Bu çalışma Ellison Tıp Vakfı (SDP, fon tarafından desteklenen <a href="http://www.ellisonfoundation.org/index.jsp" target="_blank">http://www.ellisonfoundation.org/index.jsp</a> ), NIH K01AG031917 (NJL, <a href="http://www.nih.gov" target="_blank">http://www.nih.gov/</a> ), NIH 5T32GM007315-35 (JR) ve NIH R01AG030593 (SDP). Bu çalışma P30-AG-013283 (Yaşlanma Ulusal Enstitüsü tarafından finanse Yaşlanma Biyolojisi Mükemmellik Nathan Şok Merkezi Drosophila Yaşlanma Çekirdek (DAC) kaynak kullanm <a href="http://www.nih.gov" target="_blank">http://www.nih.gov/</a> ). Yazarlar eleştirel okuma için yararlı tartışmalar ve özellikle Brian Chung Pletcher Laboratuvar teşekkür etmek istiyorum. Biz veri toplama konusunda yardım almak için Nick Asher ve Kathryn Borowicz kabul etmek istiyorum.

Biz 4 ° C&#39;de protokol görünür deneysel gıdalar, maya salçası ve üzüm agar plaklarına depolamak ve küf ve kuruluk larva ve ergin hem de standart ortam koşulları set in değil sürece 1-2 ay içinde bunları kullanmanızı tavsiye Bir 12:12 hr ışık karanlık döngüsü ve% 60 bağıl nem ile 25 ° C&#39;de bir inkübatör sinekler bakım gerektirmesi sahneye. 1. Deneysel Yiyecek Hazırlama <ol><li> Larva gelişmesi için, BT gibi bu protokolde kısaltılmış bir modifiye Caltech Orta 5, kullanın. </li><li> Biz (10 şeker (sakaroz) ve antibiyotik, anti-fungal maddeler ile takviye kaynatılmış olan bir% 2 agar baz, özel olarak maya (liyofilize bütün bira mayası) oluşur Drosophila ergin (SY) için bir diyet, tavsiye ve dağıtılmış ml başına flakon) 6. Gıda sağlamlaştırmak ve depolamadan önce 12-24 saat boyunca buharlaşmasına izin verilmelidir. Besin ortamı substan Çünküpişirme proseslerinde tially etkisi uzun ömürlü, tutarlılık bir deney içinde ve deneyler arasındaki karşılaştırma için hem de önemlidir. </li><li> Bir farmakolojik madde yetişkin gıda ilave edilecek ise, bu ilaç tek başına araç içeren katmanlar alma kontrolü şişeleri ile gıda yüzey üzerinde gıda ve katmanlı bir küçük ölçekli (2 ml), içine karıştırılabilir. </li></ol> 2. Canlı Maya Yapıştır hazırlanması Aktif kuru maya 3 gr su ile 5-6 ml birleştirin ve iyice karıştırın. Maya hamur kıvamı yumuşak fıstık ezmesi gibi olmalıdır. 3. Bir Üzüm Agar Plaka Hazırlanması <ol><li> 1.000 ml&#39;lik şişede distile su 500 ml üzüm agar premix bir paket ekleyin ve üzüm agar karışımı eritmek için paket üzerindeki yönergeleri izleyin. </li><li> Kabarcığı oluşumuna kaçınarak dikkatlice 100 mm Petri kapları içine karışımı kalın bir tabaka dökün. Premix bir paket yaklaşık 14 gra üretirpe agar plakaları. </li><li> Ortam soğutmak ve 15 dakika için kapaklı ile oda sıcaklığında katılaşmaya izin verin. Tabaklar 4 tutulabilir ° C, plastik şal sarılmış, ya da hemen kullanılabilir. </li></ol> 4. Senkronize Yumurta Toplama Bu protokolde kullanılan tüm ortam, örneğin maya, üzüm agar plakaları, CT ve% 10 SY gıda, oda sıcaklığında olmalıdır. <ol><li> Bir üzüm agar plaka üzerine yapıştırın maya 2-3 cm çapında katman aç ve bir kenara koyun. </li><li> Sinekler uyutmak aşağı örgü tarafı ile CO 2 pad üzerinde büyük bir yumurta toplama kafesi yerleştirin. Azot tabanlı anestezi yüksek kalitede sonuçlar 7 üretebilir Bazı laboratuvarlar tarafından kullanılan CO 2 alternatif vardır. </li><li> Bir huni kullanarak, yumurta toplama kafes içine sinek 150-200 çiftleri aktarın. </li><li> Kafesin açık ucunu kapak ve bir uç kapağı ile güvenli üzüm agar plağına yerleştirin. </li><li> Sinekler uyanana kadar yan kafesi yatırın.Sonra, gecede inkübatör, aşağı kafes, üzüm agar plaka tarafında tutun. </li><li> Ertesi gün, yeni mayalı üzüm plaka ile üzüm plaka takas. Sadece plaka yüzeyine maya macun yaklaşık 1 cm çaplı koydu. 1. gün üzüm plaka atın. </li><li> Embriyoların 16-22 saat boyunca üzüm agar plaka yüzeyinde toplamasına izin ver. Bu işlem tamamlandıktan sonra, üzüm agar toplamak ve üst sinekler atın. </li><li> 1x Fosfat ile üzüm agar plakaları yüzey yıkayın salin (PBS) ile tamponlu. Yumurta yavaşça bir pamuklu çubukla kazınarak mobilize edilebilir. Çizik, hasar vermemeye özen veya plaka yüzeyinden agar ince parçalar kazıyın. Bir huni yardımıyla, bir 15 ml konik tüp içine yıkanmış yumurta dökün. </li><li> Yumurta tüpün dibine yerleşmeye ve herhangi bir yumurta kaybetmemek için dikkatli olmak, süpernatant kapalı getireyim. Kalan hacmi 2-3 ml civarında olmalıdır. </li><li> Tüp PBS 8-10 ml ekleyin ve yukarıda adım 2-3 mor tekrarlayınsüpernatant netleşene kadar e kat iyice yumurtaları yıkayın. Rezidüel maya kurtulmak bu adımda anahtarıdır. </li><li> Kalan hacmi 2 ml kadar yıkama sonra tüm süpernatant süzün. Geniş çaplı pipet kullanarak BT şişeler içine tablet yumurta 32 ul. Pipet ucu Yumurta aspire hiçbir sıvı çok az olan, kompakt olmalıdır. Bu yumurta yerleşim derinliklerine pipet ucu takarak ve hızlı aspire pistonu serbest bırakarak sağlanabilir. </li><li> Sıra numaralı seribaşı CT sinek gelişim boyunca inkübatörde geri biberonlar. </li></ol> 5. Yaş eşlemeli Yetişkin Koleksiyonu Flies <ol><li> Yetişkinler genellikle gün 9 ileriye eclose olacaktır. Inkübatör gecede geri ilk gün ve yerde şişeleri üzerinde ortaya sinekler atın. Bu uygulama erken emergents için yanlışlıkla seçim önlemek ve senkronize sinekler maksimum sayıda toplanmasını sağlayacak. </li><li> 16-22 saat sonra, gün-yaşlı yetişkin int uçar aktarmako% 10 SY gıda şişeleri. Gerekirse, diğer bir grup ertesi gün toplanır. </li><li> Dönüş inkübatör içine geri uçar ve sinekler iki gün boyunca cinsel olgunluk ve arkadaşı ulaşmanızı sağlar. Yetişkinliğin ilk günü olarak% 10 SY şişe transfer günü kaydedin. </li></ol> 