Bu çalışma NHLBI gelen RW için bir hibe ile desteklenmiştir.

1. Power Tower Kurulumu ve İşletilmesi <ol><li> Güç Tower bir tabloya kelepçelenir kontrplak bir dikdörtgen parça üzerine yerleştirilir. Grainger A 4.5 rpm vites motor dört 2 &quot;x6&quot; panoları ve bir ¾ inç kontrplak levha üzerine oturmaktadır. Motor, bir AC / DC hız kontrol, sigorta ve bir açma-kapama düğmesi / bir kavşaktan kutuya birlikte kablolu. </li><li> Motoru soğutmak için çapında bir delik 3 inç kontrplak dikey ½ inç parça halinde kesilir. Bir tarafta, bir 3-inch fan kontrplak takılır, ve diğer yandan, bir 3-inch çaplı metal silindiri monte edilir. </li><li> Ucuna monte edilmiş bir silindir ile bir ölçüye dönen kol motora bağlanmıştır. Motor ve ekli kolu bir kapı menteşesi ile kontrplak bağlı bir bükük ¾ inç kare tüp stokunun bir tarafı bastırarak, saat yönünde çevirin. Bir tekerlek bu directl olduğu platformda karşı rulo izin vermek için bir platform altında tüp stok üst tarafındadırYukarıda y. </li><li> Kol tüpü stoku bir ucunu iter ve iki düzey platformu (Şekil 1D) yükselterek, diğer ucunu kaldırır. Kol silindir tüp stok temizler zaman kol (Şekil 1F) geri platformu bırakarak, başlangıç ​​pozisyonuna geri dönmek için izin verir. </li><li> Platformları kontrplak üstüne yerleştirilir ve vida gözleri üzerine kanca olan bungee kabloları tarafından teminat altına alınmıştır raflar oluşur. Platformları parantez ile kontrplak bağlı olan çekmece sürgü boyunca yukarı ve aşağı doğru kaydırın. </li><li> Flakon raflar yerleştirilir ve bungee kabloları ile yerinde tutulur bir kare ızgara ekran yardımıyla sabitlenir. </li><li> Bir Strafor yastık damla şok kırmak için platform altına yerleştirilir. </li><li> Motor gücü tam bir dönme süresi 15 saniyeden uzun olacak şekilde ayarlanır. </li></ol> 2. Egzersiz protokolü <ol><li> Sinekler% 50 nem ve 12 saatlik aydınlık / karanlık döngüsünde ile bir 25 ° C inkübatöründe içinde muhafaza edilir. Both egzersiz eğitimi ve egzersiz kapasitesinin değerlendirilmesi 25 ° C sıcaklık kontrollü odada yapılmaktadır. </li><li> Sinekler birbirinden 1-2 gün içinde toplandı ve yaş-eşleştirilir. 240 sinekler minimum dayanıklılık ve negatif geotaxis (tırmanma) yeteneği, egzersiz eğitiminin etkilerini yansıtan iki fizyolojik göstergeleri boyuna izlenmesi için gereklidir. Boyuna izleme kohort arasındaki varyasyonun karıştırıcı etkisi olmaksızın, her bir grup için başlangıç ​​değerlerine göre bağlı değişim izolasyonu sağlar. Gerektiği gibi ek deneyler için sinekler alınmalıdır. </li><li> Toplanmasından sonra, sineklerin icra edilmeyecektir egzersiz rejimi ve 120 kontrol sinek, maruz kalacağı 120 deneysel sinekler, ayrılır. Sinekler, her uçar 20 şişe içinde depolanır. Deneysel sineklerin şişeleri firma selüloz asetat Flugs ve kontrol flakon (unexercised) ile takıldığını sinekler yumuşak bir sünger tapalar, w ile takılıhich Power Tower sırasında sinekler hareketsiz aşağı itilmiş olabilir. Kendi adaptif boyutu flakon altına yakın kolayca yerleştirilmesini sağlar çünkü Sünger immobilizasyon için kullanılır. Yumuşak bir sünger malzeme de daha sağlam Flugs kaynaklanan yaralanmaları azaltır. </li><li> Power Tower sinekler depolanır ve boş şişeler içinde icra edildiği sinekler daha yumuşak bir iniş ile sağlamaktadır gıda, 5 mL içeren flakon icra edilir. Bir eğitim oturumu sırasında çoğu zaman yemek sinekler gözlemlemek olmasa da gıda tipik olarak,% 10 sukroz,% 10 maya, su ve% 2 agar oluşmaktadır. Boş şişeleri eğitim sırasında kullanılması halinde, rahatsızlıklar yaşayabilirsiniz sinekler yüzdesi giderek artmaktadır. </li><li> Güç Tower 25 &#39;de muhafaza edilmektedir sıcaklık kontrollü bir odaya ° C&#39;de işletilmektedir Deneysel sinekler Power Tower yerleştirilir ve tırmanmak için yapılır. Kontrol sinekler de Power Tower yerleştirilir, ancak sünger stoper v içine doğru itilirsinekler üzerinde ial yaklaşık 3 mm hareketi sınırlamak amacıyla. Bu grup egzersiz ilgisiz Power Tower herhangi bir etkileri için bir kontrol olarak hizmet vermektedir. Bazı oda hala manevra kabiliyeti bu sinekler için var olmasına karşın, sürekli olarak bu şartlar altında sinekler çok az çalıştırmak ve egzersiz fizyolojik bir tepki göstermek değil gözlemledim. Ayrıca tüm azından Güç kulesinin üstüne değildir ek bir kontrol grubu dahil edilmesi arzu edilebilir. </li><li> Sinekler rampalı bir programı (Şekil 2) kullanılarak, her hafta beş gün üst üste icra edilir. Haftada bir sırasında sinekler seans başına 2.5 saat 2 saat oturum başına, bir hafta iki icra edildiği ve seans başına 3 saat boyunca haftada üç. Diğer rejimler test edilmiş olsa da, bu protokol genotipler arasında ve farklı koşullar altında tutarlı sonuçlar üretir. Bu protokol, ancak, belirli bir deneme uygun olabilecek olası varyasyonları geniş bir dizi tabidir. </li></ol>3. Egzersiz ve lokomotor Yorgunluk <ol><li> Dayanıklılık egzersiz sırasında yorgunluk zaman belirli bir kohort egzersiz kapasitesini onaylamak ve / veya ölçmek için yararlı fizyolojik bir göstergesidir. Yorulma deneyleri eğitimi Deneylerde kullanılan edilecektir kohortlarında boylamasına gerçekleştirilebilir. Tahliller eğitimi protokolü ya da her ikisinin tamamlanmasından sonra, eğitim öncesinde ya da gerçekleştirilebilir. Eğitim sırasında artan ilerleme grafik isteniyorsa diğer ara zaman noktaları eklenebilir. Yorulma assay ayrıca, diyet değiştirme (Şekil 3B) olarak eğitimi protokolü, başka tedavilere cevap olarak egzersiz dayanıklılık ölçmek için kullanılabilir. </li><li> Eğitim yer alıyor değilken Yorulma deneyleri bir günde yapılmalıdır. Deney ve kontrol Hem sineklerin 20 her flakonlarda Power Tower yerleştirilir ve yorgun kadar tırmanmaya yapılır. Yorgunluk davranış tırmanma ile negatif geotaxis uyarıcıya yanıt vermek için başarısızlık olarak kabul edilmektedir. Yorgunluk behavior görsel gözlem tarafından atılırsa. </li><li> 5 veya daha az sinek arka arkaya dört damla için daha yüksek 2 inç tırmanmak mümkün olduğunda sineklerin bir şişe &quot;yorgun&quot; olarak kabul edilir. Hala çalışırken yorgunluk şişeleri Güç Tower kaldırılır ve çıkarılması süresi kaydedilmektedir. Kaldırma Times iç içe geçmiş bir histogram olarak, ya da bir &quot;time-to-başarısızlık&quot; komplo olarak çizilebilir. Bir &quot;süre-başarısızlık&quot; komplo Şekil 3B görüldüğü gibi verilerin bir örneği çizilmiştir. </li><li> Flakon 10 saat en fazla 10 dakika aralıklarla (Şekil 3B) izlenmektedir. </li></ol> 