Tage vor dem Hinterlauf Entladen zu erholen. Der Schwanz Ringe verfangen, wenn mehr als eine Maus zusammen untergebracht ist. </li></ol> 1. Hinterlauf Entladevorgang Materialien <ul><li> Größe 10-24 x 4 Schrauben, je eine pro Tier. </li><li> Nylon Kontermutter Größe 10 bis 24, je eine pro Tier. </li><li> Flügelmutter Größe 10 X 24, zwei pro Tier. </li><li> Washer Größe ¼ X 1, zwei pro Tier. </li><li> Angeln Wirbel mit Karabinerhaken Größe # 6, 1-11/16 &quot;, und man pro Tier. </li><li> Metall-Nähmaschine Spule. Einer pro Tier. </li><li> Kleine Büroklammer zum S-förmigen Haken, eine pro Tier </li><li> Zangen. </li><li> 2 x 2 &quot;Gaze. </li><li> 2 &quot;schwarzes Papier Bindemittel Klammern. </li><li> Klebeband / lab Band. </li><li> 1-3/8 &quot;Plated geschlitzten Stahlstange, die etwas über die volle Länge des Käfigs reicht </li><li> 50cm x 40cm x 20cm Käfig (Rattenkäfig). </li><li> Trinkflasche mit gebogenem Rohr. </li><li> Edelstahl-Draht, U-förmig, um Wasserflasche zu unterstützen. </li></ul> Cage-Setup <ol><li> Legen Sie den 1-38 &quot;Plated geschlitzten Stahl bar über der Oberseite des Käfigs, und kleben Sie es zeitlich unten mit Klebeband. </li><li> Schraube 1 Flügelmutter an der Maschine Schraube, legen Sie eine Scheibe, und legen Sie die Maschine Schneckentrog den geschlitzten Stahlplatte ± 15 cm vom Rand des Käfigs. </li><li> Add another Unterlegscheibe und Flügelmutter. Ziehen Sie die beiden Flügelmuttern, aber nicht ganz festziehen, wie es nötig ist, um Anpassungen später tun. </li><li> Legen Sie die Maschine Schraube durch das mittlere Loch der Spule. </li><li> Um zu verhindern, die Spule herunterfallen, schrauben Sie die Nylon-Sicherungsmutter bis zum Ende der Maschine Schraube. Die Spule sollte frei drehen. </li><li> Legen Sie die Karabinerhaken aus den Angeln Schwenk durch den unteren Teil der Spule. </li><li> Mit einer Zange eine S-förmige Haken von der Büroklammer zu bilden. (Cut 2cm von der Büroklammer an einen Haken zu bilden). </li><li> Legen Sie das eine Ende des S-förmigen Haken durch das Loch des Fischerdorfes schwenk-und kneifen sie geschlossen mit der Zange. </li><li> Legen Sie die U-förmigen Draht, parallel zur Maschine Schraube, an der Innenseite des Käfigs Seite und biegen Sie die Enden wieder auf eine volle Wasserflasche zu unterstützen. </li><li> Legen Sie die Flasche Wasser in die U-förmigen Draht, mit dem Spicket nach unten, aber nicht den Boden berührt. </li><li> Biegen Sie die 2 &quot;Bindemittel Klammer zu öffnen, so dass sie nicht in der Nähe geschlossen. Gerade genug Spannung, um 3 bis 4 Stücke von Lebensmitteln in ihr zu halten, ohne sie fallen aus. Dies verhindert, dass die Kraft der Klemme vom Zerkleinern der Nahrung oder ein strengeres Vorgehen gegen der Maus die Nase. </li><li> Legen Sie 3 bis 4 Stücke von Nagetier chow in das Bindemittel zu klemmen. </li></ol> Hinterlauf Entladen von Maus <ol><li> Legen Sie das offene Ende des S-förmigen Haken durch den kleineren Ring des Schwanzes Ring. </li><li> Stellen Sie die Maus Höhe durch Anziehen oder Lösen der unteren Flügelmutter an der Maschine Schraube. Die unteren Extremitäten sollte kein Gewicht tragen werden. Sobald die optimale Höhe erreicht ziehen Sie die obere Flügelmutter. </li><li> Positionieren Sie die Wasserflasche, und U-förmigen Draht, so dass die Maus nicht auf die Spicket klettern mit ihren Hinterbeinen.<html> Sichern Sie die Wasserflasche mit Klebeband an der Seite des Käfigs. </li><li> Position des Bindemittels Schelle mit Essen auf den Boden des Käfigs, so dass die Maus nicht auf ihn zu besteigen, Band ihn mit Klebeband. </li><li> Wiederholen Sie diesen Vorgang, wenn mehr als ein Tier ist Hinterbein auf der anderen Seite des Käfigs entladen. Haus zwei Tiere pro Käfig; Raum die Tiere so, dass sie fast berühren kann sich gegenseitig. </li><li> Verwenden Sie die 2 X 2 Gaze lose wickeln den Schwanz der Maus auf die Fische zu schwenken. Mit einem kleinen Stück Klebeband, um rund um die Gaze wickeln, die Sicherung der Gaze auf den Schwanz. Dieser Schritt ist wichtig, um den Schwanz von hängenden nach unten zu verhindern, was zu Blut-Pooling in der Spitze des Schwanzes und Schwanz es nekrotisch. </li><li> Fügen Sie eine kleine Menge von cob Betten in den Käfig. Fügen Sie nicht zu viel Einstreu sonst die Maus aus einem Haufen Bettzeug und versuchen, Hinterbeine auf Einstreu zu laden. </li></ol> 2. Repräsentative Ergebnisse: Zur Ermittlung der Erfolg der Schwanz-Ring HU Technik, die wir gemessen Körpergewicht des Tieres vor dem Schwanz Ring Chirurgie und vor und nach der HU und Verwertung; soleus Muskelmasse und Nebennieren Masse in allen Gruppen. Das Körpergewicht der Mäuse während des Experiments sind in Abbildung 1 dargestellt. Das Körpergewicht der Mäuse vor dem Schwanz Ring Chirurgie (24,7 ± 3,5 g) unterschieden sich nicht signifikant nach 5 Tagen der Erholung von der Schwanz Ring Chirurgie (24,3 ± 2,9 g) vor der HU. Auch nicht das Körpergewicht signifikant sofort Rückgang nach 14 Tagen HU (22,7 ± 1,9 g), 28 Tage von HU (21,3 + 2,1 g) oder nach 3 Tagen Erholung von HU (24,0 ± 1,8 g). Obwohl HU für 14 und 28 Tage führte zu einer kleinen (-6,8% bzw. 12%), aber nicht signifikanten Verlust an Körper-Masse, die Mäuse voll auf ihre Vor-HU Körpergewicht nach 3 Tagen der Erholung erholt. Verzehr von Lebensmitteln für die ambulante Kontroll-Mäusen und HU-Mäusen ist in Abbildung 3 dargestellt. Durchschnittliche tägliche Futteraufnahme war nicht anders in HU-Mäuse über 28 Tage im Vergleich zur Kontrollgruppe. Wir beobachteten signifikanten soleus Muskelatrophie folgenden HU für 14 und 28 Tagen (-39,1%, -46,6% und), was eine effektive HU-Verfahren (Abb. 2). Des Weiteren wird diese Grad der Atrophie ist konsistent mit der erwarteten Literaturwerte für 2-4 Wochen nach der HU 2, 7, 8. Nach 3-tägiger Erholung von HU soleus Masse deutlich auf 74% der Kontrollwerte. Soleus Masse in die Erholung Gruppe war wesentlich größer als die beiden HU-Gruppen, aber immer noch deutlich weniger als ambulante Kontrolltieren. Adrenal Gewichte wurden als Indikator für das Tier Stress gemessen; sowohl die linke und rechte Nebenniere wurden ausgeschnitten und gewogen. Die durchschnittliche Gewichte waren vergleichbar für Steuerungs-und HU-Mäusen Mäuse in allen Gruppen (Abbildung 4). Zuvor bei Ratten haben wir gezeigt, dass die Erfolgsquote für die Anzahl der Tiere zu Beginn der HU, die Zahl der Tiere, die HU ohne Coming Out der Aufhängevorrichtung abgeschlossen (wegen Tieren Kauen durch den Schweif-Traktion Band) verglichen wurde, 10 aus von 12 mit dem Morey-Holton Technik 1. Keine der Mäuse (n = 54) in dieser Studie, die jemals kam aus der Suspension vor der Fertigstellung der HU Zeitraum. Wir haben jedoch einen Maus, die das entwickelte ein stark entzündeter Schwanz. Wenn die Entzündung deutlich wurde, entfernten wir den Schwanz Ring, damit die entzündete Stelle zu heilen, und anschließend platziert anderen tail-Ring, um die Dauer der HU abgeschlossen. In der Vergangenheit, wenn wir die Morey-Holton Methode der HU verwendet, wir in der Regel beseitigen 1-2 Mäuse / Gruppe, weil sie aus der Aufhängevorrichtung zu kommen. Mit dem Weg-Ring-Verfahren gab es keine Fälle von Mäusen aus Versehen, die aus dem HU Gerät während der HU für 14 oder 28 Tage (n = 54 Mäuse). <img src="/files/ftp_upload/2467/2467fig1.jpg" alt="Abbildung 1" /> Abbildung 1. Änderungen des Körpergewichts (Mittelwert ± SD). Abkürzungen: CON: Gewicht tragenden Mäusen der Kontrollgruppe (n = 76); Pre-HU: alle Mäuse vor der HU (n = 54); HU14: Mäuse Hinterlauf für 14 Tage (n = 34) entladen; HU28: Mäuse Hinterlauf für unbelasteten 28 Tage (n = 20); REC: Hinterlauf entladen Mäuse dürfen Käfig für 3 Tage (n = 22) zu erholen. Keine signifikanten Unterschiede im Körpergewicht waren zwischen den Gruppen beobachtet. <img src="/files/ftp_upload/2467/2467fig2.jpg" alt="Abbildung 2" /> Abbildung 2. Soleus Muskelatrophie (Mittelwert ± SD). Abkürzungen: CON: Gewicht tragenden Mäusen der Kontrollgruppe (n = 76); HU14: Mäuse Hinterlauf für 14 Tage (n = 34) entladen; HU28: Mäuse Hinterlauf für 28 Tage (n = 20) entladen, und REC: Hinterlauf entladen Mäusen erlaubt zum Käfig für 3 Tage (n = 22) zu erholen. * Signifikanter Unterschied (p &lt;0,001) als tragende Kontrolle (CON). δSignificantly unterschiedlich (p &lt;0,01) als die beiden HU Gruppen. 467fig3.jpg &quot;alt =&quot; Bild 3 &quot;/&gt; Abbildung 3. Verzehrsstudie (Mittelwert ± SD). Durchschnittliche tägliche Futteraufnahme (g / Tag) während Belastung und Hinterlauf Entladen. Abkürzungen: Gewicht tragenden Mäusen der Kontrollgruppe (n = 76); HU: Mäuse Hinterlauf unloaded14 - 28 Tage. Keine signifikanten Unterschiede zwischen den CON-und HU-Gruppen beobachtet. <img src="/files/ftp_upload/2467/2467fig4.jpg" alt="Abbildung 4" /> Abbildung 4. Adrenal Mass (Mittelwert ± SD). Abkürzungen: CON: Gewicht tragenden Mäusen der Kontrollgruppe (n = 76); HU14: Mäuse Hinterlauf für 14 Tage (n = 34) entladen; HU28: Mäuse Hinterlauf für 28 Tage (n = 20) entladen, und REC: Hinterlauf entladen Mäusen erlaubt zum Käfig für 3 Tage (n = 22) zu erholen. Wurden keine signifikanten Unterschiede zwischen den Gruppen beobachtet.