6. Sinekler Sıralama ve Ömür Deneme Kurulumu <ol><li> Bir fırça kullanarak iki gruba daha sonra anestezi pad üzerinde sinekler küçük gruplar, sıralama erkek ve kadın uyuştur. CO 2 kullanılması durumunda, uzun ömürlü deney bütünlüğünü tehlikeye atabilir olası uzun süreli sağlık sorunları önlemek için maruziyeti en aza indirmek için önemlidir. </li><li> Bireysel şişeleri içine aynı cinsiyet 30 sinekler yerleştirin. Nüfus ve sağlıklı nesillerinde hiçbir dengeleyici kromozom varsayarsak, her bir şişe ile her iki cinste 3-4 şişeleri etrafında üretmek gerekir. Bireysel şişeleri içine sinekler Aliquoting toplam, sinekler sadece bir maksimum anestezi maruz, böylece, 3-4 dk daha fazla almalı9-10 dk. </li><li> 8-10 flakon her cinsiyet ve deneysel tedavi için çoğaltır kalmayana kadar tekrarlayın 6,1-6,2 adımları. </li></ol> 7. Ömür Deney Takip Excel Kurma <ol><li> Biz inkübatör şişeyi konumla ilişkili yanlılığı önlemek ve deneyci için flakon kimliğini gizlemek için deneysel koşul tarafından flakon pozisyonu yerine gruplama şişeleri randomizing öneririz. Bunu yapmak için, ilk olarak bir elektronik tablo programında her flakon bir randomize sayısal kimliği atamak, daha sonra kimlik numarasıyla kasetlere şişeleri düzenleyin. Eğer dLife deneme yönetimi yazılımı kullanıyorsanız, her flakon için kimlik numarası oluşturmak için deneme kurulumu öğretici izleyin. </li><li> Eğer bir RFID okuyucu veya dLife ile birlikte barkod okuyucu kullanıyorsanız (İsteğe bağlı) her flakon bir RFID veya barkod etiket eklemek ve dLife yılında flakon en sayısal kimliği ile etiket ilişkilendirmek. Bir okuyucu ile tarandığında programı her flakon tanıyacaktırve bir tablo içinde doğru konumda verileri kaydetmek için bir yol. DLife ile birlikte bir etiket okuyucu kullanımı önemli ölçüde veri toplama zamanı ve kayıt hatası azaltır. </li></ol> 8. Ömür Deney Bakımı Taze yiyecek içeren şişe her transfer için oda sıcaklığında olmalıdır. <ol><li> Deney süresince, yeni şişeleri üzerine transferi sinekler taze gıda içeren her 2 gün (genç kadın) veya haftada 3 kez (erkek veya kadın yaşı&gt; 3 hafta). Bu adım, genç kadınlar için beslenme ortamının larvaların varlığı mani olmamasına sağlayacaktır. Bu transfer, özellikle eski sinekler (Pletcher, kişisel gözlemler), akut mortalite kısal, anestezi olmadan tamamlanmış olmalıdır. </li><li> Her flakon transferi sırasında, yaş kaydetmek eski flakon ölü sinekler saymak ve yeni flakon taşınan ölü sinekler. Ayrıca bu bilgileri kaydetmekBir tablo içinde iki sütun (dLife veya kendi tablo ya da). Bu yapılan sinekler çift sayılmaz olmasını sağlayacaktır. Ölümlerin toplam sayısı (ölü + taşınan) gerektiği önceki transfer taşınan sineklerin en azından eşit sayıda. Yeni ölümlerin sayısını belirlemek için toplam ölüm sayısının daha önce yapılan sinekler sayısını çıkarın. </li><li> Bu kaçış veya kaza sonucu ölüm yoluyla doğal ölüm öncesinde deney bırakılırsa bir sinek sağ sansürlü olarak kabul edilir. Bu şekilde çıkan deney hayvanları uçucu deney ayrıldığı o gün ayrı bir sütun içine girilmesi gerekir. Sansürlü sinekler (bkz. aşağıda) ölü olarak kaydedilmez. </li><li> Son kurtulan ölene kadar adımları 8,1-8,2 tekrarlamak için devam edin. Sinekler yaş olarak, bazı sinekleri sırt üstü yatmak ve kendi inactiveness nedeniyle ölü görünebilir unutmayın. Bu nedenle (ölü) yapılan sinekler sayarken, bacak hareketleri var olup olmadığını belirlemek için şişeleri tarafında dokunun. Eğer öyleyse, thesE sinekler hala hayatta. Sinekler eski flakon ama canlı olarak gıda takılıp kalması durumunda, onlar ölü olarak sayılmamalıdır ve daha fazla sinek çıkarmak için flakon dokunarak kurtarılmalıdır. Bu deneysel önyargı neden olabileceğinden Sansürleme gibi sinekler dikkatli kullanılmalıdır. </li></ol> 9. Veri Analizi <ol><li> Yaşayanlar eğrisi bireyin belirli bir yaş hayatta ve tipik bir Kaplan-Meier yaklaşım (Şekil 1) 8 kullanılarak hesaplanır olasılığını görüntüler. Sağ ve üstü örtülü veri yokluğunda, formül yaş x (S x) bu tür, yaş-spesifik hayatta kalma basitleştirilebilir yaş x (N x) bir sayım zaman başlangıcında canlı bireylerin sayısı bölünmesiyle belirlenir Deney sinekler sayısı (N 0) tarafından, S x = N x / N 0. 9.2) Sağkalım eğrileri veri sunumu en sık görülen formu vardır ve bunlarBir log-rank testi kullanılarak gruplar arasındaki eşitlik için test edilebilir. Makul çıkarsama bir grupta 50-100 bireyler olarak birkaç çizilebilir. Sağkalım Ancak, kümülatif bir ölçüsüdür ve bu nedenle böyle bir yaşamın bu erken yaşlanma ile ilgili olmayan ölümler, yaşlanma özgü tespit etkileri güçleştirmek ömrü boyunca hayatta kalma düşmesine neden olacaktır. </li><li> İkinci bir veri görselleştirme yöntemi her yaş aralığı yoluyla ölme riskini gösterir ve sağkalım verileri 9,10 daha nüanslı bir açıklama sunulur yaşa özgü mortalite fonksiyonudur. Mortalite önlemler bir yaş diğerine bağımsız ve tedaviler erişkin yaşamı boyunca ayarlanır özellikle ölüm eğrisinin şekli, yaşlanma dinamikleri hakkında çıkarım için yararlıdır. Yaşa özgü mortalite tahminleri Ancak, küçük örneklem büyüklüğü olan hassasiyet ve doğruluk hem de yoksundur ve genellikle güvenilir bir es için kohort başına bireylerin birden-çok yüzlerce gerektirir11 Nihaî. </li><li> Ömür farklılıkları tahmini için diğer yöntemler parametrik (örn. Gompertz) ve yarı-parametrik (örn. Cox regresyon) modellerini içermektedir. Bu modeller güçlü olabilir ancak çünkü ölüm eğrilerinin şekli ve yanlış çıkarımlar 11,12 yol açabilir tedavi etkileri, doğası hakkında yapılan varsayımların dikkatli uygulanmalıdır. </li></ol>