4. Egzersiz, Yaş ve lokomotor Yetenek <ol><li> Bu eğitim protokolü bağlı çalışan davranışı dayandığından, eğitim etkileri miktarlarının için birincil test uzunlamasına eğitim sırasında hızı ortalama çalışan değişimi ölçmektir. Eğitim sırasında, icra ve unexercised sineklerin 120-sinek kohortlarında olumsuz geotaxis uyarana tepki için günlük test edilir. HALKA teknik dGargano ve ark escribed. (2005) sineklerin tırmanma yeteneği 12 ölçmek için kullanılır. Kısaca, bu tekniğin olumsuz geotaxis indüksiyonu sonrası tanımlanmış bir süre boyunca uçan bir şişe ile tırmandı ortalama yükseklik ölçer. Tanımlanmış bir süre boyunca yükseldi yüksekliği hızı tırmanma eşdeğerdir. Ölçümler günün çalıştırdıktan sonra yorgunluktan komplikasyonları önlemek amacıyla günlük antrenman için makine üzerinde sinekler yerleştirmeden önce yapılır. </li><li> Standart protokolde, sinekler üç hafta olmak üzere toplam icra edildiği ve tırmanma yeteneği beş hafta olmak üzere toplam incelenir: (Şekil 2) egzersiz kesilmesinden sonra egzersiz eğitimi ve iki hafta boyunca üç hafta. Bu deneyci mobilite üzerine egzersizin etkisi programı kesilmesinden sonra devam edip grafik sağlar. </li><li> Her bir grupta günlük HALKA performansı dört fotoğraf yeteneği tırmanma analizi için kullanılmıştır. Altı şişeleri her fotoğraf dahil edilir. Negatif geotaxis uyarılan, ve bir kullananzamanlı kamera, fotoğraf saniye belirli sayıda ardından çekilir. Bu deneysel koşullarına bağlı olarak değiştirilebilir olmakla beraber, tipik olarak iki saniye kullanımı. Her fotoğraf için, her şişe eşit yükseklikte dört parçaya bölünür ve görüntü işleme yazılımı her anında onu ayrılan süre içinde ulaştı kadranda dayalı bir puan atamak için kullanılır. Üst kadranda, 4 puan alabilmeniz için tırmanmaya Sinekler sonraki en yüksek kadranda uçar 3 almak, bir 2 alırsınız en yüksek ikinci kadranda uçar ve en düşük kadranda sinekler 1 alırsınız. Tüm alt kısmında kapalı tırmanmaya değil Sineklerin 0 puan verilir. </li><li> Verilen bir fotoğrafını her şişe için, bir &quot;tırmanma indisi&quot; ki şişe içinde hepsi sineklerin skorlar ortalama tarafından üretilir. Dört fotoğraflarından Her flakon Kullanıcı endeksleri o gün için son bir tırmanma indeks vermek için ortalaması alınır. </li><li> Tüm negatif geotaxis deneyler uzunlamasına yapılmaktadır. Sonuçlar normalize t vardıryeteneği tırmanış sırasında kohort varyasyon etkisini azaltmak ve egzersiz sonucu bir kohort Kullanıcı tırmanma kapasitesi göreli boylamasına değişikliği vurgulamak amacıyla ilk &quot;egzersiz öncesi&quot; puan o. İlk puanı ilk üç gün tırmanış endeksleri ortalaması ile belirlenir ve 1 değeri atanır. Daha sonraki çalışmalarda daha sonra başlangıç ​​endeksi bir yüzdesi olarak ifade edilir. </li></ol> 5.. Temsilcisi Sonuçlar Yabani tip sinekler gibi yaşı beş haftalık (Şekil 3A) arasında uzunlamasına HALKA tayinlerde yansıyan, eğitim bittikten sonra devam ederse tırmanma yeteneği bir azalma yaşa bağlı azalma olan bir dayanıklılık protokolü yanıt. Negatif geotaxis Bu gecikmiş düşüş yabani tip egzersiz yanıt normal meydana emin olmak için, pozitif kontrol olarak hizmet verebilir standart bir fenotipik bir yanıttır. Bu, verilerin bir dizi örnek olarak sunulmuştur nasıl Güç T tarafından egzersiz indüksiyonuOwer programı bir davranış giriş olarak kullanılabilir. Bu etkiyi modüle çeşitli genetik ve çevresel faktörlerin yeteneği daha sonra değerlendirilebilir. Bunun tersine, aynı zamanda, çeşitli güç Tower deney tasarımı bir çıkış olarak kullanılabilir. Örneğin, genotipine, diyet, veya diğer koşullara çeşitlendirilebilir. Sonra, egzersiz fizyolojisi bu farklılıkların etkisi Power Tower kullanılarak test edilebilir. Burada, bu yaklaşımın bir örneğini gösterir. Diyetlerine sakaroz değişen bir yüzde ile uçar artan dayanıklılık kapasitesi (Şekil 3B) ile korele yorgunluk, artan sakkaroz içeriğe kez test edildiğinde. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/3786/3786fig1.jpg" /> Şekil 1.. Power Tower İşletilmesi. Bu bükük kare tüp ile temas kadar bağlı rulo ile (AC) motorlu bükülmüş kol saat yönünde dönmektedir. (D, E) kolu bükük kare tüp iter<html> , Asansör sinek şişeleri ile dolu olduğu platformda neden olur. (F) kol gibi platformu sinekler şişenin dibine dönmek için zorlayarak, geri düşmek için izin verilen tüp temizler. <img alt="Şekil 2" src="/files/ftp_upload/3786/3786fig2.jpg" /> Şekil 2. Egzersiz Protokolü önerdi. Eğitim protokolü tabi uçar giderek 30 dakika her hafta ilk 2 saat arasında egzersiz süresi artar üç hafta süren rampalı rejimi altında her hafta beş gün için egzersiz yapılır. Standart analizler öncesi yorgunluk testleri içerir ve hafta ile 5. hafta 1 egzersiz programı ve HALKA deneyleri takip. Tüm testler negatif kontrol olarak unexercised sineklerin sayısı eşit iki kez yapılmaktadır. Araştırmacılar tarafından belirlendiği şekilde, çeşitli fizyolojik veya biyokimyasal yapılabilir. 3786fig3.jpg &quot;/&gt; Şekil 3. Dayanıklılık egzersiz hareketlilik birden yönlerini değiştirir. (A) HALKA deneyleri erkek Y 1 W 67C23 kohortlarında tek bir çift de çağlar boyunca uzunlamasına yapılmıştır. Yaştaki, genetik özdeş icra ve unexercised kontrolü sinekler ortalama tırmanışı hız için günlük ölçüldü. Sonuçlar ölçüm ilk üç günü boyunca ortalama tırmanma yüksekliği normalize bir tırmanma endeksi olarak ifade edilir. Egzersiz eğitilmiş sinekler yaş (2-yönlü ANOVA, p &lt;0.005) arasında yaştaki unexercised kardeşleri ile karşılaştırıldığında olumsuz geotaxis yeteneğinde bir azalma yaşa bağlı düşüş gösterdi. (B) Yorgunluk Testler 8 saat boyunca yürütülen yaştaki kadın Canton S sinekler yorgunluk (Log-rank, p &lt;0.0001) zamanında diyet sakaroz içeriğinin bir etkisi gösterilememiştir. Deney öncesinde, sinekler% 10 ağırlık / hacim maya konsantrasyonu ve değişen bir yüzde ile, bir maya / sukroz / agar diyetle beslendidiyet sakaroz. 20 sinekler her beş şişe Her diyet için test edildi. Grafik hala belirli bir zaman noktasında çalışan beş veya daha fazla sinekler kaç şişe görüntüler. Bu sonuçlar en az beş sineklerin olumsuz geotaxis uyaranlara cevap vermeye devam zaman bir nokta olarak tanımlanan bir flakon için &quot;başarısız&quot; bir yaşam (veya başarısızlık zamanı) eğrisi gibi istatistiksel ve grafiksel olarak tedavi edilebilir. Birçok olası çalışma tasarımları ve istatistiksel tedaviler yapılabilir ve veri işleme ve ölçüm bireysel amaçlar uyacak şekilde özel gerektiğini unutmayın.