<ol>
	<li>Brown, M., Foley, A. M., Hasser, E. M., Foley, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+alternative+method+for+hindlimb+unweighting.">An alternative method for hindlimb unweighting.</a> J Gravitational Physiol. 12, 43-50 (2005).</li><li>Fitts, R. H., Metzger, J. M., Riley, D. A., Unsworth, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+disuse:+a+comparison+of+hindlimb+suspension+and+immobilization.">Models of disuse: a comparison of hindlimb suspension and immobilization.</a> J Appl Physiol. 60, 1946-1953 (1986).</li><li>Ingalls, C. P., Warren, G. L., Armstrong, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+Ca2++transients+in+mouse+soleus+muscle+after+hindlimb+unloading+and+reloading.">Intracellular Ca2+ transients in mouse soleus muscle after hindlimb unloading and reloading.</a> Journal of Applied Physiology. 87, 386-390 (1999).</li><li>Morey, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spaceflight+and+bone+turnover:+correlation+with+a+new+rat+model+of+weightlessness.">Spaceflight and bone turnover: correlation with a new rat model of weightlessness.</a> BioScience. 29, 168-172 (1979).</li><li>Morey-Holton, E. R., Globus, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hindlimb+unloading+of+growing+rats:+a+model+for+predicting+skeletal+changes+during+space+flight.">Hindlimb unloading of growing rats: a model for predicting skeletal changes during space flight.</a> Bone. 22, 83-88 (1998).</li><li>Morey-Holton, E. R., Globus, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hindlimb+unloading+rodent+model:+technical+aspects.">Hindlimb unloading rodent model: technical aspects.</a> J Appl Physiol. 92, 1367-1377 (2002).</li><li>Thomason, D. B., Booth, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atrophy+of+the+soleus+muscle+by+hindlimb+unweighting.">Atrophy of the soleus muscle by hindlimb unweighting.</a> J Appl Physiol. 68, 1-12 (1990).</li><li>Thomason, D. B., Herrick, R. E., Surdyka, D., Baldwin, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+course+of+soleus+muscle+myosin+expression+during+hindlimb+suspension+and+recovery.">Time course of soleus muscle myosin expression during hindlimb suspension and recovery.</a> J Appl Physiol. 63, 130-137 (1987).</li></ol>