<ol>
	<li>Toivonen, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=No+influence+of+Indy+on+lifespan+in+Drosophila+after+correction+for+genetic+and+cytoplasmic+background+effects.">No influence of Indy on lifespan in Drosophila after correction for genetic and cytoplasmic background effects.</a> PLoS Genet. 3, e95 (2007).</li><li>Spencer, C. C., Howell, C. E., Wright, A. R., Promislow, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Testing+an+'aging+gene'+in+long-lived+drosophila+strains:+increased+longevity+depends+on+sex+and+genetic+background.">Testing an 'aging gene' in long-lived drosophila strains: increased longevity depends on sex and genetic background.</a> Aging Cell. 2, 123-130 (2003).</li><li>Burnett, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Absence+of+effects+of+Sir2+overexpression+on+lifespan+in+C.+elegans+and+Drosophila.">Absence of effects of Sir2 overexpression on lifespan in C. elegans and Drosophila.</a> Nature. 477, 482-485 (2011).</li><li>Bokov, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Does+reduced+IGF-1R+signaling+in+Igf1r+/-+mice+alter+aging?.">Does reduced IGF-1R signaling in Igf1r+/- mice alter aging?.</a> PLoS One. 6, e26891 (2011).</li><li>Lewis, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+standard+food+medium.">A new standard food medium.</a> Drosophila Information Service. 34, 117-118 (1960).</li><li>Skorupa, D. A., Dervisefendic, A., Zwiener, J., Pletcher, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+composition+specifies+consumption,+obesity,+and+lifespan+in+Drosophila+melanogaster.">Dietary composition specifies consumption, obesity, and lifespan in Drosophila melanogaster.</a> Aging Cell. 7, 478-490 (2008).</li><li>Rera, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+longevity+and+tissue+homeostasis+by+the+Drosophila+PGC-1+homolog.">Modulation of longevity and tissue homeostasis by the Drosophila PGC-1 homolog.</a> Cell Metab. 14, 623-634 (2011).</li><li>Kaplan, E. L., Meier, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonparametric+Estimation+from+Incomplete+Observations.">Nonparametric Estimation from Incomplete Observations.</a> Journal of the American Statistical Association. 53, 457-481 (1958).</li><li>Pletcher, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitigating+the+Tithonus+Error:+Genetic+Analysis+of+Mortality+Phenotypes.">Mitigating the Tithonus Error: Genetic Analysis of Mortality Phenotypes.</a> Sci. Aging Knowl. Environ. 2002, pe14 (2002).</li><li>Pletcher, S. D., Khazaeli, A. A., Curtsinger, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+do+life+spans+differ?+Partitioning+mean+longevity+differences+in+terms+of+age-specific+mortality+parameters.">Why do life spans differ? Partitioning mean longevity differences in terms of age-specific mortality parameters.</a> J. Gerontol. A Biol. Sci. Med. Sci. 55, 381-389 (2000).</li><li>Promislow, , Tatar, , Pletcher, , Carey, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Below-threshold+mortality:+implications+for+studies+in+evolution,+ecology+and+demography.">Below-threshold mortality: implications for studies in evolution, ecology and demography.</a> Journal of Evolutionary Biology. 12, 314-328 (1999).</li><li>Pletcher, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Model+fitting+and+hypothesis+testing+for+age-specific+mortality+data.">Model fitting and hypothesis testing for age-specific mortality data.</a> Journal of Evolutionary Biology. 12, 430-439 (1999).</li><li>Partridge, L., Gems, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Benchmarks+for+ageing+studies.">Benchmarks for ageing studies.</a> Nature. 450, 165-167 (2007).</li><li>Roman, G., Endo, K., Zong, L., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=P[Switch],+a+system+for+spatial+and+temporal+control+of+gene+expression+in+Drosophila+melanogaster.">P[Switch], a system for spatial and temporal control of gene expression in Drosophila melanogaster.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 98, 12602-12607 (2001).</li><li>Ford, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alteration+of+Drosophila+life+span+using+conditional,+tissue-specific+expression+of+transgenes+triggered+by+doxycyline+or+RU486/Mifepristone.">Alteration of Drosophila life span using conditional, tissue-specific expression of transgenes triggered by doxycyline or RU486/Mifepristone.</a> Exp. Gerontol. 42, 483-497 (2007).</li><li>Priest, N. K., Mackowiak, B., Promislow, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+parental+age+effects+on+the+evolution+of+aging.">The role of parental age effects on the evolution of aging.</a> Evolution. 56, 927-935 (2002).</li><li>Smith, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feeding+Drosophila+a+biotin-deficient+diet+for+multiple+generations+increases+stress+resistance+and+lifespan+and+alters+gene+expression+and+histone+biotinylation+patterns.">Feeding Drosophila a biotin-deficient diet for multiple generations increases stress resistance and lifespan and alters gene expression and histone biotinylation patterns.</a> J. Nutr. 137, 2006-2012 (2007).