Bu çalışma SU Eisenhardt için &quot;Deutsche Forschungsgemeinschaft&quot; (EI 866/1-1) bir hibe ile desteklenmiştir.

1. Anestezi ve İzleme <ol><li> Hayvan deneylerinde gerçekleştirmeden önce uygun ulusal ve kurumsal etik yerde olmalıdır. 180 gr - 120 bir vücut ağırlığı ile etik komite uyutmak erkek Sprague Dawley sıçan onayını takiben. Izofluran vaporizer üzeri pleksiglas kutu 3 vol% izofluran ve sıçan içine yerleştirin - 2 sunun. </li><li> En kısa sürede anestezi uygun düzeyde sağlanır sağlanmaz (parmak veya kuyruk tutam tepki eksikliği) sıçan ağırlıklandırılmış ve ventral servikal alanda traş edilir. </li><li> 37 vücut ısısını korumak için bir ısıtma pedi üzerinde dorsal sıçan yerleştirin ° C ve silikon bir maske kullanarak 2 vol% az izofluran geçerlidir. </li></ol> Aşağıdaki hazırlık adımları iyi bir cerrahi mikroskop kullanılarak gerçekleştirilir. <ol start="4"><li> Trakeanın hazırlanması için, karotis arter ve juguler ven, bölgede o 2 cm&#39;lik bir yatay cilt kesisi gerçekleştirmekf suprasternal ve yanal tükürük bezleri harekete. </li><li> Artık ventral boyun kasları karşı karşıya. Orta hatta onları dikkatle ayırmak ve trakea bulabilirsiniz. Trakeanın 2 cm ve yukarı yükseltmek böylece onu da altında bir mikro forseps yerlefltirmek - 1 Açığa. </li><li> Şimdi trakeanın ventral tarafı ile yaklaşık yarım kesmedim. , Tüm yol boyunca kesmek için bunu yaparsanız, trakeanın kesik ucuna göğüs geri kayacak ve çalışmak çok zor olabilir dikkatli olun. </li><li> Daha önce, bir hayvan vantilatör bağlı olmuştur trakea, alt kısmı içine tüp olarak kullanılan bir Abbocath tüp (14G) takın. İpucu: Firma mengenelerle sabitlenmekten yanı sıra tüp etrafında trakea dikilmesi yerine trakeal tüp tutmak esastır. Genellikle terylen 5/0 sütür kullanabilirsiniz, ancak benzer bir dikiş materyali kullanılabilir. </li><li> Tidal hacim, 4,5-5 ml;; FiO2 45 soluk / dk - Solunum sonra (frekans, 35 hacim kontrollü olabilir </sub&gt;, 0.35 - 0.50;. İsofluranın 1.5 - 2 vol%) 14 Atelektazi H 2 10 mm 5 ekspirasyon sonu basınç pozitif bir muhafaza ile önlenebilir O. 15 </li><li> Karotis kanülasyonu için, sağ sternohyoid kas karotis arter bulmak için künt diseksiyon ile ayrılır. </li><li> Karotis arter dikkatlice vagus siniri ayırın ve kan kalpten akan durdurmak için açılı bir mikro forseps üzerinde arter monte edin. </li><li> Karotis arter altında sütür eşit uzunlukta iki adet geçirin. Kalp referans olarak, daha distal sütür proksimal dikiş karotis arter etrafında gevşek bağlıdır ise baş bölgesinde akan kan tıkamak sıkıca bağlıdır. </li><li> Mikro makas kullanarak küçük bir kesim, iki bitişik harfler arasında karotis arter haline getirilir. </li><li> Bir basınç transdüktörüne bağlı normal tuzlu su çözeltisi ile doldurulmuş bir polietilen kateter (0,28 mm iç çapı) takın. </li><li> Remartere kateter daha mikro forseps ve iplik ove. Sonra arter ve kateter etrafından proksimal ligatür sıkın. İpucu: ikinci bir proksimal sütür uygulaması mikro forseps çıkardıktan sonra kanama engeller. </li><li> Karotis etrafında distal ligasyonu ve ek ankraj için kateter bağlayın. </li><li> Izleme kalp hızı ve kan basıncı tarafından sürekli anestezi izleyin. Kan gazı analizörü kullanılarak aralıklı arteriyel kan gazı analizi yapın. 16 A kalp hızı 300 bpm veya aşan 360 bpm daha düşük hem de uzun 5 dakika süreyle 80 mmHg altına düşmesi, ortalama arter basıncı dışlama kriterleri vardır. 