<ol>
	<li>Wild, S., Roglic, G., Green, A., Sicree, R., King, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+Prevalence+of+Diabetes:+Estimates+for+the+year+2000+and+projections+for+2030.">Global Prevalence of Diabetes: Estimates for the year 2000 and projections for 2030.</a> Diabetes Care. 25, 1047-1053 (2004).</li><li>Flegal, K. M., Carroll, M. D., Ogden, L. C., Johnson, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+and+Trends+in+Obesity+Among+US+Adults.">Prevalence and Trends in Obesity Among US Adults.</a> JAMA. 288, 1723-1727 (1999).</li><li>Hubert, H. B., Feinleib, M., McNamar, P. M., Castelli, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obesity+as+an+Independent+Risk+Factor+for+Cardiovascular+Disease:+A+26-year+Follow-up+of+Participants+in+the+Framingham+Heart+Study.">Obesity as an Independent Risk Factor for Cardiovascular Disease: A 26-year Follow-up of Participants in the Framingham Heart Study.</a> Circulation. 67, 698-977 (1983).</li><li>Ross, R., Dagnone, D., Jones, P. J. H., Smith, H., Paddags, A., Hudson, R., Janssen, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduction+in+obesity+and+related+comorbid+conditions+after+diet-induced+weight+loss+or+exercise-induced+weight+loss+in+med+â&#x20AC;&#x201C;+A+randomized,+controlled+trial.">Reduction in obesity and related comorbid conditions after diet-induced weight loss or exercise-induced weight loss in med â&#x20AC;&#x201C; A randomized, controlled trial.</a> Annals of Internal Medicine. 133, 92-103 (2000).</li><li>Goodyea, L. J., Kahn, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exercise+Glucose+Transport,+and+Insulin+Sensitivity.">Exercise Glucose Transport, and Insulin Sensitivity.</a> Annual Review of Medicine. 49, 235-261 (1998).</li><li>Linke, A., Adams, V., Schulze, P. D., Erbs, S., Gielen, S., Fiehn, E., Mobius-Winkler, S., Schubert, A., Schuler, G., Hambrecht, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antioxidative+Effects+of+Exercise+Training+in+Patients+With+Chronic+Heart+Failure.">Antioxidative Effects of Exercise Training in Patients With Chronic Heart Failure.</a> Circulation. 111, 1763-1763 (2005).</li><li>Kemi, O. J., Ellingsen, O., Smith, G. L., Wisloff, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exercise-induced+changes+in+calcium+handling+in+left+ventricular+cardiomyocytes.">Exercise-induced changes in calcium handling in left ventricular cardiomyocytes.</a> Frontiers in Bioscience. 13, 356-368 (2008).</li><li>Wang, H., Hiatt, W. R., Barstow, T. J., Brass, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationships+between+muscle+mitochondrial+enzyme+activity+and+oxidative+capacity+in+man:+alterations+with+disease.">Relationships between muscle mitochondrial enzyme activity and oxidative capacity in man: alterations with disease.</a> Eur. J. Appl. Physiol. 80, 22-27 (1999).</li><li>Wu, Z., Puigserver, P., Andersson, U., Zhang, C., Adelmant, G., Mootha, V., Troy, A., Cinti, S., Lowell, B., Scarpulla, R. C., Spiegelman, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+Controlling+Mitochondrial+Biogenesis+and+Respiration+through+the+Thermogenic+Coactivator+PGC-1.">Mechanisms Controlling Mitochondrial Biogenesis and Respiration through the Thermogenic Coactivator PGC-1.</a> Cell. 98, 115-124 (1999).</li><li>Goto, M., Terada, S., Kato, M., Katoh, M., Yokozeki, T., Tabata, I., Shimokawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=cDNA+Cloning+and+mRNA+Analysis+of+PGC-1+in+Epirtrochlearis+Muscle+in+Swimming-Exercised+Rats.">cDNA Cloning and mRNA Analysis of PGC-1 in Epirtrochlearis Muscle in Swimming-Exercised Rats.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. , 274-350 (2000).</li><li>Piazza, N., Gosangi, B., Devilla, S., Arking, R., Wessells, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exercise-Training+in+Young+Drosophila+melanogaster+Reduces+Age-Related+Decline+in+Mobility+and+Cardiac+Performance.">Exercise-Training in Young Drosophila melanogaster Reduces Age-Related Decline in Mobility and Cardiac Performance.</a> PLoS ONE. 4, e5886-e5886 (2009).</li><li>Gargano, J. W., Martin, I., Bhandari, P., Grotewiel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+iterative+negative+geotaxis+(RING):+a+new+method+for+assessing+age-related+locomotor+decline+in+Drosophila.">Rapid iterative negative geotaxis (RING): a new method for assessing age-related locomotor decline in Drosophila.</a> Exp Gerontol. 40, 386-395 (2005).</li></ol>