</li><li>Sorensen, J. G., Loeschcke, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Larval+crowding+in+Drosophila+melanogaster+induces+Hsp70+expression,+and+leads+to+increased+adult+longevity+and+adult+thermal+stress+resistance.">Larval crowding in Drosophila melanogaster induces Hsp70 expression, and leads to increased adult longevity and adult thermal stress resistance.</a> J. Insect Physiol. 47, 1301-1307 (2001).</li><li>Bass, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+dietary+restriction+protocols+in+Drosophila.">Optimization of dietary restriction protocols in Drosophila.</a> J. Gerontol. A Biol. Sci. Med. Sci. 62, 1071-1081 (2007).</li><li>Miquel, J., Lundgren, P. R., Bensch, K. G., Atlan, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+temperature+on+the+life+span,+vitality+and+fine+structure+of+Drosophila+melanogaster.">Effects of temperature on the life span, vitality and fine structure of Drosophila melanogaster.</a> Mechanisms of Ageing and Development. 5, 347-370 (1976).</li><li>Pittendrigh, C. S., Minis, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+systems:+longevity+as+a+function+of+circadian+resonance+in+Drosophila+melanogaster.">Circadian systems: longevity as a function of circadian resonance in Drosophila melanogaster.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 69, 1537-1539 (1972).</li><li>Joshi, A., Mueller, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+crowding+effects+on+longevity+in+Drosophila+melanogaster:+Increase+in+age-dependent+mortality.">Adult crowding effects on longevity in Drosophila melanogaster: Increase in age-dependent mortality.</a> Current Science. 72, 255-260 (1997).</li><li>Ja, W. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prandiology+of+Drosophila+and+the+CAFE+assay.">Prandiology of Drosophila and the CAFE assay.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104, 8253-8256 (2007).</li><li>Lee, K. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lifespan+and+reproduction+in+Drosophila:+New+insights+from+nutritional+geometry.">Lifespan and reproduction in Drosophila: New insights from nutritional geometry.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105, 2498-2503 (2008).</li><li>Gargano, J. W., Martin, I., Bhandari, P., Grotewiel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+iterative+negative+geotaxis+(RING):+a+new+method+for+assessing+age-related+locomotor+decline+in+Drosophila.">Rapid iterative negative geotaxis (RING): a new method for assessing age-related locomotor decline in Drosophila.</a> Experimental gerontology. 40, 386-395 (2005).</li></ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Burada sunulan protokol genetik, farmakolojik ve çevresel müdahalelerin değerlendirilmesi için uyarlanabilir Drosophila yetişkin uzun ömürlü tekrarlanabilir ölçümler üretmek için bir yöntem açıklanır. Protokol Crucial yönleri dikkatle, larval gelişim ortamı kontrol yetişkin stresi en aza indirerek ve deney grupları ve kontrol grubu arasında önyargı minimize içerir. Biz de dLife ömrü deneme yönetimi yazılımı kullanımı sunuyoruz. Sadece her flakon bir barkod veya RFID etiketi tak...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar (isteğe bağlı) </td></tr><tr><td> Aktif Kuru Maya </td><td> Fleishmann Mayası </td><td> 2192 </td><td></td></tr><tr><td> Üzüm Agar Toz Premiks </td><td> Genesee Bilimsel </td><td> 47-102 </td><td></td></tr><tr><td> Büyük Embriyo Koleksiyonu Kafesleri </td><td> Genesee Bilimsel </td><td> 59-101 </td><td></td></tr><tr><td> Büyük Yedek End Caps </td><td> Genesee Bilimsel </td><td> 59-103 </td><td></td></tr><tr><td> 6 oz Meydanı Bottom Şişeler, polipropilen </td><td> Genesee Bilimsel </td><td> 32-130 </td><td></td></tr><tr><td> Stok Şişeler için Flugs Kilitler </td><td> Genesee Bilimsel </td><td> 49-100 </td><td></td></tr><tr><td> DrosophilaFlakon, Geniş, Polistiren </td><td> Genesee Bilimsel </td><td> 32-117 </td><td></td></tr><tr><td> Geniş Yedirme Flugs Kilitler </td><td> Genesee Bilimsel </td><td> 49-101 </td><td></td></tr><tr><td> Geniş Orifisli Aardvark Pipet İpuçları, 200 ul </td><td> Denville Bilimsel </td><td> P1105-CP </td><td></td></tr><tr><td> Flystuff Flypad, Standart Boyut </td><td> Genesee Bilimsel </td><td> 59-114 </td><td></td></tr><tr><td> BD Falcon 15 ml Konik Santrifüj Tüpleri </td><td> Fisher Scientific </td><td> 14-959-70C </td><td></td></tr><tr><td> Açık Kapaklar ile Fisherbrand Petri Yemekleri, Ridge Yükseltilmiş; 100 OD x 15 mm H; </td><td> Fisher Scientific </td><td> 08-757-12 </td><td></td></tr><tr><td> Kimax * Colorware şişeler 1000 ml sarı </td><td> Fisher Scientific </td><td> 10-200-47 </td><td></td></tr><tr><td> 10x PBS pH 7.4 </td><td> Içindevitrogen </td><td> 70011044 </td><td></td></tr><tr><td> GELIDIUM Agar </td><td> Mooragar </td><td> n / a </td><td></td></tr><tr><td> Bira mayası </td><td> MP Biomedicals </td><td> 0290331280 </td><td></td></tr><tr><td> Toz şeker </td><td> Kroger </td><td> n / a </td><td></td></tr><tr><td> Tegosept </td><td> Genesee Bilimsel </td><td> 20-266 </td><td> Gıda Koruyucu Fly </td></tr><tr><td> Propionik asit,% 99 </td><td> Acros Organics </td><td> 149300025 </td><td> Gıda Koruyucu Fly </td></tr><tr><td> Kanamisin Sülfat </td><td> ISC BioExpress </td><td> 0408-10G </td><td></td></tr><tr><td> Tetrasiklin HCl </td><td> VWR </td><td> 80058-724 </td><td></td></tr></tbody></table>