17, 18 kan koruyun fizyolojik sınırlar içinde pH (7,35-7,45). Deney nedeniyle anormal izleme oranlarına feshedilmiş olan durumda, boyun çıkığı ya exanguation tarafından hayvan derisini soymak. </li></ol> Flüoresan boyalar ya da başka ilaçlar o intravenöz uygulama içinf faiz, aşağıdakileri gerçekleştirin: <ol start="17"><li> Cerrahi mikroskop ile juguler ven alanında odaklanın. </li><li> Her el forseps ile juguler ven ortaya çıkarmak için ince fasya gözyaşı. Açılı bir mikro forseps üzerine ven monte edin. Kan akışı sonra duracaktır. </li><li> Forseps kullanarak dikiş eşit uzunlukta iki adet karotis kanülasyonu için uyumlu juguler ven altında geçirilir. Sıkı distal sütür ve juguler ven çevresinde gevşek proksimal sütür bağlayın. </li><li> Juguler ven içine küçük bir kesim yapın ve tuzlu su ile yıkanmalıdır edilmiş bir polietilen kateter (0.28 mm iç çap) yerleştirin. Insizyon ve kanülasyon karotis göre daha zahmetli ve zaman alıcı olabilir işaretleyin. </li><li> Kalp doğru kateter geçirin ve ven ve kateter etrafından kalbe yakın bağ sıkın. </li><li> Uygun açıklığı sonra, kateter etrafında distal bağ bağla. İpucu: bo Ek fiksasyonubant ile inci kateterler dislodgment önleyebilir. </li><li> Intraluminal pıhtılaşmayı önlemek için sık sık kateterler durulayın. </li></ol> 2. Cremaster&#39;ın Muscle hazırlanması <ol><li> Kremasterik görüntüleme için 2 cm kalınlığında - Biz 1.5 bir alüminyum sahne kullanın. Aşamasında hızla böylece kremasterik doku termal kontrol hafifletilmesi ısıtma pedi istenen sıcaklık benimser. Bu inflamasyon çalışmaları için çok önemlidir. Kremasterik sıcaklığında düzenlenmesi daha güç olsa da alternatif olarak bir Pleksiglas platformu kullanılabilir. Aşamasının merkezinde skrotumda yerleştirin. </li><li> Başlangıç ​​kesi ince makasla subdermal alanı ihtiyatlı genişlemesi takiben çok uzak ucu içinde skrotumun yukarıda cilt ve dış spermatik pano içinde yapılır. Aletleri ile temel doku dokunmaktan kaçının. </li><li> En kısa sürede doku maruz olarak önceden ısıtılmış ile nemlendirilir (37 ° C) fosfat salin wi tamponluth kalsiyum ve magnezyum. Açıkta doku düzenli çözümü uygulayın. </li><li> Dış spermatik fasya ve Cremaster&#39;ın kas arasındaki bağ dokusu özenle çevreleyen dokudan Cremaster&#39;ın kas boşaltmak için kaldırılır. </li><li> Cremaster&#39;ın kas dış yüzeyi daha sonra temkinli bir bağ dokusu silinmiş olabilir. Sürekli superfusion diseksiyonu hidratlar sırasında bağ dokusu, görünürlük ve çıkarmasını kolaylaştıracak. </li><li> Basılı tutun Cremaster&#39;ın çuval distal ucu dikerek ve biraz çuval sonuna uzatmak. </li><li> Ventral yüzüne çuval distal ucu kesilirken ve mikro makas kullanırken proksimalde kesi uzatıyoruz. Dikkatli bir termal koter kullanılarak kesi hatları boyunca kanayan damarların dağlamak. Ek inflamatuar uyaranlara sınırlamak için gereksiz koterizasyon kaçının. İpucu:. Hazırlık çevresine yakın Kan akış dinamikleri Bu doku hasarı değişmiş Bu nedenle 19, en aza indirmek içinse veri toplama etkiler, hazırlık merkezine yakın kan damarlarının görüntülenmesi için kullanılmalıdır. </li><li> Açık Cremaster&#39;ın gerçi hala testisin altında epididim ince bir bağ ile bağlanmış alüminyum kaide üzerinde düz yatıyor. Bir tarafa testisi yansıtan epididim bağlanmak küçük bir arter ve ven gibi bu bağın ortaya koyar. Gemiler mühür ve testis ve kremasterik doku arasındaki bağ bağ kesmek için mikro makas istihdam koter kullanın. </li><li> Yavaşça kasık kanalı içine izole testis geri itin. Diğer yazarlar ilişkili inguinal fad ped ile birlikte proksimal ligasyonu (orşiektomi) sonra testis rezeke. Hepimiz ek cerrahi uyaranlara kaçınıyorum IRI bağlı lökosit aktivasyonu gibi hassas bir modelde 20, bu yüzden genellikle değildir testis, rezeksiyon imtina Cremaster&#39;ın kasının yeterli maruz almak gerekir. </li><li> İlk ek olarakfiksasyon sütür dört doku kenarları (her tarafta iki adet) ve dikkatli bir alüminyum sahnede radyal kremasterik doku yaymak için kurdeleler konuları ekleyin. Alüminyum sahne