Biz ifşa hiçbir şey yok.

Burada sunulan genel bir protokol sonrasında antrenmanlara fizyolojik etkileri belgeleyen başarılı olmuştur. Ancak, bu protokolde çeşitli alanlarda, özellikle deneysel ihtiyaçlarınıza göre değişiklik tabidir. Örneğin, nöbetleri ve eğitim ve sayıda uzunluğu potansiyel programı daha az ya da çok zor olarak istenen olmak üzere farklı şekillerde olabilir. Negatif geotaxis yeteneği ölçüldüğü kabın yüksekliği belgelenmelidir iyileştirilmesi için kullanılabilir alanını artırmak üzere değiştirilebilir. Hız tırmanma kantitatif otomasyonunu çeşitli yöntemler uygulanabilir. Prensip olarak, arka plan sinek ayırt yeteneğine sahip herhangi bir yazılım programı veri toplama işlemi hızlandırmak için kullanılabilir. Protokolünün bazı yönleri ise, büyük bir dikkatle sadece modifiye edilmelidir. Örneğin, ön deneyler kuvvetli haftada kalanı en az bir gün daha Göstrm kolaylaştırmak için eğilimi göstermektediramansız günlük egzersiz daha ovement. Buna ek olarak, sirkadiyen ritimler ve sıcaklık soğukkanlıdırlar hayvanların hareketleri etkiler bilinmektedir. Eğitim gerçekleşir o günün zaman sirkadiyen ritim karıştırıcı etkileri olasılığını önlemek için, çeşitli olabilir, ama her zaman karşılaştırma altında belli gruplar içinde tutarlı olmalıdır. Sıcaklık kontrolü de önemlidir ve biz ev egzersiz donanımları için sabit sıcaklıkta özel bir oda öneririz. Son olarak, erkeklerde ve kadınlarda egzersiz kapasitesi verimlilik ve cinsiyet farklılıkları karıştırıcı etkilerin önlenmesi için potansiyel olarak, ayrı ayrı ve yetiştirilen ölçülmelidir. Bu metodoloji Potansiyel uygulamaları yalnızca araştırmacı hayal gücü ile sınırlıdır. Ön çalışma olarak, üç geniş uygulamalarda bu yöntem kullanılmaktadır adres: <ol><li> Çağlar boyunca vahşi tip biyoloji çeşitli yönlerine ilişkin dayanıklılık egzersiz etkisini ölçmek için. </li><li> TBelirli mutant fenotipleri dayanıklılık egzersiz etkisini ölçmek o. </li><li> Egzersizin yararları yürütmek için gerekli olan genetik faktörler için taranması için </li></ol> Bu uygulamaların her biri belirli bir olasılıklar çeşitli kapsar. Bizim ön tecrübeye dayanarak, mutant fenotipleri bu diyete göre değişir kadar egzersiz düzeyi ile değişebilir eğilimindedir. Daha iyi bir diyet, egzersiz fizyolojisi ve yaşlanma arasındaki ilişkiyi anlamak için omurgasız modellerin kullanımı belki de bu protokolün en önemli genel bir uygulamadır.