measurement of lifespan in drosophila melanogaster

Yaşlanma, fiziksel performansa yol açan ve onu muayene edildiği hemen hemen bütün organizmalarda sürekli fizyolojik bozulma sonuçları, hastalık riskinin arttığı bir olgudur. Bireysel yaşlanma genellikle yaştaki bireylerin büyük kohortlarında gözlem ömrü tarafından laboratuvarda ölçülür yaşa bağlı mortalite, bir artış olarak nüfus düzeyinde tezahür. Ölçüde ölçmek için aramaya Deneyler basit modeli organizmalarda genetik veya çevresel manipülasyonlar etkisini ömrü ömrünü uzatmak ve memelilerde yaşla ilişkili hastalığı önlemek için takson genelinde ve ilham verici yeni stratejiler için muhafaza edilmektedir yaşlanma yönlerini anlamak için son derece başarılı olmuş hangi . Sirke sineği, Drosophila melanogaster, nispeten kısa ömürlü, uygun hayvancılık ve basit genetik nedeniyle yaşlanma mekanizmaları incelemek için cazip bir model organizmadır.Ancak, yaş-spesifik sağkalım ve ölüm gibi yaşlanma demografik önlemler, deneysel tasarım ve ortamda bile küçük varyasyonlar için olağanüstü duyarlıdır ve yaşlanma deneyler süresince sıkı laboratuvar uygulamalarının bakım gereklidir. Birlikte genetik arka plan dikkatli kontrolü uygulamaya ihtiyacı olan bu hususlar, sağlam ölçümler üretmek için gereklidir. Nitekim, maya uzun ömürlü deneyler, solucanlar, sinekler ve çevresel veya genetik eserler 1-4 kadar takip edilmiştir farelerin çıkarım çevreleyen birçok önemli tartışmalar vardır. Bu protokol, biz laboratuvar şişeleri kullanarak Drosophila da uzun ömürlü ölçüm uzun yıllar boyunca optimize edilmiş prosedürleri bir dizi tanımlamak. Biz de bizim laboratuvar tarafından geliştirilen ve indirme (yüklenememektedir dLife yazılımın kullanımı, tarif <a href="http://sitemaker.umich.edu/pletcherlab/software">http://sitemaker.umich.edu/ple</a>tcherlab / yazılım). dLife throughput hızlandırır ve anında işleme ve veri toplama basitleştirilmesi ve veri analizi standartlaştırarak, birleşmeyle Optimum deneysel tasarım tarafından iyi uygulamaları teşvik etmektedir. Biz de tasarım, koleksiyon ve ömrü verileri yorumlamada birçok potansiyel tuzaklar tartışacağız, ve biz bu tehlikeleri önlemek için adımları sağlar.

