We thank Yixian Zheng (Carnegie Institution of Washington, Baltimore, MD) for the original protocol and assistance in initial setup and members of the Lei laboratory for critical reading of the manuscript. This work was funded by the Intramural Research Program of the National Institute of Diabetes and Digestive and Kidney Diseases.

1. Döngüsü Başlangıç: Seeding Embriyolar Not: döngüsü, önceki periyottan gelen toplanan malzemenin 1,5 g (embriyo ve / veya bazı birinci değişim safhasındaki larva oluşan bir karışımı) ile başlar. Bu materyal, pupa aşamasına kadar aktif maya karışımı ile plastik bir kap (spesifik malzemeleri / ekipman tabloya bakınız) yerleştirilir. konteyner larvaları kaçmak için izin önlemek için kapaklı biyolojik embriyoların karışımı ve larva girmesinden sonra kapalı olacak. Hava dolaşımı sağlamak için kapağın içine delik yapmak için gereklidir. deliklerden larva kaçış zorunda kalmamak için, köpük fişler kullanılır. Son olarak, çamaşır suyu ile kirli ya da boyama giysiler almamak için, bu bölümde değil, aynı zamanda tüm protokol sadece eldiven ve laboratuvar önlüğü giymek için tavsiye edilir. <ol><li> plastik kap ayarlayın. <ol><li> Bir plastik kap kapağında bir jilet ile üç köşeli delik açın2,2 cm pproximately. Köpük fişler (50 x 55 mm, dxl) için sıkı bir uyum sağlamak ve daha sonra her deliğe bir köpük fiş yerleştirmek için her deliğin dört bir yanına bant (3/4 inç etiketleme bant) ekleyin. </li><li> plastik film ile plastik kabın içini kaplayın. Bu filmin üzerinde, plastik kabın dibine karşılamak için pamuk katman ekleyin. parmaklarınızla pamuk gözyaşı. </li></ol></li><li> sinek yemek hazırlamak. <ol><li> 500 ml&#39;lik bir beher içinde, deiyonize su 333 ml ilave edilir. manyetik bir çubuk ile kabı karıştırılırken, stok çözeltileri (sırasıyla 99.96 ve% 85,%) ilgili propiyonik asit 167 ul ve fosforik asit 1.08 ml ekleyin. </li><li> Yavaş yavaş büyük topaklar kaçınarak, aktif kuru maya 77.5 g ekleyin. kuru maya çözündürülmesinden sonra, sükroz 38.8 g ekleyin. NOT: hemen bu bileşeni ekledikten sonra, fermantasyon başlayacak çünkü Sakaroz son madde eklenecek olmalıdır. </li></ol></li><li> Hemen sükroz çözüldükten sonra, dökmepamuk üzerinde gıda ve eşit pamuk kapsayacak şekilde emin olun. gıda kirlenmesine laboratuvar içinde kaçan sinekler önlemek için kapaklı plastik kap kapatın. </li><li> % 70 5 ml etanol ile bir önceki döngüden hasat embriyolar (değil dechorionated), 1.5 g yeniden süspanse edin. Yarım iki filtre kağıtları kesme ve spatula veya geniş uçlu bir transfer pipeti kullanılarak 4 adet üzerinde eşit biyolojik karışımı dağıtmak (gerekirse kesilmiş). batırılmış pamuk üstüne filtre kağıtları Lay ve kapağını kapatın. Son olarak, pupa aşamasına kadar plastik RT (24 º C) de konteyner ve nem (% 35) kuluçkaya yatmaktadır. NOT: Plastik kap nemli bir odasında konulmamalıdır, aksi takdirde bu bakterilerin büyümesini teşvik edecektir. </li></ol> Embriyolar itibaren Sinekler için: Cycle 2. devamı. NOT: döngüsünün bu bölümü 9 gün sonra yetişkin sinekler ortaya çıkacak zaman kadar günde 1 plastik kap içine yerleştirilir embriyolardan giderpupa dan. Bu 8 gün boyunca hiçbir şey bitmiş ama embriyolar eclosion kadar Drosophila yaşam döngüsünün sonraki aşamalarında doğru ilerleme olduğunu izleme için vardır. Larvalar ölüyor ve bu süre içinde siyah dönüm başlarsanız, köpük fişler çok sıkı olmayan ve yeterli havalandırma sağlanmadığı kontrol edin. Bu dönem bir önceki döngüsü sinek nüfus kafesini temizlemek için iyi bir zamandır. <ol><li> Yetişkin dişi sinek gıda (adım 3) içine yatırılır sonra gözlemlemek embriyolar 1. larvası 24 civarında saat olur. Ortaya çıkan larvalar büyüyen ve 2. ve 3. instar larvaları içine iki kez tüy dökme, 4 gün boyunca 1. adımda hazırlanan sinek gıdalardan besleyecek. </li><li> sinek nüfus kafesini temizleyin. <ol><li> sinekler aktivitesi yavaşlatmak için en az 30 dakika boyunca 4 ° C&#39;de kafes yerleştirin. Kafesin bir tarafını kapsayan net çıkarın ve hızlı bir hareket ile, büyük bir biyolojik tehlike plastik açık tarafı kapçanta. torbaya kafes içeriğini dökün. </li><li> biohazard çanta hala kafesin bir tarafını kapsayan, dikey olarak aşağı biohazard çanta tarafı lavabonun üzerinde kafes yerleştirin. Dikkatle kaçan sinek önlemek ve biyolojik tehlikeli atık kabı içine atmak için plastik torba çıkarın. </li><li> Dikkatle, küçük bir delik oluşturmak lavabonun içine sinekler yıkayacak su ile kafes, içini yıkamak için yeterince üst net açın. Yavaş yavaş deliğin boyutunu artırmak ve kafes içindeki tüm sinekler ortadan kaldırır. </li><li> kafes ve su ve sabun ile hem ağları temizleyin. ağları hala ıslak iken kuru temizleme kafesin her iki tarafında emniyete ve son kafeste yapışmasını aşama 1.1.2 hazırlanan plastik filmi önleyecek bir laboratuar sağanak kağıt içine konur. Şimdi kafes sonraki döngü için hazırdır. </li></ol></li><li> Dört gün ilk kurulumdan sonra, larva pupa gözlemlemek. Larvalar 4 gün daha, bu aşamada kalacaktır. NOT: During bu aşama pupa plastik kap içinde tüm pamuk yüzeyini kapsayacak. </li><li> İlk sinekler ortaya pupa evresinde ve önce plastik kap açın ve temiz nüfus kafes içinde laboratuvar Sağanak kağıt üzerinde tüm pupa ile pamuk içeren plastik film yerleştirin. bir çift düğüm ile net kapatın ve plastik kap ve bir sonraki döngü için kapağı temizleyin. NOT: Kapağın yapıştırılmış Pupa atılır ve otoklav veya eclosion önce dondurularak imha edilmelidir. </li></ol> 3. Yetişkin Sinekler. NOT: pupa 4 gün pupa çıkacağı ilk sinekler sahne sonra. 