Wir untersuchten eine alternative Methode der Hinterlauf Entladen Mäuse, die wir bestimmt sich als äußerst erfolgreich. Der Schwanz-Ring-Verfahren wie hier beschrieben wurde für die langfristige Hinterlauf Suspension verwendet, und die Recovery nach HU studieren. Unter jeder dieser Bedingungen, es gab keinen Beweis für ein Versagen, sich anzupassen, wie stabil die Nahrungsaufnahme, Körpergewicht und Nebennieren Gewichte der Mäuse nachgewiesen. Dieser Schwanz-Ring HU-Technik ist einfach durchzuführen und können problemlos mit sehr wenig chirurgische Praxis integriert werden. Es gibt mehrere Vorteile von tail-Ring-Methode im Vergleich zu den traditionellen Morey-Holton 5, 6-Methode. Zunächst werden die Haut und Ring Implantationsstelle an diesem Schwanz immer sichtbar, so dass, wenn Probleme entstehen ist es offensichtlich sofort, nicht erst am Ende der Aussetzung. Zweitens sind die Tiere nicht in der Lage, sich aus der Aufhängevorrichtung zu irgendeinem Zeitpunkt während HU, die Beseitigung der Notwendigkeit, eine Feststellung, ob eine Maus oder nicht im Datensatz behalten zu machen. Darüber hinaus sind die Mäuse nicht die Mühe, den Ring Apparate und, wenn sie von HU für die Verwertung freigegeben werden, sie nicht mit ihren Schwänzen manipulieren, so dass für einen nahtlosen Erholungsphase nach HU. Schließlich halten Hinterlauf entladen Mäuse mit dem Schwanz-Ring-Methode ihr Körpergewicht besser als Mäuse Hinterlauf der Morey-Holton tail-Traktion Technik entladen. In unseren Händen nach 14 Tagen HU beobachteten wir eine kleine (-6,8%), aber nicht signifikanten Verlust an Körper-Masse. Während Ingalls et al. Beobachteten einen signifikanten -12% Abnahme des Körpergewichts bei Mäusen nach 14 Tagen HU durch den Morey-Holton Methode 3. Obwohl Ingalls nicht gemeldet haben Nebennieren Gewichte, scheint es, dass unsere tail-Ring-Methode weniger Stress verleiht der Maus (Nebennieren Gewichte in unseren HU Mäuse sind nicht anders als bei den Kontrollen) und eine bessere Wartung des Körpergewichts während der Hinterlauf Entladen Zeitraum. Zusammenfassend wurde ein tail-Ring-Methode der Hinterlauf Entladen entwickelt und getestet an Mäusen HU für 14 und 28 Tagen und an Mäusen wieder in Käfig Erholung für 3 Tage nach der HU. Auf der Grundlage der Nebennieren-Gewichte, Körpermasse und Nahrungsaufnahme, erscheinen Mäuse auch an den Schwanz-Ring Apparat angepasst haben. Der Schwanz-Ring Hinterlauf des Entladens ist eine nützliche, einfache Alternative zu den traditionellen Morey-Holton Hinterlauf Entladen Technik.