Protokolü basitleştirilmiş bir şeması önemli adımları özetlenen Şekil 1&#39;de sunulmuştur. Protokolünün senkronizasyon kısım yaş grubundaki yetişkin sinek gerektiren çeşitli deneyleri için de kullanılabilir. Yabani tip sinekler tipik hayatta kalma eğrileri dLife deney yönetim yazılımı (Şekil 2b, c) kullanılarak, Şekil 2a&#39;da gösterilmektedir. Erişkin erkeklerde genellikle hem nüfusları 25 ° C&#39;de% 10 ...

Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Lifespan in Drosophila melanogaster at JoVE.com

Measurement of Lifespan in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster uzun ömürlü düzenleme moleküler temelini keşfetmek için güçlü bir model organizmadır. Bu protokol bir tekrarlanabilir, uzun ömürlü yanı sıra potansiyel tuzaklar nüfus tabanlı ölçme ve bunlardan kaçınmanın yolları üreten katılan adımları görüşecek.

In ömrü ölçümü<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Aging is a phenomenon that results in steady physiological deterioration in nearly all organisms in which it has been examined, leading to reduced ...

measurement-of-lifespan-in-drosophila-melanogaster

Research

JoVE Journal

Biology

Measurement of Lifespan in Drosophila melanogaster

34.0K Görüntüleme.  University of Michigan. Drosophila melanogaster uzun ömürlü düzenleme moleküler temelini keşfetmek için güçlü bir model organizmadır. Bu protokol bir tekrarlanabilir, uzun ömürlü yanı sıra potansiyel tuzaklar nüfus tabanlı ölçme ve bunlardan kaçınmanın yolları üreten katılan adımları görüşecek.

Video: Measurement of Lifespan in Drosophila melanogaster

Dissection of Larval CNS in Drosophila Melanogaster

The central nervous system (CNS) of Drosophila larvae is complex and poorly understood.  One way to investigate the CNS is to use immunohistochemistry to examine the expression of various novel and marker proteins.  Staining of whole larvae is impractical because the tough cuticle prevents antibodies from penetrating inside the body cavity.  In order to stain these tissues it is necessary to dissect the animal prior to fixing and staining.  In this article we demonstrate how to dissect Drosophila larvae without damaging the CNS.  Begin by tearing the larva in half with a pair of fine forceps, and then turn the cuticle "inside-out" to expose the CNS.  If the dissection is performed carefully the CNS will remain attached to the cuticle.  We usually keep the CNS attached to the cuticle throughout the fixation and staining steps, and only completely remove the CNS from the cuticle just prior to mounting the samples on glass slides.  We also show some representative images of a larval CNS stained with Eve, a transcription factor expressed in a subset of neurons in the CNS.  The article concludes with a discussion of some of the practical uses of this technique and the potential difficulties that may arise.

In this article we demonstrate how to dissect the central nervous system from third instar Drosophila larvae.

Drosophila melanogaster Larvaların MSS diseksiyonu

The central nervous system (CNS) of Drosophila larvae is complex and poorly understood.  One way to investigate the CNS is to use immunohistochemistry to ...

Biyoloji

High-Resolution Video Tracking of Locomotion in Adult Drosophila Melanogaster

Flies provide an important model for studying complex behavior due to the plethora of genetic tools available to researchers in this field. Studying locomotor behavior in Drosophila melanogaster relies on the ability to be able to quantify changes in motion during or in response to a given task. For this reason, a high-resolution video tracking system, such as the one we describe in this paper, is a valuable tool for measuring locomotion in real-time. Our protocol involves the use of an initial air pulse to break the flies momentum, followed by a thirty second filming period in a square chamber. A tracking program is then used to calculate the instantaneous speed of each fly within the chamber in 10 msec increments. Analysis software then compiles this data, and outputs a variety of parameters such as average speed, max speed, time spent in motion, acceleration, etc. This protocol will discuss proper feeding and management of flies for behavioral tasks, handling flies without anesthetization or immobilization, setting up a controlled environment, and running the assay from start to finish.

The study of complex locomotor behavior in Drosophila melanogaster is dependent upon the ability to quantify changes in a given fly's movement. This article demonstrates how to do this using a high-resolution tracking system.

Yetişkin Drosophila melanogaster Locomotion Yüksek Çözünürlüklü Video Takip

Flies provide an important model for studying complex behavior due to the plethora of genetic tools available to researchers in this field.  Studying ...

Monitoring Heart Function in Larval Drosophila melanogaster for Physiological Studies

We present various methods to record cardiac function in the larval Drosophila. The approaches allow heart rate to be measured in unrestrained and restrained whole larvae. For direct control of the environment around the heart another approach utilizes the dissected larvae and removal of the internal organs in order to bathe the heart in desired compounds. The exposed heart also allows membrane potentials to be monitored which can give insight of the ionic currents generated by the myocytes and for electrical conduction along the heart tube. These approaches have various advantages and disadvantages for future experiments that are discussed. The larval heart preparation provides an additional model besides the Drosophila skeletal NMJ to investigate the role of intracellular calcium regulation on cellular function. Learning more about the underlying ionic currents that shape the action potentials in myocytes in various species, one can hope to get a handle on the known ionic dysfunctions associated to specific genes responsible for various diseases in mammals.

Monitoring Heart Function in Larval Drosophila melanogaster for Physiological Studies

We present various ways to monitor heart function in the larva of Drosophila for assessing questions dealing with the function of gap junctions, ion channel mutations, modulation of pacemaker activity and pharmacological studies.