24 içinde - 48 saat tüm sinekler eclosed gerekirdi. döngüsünün bu bölümünde, üreme için doğru ortamı yaratmak amacıyla onlara yiyecek temin etmek önemlidir. <ol><li> pekmez Tepsileri hazırlayın. <ol><li> 1 L&#39;lik bir şişeye deiyonize H2O 556,25 mi, melas 90 ml ve agar 22 g Kombine. Serin 30 dakika boyunca bir karıştırma çubuğuna sahip olan otoklav ve% 95 EtOH içinde% 10 Tegosept 9.25 ilave edin. </li><li> 21 x 14,5 cm et tepsisine karışımı dökün. 17 tepsileri - hacim 15 karşılamak için yeterli olduğundan emin olun. kuvvetlendirmek ve kurumasını önlemek için plastik bir film ile her bir tepsiyi kapsamaktadır için 20 dakika - 10 bekleyin. 1 L çeşitli şişeler, aynı zamanda hazırlanabilir. Gerekli kadar plastik sarılı 4 ° C&#39;de pekmez tepsileri saklayın. </li></ol></li><li> yetişkin sinekler kafesin içinde ıslak maya ile kaplı bir pekmez tepsi ekleyin. <ol><li> plaka eklemeden önce, 30 dakika boyunca soğuk bir odada 4 ° C&#39;de kafes yerleştirin. </li><li> Bir beher içine deiyonize H2O 200 ml ilave edilir ve bir kaşık ile karıştırılırken yavaşça kuru maya dökün. Karışım, yaklaşık sinekler gıda içine saplanıyor önlemek için fıstık ezmesi kıvamına olduğunda kuru maya ekleyerek durdurun. NOT: gıda çözüm kapsayacak şekilde çok zor olacak, aksi takdirde katılaşmaya izin vermemek önemlidirmelas tepsi ve hasat işleminin (bölüm 4.3&#39;e bakınız) sırasında yumurta ayıklayın. </li><li> bir pekmez tepsiden plastik filmi çıkarın ve bir kaşık ya da spatula kullanılarak taze hazırlanmış ıslak maya tabakası ile örtün. tüm yüzey kaplı olduğundan emin olun. </li><li> kafes soğuk oda hala iken, net açın ve dikkatlice kafese ıslak maya ile pekmez tepsi ekleyin. net kapatın ve oda sıcaklığında kafes yerleştirin. NOT: yerleştirme sırasında boş bir et tepsisi ile plaka kapsayacak şekilde yararlı olabilir, ancak pekmez tepsiye sinek erişimi engellemek için değil emin olabilir. </li></ol></li><li> çok kuru almak için maya önlemek için 48 saat - Gıda plakası her 24 değiştirin. Yetişkin sinekler kurumaya karşı çok duyarlıdır. </li></ol> Cycle 4. sonu: Embriyolar Hasat NOT: En iyi sinek doğurganlık 3&#39;tür - eclosion 5 gün sonra. Bu nedenle, bu süre içinde hasat iyi embriyo verimi alırsınız. Sonra istenilen koleksiyonları komple vardırted, devir bitti. sinekler kurban ve temizlenmiş kafes adım 2.2 belirtilmelidir. <ol><li> Tipik olarak, 2 gün sinek eclosion sonra, bölüm 3.2.5 açıklandığı gibi yeni bir pekmez, kafesin içine taze ıslak gıda tepsisi tanıtmak. parmak yardımıyla, yumurta birikimi veriminin arttırılması için, mümkün olduğu kadar yaş maya yüzeyi düzensiz hale. Eski bir gıda tepsi kafeste varsa, yeni plaka eklemeden önce, dikkatlice çıkarın ve bir biyolojik tehlikeli torbaya atın. veriminin arttırılması için bir başka ipucu, tüm yumurtaları gıda atılacak, böylece pamuk katmanı kaldırmaktır. Oda sıcaklığında kafesi koruyun. </li><li> küçük beyaz noktalar olarak embriyolar gözlemleyin. NOT: yumurta tahsil edilecek hazırız. sinek kafesinin rutin bakım için, 2 gün koleksiyonu önerilen zamandır. Bu koleksiyon, çoğunlukla embriyolar ve birkaç 1 instar larvaları içerecektir. Çeşitli colle için hasat embriyo tipik verim temsilcisi sonuçları görünction zaman noktalarında. </li><li> embriyoların hasat <ol><li> yaklaşık 30 dakika boyunca soğuk odada kafes yerleştirin. 1. bölümde açıklandığı gibi bu süre içinde sonraki döngü için plastik kap ve sinek yemek hazırlamak. </li><li> 8-otoklav tepsisinde toplam kapasitenin ¼ ve daha sonra% 10 Triton X-100, 1 ml eklemek için su ilave edilir. kafes soğuk oda olmasına rağmen dikkatle pekmez plaka kaldırmak ve bir biyolojik tehlikeli torba içine yerleştirin. </li><li> torbadan tepsisini çıkartın ve otoklav tepsisine deterjan çözeltisi içinde (kaçmasını sinekler önlemek için) hızlı bir şekilde daldırın. biohazard çanta kapatın ve biyolojik tehlike kabı koyun. Sinekler deterjan içermeyen su içinde boğmak olmaz. </li><li> pekmez kapalı embriyo ve mayayı yıkamak için büyük bir fırça ve distile su tabancası kullanın. biohazard kutunun içine plakaları ve pekmez atın. </li><li> Üç elek seti (altta kaba elek üstünde 30, 40 orta ve 100) dikkatle çözüm dökün. Yıkama kümeleri on distile su tabancası ile üst düzey hiçbir kümeleri kalmayıncaya kadar. NOT: yetişkin sinekler ve 3. instar larvaları elek 30 tutulacaktır. <ol><li> distile su ile otoklav tepsisini durulayın ve eleklerden durulama suyunu dökün. maya kümeleri kalırsa üst elek ve tekrar sürecini çıkarın. 1. ve 2. evre larvalarının En önemlisi elek 40 kalacaktır. </li></ol></li><li> İkinci elek çıkarın. Üçüncü (alt) elek sarımsı embriyolar ve küçük 1 instar larvalarının karışımıdır. eleğin bir yanına tüm yumurta taşımak için damıtılmış su tabancası kullanarak. Bir spatula ile toplayın ve bunları tartın. </li><li> Bu döngü sırasında embriyoların toplama verimi / larva 7 ila 13 gr arasında değişmektedir. yeni bir döngü (bölüm 1) başlatmak için bu malzemenin sadece 1,5 gr kullanın. daha ileri işlemler için embriyoların kalanını kullanın veya iptal edilebilir. </li></ol></li></ol> 5. Ekİşleme NOT: Nüfusun devamı için kullanılmayan embriyolar alternatif deneyler için hemen kullanılabilir veya -80 ° C&#39;de dondurulabilir. Her iki seçenekte de, embriyolar öncelikle dechorionated gerekebilir. <ol><li> dechorionation için,% 50 çamaşır suyu çözeltisi içinde 2 dakika için embriyolar yıkama ve damıtılmış su ile iyice yıkayın. </li><li> Bir kağıt havlu ile iyice bastırarak embriyolar, ilk kuru donma ve ardından 15 ya da 50 ml konik tüp içine, bir spatula yardımıyla, onları tartmak ve yerleştirmek için. Son olarak, bir kaç saniye için sıvı N2 konik bir tüp içinde daldırın. </li></ol>