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		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Wire cutters/pliers</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Ace Hardware </td>
<td>84-056</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Gauze</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>22-037-901</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Heating pad</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sunbeam</td>
<td>Z-1228-001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Silver nitrate applicators</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>ARZOL</td>
<td>0001-2</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Isoflurane,USP</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Novaplus</td>
<td>NDC 0409-3292-49</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Chlorhexidine Gluconate 4%</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Purdue Products L.P</td>
<td>NDC 67618-200-01</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sterile 2-0 surgical steel suture</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Ethicon</td>
<td>SS-28</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>25 X 5/8 A gauge needle</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Terumo</td>
<td>NN 2516R</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hemostat/ needle holder</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>12500-12</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Size 10-24 X 4 machine screws</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hillman The Fastener Center</td>
<td>90272</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Nylon lock nut size 10 X 24</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hillman The Fastener Center</td>
<td>180141</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Wing nut size 10 X 24</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hillman The Fastener Center</td>
<td>180243</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fender Washer size &frac14; X 1</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hillman The Fastener Center</td>
<td>290012</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fishing swivel with snap hook size #6, 1-11/16&#x201D;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bass Pro Shop</td>
<td>38-481-554-01</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Metal sewing machine bobbin.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Singer</td>
<td>45785</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Paper clip</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Office Depot</td>
<td>221720</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>2&#x201D; black paper binder clamps.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Office Depot</td>
<td>308957</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Scotch Multi-Use Duct Tape</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Office Depot</td>
<td>790710</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1-3/8&#x201D; Plated slotted steel bar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Home Depot</td>
<td>548932</td>
<td>Extends slightly beyond the full length of the cage</td>
</tr>
<tr>
<td>50cm X 40cm X 20cm cage (rat cage</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Alternative Design Manufacturing</td>
<td>RC88D-PC</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Water Bottle</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Alternative Design Manufacturing</td>
<td>WB16FS</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Stainless Steel wire</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Small Parts, Inc</td>
<td>SWX-4029</td>
<td>U-shaped wire to support water bottle</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