ve inguinal kanalın dış girişinde arasında bir boşluk bırakarak iskemi için sonraki kremasterik kırpma kolaylaştırır. </li><li> Yeri polietilen kateter iki ucu (0.28 mm iç çap) superfusion kurulumu için kremasterik doku yakın. Lümen nihai sıvı odasında hava kabarcıklarını önlemek için serbest bir hava olduğundan emin olun. </li><li> Bir şırınga kullanılarak Cremaster&#39;ın adele çevresinde vazelin (vazelin) bir çizgi çizin. Hattı kapsama için kullanılır kapak kayma genişletilmesi gerekir. </li><li> Bir sıvı odası oluşturmak için, kremasterik doku üzerinde kare bir kapak kayma (32 × 32 mm) yerleştirin ve sıkıca Vazelin hattına kenarları takın. </li><li> Durumda kremasterik doku belirli bir ilaç, çevredeki grip sürekli değiştirilmesi ile superfused değildirid gereksiz olduğunu. Fosfat tek bir uygulama, kalsiyum ve magnezyum hazırlandı bölmeye sahip tamponlu tuz çözeltisi ardından yeterli olabilir. Ilaçlar ile uyarılması Ancak lokal saat başına 3 ml &#39;lik bir oranda mikro-perfüzyon pompa vasıtasıyla sürekli yapılmalıdır. </li><li> Kremasterik doku şimdi mikroskopik görüntüleme için hazırdır. </li></ol> 3. Intravital Kurulum Temel intravital kurulum değişebilir. Epifloresans görüntüleme için deneyler karanlık bir odada yürütülmelidir. <ol><li> Hayvan epi-aydınlatma için ışık kaynağı LED 470 nm ile donatılmış bir intravital Epifloresans mikroskop aşamasında aktarılır. Yaklaşık 800 × büyütme elde etmek için suya daldırma objektif (20 × / 1.0) kullanın. Yüksek çözünürlüklü bir dijital kamera ve çevrimdışı değerlendirme için bir kişisel bilgisayarda saklama kayıtlarının yardımıyla Kayıt gözlemler. </li><li> Lökosit etiketleme için, rodamin enjekteIntravenöz olarak 0.4 mg / kg vücut ağırlığı arasında konsantrasyonlarda jugular kateter ile 6G. </li><li> Gözlem için bir postkapiller venül seçin. Damar çapı 20-60 mikron ve kan akımı arasında olmalıdır yeterli olmalıdır. Doku pre-aktive etkisini en aza indirmek için, lökosit haddeleme &lt;20 cells/30 saniye ve yapışık hücrelerin sayısı &lt;venular endotelinin 10 cells/200μm olduğu, sadece damarlarının fazla analiz için kullanılabilir. </li><li> Mümkünse kadar ila üç postkapiller venlerde gözlenmesi için kullanılabilir, ancak bunlar farklı zaman noktalarında damarlarının kafa önlemek için kremasterik doku karşılık gelen bir bölümünde yer almalıdır. </li></ol> 4. İskemi-reperfüzyon Hasarı (IIR) <ol><li> Doku 30 dakika için stabilize edelim. </li><li> Lökosit yuvarlanmasını ve uyulması için bazal değerleri kurmak için 30 saniyelik bir kayıt yapın. İdeal olarak, hücre doğrulamak için toplam üç bazal kayıtlarında oluşturmaknumaraları ve standart sapma elde etmek için. </li><li> Yavaşça uygulama forseps kullanılarak açığa kremasterik doku çok proksimal ucu etrafında bir Biemer damar klibin yerleştirin. Durağanlık hemen gerçekleşmesi gereken ve gözlenen damar bölümünde Epifloresans mikroskopi ile görülebilmesi. </li><li> Zaman içerisinde çeşitli hasarı gerekli seviyede bağlı olarak kullanılabilir. Diğer yazarlar tarafından detaylı olarak açıklanmış olan iskemi süresinin 30 dakika uygulayın. 21-23 sonrasında damar kıskacı çıkarın. Kan akışı bir 15 dakika stabilize olmasını bekleyin. </li><li> 30 saniye süresi daha sonraki kayıt reperfüzyon (örneğin 30 saniye her 15 dakika) boyunca yapılabilir. Çevrimdışı analiz için dijital olarak saklayın. </li><li> Deney sona ermesi için, sıçan gibi kafatası tabanında bir makas bıçak donuk kenarı gibi künt bir enstrüman basarak yeterli anestezi altında servikal dislokasyon ile ötenazi edilir. Diğer ileÖte yandan, kuyruk tabanı hızlı kafatası servikal omur ayrılmasına neden çekilir. </li></ol> 5.. Çevrimdışı Video Oynatma Analizi <ol><li> Isimli