<ol>
	<li>Lim, S. J., Boyle, P. J., Chinen, M., Dale, R. K., Lei, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-wide+localization+of+exosome+components+to+active+promoters+and+chromatin+insulators+in+Drosophila.">Genome-wide localization of exosome components to active promoters and chromatin insulators in Drosophila.</a> Nucleic Acids Res. 41, 2963-2980 (2013).</li><li>Ong, C. T., Van Bortle, K., Ramos, E., Corces, V. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Poly(ADP-ribosyl)ation+regulates+insulator+function+and+intrachromosomal+interactions+in+Drosophila.">Poly(ADP-ribosyl)ation regulates insulator function and intrachromosomal interactions in Drosophila.</a> Cell. 26, 148-159 (2013).</li><li>Gonzalez, I., Mateos-Langerak, J., Thomas, A., Cheutin, T., Cavalli, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+regulators+of+the+three-dimensional+polycomb+organization+by+a+microscopy-based+genome-wide+RNAi+screen.">Identification of regulators of the three-dimensional polycomb organization by a microscopy-based genome-wide RNAi screen.</a> Mol Cell. 8, 485-499 (2014).</li><li>Magbanua, J. P., Runneburger, E., Russell, S., White, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+variably+occupied+CTCF+binding+site+in+the+ultrabithorax+gene+in+the+Drosophila+bithorax+complex.">A variably occupied CTCF binding site in the ultrabithorax gene in the Drosophila bithorax complex.</a> Mol Cell Biol. 35, 318-330 (2014).</li><li>Maksimenko, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+new+insulator+proteins,+Pita+and+ZIPIC,+target+CP190+to+chromatin.">Two new insulator proteins, Pita and ZIPIC, target CP190 to chromatin.</a> Genome Res. 25, 89-99 (2015).</li><li>Lei, E. P., Corces, V. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+interference+machinery+influences+the+nuclear+organization+of+a+chromatin+insulator.">RNA interference machinery influences the nuclear organization of a chromatin insulator.</a> Nat Genet. 38, 936-941 (2006).</li><li>Matzat, L. H., Dale, R. K., Moshkovich, N., Lei, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-specific+regulation+of+chromatin+insulator+function.">Tissue-specific regulation of chromatin insulator function.</a> PLoS Genet. 8, e1003069 (2012).</li><li>King, M. R., Matzat, L. H., Dale, R. K., Lim, S. J., Lei, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+RNA-binding+protein+Rumpelstiltskin+antagonizes+gypsy+chromatin+insulator+function+in+a+tissue-specific+manner.">The RNA-binding protein Rumpelstiltskin antagonizes gypsy chromatin insulator function in a tissue-specific manner.</a> J Cell Sci. 1, 2956-2966 (2014).</li><li>Sisson, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culturing+large+populations+of+drosophila+for+protein+biochemistry.">Culturing large populations of drosophila for protein biochemistry.</a> Cold Spring Harb Protoc. , (2007).</li><li>Shaffer, C. D., Wuller, J. M., Elgin, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Raising+large+quantities+of+Drosophila+for+biochemical+experiments.">Raising large quantities of Drosophila for biochemical experiments.</a> Methods Cell Biol. 44, 99-108 (1994).</li><li>Roberts, D. B., Standen, G. N., Roberts, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+elements+of+Drosophila+biology+and+genetics.">The elements of Drosophila biology and genetics.</a> Drosophila: A practical approach. , 1-53 (1998).</li><li>Ashburner, M., Roote, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+of+Drosophila:+The+laboratory+setup.">Culture of Drosophila: The laboratory setup.</a> Cold Spring Harb Protoc. , (2007).</li><li>Dahlberg, O., Shilkova, O., Tang, M., Holmqvist, P. H., Fb Mannervik, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=P-TEb,+The+super+elongation+complex+and+mediator+regulate+a+subset+of+non-paused+genes+during+early+Drosophila+embryo+development.">P-TEb, The super elongation complex and mediator regulate a subset of non-paused genes during early Drosophila embryo development.</a> PLOS Genet. 13, e1004971 (2015).</li><li>Zhang, S. D., Odenwald, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Misexpression+of+the+white+(w)+gene+triggers+male-male+courtship+in+Drosophila.">Misexpression of the white (w) gene triggers male-male courtship in Drosophila.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 6, 5525-5529 (1995).</li><li>Chak, L. L., Mohammed, J., Lai, E. C., Tucker-Kellogg, G., Okamura, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+deeply+conserved,+noncanonical+miRNA+hosted+by+ribosomal+DNA.">A deeply conserved, noncanonical miRNA hosted by ribosomal DNA.</a> RNA. 21, 375-384 (2015).</li><li>Moshkovich, N., Lei, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HP1+recruitment+in+the+absence+of+argonaute+proteins+in+Drosophila.">HP1 recruitment in the absence of argonaute proteins in Drosophila.</a> PLOS Genet. 12, e1000880 (2010).</li><li>Pandey, U. B., Nichols, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+disease+models+in+Drosophila+melanogaster+and+the+role+of+the+fly+in+therapeutic+drug+discovery.">Human disease models in Drosophila melanogaster and the role of the fly in therapeutic drug discovery.</a> Pharmacol Rev. 63, 411-436 (2011).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Malzeme bir 1.5 g başlayarak döngü başına 7 ile 13 g arasında toplanan embriyolar bir verim elde edebilir. materyal Böyle bir miktarda almak için uçucu döngüsünün tüm aşamaları için doğru kültür koşulları sağlamak için çok önemlidir. en önemli parametreler sırasıyla 24 ºC ve% 35 olmalıdır sıcaklık ve nem vardır. bu iki parametre laboratuar normal bir ortamda sabit tutulması mümkün değilse, bir olasılık, bir inkübatör veya bir çevre odasına sinek kafesi yerleştirmek olacaktır. Diğer protokoller üretilen yumurta 9,10 verimini artırmak için% 70 nem ve aynı zamanda sabit bir 24 saat aydınlık-karanlık döngüsü önerilir. Ancak% 35 civarında nem tutma bakteri kontaminasyonu önler ve bu protokolün amacı, nüfus kafesin sadece bakım olduğundan, sinekler laboratuar normal ışık ortamında tutulur. Bir diğer önemli nokta di tutmaktıryetişkin sturbances mümkün olduğunca düşük uçar. Diğer sinekler çapraz bulaşmayı önlemek için sinek odasından ayrı bir yere kafesi tutmak için tavsiye edilebilir. Onların saflığını korumak ve büyük nüfus kafeslerde 14 belirgin anormal çiftleşme davranışı sergileyebilir çok zor olduğundan transgenik ve mutant sinekler büyük popülasyonlarının kültür, tavsiye edilmez. Olası bir sorun büyük miktarlarda Drosophila kültür gıda için rekabet edebilir ve dolayısıyla üretilen yumurta verimi azaltacak akarları ve / veya küf gibi diğer organizmalar, varlığıdır. Bunu önlemek için, o temiz, tüm ekipman tutmak kafesi, ağlar yıkama su ve sabunla ve her döngüden sonra atılabilir malzeme (köpük fişler) atarak kutuları uçmak için çok önemlidir. adımda sinek yiyecek hazırlarken büyüyen kalıp azaltmak için, propiyonik ve fosforik asit ıslak maya ilave edilirpekmez hazırlanması 1.2 ve Tegosept adım 3.1 tepsi. zaman kısa ve malzemeler hemen temizlenmelidir olamaz zaman böyle -20 ˚C plastik kutu veya elek gibi bir yerde malzemelere bazen yararlı olabilir. Embriyolar sinek kutunun içine ekilmiş ve son toplama gününde biten zaman başlayan, 15 gün - Bütün bir koleksiyon döngüsü 14 oluşur. Bu süre boyunca, protokol bölümünde ayrıntılı bir nüfus sinek kafes bakımı (Şek. 2) için gerekli tüm adımları, hatırlamak için bir program düzenlemek için tavsiye edilir. yetişkin sinekler ortaya kadar yumurta, numaralı seribaşı olduğu günden itibaren, sadece plastik kutu incelemek için gerekli olan ve pupa devresi oluştuğunda, kafesin içine yerleştirmek için. Embriyolar, yeni bir çevrim için tohumlanmıştır kadar 3 gün - Daha sonra sinekler her 2 beslenmeleri gerekmektedir. Bütün protokolde, en uzun gün yeni bir döngü başlatmak için embriyoların toplama ve tohumlama sırasında. bir5 gün yetişkin eclosion sonra ve nihayet 2 gün sonra azalır - protokolde yorumladı s, en iyi yumurta verimi 3&#39;tür. Bu yumurtaların hasat yapılacak olan güne seçmek için bize bazı esneklik verir. Herhangi bir nedenle toplanan embriyoların verimi arzu edilen çıkış miktarı (1.5 g) daha az olması durumunda, tek bir zaman yeni bir pekmez tepsi ekleme ve daha fazla yumurta ertesi gün toplayabilir. Sabit koleksiyonları için, paralel 2 kafesleri korumak için tavsiye edilir, ve embriyoların yüksek miktarlarda gerekiyorsa, aynı zamanda büyük kafesleri kullanmak mümkündür edilir. Kısa süre koleksiyonları yapmanın durumunda, verimi artırmak için tek yönlü sabah yumurtlama patlama yararlanmak etmektir. Çeşitli gelişim evreleri büyük miktarlarda toplanması pek çok avantajı vardır. Örneğin, nüfusun kafesleri toplanan embriyolar immüno-çökeltme tahlilleri 6-8 kütle collectio çok başarılı bir şekilde kullanılmıştırayrışmış larvaları larva dokuların N 3C deney 4 ve RNA preparatları 15 için çok iyi bir kaynağı olduğu göstermiştir, ve yetişkin sinek kafaları ChIP deneyler 16 kullanılmıştır. Buna ek olarak, yetişkinler genellikle doku kültürü 17 için sinek özleri yapmak için ihtiyaç vardır. kafesin en umut verici uygulamalardan biri patojenlerin biyolojik moleküller, kimyasal maddeler ve iyonizan radyasyon maruz kalmaya yanıt olarak genler, transkript, proteinler ve Metabolitlerin analiz ve tarama izin yüksek verimli deneyleri için bir materyal sunmaktır. Bu büyük ölçekli deneylerde bireylerin çok sayıda gereklidir, ve burada açıklanan sinek nüfus kafes onların analiz ve 18 taranması için Drosophila yaşam döngüsünün farklı aşamalarında malzemenin büyük miktarlarda elde etmek için çok yararlı olabilir.