Larvaların olarak izlenmesi Kalp Fonksiyonu Drosophila melanogaster Fizyolojik Çalışmaları

We present various methods to record cardiac function in the larval Drosophila. The approaches allow heart rate to be measured in unrestrained  and  ...

Live Imaging Of Drosophila melanogaster Embryonic Hemocyte Migrations

Many studies address cell migration using in vitro methods, whereas the physiologically relevant environment is that of the organism itself. Here we present a protocol for the mounting of Drosophila melanogaster embryos and subsequent live imaging of fluorescently labeled hemocytes, the embryonic macrophages of this organism. Using the Gal4-uas system1 we drive the expression of a variety of genetically encoded, fluorescently tagged markers in hemocytes to follow their developmental dispersal throughout the embryo. Following collection of embryos at the desired stage of development, the outer chorion is removed and the embryos are then mounted in halocarbon oil between a hydrophobic, gas-permeable membrane and a glass coverslip for live imaging. In addition to gross migratory parameters such as speed and directionality, higher resolution imaging coupled with the use of fluorescent reporters of F-actin and microtubules can provide more detailed information concerning the dynamics of these cytoskeletal components.

Live Imaging Of Drosophila melanogaster Embryonic Hemocyte Migrations

Drosophila hemocytes disperse over the entirety of the developing embryo. This protocol demonstrates how to mount and image these migrations using embryos with fluorescently labelled hemocytes.

Uygulamalarda Canlı Görüntüleme Drosophila melanogaster Embriyonik Hemocyte Göçler

Many studies address cell migration using in vitro methods, whereas the physiologically relevant environment is that of the organism itself. Here we ...

Dissection of Oenocytes from Adult Drosophila melanogaster

In Drosophila melanogaster, as in other insects, a waxy layer on the outer surface of the cuticle, composed primarily of hydrocarbon compounds, provides protection against desiccation and other environmental challenges. Several of these cuticular hydrocarbon (CHC) compounds also function as semiochemical signals, and as such mediate pheromonal communications between members of the same species, or in some instances between different species, and influence behavior. Specialized cells referred to as oenocytes are regarded as the primary site for CHC synthesis. However, relatively little is known regarding the involvement of the oenocytes in the regulation of the biosynthetic, transport, and deposition pathways contributing to CHC output. Given the significant role that CHCs play in several aspects of insect biology, including chemical communication, desiccation resistance, and immunity, it is important to gain a greater understanding of the molecular and genetic regulation of CHC production within these specialized cells. The adult oenocytes of D. melanogaster are located within the abdominal integument, and are metamerically arrayed in ribbon-like clusters radiating along the inner cuticular surface of each abdominal segment. In this video article we demonstrate a dissection technique used for the preparation of oenocytes from adult D. melanogaster. Specifically, we provide a detailed step-by-step demonstration of (1) how to fillet prepare an adult Drosophila abdomen, (2) how to identify the oenocytes and discern them from other tissues, and (3) how to remove intact oenocyte clusters from the abdominal integument. A brief experimental illustration of how this preparation can be used to examine the expression of genes involved in hydrocarbon synthesis is included. The dissected preparation demonstrated herein will allow for the detailed molecular and genetic analysis of oenocyte function in the adult fruit fly.

Dissection of Oenocytes from Adult Drosophila melanogaster

In insects, the oenocytes produce cuticular hydrocarbon compounds. These compounds protect against desiccation and facilitate chemical communication. Here we demonstrate a dissection technique used to isolate the oenocytes from adult Drosophila melanogaster, and illustrate how this preparation can be utilized to study genes involved in hydrocarbon synthesis.

Yetişkin gelen Oenocytes diseksiyonu Drosophila melanogaster</em

In Drosophila melanogaster, as in other insects, a waxy layer on the outer surface of the cuticle, composed primarily of hydrocarbon compounds, provides ...

Isolation of Drosophila melanogaster Testes

The testes of Drosophila melanogaster provide an important model for the study of stem cell maintenance and differentiation, meiosis, and soma-germline interactions. Testes are typically isolated from adult males 0-3 days after eclosion from the pupal case. The testes of wild-type flies are easily distinguished from other tissues because they are yellow, but the testes of white mutant flies, a common genetic background for laboratory experiments are similar in both shape and color to the fly gut. Performing dissection on a glass microscope slide with a black background makes identifying the testes considerably easier. Testes are removed from the flies using dissecting needles. Compared to protocols that use forceps for testes dissection, our method is far quicker, allowing a well-practiced individual to dissect testes from 200-300 wild-type flies per hour, yielding 400-600 testes. Testes from white flies or from mutants that reduce testes size are harder to dissect and typically yield 200-400 testes per hour.

Isolation of Drosophila melanogaster Testes

Drosophila melanogaster testes can be rapidly and efficiently isolated from adult males using dissecting needles. With practice, one can readily isolate in one or two days an amount of testes sufficient for the analysis of DNA or RNA by high throughput sequencing or more traditional molecular biology methods or of protein for antibody- or enzyme-based assays.

İzolasyonu Drosophila melanogaster Testisler

The testes of Drosophila melanogaster provide an important model for the study of stem cell maintenance and differentiation, meiosis, and soma-germline ...