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> Dayton Redüktörlü </td><td> Grainger </td><td> 1LRA6A </td><td></td></tr><tr><td> Raco Elektrik Kutusu </td><td> Grainger </td><td> 5A052 </td><td></td></tr><tr><td> Raco Kapak </td><td> Grainger </td><td> 5A053 </td><td></td></tr><tr><td> Cooper Bussmann Sigorta </td><td> Grainger </td><td> 6F043 </td><td></td></tr><tr><td> Cooper Bussmann Sigorta Tutucu </td><td> Grainger </td><td> 1DD33 </td><td></td></tr><tr><td> Carling Teknolojileri Anahtarı </td><td> Grainger </td><td> 2X464 </td><td></td></tr><tr><td> Dayton Kontrol, AC / DC Hız </td><td> Grainger </td><td> 4X796 </td><td&gt; </td></tr><tr><td> Dar Plastik şişeler için Flugs </td><td> Genesee Bilimsel </td><td> 49-102 </td><td></td></tr></tbody></table>

endurance training protocol and longitudinal performance assays for drosophila melanogaster

Modern tıp araştırmacıları karşılaştığı en önemli sorunlardan biri, diyabet ve 1-3 kardiyovasküler hastalık gibi ilişkili bozukluklarda sonucu artış, obezite kabaran seviyeleridir. Bu ilişkili sağlık sorunlarının bir araştırma önemli bir konu faydalı bir müdahale olarak dayanıklılık egzersiz rolü kapsar. Egzersiz, aşırı vücut yağ 4 azalma dahil olmak üzere birçok faydalı sonuçlar, pahalı olmayan, non-invazif girişim olan anti-inflamatuar ve antioksidan yanıtları 6, 7 ve kardiyomiyositler geliştirilmiş kasılma kapasitesini arttırmış, iskelet kası 5 insülin duyarlılığı arttı. Düşük yoğunluklu egzersiz önemli bir ara 9,10 olarak transkripsiyonel koaktivatör PGC1-α ile, insanlarda, farelerde ve 8 mitokondriyal aktivitesi ve biyogenezi arttırdığı bilinmektedir. Despite pek çok önemli yaşa bağlı hastalıklarla mücadele için bir araç olarak egzersiz önemini, geniş uzunlamasına genetik çalışmalar kısa ömürlü bir genetik modeli türleri için bir dayanıklılık antrenmanı protokol eksikliği engellemektedir edilmiştir. Birlikte ömrünün kısa ve ucuz bakım Drosophila ile kullanılabilir genetik araçları, çeşitli, bu genetik mekanizmalar daha fazla çalışma için cazip bir model haline getiriyor. Bu göz önüne aldığımızda biz büyük ölçekli Drosophila melanogaster 11 egzersiz eğitimi için Power Tower olarak bilinen yeni bir cihaz, geliştirdik. Power Tower tekrar tekrar hızlı bir tırmanma ikna etmek için sinekler &#39;içgüdüsel olumsuz geotaxis davranışı kullanır. Her zaman makinesi asansörleri, keser, sineklerin platformu, sinekler tırmanmaya indüklenir. Sinekler gibi uzun makine çalıştırma veya onlar da cevap yorgun olana kadar olduğu gibi yanıt vermeye devam. Böylece, araştırmacı s sağlamak için bu makineyi kullanabiliryaştaki ve genetik olarak özdeş sinekler büyük sayılardaki imultaneous eğitim. Ayrıca, eğitim sırasında sinek kohortlarında boyuna ilerlemeyi izlemek için yararlı ilgili deneyleri açıklar.

Watch this Scientific Journal Video about Endurance Training Protocol and Longitudinal Performance Assays for Drosophila melanogaster at JoVE.com

Endurance Training Protocol and Longitudinal Performance Assays for Drosophila melanogaster

Biz, önemli bir genetik modeli türleri için ilk dayanıklılık eğitimi protokolü açıklamak<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Ve mobilite aşağıdaki eğitim gelişmeler grafik birkaç testleri özetlemektedir.

Drosophila melanogaster Kondisyon Eğitim Protokolü ve Boyuna Performans Tahliller

One of the most pressing problems facing modern medical researchers is the surging levels of obesity, with the consequent increase in associated disorders ...

endurance-training-protocol-longitudinal-performance-assays-for

Research

JoVE Journal

Biology

Endurance Training Protocol and Longitudinal Performance Assays for Drosophila melanogaster

15.5K Görüntüleme.  University of Michigan Medical School. Biz, önemli bir genetik modeli türleri için ilk dayanıklılık eğitimi protokolü açıklamak Drosophila melanogaster Ve mobilite aşağıdaki eğitim gelişmeler grafik birkaç testleri özetlemektedir.