Genetik ve biyokimyasal yaklaşımlar birleştirme yeteneği Drosophila biyokimya ve moleküler biyoloji çalışmaları 1-3 için özellikle uygun bir organizma yapmıştır. Bu çalışmalar genellikle erişkin sinek, aynı zamanda larva 4, pupa 5 ve embriyolar 6-8 değil sadece biyolojik materyalin büyük miktarlarda gerektirir. büyük miktarlarda ham materyal elde etmek için, araştırmacılar &quot;nüfus kafesleri&quot; sinek olarak bilinen büyük kaplar kullanılarak kültürlü sinekler var. Bu kafesler kaçan sinekler olmayan kafes içinde gıda maddenin arzı için her iki tarafta bir ağ kapsamındaki plastik bir silindirden oluşmaktadır. Bu kafesler 9-11 ev yapımı ya da (özel malzemeler / ekipman tabloya bakınız) bir şirketten satın olabilir. Sinekler sayıda büyümesi için bu sistemi kullanan bir büyük avantajı, meyve döngüsü 12, tüm sineklerin yeniden geliştirmek şekilde kontrol edilebilir hedefi olduğunulatively şekilde senkronize. Bu senkronizasyon, yeni embriyolar ekim larva / sinekler beslenme ve hassas zamanlarda yetişkin sinekler feda ederek elde edilir. Senkronize bir uçucu popülasyonu kullanılarak gelişim çalışmalarında 13 için özellikle yararlıdır. Birkaç sinekler yeni bir nüfus kafesinin başlangıç ​​amplifikasyonu 9-11 birçok döngülerini gerektiren zaman alıcı bir süreçtir. Hatta sinek kültür şişeleri veya minicages gibi büyük kaplar kullanılarak, tüm süreç aylarca sürebilir. Adım tüketen bu kez önlemek için, birçok Drosophila laboratuarlar düzenli tür kafesleri korumak. Zaten kurulmuş nüfus kafesinden bir embriyo toplama başlayan yeni kafes başlamak için en uygun olduğunu. Genel olarak, çoğu laboratuarları Bu makale sinek nüfus kafesleri korumak için ayrıntılı bir protokol sunar gibi Oregon R veya Canton S. olarak wild tip nüfus kafesleri, korumak.