Imaging Through the Pupal Case of Drosophila melanogaster

The longstanding use of Drosophila as a model for cell and developmental biology has yielded an array of tools. Together, these techniques have enabled analysis of cell and developmental biology from a variety of methodological angles. Live imaging is an emerging method for observing dynamic cell processes, such as cell division or cell motility. Having isolated mutations in uncharacterized putative cell cycle proteins it became essential to observe mitosis in situ using live imaging. Most live imaging studies in Drosophila have focused on the embryonic stages that are accessible to manipulation and observation because of their small size and optical clarity. However, in these stages the cell cycle is unusual in that it lacks one or both of the gap phases. By contrast, cells of the pupal wing of Drosophila have a typical cell cycle and undergo a period of rapid mitosis spanning about 20 hr of pupal development. It is easy to identify and isolate pupae of the appropriate stage to catch mitosis in situ. Mounting intact pupae provided the best combination of tractability and durability during imaging, allowing experiments to run for several hours with minimal impact on cell and animal viability. The method allows observation of features as small as, or smaller than, fly chromosomes. Adjustment of microscope settings and the details of mounting, allowed extension of the preparation to visualize membrane dynamics of adjacent cells and fluorescently labeled proteins such as tubulin. This method works for all tested fluorescent proteins and can capture submicron scale features over a variety of time scales. While limited to the outer 20 &#181;m of the pupa with a conventional confocal microscope, this approach to observing protein and cellular dynamics in pupal tissues in vivo may be generally useful in the study of cell and developmental biology in these tissues.

Imaging Through the Pupal Case of Drosophila melanogaster

This paper demonstrates the use of a fast scanning confocal microscope to image cell behavior directly through the puparium. By leaving the pupal case intact, this method allows observation and measurement of dynamic cell processes at a stage of Drosophila development that is difficult to study directly.

Ve Pupa Durumunda sayesinde görüntüleme<em&gt; Drosophila melanogaster</em

The longstanding use of Drosophila as a model for cell and developmental biology has yielded an array of tools. Together, these techniques have enabled ...

Measurement of Metabolic Rate in Drosophila using Respirometry

Metabolic disorders are a frequent problem affecting human health. Therefore, understanding the mechanisms that regulate metabolism is a crucial scientific task. Many disease causing genes in humans have a fly homologue, making Drosophila a good model to study signaling pathways involved in the development of different disorders. Additionally, the tractability of Drosophila simplifies genetic screens to aid in identifying novel therapeutic targets that may regulate metabolism. In order to perform such a screen a simple and fast method to identify changes in the metabolic state of flies is necessary. In general, carbon dioxide production is a good indicator of substrate oxidation and energy expenditure providing information about metabolic state. In this protocol we introduce a simple method to measure CO2 output from flies. This technique can potentially aid in the identification of genetic perturbations affecting metabolic rate.

Measurement of Metabolic Rate in Drosophila using Respirometry

Metabolic disorders are among one of the most common diseases in humans. The genetically tractable model organism D. melanogaster can be used to identify novel genes that regulate metabolism. This paper describes a relatively simple method which allows studying the metabolic rate in flies by measuring their CO2 production.

Metabolik Oranı Ölçümü<em&gt; Drosophila</em&gt; Respirometrik kullanarak

Metabolic disorders are a frequent problem affecting human health. Therefore, understanding the mechanisms that regulate metabolism is a crucial ...

Enhanced Northern Blot Detection of Small RNA Species in Drosophila Melanogaster

The last decades have witnessed the explosion of scientific interest around gene expression control mechanisms at the RNA level. This branch of molecular biology has been greatly fueled by the discovery of noncoding RNAs as major players in post-transcriptional regulation. Such a revolutionary perspective has been accompanied and triggered by the development of powerful technologies for profiling short RNAs expression, both at the high-throughput level (genome-wide identification) or as single-candidate analysis (steady state accumulation of specific species). Although several state-of-art strategies are currently available for dosing or visualizing such fleeing molecules, Northern Blot assay remains the eligible approach in molecular biology for immediate and accurate evaluation of RNA expression. It represents a first step toward the application of more sophisticated, costly technologies and, in many cases, remains a preferential method to easily gain insights into RNA biology. Here we overview an efficient protocol (Enhanced Northern Blot) for detecting weakly expressed microRNAs (or other small regulatory RNA species) from Drosophila melanogaster whole embryos, manually dissected larval/adult tissues or in vitro cultured cells. A very limited amount of RNA is required and the use of material from flow cytometry-isolated cells can be also envisaged.

Enhanced Northern Blot Detection of Small RNA Species in Drosophila Melanogaster

The aim of this publication is to visualize and discuss the operative steps of an Enhanced Northern Blot protocol on RNA extracted from Drosophila melanogaster embryos, cells, and tissues. This protocol is particularly useful for the efficient detection of small RNA species.

Küçük RNA Türlerin Northern Blot Algılama geliştirilmiş<em&gt; Drosophila melanogaster</em

The last decades have witnessed the explosion of scientific interest around gene expression control mechanisms at the RNA level. This branch of molecular ...

Maintenance of a Drosophila melanogaster Population Cage

Large quantities of DNA, RNA, proteins and other cellular components are often required for biochemistry and molecular biology experiments. The short life cycle of Drosophila enables collection of large quantities of material from embryos, larvae, pupae and adult flies, in a synchronized way, at a low economic cost. A major strategy for propagating large numbers of flies is the use of a fly population cage. This useful and common tool in the Drososphila community is an efficient way to regularly produce milligrams to tens of grams of embryos, depending on uniformity of developmental stage desired. While a population cage can be time consuming to set up, maintaining a cage over months takes much less time and enables rapid collection of biological material in a short period. This paper describes a detailed and flexible protocol for the maintenance of a Drosophila melanogaster population cage, starting with 1.5 g of harvested material from the previous cycle.

Maintenance of a Drosophila melanogaster Population Cage

This manuscript reports a detailed protocol for culturing, on a regular basis, a population of Drosophila melanogaster using a fly population cage.

Bir bakımı<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Nüfus Kafes

Large quantities of DNA, RNA, proteins and other cellular components are often required for biochemistry and molecular biology experiments. The short life ...