Bu protokol, arkadaki mekanik hassasiyeti test etmek için kullanışlıdır. Kronik sırt ağrısının sıçan modellerinde uzunlamasına tasarımlar için özellikle ilginçtir, bunun amacı zararlı uyaranlara karşı sırt duyarlılığını azaltmak için bir müdahalenin etkinliğini incelemektir. Yöntem basit, erişilebilir ve eğitimli deneycilerde tekrarlanabilir sonuçlar verir.
Büyük ölçüde, arka pençedeki mekanik hassasiyeti değerlendirmek için yaygın olarak kullanılan Von Frey testine dayanmaktadır. Diğer davranışsal testlere gelince, deneyciler filamentlerin uygulanmasını standartlaştırmak ve mekanik uyaranlar tarafından üretilen davranışlar diğer davranışlardan kolayca ayırt edilene kadar pratik yapmalıdır. Test basittir, aksi takdirde ve onu kullanmak için büyük bir zorluk olmamalıdır.
Prosedürü gösteren, laboratuvarımdan doktora öğrencisi olan Nasim Eskandari olacak. Sıçanda kronik sırt ağrısını indüklemek için, sırt kaslarına Tam Freund Adjuvanı veya CFA'nın kas içi enjeksiyonunu gerçekleştirin. 27 gauge iğne kullanarak, CFA'nın kullanıma hazır yağda su emülsiyonunun 150 mikrolitresini tek taraflı veya iki taraflı olarak paraspinal kaslara enjekte edin.
İğneyi en az üç dakika yerinde tutun. Daha sonra, iki bitişik odayı dört adet 33 santimetre uzunluğundaki pleksiglas bacağa monte ederek her hayvan için bir odadan oluşan iki hayvan için test kafesini imal edin. Odaların duvarları için şeffaf pleksiglas ve hayvanların birbirlerini görmesini önlemek için odaları ayırmak için siyah pleksiglas kullanın.
Ardından, sekiz milimetrelik bir teller arası mesafeye sahip bir milimetrelik telden yapılmış paslanmaz çelik ağ kullanarak test kafesinin zeminini ve tavanını yapın. İlk testten önce sıçanı günde 30 dakika boyunca test kafesine alıştırmak, ardışık beş ila yedi gün boyunca. İzofluran anestezisi altında eğilimli bir pozisyonda, bir hayvan kılı düzeltici kullanarak ilgilenilen bölgedeki arka saçları yaklaşık 10 omur seviyesinin üzerinde tıraş edin.
Tekrarlanan önlemler için, uyaranların her zaman doğrudan cilde uygulandığından emin olmak için davranışsal değerlendirme yapmadan her üç günde bir arka saçları tıraş edin. Testi farklı günlerde tekrarlarken filamentlerin her zaman aynı bölgeye uygulandığından emin olmak için kalıcı bir işaretleyici ile cilde bir işaret çizin. Test gününde, sıçan sakinleşene kadar testten 15 ila 30 dakika önce sıçanı test kafesine yerleştirin.
Daha sonra Von Frey filamentlerini arkaya dik olarak, her zaman iki gramlık filamentten başlayarak ve yukarı / aşağı yöntemini kullanarak uygulayın. Filamenti iki saniye boyunca iki taraflı olarak ilgi alanına uygulayın Omurgadan 10 milimetre, sıçan uyanıkken, dört pençesi üzerinde dururken ve hareket etmediğinde her 15 ila 30 saniyede bir işlenir. Bir filamentin uygulanmasıyla herhangi bir yanıt gözlenmezse, bir sonraki filamenti seride daha yüksek bir kuvvetle uygulayın.
Sırtın kemerlenmesi, yalama, kas seğirmesi, filamentten uzaklaşma veya dönme gibi olumlu bir yanıt gözlenirse, seride daha düşük bir kuvvetle bir sonraki filamenti kullanın. İlk davranış değişikliğinden sonra dört okuma elde edilene kadar prosedüre devam edin. Bu çalışmada, CFA ve kontrol sıçanları arasındaki sırt mekanik duyarlılığı araştırılmıştır.
Başlangıçta, mekanik duyarlılık gruplar arasında benzerdi. Bel kaslarına KFA'nın intramüsküler enjeksiyonu, mekanik duyarlılıkta yedi ila 28 gün arasında belirgin bir artışa neden olmuştur. Buna karşılık, kontrol sıçanları önemli bir değişiklik göstermedi.
Ayrıca, histolojik inceleme, açık bir lökosit infiltrasyonu ile CFA enjekte edilen kaslarda kronik inflamatuar değişikliklerin varlığını doğruladı. Kas içi salin enjeksiyonundan sonra kontrollü bir sıçandan sağlıklı sırt kasları referans olarak gösterilmiştir. Mekanik aşırı duyarlılık, arka kaslara ek olarak standart bir Von Frey testi ile arka pençede gözlendi.
Filamentin her zaman arkaya dik olarak aynı şekilde uygulandığından ve uygularken hayvanın hareket etmediğinden emin olmak çok önemlidir. Deneyci ayrıca modern hareketler için davranışsal tepkileri ayırt etmede güven hissetmelidir.