an alternant method to the traditional nasa hindlimb unloading model in mice

Die Morey-Holton Hinterlauf Entladen (HU)-Methode ist eine allgemein anerkannte National Aeronautics and Space Administration (NASA) Boden-basiertes Modell für die Untersuchung Nichtnutzung-Atrophie bei Nagetieren 4-6. Unsere Studie untersuchte eine Alternante Methode, um die Gold-Standard Morey-Holton HU tail-Traktion Technik bei Mäusen. Vierundfünfzig weiblichen Mäusen (4-8 mo.) Wurden HU für 14 Tage (n = 34) oder 28 Tage (n = 20). Erholung von HU wurde nach 3 Tagen von normalen Käfig Gehfähigkeit nach HU (n = 22) untersucht. Aged abgestimmt Mäusen (n = 76) diente als Gewicht tragenden Kontrollen. Vor HU einen Schwanz Ring wurde mit einem 2:0-sterilen chirurgischen Stahldraht, die durch die 5 th, 6 th, oder 7 th Bandscheibe Raum übergeben wurde und geformt zu einem Ring, von dem die Mäuse ausgesetzt wurden gebildet. Vertebral Standort für den Schwanz-Ring wurde ausgewählt, um angemessen Balance Körpergewicht des Tieres, ohne sich mit Stuhlgang. Wir haben festgestellt, den Erfolg dieses Romans HU Technik, die von der Beurteilung des Körpergewichts vor und nach der HU, den Grad der soleus Atrophie und Nebennieren Masse folgende HU. Das Körpergewicht der Mäuse vor der HU (24,3 ± 2,9 g) nicht signifikant sofort Rückgang nach 14d der HU (22,7 ± 1,9 g), 28d der HU (21,3 + 2,1 g) oder nach 3 Tagen Erholung (24,0 ± 1,8 g) . Soleus Muskelmasse deutlich zurückgegangen (-39,1%, -46,6% und) folgende HU für 14 Tage und 28 Tage (p &lt;0,001). Nach 3-tägiger Erholung soleus Masse deutlich auf 74% der Kontrollwerte. Adrenal Gewichte der HU-Mäuse unterschieden sich nicht im Vergleich zu Kontrolltieren. Der Erfolg unserer neuen HU-Methode wird durch die Pflege von Körpergewicht des Tieres, vergleichbar Nebenniere Gewichte und soleus Atrophie folgenden HU, entsprechend zu erwarten Literatur Werte 2, 7, 8 belegt. Die Hauptvorteile dieser HU-Methode sind: 1) einfache Schwanz Prüfung beim Einhängen, 2) verringert die Wahrscheinlichkeit von Zyanose, entzündet, und / oder nekrotischen Schwänzen häufig mit tail-Taping und HU beobachtet, 3) keine Möglichkeit, Mäuse Kauen der Traktion Tape und Coming-out der Aufhängevorrichtung und 4) eine schnelle Heilung und normale Käfig Aktivität unmittelbar nach HU.

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An Alternant Method to the Traditional NASA Hindlimb Unloading Model in Mice

Wir entwickelten eine alternierende Hinterlauf Entladen Modell bei Mäusen. Der Hauptvorteil unserer Hinterlauf Entladen tail-Ring-Methode gegenüber der herkömmlichen Morey-Holton tail-Traktion-Technik ist eine einfache, klare Verfahren, dass Stress minimiert auf das Tier.

Eine alternierende Methode, um die traditionelle NASA Hinterlauf Entladen Modell in Mäusen

The Morey-Holton hindlimb unloading (HU) method is a widely accepted National Aeronautics and Space Administration (NASA) ground-based model for studying ...

an-alternant-method-to-traditional-nasa-hindlimb-unloading-model

Research

JoVE Journal

Biology

20.2K Aufrufe.  University of Missouri, Columbia. Wir entwickelten eine alternierende Hinterlauf Entladen Modell bei Mäusen. Der Hauptvorteil unserer Hinterlauf Entladen tail-Ring-Methode gegenüber der herkömmlichen Morey-Holton tail-Traktion-Technik ist eine einfache, klare Verfahren, dass Stress minimiert auf das Tier.

Serie: An Alternant Method to the Traditional NASA Hindlimb Unloading Model in Mice

Murine Model of Hindlimb Ischemia 

In the United States, peripheral arterial disease (PAD) affects about 10 million individuals, and is also prevalent worldwide. Medical therapies for symptomatic relief are limited. Surgical or endovascular interventions are useful for some individuals, but long-term results are often disappointing. As a result, there is a need for developing new therapies to treat PAD. The murine hindlimb ischemia preparation is a model of PAD, and is useful for testing new therapies. When compared to other models of tissue ischemia such as coronary or cerebral artery ligation, femoral artery ligation provides for a simpler model of ischemic tissue. Other advantages of this model are the ease of access to the femoral artery and low mortality rate. 
In this video, we demonstrate the methodology for the murine model of unilateral hindimb ischemia. The specific materials and procedures for creating and evaluating the model will be described, including the assessment of limb perfusion by laser Doppler imaging. This protocol can also be utilized for the transplantation and non-invasive tracking of cells, which is demonstrated by Huang et al.1.

Murine Model of Hindlimb Ischemia

The surgical procedure for induction of unilateral hindlimb ischemia is demonstrated, with confirmation of ischemia by laser Doppler perfusion imaging.

Mausmodell der hinteren Gliedmaßen Ischämie

In the United States, peripheral arterial disease (PAD) affects about 10 million individuals, and is also prevalent worldwide.  Medical therapies for ...