<table><tbody><tr><td>Bacto-Agar</td><td>Beckton Dickinson</td><td>214010</td><td></td></tr><tr><td>Curity practical cotton roll</td><td>Kendall</td><td>2287</td><td></td></tr><tr><td>Dry yeast</td><td>Affymetrix</td><td>23540</td><td></td></tr><tr><td>Filter paper</td><td>GE Healthcare Life Science</td><td>1001-085</td><td></td></tr><tr><td>Foam tube plugs</td><td>Jaece</td><td>L800-D2</td><td>50 mm Diameter x 55 mm Length</td></tr><tr><td>Fly population cage</td><td>Flystuff</td><td>59-116</td><td>9&amp;Prime; Diameter x 14.4&amp;Prime; Length. Includes the nets for the cage.</td></tr><tr><td>Meat tray</td><td>Genpak</td><td>1002S (#2S)</td><td>8.25 x 5.75 x 0.5 inches</td></tr><tr><td>Molasses</td><td>Grandma&amp;acute;s</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Plastic container</td><td>Rubbermaid</td><td>4022-00</td><td></td></tr><tr><td>Plastic film</td><td>Glad</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Phosphoric acid</td><td>Fisher Scientific</td><td>S 93326</td><td>Toxic. Handle in Chemistry Hood</td></tr><tr><td>Propionic acid</td><td>Fisher Scientific</td><td>A258-500</td><td>Toxic. Handle in Chemistry Hood</td></tr><tr><td>Stainless steel&amp;nbsp; sieve #100</td><td>VWR</td><td>57324-400</td><td></td></tr><tr><td>Stainless steel&amp;nbsp; sieve #40</td><td>VWR</td><td>57324-272</td><td></td></tr><tr><td>Stainless steel&amp;nbsp; sieve #30</td><td>VWR</td><td>57324-240</td><td></td></tr><tr><td>Sucrose</td><td>MP</td><td>152584</td><td></td></tr><tr><td>Tegasept</td><td>LabScientific</td><td>FLY5501</td><td></td></tr><tr><td>Triton-X100</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP151-500</td><td></td></tr></tbody></table>

maintenance of a drosophila melanogaster population cage

Large quantities of DNA, RNA, proteins and other cellular components are often required for biochemistry and molecular biology experiments. The short life cycle of Drosophila enables collection of large quantities of material from embryos, larvae, pupae and adult flies, in a synchronized way, at a low economic cost. A major strategy for propagating large numbers of flies is the use of a fly population cage. This useful and common tool in the Drososphila community is an efficient way to regularly produce milligrams to tens of grams of embryos, depending on uniformity of developmental stage desired. While a population cage can be time consuming to set up, maintaining a cage over months takes much less time and enables rapid collection of biological material in a short period. This paper describes a detailed and flexible protocol for the maintenance of a Drosophila melanogaster population cage, starting with 1.5 g of harvested material from the previous cycle.