video oynatma analiz için ayrı resim ve yavaş hareket video sırasının gözlem seçimi sağlayan yazılım kullanmak yararlıdır. Uygun kontrast ve parlaklığını ayarlayın. Biz uzunluk ölçümleri ve dijital büyütme sağlayan mikroskop üreticisi tarafından sağlanan yazılımı kullanın. </li><li> Lökosit yuvarlanmasını miktarının tayini için, tüm kayıtları tutarlı olduğundan dikey gemi kesişen bir sanal hattı tanımlayabilirsiniz. Elle 30 saniye içinde sınırını geçmesi haddeleme lökosit sayısını. </li><li> Yapışık lökositlerin ölçülmesi için, tüm kayıtları tutarlı bir 200 mikron geminin tanımlayın 23 30 saniye boyunca sabit kalmasını açıkça görünür lökosit say -. Böylece defined olarak yapışık. 24 </li></ol> 6. Temsilcisi Sonuçlar Cremaster&#39;ın kas IRI ortalama arter basıncı (OAB), kalp hızı ve kan pH üzerinde etkisi yoktur Söz konusu kurulum (Şekil 1) kullanarak, bir iki saat protokolü üzerinden IRI yılında mikrosirkülasyonu araştırıldı, ancak 6 saate kadar çok daha uzun bir gözlem zaman mümkündür. Şekil 2 de gösterildiği gibi ortalama kan basıncı ve kalp atım hızı soruşturma süresi boyunca stabil olarak, Cremaster&#39;ın kas IRI sıçan sirkülasyon üzerinde anlamlı bir etkisi vardır macrohemodynamic. Ayrıca biz fizyolojik sınırlar içinde idi o kan pH arteriyel sık ölçümleri ile homeostaz izlenmekte ve anlamlı gruplar arası farklılıklar gösterdi. IRI kremasterik dolaşımdaki lökosit yuvarlanmasını indükler Lökosit endotel etkileşimi bir anahtardırakut inflamasyon olay. Intravital mikroskopi sayesinde biz Cremaster&#39;ın kas IRI (Şekil 3A) önceki verileri 21, 25 ile uyumlu olarak haddeleme lökosit sayısında bir zaman bağımlı bir artış bulundu. Rolling 137,63 maksimum ± reperfüzyon süresi 120 dakika sonra bazal değerin% 22.55 ile iki saat gözlem zaman içinde monte edilmiş ve daha sonra (137,63 ± 22,55 vs 99,43 ± bazal değerin% 14,04) sham operasyonu hayvanlara kıyasla istatistiksel anlamlılığa ulaşmıştır. IRI kremasterik dolaşımdaki lökosit adezyon indükler Lökosit-endotel etkileşimi daha fazla değerlendirme için biz bir 200 mikron gemi bölümünde lökosit adezyon analiz. IRI 60 dakika sonra hayvanlar ameliyat anlamlı sahte değerleri aşıldığında yapışık lökosit sayısında bir artışa neden olduğunu (118,33 ± 6,83 vs 96,27 ± bazal değerin% 5.78) ve daha ASCEreperfüzyon 120 dakika (Şekil 3B) tarafından nded. Özetle vivo modelde açıklanan IRI ederken hayvanın hayatta kalma ve dolaşım istikrar akut lökosit aktivasyonu tutarlı veri garantilidir sağlar. <img src="/files/ftp_upload/3973/3973fig1.jpg" alt="Şekil 1" /> Şekil 1.. Sıçan Cremaster&#39;ın kas iskemi-reperfüzyon hasarında intravital Epifloresans mikroskopi performans için A. akış çizelgesi. Anestezi ve izlenmesi için gerekli hazırlıklar tamamlandıktan sonra, sıçan Cremaster&#39;ın kas görüntüleme için maruz kalmaktadır. Lökosit aktivasyonunun kayıtların doku iskemisi öncesi ve sonrası alınmıştır. Daha sonraki video analizi en iyi offline yapılır. B. Önerilen intravital kurulum şematik figür. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/3973/3973fig1large.jpg" target="_blank">büyük rakamı görmek için buraya tıklayın</a> . &lt;p class = &quot;jove_content&quot; fo: keep-together.within-page = &quot;always&quot;&gt; <img src="/files/ftp_upload/3973/3973fig2.jpg" alt="Şekil 2" /> Şekil 2. Cremaster&#39;ın kas IRI ortalama arter basıncı (OAB), kalp hızı ve kan pH üzerinde etkisi yoktur. Arter basıncı (A) ve kalp atım hızı (B) ortalama sağ kanülasyon sonra basınç dönüştürücü ile deney boyunca her 30 dakika takip edildi karotis arter. Kan-Ph (C) ölçülmesi 0, 60 sonra gerçekleştirilir ve 120 dakika oldu. Değerler ortalama ± 6 farklı sıçanların SEM ve gruplar arası anlamlı bir fark olmayan fizyolojik düzeyde idi. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/3973/3973fig2large.jpg" target="_blank">büyük rakam görmek için buraya tıklayın</a> . <img src="/files/ftp_upload/3973/3973fig3.jpg" alt="Şekil 3" /> Şekil 3. IRI lökosit artarKremasterik dolaşımda-endotel etkileşimi. Intravital Epifloresans mikroskopi doku iskemisi 30 dakika sonra 120 dakika protokolü üzerinden reperfüzyonda lökosit-endotel etkileşimi belirlemek için kullanılmıştır rodamin 6G (0.4 mg / kg vücut ağırlığı) ile lökositlerin etiketleme sonra. Kayıtları yaklaşık büyütme × 800 alınmıştır. Lökosit yuvarlanmasını iskemi uğramadı kremasterik dokuda deney boyunca sabit kalır, oysa A. IRI önemli reperfüzyon 120 dakika Cremaster&#39;ın kas postkapiller venlerde haddeleme lökosit sayısını artırır. Değerler ortalama ± standart 6 gözlenen sıçan SEM. # P &lt;0.05 eşleştirilmemiş t testi kullanılarak. B. yapışık lökosit sayısında önemli ölçüde kremasterik iskemi 30 dakika ve doku reperfüzyon sonraki 60 dakika sonra rasgele seçilen 200μm postkapiller damar bölümünde artar. Sonuçlar hatta mo olsunBir iki saat reperfüzyon döneminden sonra telaffuz ediyorsun. Değerler ortalama ± standart 6 gözlenen sıçan SEM. # P &lt;0.05 postkapiller venül C. Temsilcisi resimleri önceden iskemi (sol). Eşleştirilmemiş t testi kullanılarak ve IRI (sağda) sonra 120 dakika. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/3973/3973fig3large.jpg" target="_blank">büyük rakam görmek için buraya tıklayın</a> .

<ol>
	<li>Cetin, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effect+of+fucoidin+(a+neutrophil+rolling+inhibitor)+on+ischemia+reperfusion+injury:+experimental+study+in+rat+epigastric+island+flaps.">Protective effect of fucoidin (a neutrophil rolling inhibitor) on ischemia reperfusion injury: experimental study in rat epigastric island flaps.</a> Ann. Plast. Surg. 47, 540-546 (2001).</li><li>Granger, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+xanthine+oxidase+and+granulocytes+in+ischemia-reperfusion+injury.">Role of xanthine oxidase and granulocytes in ischemia-reperfusion injury.</a> Am. J. Physiol. 255, H1269-H1275 (1988).</li><li>Lazarus, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+mast+cells+in+ischaemia-reperfusion+injury+in+murine+skeletal+muscle.">The role of mast cells in ischaemia-reperfusion injury in murine skeletal muscle.</a> J Pathol. 191, 443-448 (2000).</li><li>van den Heuvel, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review:+Ischaemia-reperfusion+injury+in+flap+surgery.">Review: Ischaemia-reperfusion injury in flap surgery.</a> J. Plast. Reconstr. Aesthet. Surg. 62, 721-726 (2009).</li><li>Rosen, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+surface+lectins+in+the+immune+system.">Cell surface lectins in the immune system.</a> Semin. Immunol. 5, 237-247 (1993).</li><li>van der Flier, A., Sonnenberg, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Function+and+interactions+of+integrins.">Function and interactions of integrins.</a> Cell Tissue Res. 305, 285-298 (2001).</li><li>Panes, J., Perry, M., Granger, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocyte-endothelial+cell+adhesion:+avenues+for+therapeutic+intervention.">Leukocyte-endothelial cell adhesion: avenues for therapeutic intervention.</a> Br. J. Pharmacol. 126, 537-550 (1999).</li><li>Gavins, F. N., Chatterjee, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+microscopy+for+the+study+of+mouse+microcirculation+in+anti-inflammatory+drug+research:+focus+on+the+mesentery+and+cremaster+preparations.">Intravital microscopy for the study of mouse microcirculation in anti-inflammatory drug research: focus on the mesentery and cremaster preparations.