Video: Endurance Training Protocol and Longitudinal Performance Assays for Drosophila melanogaster

High-Resolution Video Tracking of Locomotion in Adult Drosophila Melanogaster

Flies provide an important model for studying complex behavior due to the plethora of genetic tools available to researchers in this field. Studying locomotor behavior in Drosophila melanogaster relies on the ability to be able to quantify changes in motion during or in response to a given task. For this reason, a high-resolution video tracking system, such as the one we describe in this paper, is a valuable tool for measuring locomotion in real-time. Our protocol involves the use of an initial air pulse to break the flies momentum, followed by a thirty second filming period in a square chamber. A tracking program is then used to calculate the instantaneous speed of each fly within the chamber in 10 msec increments. Analysis software then compiles this data, and outputs a variety of parameters such as average speed, max speed, time spent in motion, acceleration, etc. This protocol will discuss proper feeding and management of flies for behavioral tasks, handling flies without anesthetization or immobilization, setting up a controlled environment, and running the assay from start to finish.

The study of complex locomotor behavior in Drosophila melanogaster is dependent upon the ability to quantify changes in a given fly's movement. This article demonstrates how to do this using a high-resolution tracking system.

Yetişkin Drosophila melanogaster Locomotion Yüksek Çözünürlüklü Video Takip

Flies provide an important model for studying complex behavior due to the plethora of genetic tools available to researchers in this field.  Studying ...

Biyoloji

Neurocircuit Assays for Seizures in Epilepsy Mutants of Drosophila

Drosophila melanogaster is a useful tool for studying seizure like activity. A variety of mutants in which seizures can be induced through either physical shock or electrical stimulation is available for study of various aspects of seizure activity and behavior. All flies, including wild-type, will undergo seizure-like activity if stimulated at a high enough voltage. Seizure like activity is an all-or-nothing response and each genotype has a specific seizure threshold. The seizure threshold of a specific genotype of fly can be altered either by treatment with a drug or by genetic suppression or enhancement. The threshold is easily measured by electrophysiology. Seizure-like activity can be induced via high frequency electrical stimulation delivered directly to the brain and recorded through the dorsal longitudinal muscles (DLMs) in the thorax. The DLMs are innervated by part of the giant fiber system. Starting with low voltage, high frequency stimulation, and subsequently raising the voltage in small increments, the seizure threshold for a single fly can be measured.

Neurocircuit Assays for Seizures in Epilepsy Mutants of Drosophila

Using high frequency electrical stimulation, seizure-like activity can be induced in Drosophila. This activity is easily recorded from the giant fiber system.

, Epilepsi Mutants Nöbetler Neurocircuit Tahliller Drosophila</em

Drosophila melanogaster is a useful tool for studying seizure like activity. A variety of mutants in which seizures can be induced through either physical ...

Microinjection Techniques for Studying Mitosis in the Drosophila melanogaster Syncytial Embryo

This protocol describes the use of the Drosophila melanogaster syncytial embryo for studying mitosis1. Drosophila has useful genetics with a sequenced genome, and it can be easily maintained and manipulated. Many mitotic mutants exist, and transgenic flies expressing functional fluorescently (e.g. GFP) - tagged mitotic proteins have been and are being generated. Targeted gene expression is possible using the GAL4/UAS system2. 

The Drosophila early embryo carries out multiple mitoses very rapidly (cell cycle duration, &asymp;10 min). It is well suited for imaging mitosis, because during cycles 10-13, nuclei divide rapidly and synchronously without intervening cytokinesis at the surface of the embryo in a single monolayer just underneath the cortex. These rapidly dividing nuclei probably use the same mitotic machinery as other cells, but they are optimized for speed; the checkpoint is generally believed to not be stringent, allowing the study of mitotic proteins whose absence would cause cell cycle arrest in cells with a strong checkpoint. Embryos expressing GFP labeled proteins or microinjected with fluorescently labeled proteins can be easily imaged to follow live dynamics (Fig. 1). In addition, embryos can be microinjected with function-blocking antibodies or inhibitors of specific proteins to study the effect of the loss or perturbation of their function3. These reagents can diffuse throughout the embryo, reaching many spindles to produce a gradient of concentration of inhibitor, which in turn results in a gradient of defects comparable to an allelic series of mutants. Ideally, if the target protein is fluorescently labeled, the gradient of inhibition can be directly visualized4. It is assumed that the strongest phenotype is comparable to the null phenotype, although it is hard to formally exclude the possibility that the antibodies may have dominant effects in rare instances, so rigorous controls and cautious interpretation must be applied. Further away from the injection site, protein function is only partially lost allowing other functions of the target protein to become evident.

Microinjection Techniques for Studying Mitosis in the Drosophila melanogaster Syncytial Embryo

This protocol describes the use of microinjection and high resolution imaging in the Drosophila melanogaster syncytial embryo to study mitosis.

Mitoz incelenmesi için Mikroenjeksiyon Teknikleri Drosophila melanogaster Sinsityal Embriyo

This protocol describes the use of the Drosophila melanogaster syncytial embryo  for studying mitosis1.  Drosophila has useful genetics with a sequenced ...