Bir sinek kafes nüfusun bakım sinek yaşam döngüsü dayanmaktadır. Bu nedenle, plastik kap içinde (Şekil 1A) embriyoları ve larvaları ilk biyolojik karışımını yerleştirdikten sonra döllenmiş yumurtalar en fazla 2 gün içinde larvaları olacak ve larva 4 gün büyüyecek, nispeten (farklı dönem larva aşamalardan senkronize ) Şekil 1B bkz. Larvalar 3. instar larva sahne tamamladıktan sonra onlar pupa ve kapağın (Şekil 1C) iç yüzeyinde bazı plastik kap içinde pamuk yüzeyini kapsayacak. sinekler metamorfoz süreci bitene kadar bu pupa devresi süresi önümüzdeki 4 gün boyunca devam edecek. Bu dönemde kuvvetle kafese sinekler aktarmak için tavsiye edilir. sonra 10 - ilk yetişkin sinekler 9. günde Eclose başlayacakdöngüsü (Şekil 1D) ve 11. günde hepsi tarafından başlatılması pupa ortaya çıkmıştır olacaktır. 5 gün eclosion (15 gün 13) sonra ve nihayet (7 gün eclosion sonra) günde 17 düşüşler - embriyoların toplama en iyi verimi 3 elde edilir. Nedenle, günde 13 taze gıda son tepsi ekleme ve 15. gün yumurta (Şekil 1E ve F) toplamak için tavsiye edilir. Bu embriyoların maksimum sayıda toplanmasını sağlayacaktır. 6 ardışık döngü koleksiyonları verimi, her döngüde 1.5 g bir başlangıç ​​malzemesi ile toplandı, embriyoların verim azalır bunlara bağlı olarak çok kuru olduğu neden olabilir toplanması ve daha önce üçüncü bir ekstra gün. Tablo 1, ekleme, ve Şekil 2, bütün döngü koleksiyonu için önerilen zamanlama olduğunu. malzeme 2 gün hasat60; süreleri çok embriyo oluşmaktadır. Ancak larva az sayıda da vardır. asynchronicity bir dereceye beklenen beri kafes bakım amacıyla bu larvalar, bir sorun değildir. Bununla birlikte bazı biyokimyasal deneyler için bu embriyolar, saflığı çok önemlidir, ancak, aynı zamanda, bu deneyler için yumurtaların büyük miktarda toplamak için de gereklidir. Bu nedenle, çok sayıda kısa ardışık koleksiyonları hızlı oda sıcaklığında gıda ile yeni bir levha eklendikten sonra, bu yöntem ile elde edilebilir verim ve saflıkta bir tahmin sağlamak üzere, 1 saat, 3 saat sonra yapıldı (Tablo 2 ve Şekil 3) . 1 saat arka arkaya koleksiyonları çok düşük bir verimle (14.5 mg), fakat daha sonra toplanır, her zaman için yüksek embriyo miktarlarda, ancak son başladı. sinekler yiyecek değişiyor ama daha sonra alıştırma sürecinde vurguladı ilk düşük verim nedeniyle olabilir. Diğer yandan, herhangi bir larVAE kısa koleksiyonları daha yüksek saflıkta elde gösteren beş sıralı koleksiyonları (Şekil 3A) görülmüştür. Pamuk kafes kaldırılır değilse, daha önceki zaman noktalarında gelen larva olasılığı kalır ve taze plaka artar girecek. pamuk çıkarıldığında bile, zaman zaman larvalar kafesin yanında dolaşmak ve bir toplama sırasında yiyecek girin. 3 saat üst üste koleksiyonları için, verim 840 civarında 1 saat koleksiyonları elde edilen verim 10 kat daha fazla olduğu 1250 mg, arasında değişmektedir. Bu embriyoların saflık% 100 (Şekil 3B) yakın oldu. Ara sıra larvalar gözlendi. Bazı gelişimsel çalışmalar toplanan embriyolar için çok sıkı bir senkronizasyon gerektirir. Senkronizasyon saflığını artırmak için, koşulları ideal değilse, dişiler daha olgun yumurta korumak ve yatırabilirsiniz çünkü ilk toplama plakası atmak için tavsiye edilirkoşulları gibi taze plaka tanıtımı ile olduğu gibi, geliştirmek m. Ayrıca eski yetişkin sinekler (&gt; 6 gün) daha az senkronize embriyolar üretmek olduğunu bilmek önemlidir. yüksek doğruluk ile senkronizasyon derecesini doğrulamak için, toplanan embriyoların bir DAPI boyama önerilir. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/53756/53756fig1.jpg" /> Şekil 1. Fly Nüfus Cage Drosophila melanogaster Yaşam Döngüsü. Döngüsünün (A) Başlangıç ​​plastik kutu kap içine embriyoların 1.5 g tohumlama. Bir referans olarak, alt panelde, filtre kağıdı uzunluğu 8.5 cm dir. (B) Larva nispeten 5 gün döngüsünün başlangıcından sonra senkronize büyüyen. 8. günde (C), sinekler en pupa içindedir. B (b &#39;), ve C alt paneller<html> (C &#39;), üst panel belirtilen alanlarında büyütme bulunmaktadır. (D) Yetişkin sinekler 10 gün döngüsü başlandıktan sonra pupa ortaya çıktı. (E) Yetişkin sinek gıda 15. günde de, sarımsı materyal embriyoları toplama işlemine başlamadan önce nüfus kafes içinde uçar döllenmiş yumurta. 100 kaba elek dibinde toplanan (F) Embriyolar (ve birkaç larva), bir bütün kafes döngüsünden sonra. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53756/53756fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/53756/53756fig2.jpg" /> Şekil 2. Tüm Döngüsü Toplama Programı. Şekil 2, bir tam döngü toplanması için önerilen program gösterilmektedir.<html> t = &quot;_ blank&quot;&gt; bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız. <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/53756/53756fig3.jpg" /> Şekil 1 saat ve 3 saat ardışık koleksiyonları 3. Saflık. 1 saat (A) ve gıda yeni bir tepsi ekledikten sonra 3 saat (B) toplanan embriyoların Temsilcisi görüntü. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53756/53756fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <table><tbody><tr><td> Çevrim numarası </td><td> Verim: (g) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 10.3 </td></tr><tr><td> 2 </td><td> 9.5 </td></tr><tr><td> 3 </td><td> 10.3 </td></tr><tr><td> 4 </td><td> 12.7 </td></tr><tr><td> 5 </td><td> 10 </td></tr><tr><td> 6 </td><td> 7.1 </td></tr></tbody></table>&quot;fo: keep-together.within-page =&quot; ntent. 1 &quot;&gt; Çeşitli Döngüsü Koleksiyonlar Tablo 1. Verim Tablo 1 1.5 g başlangıç ​​materyali ile 6 ardışık döngü koleksiyonları verimi gösterir her döngüde, son. gıda tepsisi 13. günde ilave edildi ve hasat 15. günde yapıldı. <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td> Collection # </td><td> Koleksiyonun Uzunluğu (saat) </td><td> Verim: (mg) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 1 </td><td> 14.5 </td></tr><tr><td> 2 </td><td> 1 </td><td> 21.6 </td></tr><tr><td> 3 </td><td> 1 </td><td> 56.1 </td></tr><tr><td> 4 </td><td> 1 </td><td> 160.1 </td></tr><tr><td> 5 </td><td> 1 </td><td> 106.1 </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 3 </td><td> 960 </td></tr><tr><td> 2 </td><td> 3 </td><td> 840 </td&gt; </tr><tr><td> 3 </td><td> 3 </td><td> 1250 </td></tr></tbody></table> Tablo 2. 1 saat ve 3 saat Ardışık Koleksiyonlar Verim. Tablo 2 Yeni pekmez plaka yerleştirdikten sonra yeni gıda ve arka arkaya 3 koleksiyonları 3 saat ekledikten sonra 1 saat 5 ardışık koleksiyonları verimini gösterir.

Watch this Scientific Journal Video about Maintenance of a Drosophila melanogaster Population Cage at JoVE.com

Maintenance of a Drosophila melanogaster Population Cage

This manuscript reports a detailed protocol for culturing, on a regular basis, a population of Drosophila melanogaster using a fly population cage.

Bir bakımı<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Nüfus Kafes

Large quantities of DNA, RNA, proteins and other cellular components are often required for biochemistry and molecular biology experiments. The short life ...

maintenance-of-a-drosophila-melanogaster-population-cage

Research

JoVE Journal

Biology

Maintenance of a Drosophila melanogaster Population Cage

13.1K Görüntüleme.  National Institutes of Health. This manuscript reports a detailed protocol for culturing, on a regular basis, a population of Drosophila melanogaster using a fly population cage.

Video: Maintenance of a Drosophila melanogaster Population Cage

Rearing the Fruit Fly Drosophila melanogaster Under Axenic and Gnotobiotic Conditions

The influence of microbes on myriad animal traits and behaviors has been increasingly recognized in recent years. The fruit fly Drosophila melanogaster is a model for understanding microbial interactions with animal hosts, facilitated by approaches to rear large sample sizes of Drosophila under microorganism-free (axenic) conditions, or with defined microbial communities (gnotobiotic). This work outlines a method for collection of Drosophila embryos, hypochlorite dechorionation and sterilization, and transfer to sterile diet. Sterilized embryos are transferred to sterile diet in 50 ml centrifuge tubes, and developing larvae and adults remain free of any exogenous microbes until the vials are opened. Alternatively, flies with a defined microbiota can be reared by inoculating sterile diet and embryos with microbial species of interest. We describe the introduction of 4 bacterial species to establish a representative gnotobiotic microbiota in Drosophila. Finally, we describe approaches for confirming bacterial community composition, including testing if axenic Drosophila remain bacteria-free into adulthood.