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 49, 1-14 (2004).</li><li>Sutton, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Injury+of+the+renal+microvascular+endothelium+alters+barrier+function+after+ischemia.">Injury of the renal microvascular endothelium alters barrier function after ischemia.</a> Am. J. Physiol. Renal. Physiol. 285, 191-198 (2003).</li><li>Serracino-Inglott, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+nitric+oxide+synthase+expression+during+hepatic+ischemia-reperfusion.">Differential nitric oxide synthase expression during hepatic ischemia-reperfusion.</a> Am. J. Surg. 185, 589-595 (2003).</li><li>Eppinger, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mediators+of+ischemia-reperfusion+injury+of+rat+lung.">Mediators of ischemia-reperfusion injury of rat lung.</a> Am J Pathol. 150, 1773-1784 (1997).</li><li>Dumont, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+imaging+of+apoptotic+cell-membrane+changes+at+the+single-cell+level+in+the+beating+murine+heart.">Real-time imaging of apoptotic cell-membrane changes at the single-cell level in the beating murine heart.</a> Nat Med. 7, 1352-1355 (2001).</li><li>Baez, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+open+cremaster+muscle+preparation+for+the+study+of+blood+vessels+by+in+vivo+microscopy.">An open cremaster muscle preparation for the study of blood vessels by in vivo microscopy.</a> Microvasc Res. 5, 384-394 (1973).</li><li>Woeste, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Octreotide+attenuates+impaired+microcirculation+in+postischemic+pancreatitis+when+administered+before+induction+of+ischemia.">Octreotide attenuates impaired microcirculation in postischemic pancreatitis when administered before induction of ischemia.</a> Transplantation. 86, 961-967 (2008).</li><li>Schultz, J. E., Hsu, A. K., Gross, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphine+mimics+the+cardioprotective+effect+of+ischemic+preconditioning+via+a+glibenclamide-sensitive+mechanism+in+the+rat+heart.">Morphine mimics the cardioprotective effect of ischemic preconditioning via a glibenclamide-sensitive mechanism in the rat heart.</a> Circ. Res. 78, 1100-1104 (1996).</li><li>Dobschuetz, E. v. o. n. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+intravital+fluorescence+microscopy--a+novel+method+for+the+assessment+of+microvascular+permeability+in+acute+pancreatitis.">Dynamic intravital fluorescence microscopy--a novel method for the assessment of microvascular permeability in acute pancreatitis.</a> Microvasc Res. 67, 55-63 (2004).</li><li>Vutskits, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adverse+effects+of+methylene+blue+on+the+central+nervous+system.">Adverse effects of methylene blue on the central nervous system.</a> Anesthesiology. 108, 684-692 (2008).</li><li>Takasu, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+survival+time+with+combined+early+blood+transfusion+and+fluid+administration+in+uncontrolled+hemorrhagic+shock+in+rats.">Improved survival time with combined early blood transfusion and fluid administration in uncontrolled hemorrhagic shock in rats.</a> J. Trauma. 8, 312-316 (2010).</li><li>Proctor, K. G., Busija, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationships+among+arteriolar,+regional,+and+whole+organ+blood+flow+in+cremaster+muscle.">Relationships among arteriolar, regional, and whole organ blood flow in cremaster muscle.</a> Am. J. Physiol. 249, 34-41 (1985).</li><li>Bagher, P., Segal, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Mouse+Cremaster+Muscle+Preparation+for+Intravital+Imaging+of+the+Microcirculation.">The Mouse Cremaster Muscle Preparation for Intravital Imaging of the Microcirculation.