Forschung

Biologie

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the function and regulation of protein folding was studied in vitro, in isolated tissue culture cells and in unicellular organisms. Recent studies have uncovered links between protein homeostasis (proteostasis), metabolism, development, aging, and temperature-sensing. These findings have led to the development of new tools for monitoring protein folding in the model metazoan organism Caenorhabditis elegans. In our laboratory, we combine behavioral assays, imaging and biochemical approaches using temperature-sensitive or naturally occurring metastable proteins as sensors of the folding environment to monitor protein misfolding. Behavioral assays that are associated with the misfolding of a specific protein provide a simple and powerful readout for protein folding, allowing for the fast screening of genes and conditions that modulate folding. Likewise, such misfolding can be associated with protein mislocalization in the cell. Monitoring protein localization can, therefore, highlight changes in cellular folding capacity occurring in different tissues, at various stages of development and in the face of changing conditions. Finally, using biochemical tools ex vivo, we can directly monitor protein stability and conformation. Thus, by combining behavioral assays, imaging and biochemical techniques, we are able to monitor protein misfolding at the resolution of the organism, the cell, and the protein, respectively.

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

To study the relationship between protein homeostasis, stress and aging, we monitored changes in protein folding by following protein dysfunction, protein localization in the cell and protein stability at the organismal, cellular and protein levels, using the genetically tractable metazoan Caenorhabditis elegans as a model system.

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the ...

Hybrid-Cut: An Improved Sectioning Method for Recalcitrant Plant Tissue Samples

Maintaining plant section integrity is essential for studying detailed anatomical structures at the cellular, tissue, or even organ level. However, some plant cells have rigid cell walls, tough fibers and crystals (calcium oxalate, silica, etc.), and high water content that often disrupt tissue integrity during plant tissue sectioning.
This study establishes a simple Hybrid-Cut tissue sectioning method. This protocol modifies a paraffin-based sectioning technique and improves the integrity of tissue sections from different plants. Plant tissues were embedded in paraffin before sectioning in a cryostat at -16 &#176;C. Sectioning under low temperature hardened the paraffin blocks, reduced tearing and scratching, and improved tissue integrity significantly. This protocol was successfully applied to calcium oxalate-rich Phalaenopsis orchid tissues as well as recalcitrant tissues such as reproductive organs and leaves of rice, maize, and wheat. In addition, the high quality of tissue sections from Hybrid-Cut could be used in combination with in situ hybridization (ISH) to provide spatial expression patterns of genes of interest. In conclusion, this protocol is particularly useful for recalcitrant plant tissue containing high crystal or silica content. Good quality tissue sections enable morphological and other biological studies.

This protocol describes a simple Hybrid-Cut tissue sectioning method that is useful for recalcitrant plant tissues. Good quality tissue sections enable anatomical studies and other biological studies including in situ hybridization (ISH).

Hybrid-Cut: Ein verbesserter Schnittverfahren für widerspenstige Pflanzengewebeproben

Maintaining plant section integrity is essential for studying detailed anatomical structures at the cellular, tissue, or even organ level. However, some ...

A Method to Assess Bacteriocin Effects on the Gut Microbiota of Mice

Very intriguing questions arise with our advancing knowledge on gut microbiota composition and the relationship with health, particularly relating to the factors that contribute to maintaining the population balance. However, there are limited available methodologies to evaluate these factors. Bacteriocins are antimicrobial peptides produced by many bacteria that may confer a competitive advantage for food acquisition and/or niche establishment. Many probiotic lactic acid bacteria (LAB) strains have great potential to promote human and animal health by preventing the growth of pathogens. They can also be used for immuno-modulation, as they produce bacteriocins. However, the antagonistic activity of bacteriocins is normally determined by laboratory bioassays under well-defined but over-simplified conditions compared to the complex gut environment in humans and animals, where bacteria face multifactorial influences from the host and hundreds of microbial species sharing the same niche. This work describes a complete and efficient procedure to assess the effect of a variety of bacteriocins with different target specificities in a murine system. Changes in the microbiota composition during the bacteriocin treatment are monitored using compositional 16S rDNA sequencing. Our approach uses both the bacteriocin producers and their isogenic non-bacteriocin-producing mutants, the latter giving the ability to distinguish bacteriocin-related from non-bacteriocin-related modifications of the microbiota. The fecal DNA extraction and 16S rDNA sequencing methods are consistent and, together with the bioinformatics, constitute a powerful procedure to find faint changes in the bacterial profiles and to establish correlations, in terms of cholesterol and triglyceride concentration, between bacterial populations and health markers. Our protocol is generic and can thus be used to study other compounds or nutrients with the potential to alter the host microbiota composition, either when studying toxicity or beneficial effects.

Bacteriocins are believed to play a key role in defining microbial diversity in different ecological niches. Here, we describe an efficient procedure to assess how bacteriocins affect gut microbiota composition in an animal model.