Rearing the Fruit Fly Drosophila melanogaster Under Axenic and Gnotobiotic Conditions

A method for rearing Drosophila melanogaster under axenic and gnotobiotic conditions is presented. Fly embryos are dechorionated in sodium hypochlorite, transferred aseptically to sterile diet, and reared in closed containers. Inoculating diet and embryos with bacteria leads to gnotobiotic associations, and bacterial presence is confirmed by plating whole-body Drosophila homogenates.

Meyve Fly Yetiştirme<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Aksenik ve gnotobiyotik Koşullarında

The influence of microbes on myriad animal traits and behaviors has been increasingly recognized in recent years. The fruit fly Drosophila melanogaster is ...

Gelişim Biyolojisi

An Automated Method to Determine the Performance of Drosophila in Response to Temperature Changes in Space and Time

Temperature is a ubiquitous environmental factor that affects how species distribute and behave. Different species of Drosophila fruit flies have specific responses to changing temperatures according to their physiological tolerance and adaptability. Drosophila flies also possess a temperature sensing system that has become fundamental to understanding the neural basis of temperature processing in ectotherms. We present here a temperature-controlled arena that permits fast and precise temperature changes with temporal and spatial control to explore the response of individual flies to changing temperatures. Individual flies are placed in the arena and exposed to pre-programmed temperature challenges, such as uniform gradual increases in temperature to determine reaction norms or spatially distributed temperatures at the same time to determine preferences. Individuals are automatically tracked, allowing the quantification of speed or location preference. This method can be used to rapidly quantify the response over a large range of temperatures to determine temperature performance curves in Drosophila or other insects of similar size. In addition, it can be used for genetic studies to quantify temperature preferences and reactions of mutants or wild-type flies. This method can help uncover the basis of thermal speciation and adaptation, as well as the neural mechanisms behind temperature processing.

An Automated Method to Determine the Performance of Drosophila in Response to Temperature Changes in Space and Time

Here we present a protocol to automatically determine the locomotor performance of Drosophila at changing temperatures using a programmable temperature-controlled arena that produces fast and accurate temperature changes in time and space.

Drosophila sıcaklık değişiklikler uzay ve zaman içinde performansını belirlemek için otomatik yöntemi

Temperature is a ubiquitous environmental factor that affects how species distribute and behave. Different species of Drosophila fruit flies have specific ...

Davranış

Determination of the Spontaneous Locomotor Activity in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster has been used as an excellent model organism to study environmental and genetic manipulations that affect behavior. One such behavior is spontaneous locomotor activity. Here we describe our protocol that utilizes Drosophila population monitors and a tracking system that allows continuous monitoring of the spontaneous locomotor activity of flies for several days at a time. This method is simple, reliable, and objective and can be used to examine the effects of aging, sex, changes in caloric content of food, addition of drugs, or genetic manipulations that mimic human diseases.

Determination of the Spontaneous Locomotor Activity in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster are useful in studying genetic or environmental manipulations that affect behaviors such as spontaneous locomotor activity.&#160; Here we describe a protocol that utilizes monitors with infrared beams and data analysis software to quantify spontaneous locomotor activity.&#160;

Olarak spontan lokomotor aktivitenin belirlenmesi<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Drosophila melanogaster has been used as an excellent model organism to study environmental and genetic manipulations that affect behavior. One such ...

Nörobilim

Conditions Affecting Social Space in Drosophila melanogaster

The social space assay described here can be used to quantify social interactions of Drosophila melanogaster &#8212; or other small insects &#8212; in a straightforward manner. As we previously demonstrated 1, in a two-dimensional chamber, we first force the flies to form a tight group, subsequently allowing them to take their preferred distance from each other. After the flies have settled, we measure the distance to the closest neighbor (or social space), processing a static picture with free online software (ImageJ). The analysis of the distance to the closest neighbor allows researchers to determine the effects of genetic and environmental factors on social interaction, while controlling for potential confounding factors. Diverse factors such as climbing ability, time of day, sex, and number of flies, can modify social spacing of flies. We thus propose a series of experimental controls to mitigate these confounding effects. This assay can be used for at least two purposes. First, researchers can determine how their favorite environmental shift (such as isolation, temperature, stress or toxins) will impact social spacing 1,2. Second, researchers can dissect the genetic and neural underpinnings of this basic form of social behavior 1,3. Specifically, we used it as a diagnostic tool to study the role of orthologous genes thought to be involved in social behavior in other organisms, such as candidate genes for autism in humans 4.

Conditions Affecting Social Space in Drosophila melanogaster

The effect of genes and environment on social space of Drosophila melanogaster can be quantified through a powerful but straightforward analytical paradigm. We show here different factors that can affect this social space, and thus need to be taken into consideration when designing experiments in this paradigm.

Sosyal Space Etkileyen Koşullar<em&gt; Drosophila melanogaster</em

The social space assay described here can be used to quantify social interactions of Drosophila melanogaster &#8212; or other small insects &#8212; in a ...

Foraging Path-length Protocol for Drosophila melanogaster Larvae

The Drosophila melanogaster larval path-length phenotype is an established measure used to study the genetic and environmental contributions to behavioral variation. The larval path-length assay was developed to measure individual differences in foraging behavior that were later linked to the foraging gene. Larval path-length is an easily scored trait that facilitates the collection of large sample sizes, at minimal cost, for genetic screens. Here we provide a detailed description of the current protocol for the larval path-length assay first used by Sokolowski. The protocol details how to reproducibly handle test animals, perform the behavioral assay and analyze the data. An example of how the assay can be used to measure behavioral plasticity in response to environmental change, by manipulating feeding environment prior to performing the assay, is also provided. Finally, appropriate test design as well as environmental factors that can modify larval path-length such as food quality, developmental age and day effects are discussed.

Foraging Path-length Protocol for Drosophila melanogaster Larvae

We provide a detailed protocol for a Drosophila melanogaster foraging path-length assay. We discuss the preparation and handling of test animals, how to perform the assay and analyze the data.

için yiyecek arama yolu uzunluğu Protokolü<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Larva

The Drosophila melanogaster larval path-length phenotype is an established measure used to study the genetic and environmental contributions to behavioral ...