Monitoring Heart Function in Larval Drosophila melanogaster for Physiological Studies

We present various methods to record cardiac function in the larval Drosophila. The approaches allow heart rate to be measured in unrestrained and restrained whole larvae. For direct control of the environment around the heart another approach utilizes the dissected larvae and removal of the internal organs in order to bathe the heart in desired compounds. The exposed heart also allows membrane potentials to be monitored which can give insight of the ionic currents generated by the myocytes and for electrical conduction along the heart tube. These approaches have various advantages and disadvantages for future experiments that are discussed. The larval heart preparation provides an additional model besides the Drosophila skeletal NMJ to investigate the role of intracellular calcium regulation on cellular function. Learning more about the underlying ionic currents that shape the action potentials in myocytes in various species, one can hope to get a handle on the known ionic dysfunctions associated to specific genes responsible for various diseases in mammals.

Monitoring Heart Function in Larval Drosophila melanogaster for Physiological Studies

We present various ways to monitor heart function in the larva of Drosophila for assessing questions dealing with the function of gap junctions, ion channel mutations, modulation of pacemaker activity and pharmacological studies.

Larvaların olarak izlenmesi Kalp Fonksiyonu Drosophila melanogaster Fizyolojik Çalışmaları

We present various methods to record cardiac function in the larval Drosophila. The approaches allow heart rate to be measured in unrestrained  and  ...

Live Imaging Of Drosophila melanogaster Embryonic Hemocyte Migrations

Many studies address cell migration using in vitro methods, whereas the physiologically relevant environment is that of the organism itself. Here we present a protocol for the mounting of Drosophila melanogaster embryos and subsequent live imaging of fluorescently labeled hemocytes, the embryonic macrophages of this organism. Using the Gal4-uas system1 we drive the expression of a variety of genetically encoded, fluorescently tagged markers in hemocytes to follow their developmental dispersal throughout the embryo. Following collection of embryos at the desired stage of development, the outer chorion is removed and the embryos are then mounted in halocarbon oil between a hydrophobic, gas-permeable membrane and a glass coverslip for live imaging. In addition to gross migratory parameters such as speed and directionality, higher resolution imaging coupled with the use of fluorescent reporters of F-actin and microtubules can provide more detailed information concerning the dynamics of these cytoskeletal components.

Live Imaging Of Drosophila melanogaster Embryonic Hemocyte Migrations

Drosophila hemocytes disperse over the entirety of the developing embryo. This protocol demonstrates how to mount and image these migrations using embryos with fluorescently labelled hemocytes.

Uygulamalarda Canlı Görüntüleme Drosophila melanogaster Embriyonik Hemocyte Göçler

Many studies address cell migration using in vitro methods, whereas the physiologically relevant environment is that of the organism itself. Here we ...

Isolation of Drosophila melanogaster Testes

The testes of Drosophila melanogaster provide an important model for the study of stem cell maintenance and differentiation, meiosis, and soma-germline interactions. Testes are typically isolated from adult males 0-3 days after eclosion from the pupal case. The testes of wild-type flies are easily distinguished from other tissues because they are yellow, but the testes of white mutant flies, a common genetic background for laboratory experiments are similar in both shape and color to the fly gut. Performing dissection on a glass microscope slide with a black background makes identifying the testes considerably easier. Testes are removed from the flies using dissecting needles. Compared to protocols that use forceps for testes dissection, our method is far quicker, allowing a well-practiced individual to dissect testes from 200-300 wild-type flies per hour, yielding 400-600 testes. Testes from white flies or from mutants that reduce testes size are harder to dissect and typically yield 200-400 testes per hour.

Isolation of Drosophila melanogaster Testes

Drosophila melanogaster testes can be rapidly and efficiently isolated from adult males using dissecting needles. With practice, one can readily isolate in one or two days an amount of testes sufficient for the analysis of DNA or RNA by high throughput sequencing or more traditional molecular biology methods or of protein for antibody- or enzyme-based assays.

İzolasyonu Drosophila melanogaster Testisler

The testes of Drosophila melanogaster provide an important model for the study of stem cell maintenance and differentiation, meiosis, and soma-germline ...

Quantitative Comparison of cis-Regulatory Element (CRE) Activities in Transgenic Drosophila melanogaster

Gene expression patterns are specified by cis-regulatory element (CRE) sequences, which are also called enhancers or cis-regulatory modules. A typical CRE possesses an arrangement of binding sites for several transcription factor proteins that confer a regulatory logic specifying when, where, and at what level the regulated gene(s) is expressed. The full set of CREs within an animal genome encodes the organism&prime;s program for development1, and empirical as well as theoretical studies indicate that mutations in CREs played a prominent role in morphological evolution2-4. Moreover, human genome wide association studies indicate that genetic variation in CREs contribute substantially to phenotypic variation5,6. Thus, understanding regulatory logic and how mutations affect such logic is a central goal of genetics. 
Reporter transgenes provide a powerful method to study the in vivo function of CREs. Here a known or suspected CRE sequence is coupled to heterologous promoter and coding sequences for a reporter gene encoding an easily observable protein product. When a reporter transgene is inserted into a host organism, the CRE&prime;s activity becomes visible in the form of the encoded reporter protein. P-element mediated transgenesis in the fruit fly species Drosophila (D.) melanogaster7 has been used for decades to introduce reporter transgenes into this model organism, though the genomic placement of transgenes is random. Hence, reporter gene activity is strongly influenced by the local chromatin and gene environment, limiting CRE comparisons to being qualitative. In recent years, the phiC31 based integration system was adapted for use in D. melanogaster to insert transgenes into specific genome landing sites8-10. This capability has made the quantitative measurement of gene and, relevant here, CRE activity11-13 feasible. The production of transgenic fruit flies can be outsourced, including phiC31-based integration, eliminating the need to purchase expensive equipment and/or have proficiency at specialized transgene injection protocols. 
Here, we present a general protocol to quantitatively evaluate a CRE&prime;s activity, and show how this approach can be used to measure the effects of an introduced mutation on a CRE&prime;s activity and to compare the activities of orthologous CREs. Although the examples given are for a CRE active during fruit fly metamorphosis, the approach can be applied to other developmental stages, fruit fly species, or model organisms. Ultimately, a more widespread use of this approach to study CREs should advance an understanding of regulatory logic and how logic can vary and evolve.