Eine Methode zur Beurteilung von Bakteriocin-Wirkungen auf die Gut-Mikrobiota von Mäusen

Very intriguing questions arise with our advancing knowledge on gut microbiota composition and the relationship with health, particularly relating to the ...

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A)

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer progression. How the chromosomal location and function of a centromere (i.e., centromere identity) are determined and participate in accurate chromosome segregation is a fundamental question. CENP-A is proposed to be the non-DNA indicator (epigenetic mark) of centromere identity, and CENP-A ubiquitylation is required for CENP-A deposition at the centromere, inherited through dimerization between cell division, and indispensable to cell viability.
Here we describe mass spectrometry analysis to identify ubiquitylation of EYFP-CENP-A K124R mutant suggesting that ubiquitylation at a different lysine is induced because of the EYFP tagging in the CENP-A K124R mutant protein. Lysine 306 (K306) ubiquitylation in EYFP-CENP-A K124R was successfully identified, which corresponds to lysine 56 (K56) in CENP-A through mass spectrometry analysis. A caveat is discussed in the use of GFP/EYFP or the tagging of high molecular weight protein as a tool to analyze the function of a protein. Current technical limit is also discussed for the detection of ubiquitylated bands, identification of site-specific ubiquitylation(s), and visualization of ubiquitylation in living cells or a specific single cell during the whole cell cycle.
The method of mass spectrometry analysis presented here can be applied to human CENP-A protein with different tags and other centromere-kinetochore proteins. These combinatory methods consisting of several assays/analyses could be recommended for researchers who are interested in identifying functional roles of ubiquitylation.

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A EYFP-CENP-A

CENP-A ubiquitylation is an important requirement for CENP-A deposition at the centromere, inherited through dimerization between cell division, and indispensable to cell viability. Here we describe mass spectrometry analysis to identify ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A) protein.

Massenspektrometrieanalyse zur Identifizierung der Ubiquitylierung von EIFP-A mit EYFP-Tags (EYFP-CENP-A)

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer ...

An Antegrade Perfusion Method for Cardiomyocyte Isolation from Mice

In basic research using mouse heart, isolating viable individual cardiomyocytes is a crucial technical step to overcome. Traditionally, isolating cardiomyocytes from rabbits, guinea pigs or rats has been performed via retrograde perfusion of the heart with enzymes using a Langendorff apparatus. However, a high degree of skill is required when this method is used with a small mouse heart. An antegrade perfusion method that does not use a Langendorff apparatus was recently reported for the isolation of mouse cardiomyocytes. We herein report a complete protocol for the improved antegrade perfusion of the excised heart to isolate individual heart cells from adult mice (8 - 108 weeks old). Antegrade perfusion is performed by injecting perfusate near the apex of the left ventricle of the excised heart, the aorta of which was clamped, using an infusion pump. All procedures are carried out on a pre-warmed heater mat under a microscope, which allows for the injection and perfusion processes to be monitored. The results suggest that ventricular and atrial myocytes, and fibroblasts can be well isolated from a single adult mouse simultaneously.

We developed a simple method for isolating high quality individual mouse heart cells by the antegrade perfusion technique. This method is Langendorff-free and useful for isolating ventricular and atrial myocytes or interstitial cells, such as cardiac fibroblasts or progenitors.

Eine antegrade Perfusionsmethode zur Kardiomyozytenisolation von Mäusen

In basic research using mouse heart, isolating viable individual cardiomyocytes is a crucial technical step to overcome. Traditionally, isolating ...

Imaging Molecular Adhesion in Cell Rolling by Adhesion Footprint Assay

Rolling adhesion, facilitated by selectin-mediated interactions, is a highly dynamic, passive motility in recruiting leukocytes to the site of inflammation. This phenomenon occurs in postcapillary venules, where blood flow pushes leukocytes in a rolling motion on the endothelial cells. Stable rolling requires a delicate balance between adhesion bond formation and their mechanically-driven dissociation, allowing the cell to remain attached to the surface while rolling in the direction of flow. Unlike other adhesion processes occurring in relatively static environments, rolling adhesion is highly dynamic as the rolling cells travel over thousands of microns at tens of microns per second. Consequently, conventional mechanobiology methods such as traction force microscopy are unsuitable for measuring the individual adhesion events and the associated molecular forces due to the short timescale and high sensitivity required. Here, we describe our latest implementation of the adhesion footprint assay to image the P-selectin: PSGL-1 interactions in rolling adhesion at the molecular level. This method utilizes irreversible DNA-based tension gauge tethers to produce a permanent history of molecular adhesion events in the form of fluorescence tracks. These tracks can be imaged in two ways: (1) stitching together thousands of diffraction-limited images to produce a large field of view, enabling the extraction of adhesion footprint of each rolling cell over thousands of microns in length, (2) performing DNA-PAINT to reconstruct super-resolution images of the fluorescence tracks within a small field of view. In this study, the adhesion footprint assay was used to study HL-60 cells rolling at different shear stresses. In doing so, we were able to image the spatial distribution of the P-selectin: PSGL-1 interaction and gain insight into their molecular forces through fluorescence intensity. Thus, this method provides the groundwork for the quantitative investigation of the various cell-surface interactions involved in rolling adhesion at the molecular level.