Measurement of Lifespan in Drosophila melanogaster

Aging is a phenomenon that results in steady physiological deterioration in nearly all organisms in which it has been examined, leading to reduced physical performance and increased risk of disease. Individual aging is manifest at the population level as an increase in age-dependent mortality, which is often measured in the laboratory by observing lifespan in large cohorts of age-matched individuals. Experiments that seek to quantify the extent to which genetic or environmental manipulations impact lifespan in simple model organisms have been remarkably successful for understanding the aspects of aging that are conserved across taxa and for inspiring new strategies for extending lifespan and preventing age-associated disease in mammals.
The vinegar fly, Drosophila melanogaster, is an attractive model organism for studying the mechanisms of aging due to its relatively short lifespan, convenient husbandry, and facile genetics. However, demographic measures of aging, including age-specific survival and mortality, are extraordinarily susceptible to even minor variations in experimental design and environment, and the maintenance of strict laboratory practices for the duration of aging experiments is required. These considerations, together with the need to practice careful control of genetic background, are essential for generating robust measurements. Indeed, there are many notable controversies surrounding inference from longevity experiments in yeast, worms, flies and mice that have been traced to environmental or genetic artifacts1-4. In this protocol, we describe a set of procedures that have been optimized over many years of measuring longevity in Drosophila using laboratory vials. We also describe the use of the dLife software, which was developed by our laboratory and is available for download (<a href="http://sitemaker.umich.edu/pletcherlab/software">http://sitemaker.umich.edu/pletcherlab/software</a>). dLife accelerates throughput and promotes good practices by incorporating optimal experimental design, simplifying fly handling and data collection, and standardizing data analysis. We will also discuss the many potential pitfalls in the design, collection, and interpretation of lifespan data, and we provide steps to avoid these dangers.

Measurement of Lifespan in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster is a powerful model organism for exploring the molecular basis of longevity regulation. This protocol will discuss the steps involved in generating a reproducible, population-based measurement of longevity as well as potential pitfalls and how to avoid them.

In ömrü ölçümü<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Aging is a phenomenon that results in steady physiological deterioration in nearly all organisms in which it has been examined, leading to reduced ...

Biyoloji

Oral Bacterial Infection and Shedding in Drosophila melanogaster

The fruit fly Drosophila melanogaster is one of the best developed model systems of infection and innate immunity. While most work has focused on systemic infections, there has been a recent increase of interest in the mechanisms of gut immunocompetence to pathogens, which require methods to orally infect flies. Here we present a protocol to orally expose individual flies to an opportunistic bacterial pathogen (Pseudomonas aeruginosa) and a natural bacterial pathogen of D. melanogaster (Pseudomonas entomophila). The goal of this protocol is to provide a robust method to expose male and female flies to these pathogens. We provide representative results showing survival phenotypes, microbe loads, and bacterial shedding, which is relevant for the study of heterogeneity in pathogen transmission. Finally, we confirm that Dcy mutants (lacking the protective peritrophic matrix in the gut epithelium) and Relish mutants (lacking a functional immune deficiency (IMD) pathway), show increased susceptibility to bacterial oral infection. This protocol, therefore, describes a robust method to infect flies using the oral route of infection, which can be extended to the study of a variety genetic and environmental sources of variation in gut infection outcomes and bacterial transmission.

Oral Bacterial Infection and Shedding in Drosophila melanogaster

This protocol describes methods to orally expose and infect the fruit fly Drosophila melanogaster with bacterial pathogens, and to measure the number of infectious bacteria shed following gut infection. We further describe the effect of immune mutants on fly survival following oral bacterial infection.

Bakteriyel enfeksiyon ve atma Drosophila melanogaster içinde sözlü

The fruit fly Drosophila melanogaster is one of the best developed model systems of infection and innate immunity. While most work has focused on systemic ...

Circadian Entrainment of Drosophila Melanogaster

Nearly universal among organisms, circadian rhythms coordinate biological activity to earth&#39;s orbit around the sun. To identify factors creating this rhythm and to understand the resulting outputs, entrainment of model organisms to defined circadian time-points is required. Here we detail a procedure to entrain many Drosophila to a defined circadian rhythm. Furthermore, we detail post-entrainment steps to prepare samples for immunofluorescence, nucleic acid, or protein extraction-based analysis.

Here, we detail how to synchronize Drosophila to a circadian day. This is the first, and most important step necessary for studying biological rhythms and chronobiology.

Drosophila Melanogaster Sirkadiyen Entrainment

Nearly universal among organisms, circadian rhythms coordinate biological activity to earth&#39;s orbit around the sun. To identify factors creating this ...

Drosophila Maintenance

Drosophila melanogaster, commonly known as fruit flies, are a frequently used model organism for life science research. Although starting a collection of these critters may seem as easy as leaving a banana on your kitchen counter for too long, a productive fly colony in the lab requires careful husbandry and maintenance.
This video demonstrates the necessary steps for maintaining a healthy fly stock. The overview begins with the preparation and storage of the yeast and sugar-containing media on which flies feed. Next, the vessels most commonly used for housing Drosophila are shown, as well as how and when to move flies between these containers. Finally, the presentation also includes examples of the ways in which housing and feeding conditions are manipulated for biological experiments.

Maintenance and Husbandry of Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster, commonly known as fruit flies, are a frequently used model organism for life science research. Although starting a collection of ...

Education

JoVE Science Education

Temel Biyoloji

Biyoloji I: Maya, Drosophila ve C. elegans

Drosophila Courtship Conditioning: A Method to Test Learning and Memory In Flies

Source: Koemans, T. S., et al. <a href="https://www.jove.com/video/55808/" target="_blank">Drosophila Courtship Conditioning As a Measure of Learning and Memory</a>. J. Vis. Exp. (2017).
This video describes a classical conditioning assay that tests learning and memory in Drosophila, called courtship conditioning. The assay is based on the reduction of male courtship after experiencing a rejection by a non-receptive premated female. The example protocol shows a setup for the procedure that can be used to assess short- and long-term memory.

Bir bakımı

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Meyve Fly Yetiştirme

Drosophila sıcaklık değişiklikler uzay ve zaman içinde performansını belirlemek için otomatik yöntemi

Olarak spontan lokomotor aktivitenin belirlenmesi

Sosyal Space Etkileyen Koşullar

için yiyecek arama yolu uzunluğu Protokolü

In ömrü ölçümü

Bakteriyel enfeksiyon ve atma Drosophila melanogaster içinde sözlü

Drosophila Melanogaster Sirkadiyen Entrainment

Drosophila Maintenance

Drosophila Kur Yapma Koşullandırması: Sineklerde Öğrenme ve Hafızayı Test Etmek İçin Bir Yöntem