Quantitative Comparison of cis-Regulatory Element CRE Activities in Transgenic Drosophila melanogaster

Phenotypic variation for traits can result from mutations in cis-regulatory element (CRE) sequences that control gene expression patterns. Methods derived for use in Drosophila melanogaster can quantitatively compare the levels of spatial and temporal patterns of gene expression mediated by modified or naturally occurring CRE variants.

Uygulamalarda Kantitatif Karşılaştırılması Cis</emTransgenik>-Regulatory Element (CRE) Etkinlikler Drosophila melanogaster</em

Gene expression patterns are specified by cis-regulatory element (CRE) sequences, which are also called enhancers or cis-regulatory modules. A typical CRE ...

Measurement of Lifespan in Drosophila melanogaster

Aging is a phenomenon that results in steady physiological deterioration in nearly all organisms in which it has been examined, leading to reduced physical performance and increased risk of disease. Individual aging is manifest at the population level as an increase in age-dependent mortality, which is often measured in the laboratory by observing lifespan in large cohorts of age-matched individuals. Experiments that seek to quantify the extent to which genetic or environmental manipulations impact lifespan in simple model organisms have been remarkably successful for understanding the aspects of aging that are conserved across taxa and for inspiring new strategies for extending lifespan and preventing age-associated disease in mammals.
The vinegar fly, Drosophila melanogaster, is an attractive model organism for studying the mechanisms of aging due to its relatively short lifespan, convenient husbandry, and facile genetics. However, demographic measures of aging, including age-specific survival and mortality, are extraordinarily susceptible to even minor variations in experimental design and environment, and the maintenance of strict laboratory practices for the duration of aging experiments is required. These considerations, together with the need to practice careful control of genetic background, are essential for generating robust measurements. Indeed, there are many notable controversies surrounding inference from longevity experiments in yeast, worms, flies and mice that have been traced to environmental or genetic artifacts1-4. In this protocol, we describe a set of procedures that have been optimized over many years of measuring longevity in Drosophila using laboratory vials. We also describe the use of the dLife software, which was developed by our laboratory and is available for download (<a href="http://sitemaker.umich.edu/pletcherlab/software">http://sitemaker.umich.edu/pletcherlab/software</a>). dLife accelerates throughput and promotes good practices by incorporating optimal experimental design, simplifying fly handling and data collection, and standardizing data analysis. We will also discuss the many potential pitfalls in the design, collection, and interpretation of lifespan data, and we provide steps to avoid these dangers.

Measurement of Lifespan in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster is a powerful model organism for exploring the molecular basis of longevity regulation. This protocol will discuss the steps involved in generating a reproducible, population-based measurement of longevity as well as potential pitfalls and how to avoid them.

In ömrü ölçümü<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Aging is a phenomenon that results in steady physiological deterioration in nearly all organisms in which it has been examined, leading to reduced ...

Maintenance of a Drosophila melanogaster Population Cage

Large quantities of DNA, RNA, proteins and other cellular components are often required for biochemistry and molecular biology experiments. The short life cycle of Drosophila enables collection of large quantities of material from embryos, larvae, pupae and adult flies, in a synchronized way, at a low economic cost. A major strategy for propagating large numbers of flies is the use of a fly population cage. This useful and common tool in the Drososphila community is an efficient way to regularly produce milligrams to tens of grams of embryos, depending on uniformity of developmental stage desired. While a population cage can be time consuming to set up, maintaining a cage over months takes much less time and enables rapid collection of biological material in a short period. This paper describes a detailed and flexible protocol for the maintenance of a Drosophila melanogaster population cage, starting with 1.5 g of harvested material from the previous cycle.

Maintenance of a Drosophila melanogaster Population Cage

This manuscript reports a detailed protocol for culturing, on a regular basis, a population of Drosophila melanogaster using a fly population cage.

Bir bakımı<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Nüfus Kafes

Large quantities of DNA, RNA, proteins and other cellular components are often required for biochemistry and molecular biology experiments. The short life ...

Design and Development of Aptamer&#8211;Gold Nanoparticle Based Colorimetric Assays for In-the-field Applications

The design and development of an aptamer&#8211;gold nanoparticle (AuNP) colorimetric assay for the detection of small molecules for in-the-field applications was examined. Target selective AuNP based color assays have been developed in controlled proof-of-concept laboratory settings. However, these schemes have not been exerted to a point of failure to determine their practical use beyond laboratory settings. This work describes a generic approach to design, develop, and troubleshoot an aptamer-AuNP colorimetric assay for small molecule analytes and using the assay for in-the-field settings. The assay is advantageous because adsorbed aptamers passivate the nanoparticle surfaces and provide a means to reduce and eliminate false positive responses to non-target analytes. Transitioning this system to practical uses required defining not only the shelf-life of the aptamer-AuNP assay, but establishing methods and procedures for extending the long-term storage capabilities. Also, one of the recognized concerns with colorimetric readout is the burden placed on analysts to accurately identify often subtle changes in color. To lessen the responsibility on analysts in the field, a color analysis protocol was designed to perform the color identification duties without the need for performing this task on laboratory grade equipment. The method for creating and testing the data analysis protocol is described. However to understand and influence the design of adsorbed aptamer assays, the interactions associated with the aptamer, target, and AuNPs require further study. The knowledge gained could lead to tailoring aptamers for improved functionality.

The design and development of an aptamer&#8211;gold nanoparticle colorimetric assay for the detection of small molecules for in-the-field applications was examined. Additionally, a smart-device colorimetric application (app) was validated and long-term storage of the assay was established for use in the field.