This protocol presents the experimental procedures to perform the adhesion footprint assay to image the adhesion events during fast cell rolling adhesion.

Abbildung der molekularen Adhäsion im Zellrollen durch Adhäsion Footprint Assay

Rolling adhesion, facilitated by selectin-mediated interactions, is a highly dynamic, passive motility in recruiting leukocytes to the site of ...

Bioluminescent Monitoring of Graft Survival in an Adoptive Transfer Model of Autoimmune Diabetes in Mice

Type 1 diabetes is characterized by the autoimmune destruction of the insulin-producing beta cells of the pancreas. A promising treatment for this disease is the transplantation of stem cell-derived beta cells. Genetic modifications, however, may be necessary to protect the transplanted cells from persistent autoimmunity. Diabetic mouse models are a useful tool for the preliminary evaluation of strategies to protect transplanted cells from autoimmune attack. Described here is a minimally invasive method for transplanting and imaging cell grafts in an adoptive transfer model of diabetes in mice. In this protocol, cells from the murine pancreatic beta cell line NIT-1 expressing the firefly luciferase transgene luc2 are transplanted subcutaneously into immunodeficient non-obese diabetic (NOD)-severe combined immunodeficient (scid) mice. These mice are simultaneously injected intravenously with splenocytes from spontaneously diabetic NOD mice to transfer autoimmunity. The grafts are imaged at regular intervals via non-invasive bioluminescent imaging to monitor the cell survival. The survival of mutant cells is compared to that of control cells transplanted into the same mouse.

This protocol describes a straightforward and minimally invasive method for transplanting and imaging NIT-1 cells in non-obese diabetic (NOD)-severe combined immunodeficient mice challenged with splenocytes purified from spontaneously diabetic NOD mice.

Biolumineszentes Monitoring des Transplantatüberlebens in einem adoptiven Transfermodell des Autoimmundiabetes bei Mäusen

Type 1 diabetes is characterized by the autoimmune destruction of the insulin-producing beta cells of the pancreas. A promising treatment for this disease ...

Establishing a Diaphyseal Femur Fracture Model in Mice

Bones have a significant regenerative capacity. However, fracture healing is a complex process, and depending on the severity of the lesions and the age and overall health status of the patient, failures can occur, leading to delayed union or nonunion. Due to the increasing number of fractures resulting from high-energy trauma and aging, the development of innovative therapeutic strategies to improve bone repair based on the combination of skeletal/mesenchymal stem/stromal cells and biomimetic biomaterials is urgently needed. To this end, the use of reliable animal models is fundamental to better understanding the key cellular and molecular mechanisms that determine the healing outcomes. Of all the models, the mouse is the preferred research model because it offers a wide variety of transgenic strains and reagents for experimental analysis. However, the establishment of fractures in mice may be technically challenging due to their small size. Therefore, this article aims to demonstrate the procedures for the surgical establishment of a diaphyseal femur fracture in mice, which is stabilized with an intramedullary wire and resembles the most common bone repair process, through cartilaginous callus formation.

This protocol describes a surgical procedure for the establishment of a diaphyseal fracture in the femur of mice, which is stabilized with an intramedullary wire, for fracture healing studies.

Etablierung eines diaphysären Femurfrakturmodells bei Mäusen

Bones have a significant regenerative capacity. However, fracture healing is a complex process, and depending on the severity of the lesions and the age ...

Noninvasive Intratracheal Lipopolysaccharide Instillation in Mice

The acute lung injury (ALI) mouse model induced by lipopolysaccharide (LPS) or endotoxin is still among the most commonly used models in animal studies of acute lung injury or acute inflammation. The current most commonly used methods in acute lung injury mouse models are an intraperitoneal injection of LPS and tracheostomy for the tracheal infusion of LPS. However, the former method lacks lung targeting and damages other organs, and the latter method induces operative trauma, infection risk, and a low survival rate. Here, we recommend a noninvasive oropharyngeal endotracheal intubation method for LPS instillation in mice. In this method, LPS is noninvasively introduced into the trachea through the oropharyngeal cavity to be instilled into the lung with the help of an apparatus for endotracheal intubation. This method not only assures lung targeting but also avoids damage and the risk of death in the animals. We expect that this approach will become widely used in the field of acute lung injury.

Here, we propose a protocol for intratracheal lipopolysaccharide (LPS) delivery via noninvasive oropharyngeal endotracheal intubation. This method minimizes the trauma of the surgical procedure for the animal and accurately delivers LPS to the trachea and then to the lungs.

Nichtinvasive intratracheale Lipopolysaccharid-Instillation bei Mäusen

The acute lung injury (ALI) mouse model induced by lipopolysaccharide (LPS) or endotoxin is still among the most commonly used models in animal studies of ...