</a> J. Vis. Exp. (52), e2874 (2011).</li><li>Kanwar, S., Hickey, M. J., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postischemic+inflammation:+a+role+for+mast+cells+in+intestine+but+not+in+skeletal+muscle.">Postischemic inflammation: a role for mast cells in intestine but not in skeletal muscle.</a> Am. J. Physiol. 275, 212-218 (1998).</li><li>Leoni, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflamed+phenotype+of+the+mesenteric+microcirculation+of+melanocortin+type+3+receptor-null+mice+after+ischemia-reperfusion.">Inflamed phenotype of the mesenteric microcirculation of melanocortin type 3 receptor-null mice after ischemia-reperfusion.</a> FASEB J. 22, 4228-4238 (2008).</li><li>Simoncini, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+of+oestrogen+receptor+with+the+regulatory+subunit+of+phosphatidylinositol-3-OH+kinase.">Interaction of oestrogen receptor with the regulatory subunit of phosphatidylinositol-3-OH kinase.</a> Nature. 407, 538-541 (2000).</li><li>Woollard, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiological+levels+of+soluble+P-selectin+mediate+adhesion+of+leukocytes+to+the+endothelium+through+Mac-1+activation.">Pathophysiological levels of soluble P-selectin mediate adhesion of leukocytes to the endothelium through Mac-1 activation.</a> Circ. Res. 103, 1128-1138 (2008).</li><li>Mori, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemia-reperfusion+induced+microvascular+responses+in+LDL-receptor+-/-+mice.">Ischemia-reperfusion induced microvascular responses in LDL-receptor -/- mice.</a> Am. J. Physiol. 276, H1647-H1654 (1999).</li><li>Eisenhardt, S. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+Molecular+Changes+Induced+by+Ischemia/Reperfusion+in+Human+Free+Muscle+Flap+Tissue+Samples.">Monitoring Molecular Changes Induced by Ischemia/Reperfusion in Human Free Muscle Flap Tissue Samples.</a> Ann. Plast. Surg. , (2011).</li><li>Eisenhardt, S. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+activation-specific+human+anti-{alpha}M{beta}2+single-chain+antibodies+as+potential+diagnostic+tools+and+therapeutic+agents.">Generation of activation-specific human anti-{alpha}M{beta}2 single-chain antibodies as potential diagnostic tools and therapeutic agents.</a> Blood. 109, 3521-3528 (2007).</li><li>Eisenhardt, S. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissociation+of+pentameric+to+monomeric+C-reactive+protein+on+activated+platelets+localizes+inflammation+to+atherosclerotic+plaques.">Dissociation of pentameric to monomeric C-reactive protein on activated platelets localizes inflammation to atherosclerotic plaques.</a> Circ Res. 105, 128-137 (2009).</li><li>Eisenhardt, S. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C-reactive+protein:+how+conformational+changes+influence+inflammatory+properties.">C-reactive protein: how conformational changes influence inflammatory properties.</a> Cell Cycle. 8, 3885-3892 (2009).</li><li>Granger, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Physiology and pathophysiology of leukocyte adhesion. , 520 (1995).</li><li>Baatz, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetics+of+white+blood+cell+staining+by+intravascular+administration+of+rhodamine+6G.">Kinetics of white blood cell staining by intravascular administration of rhodamine 6G.</a> Int. J. Microcirc. Clin. Exp. 15, 85-91 (1995).</li><li>Mempel, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+leukocyte+trafficking+in+blood+vessels+and+tissues.">In vivo imaging of leukocyte trafficking in blood vessels and tissues.</a> Curr. Opin. Immunol. 16, 406-417 (2004).</li><li>Abbitt, K. B., Rainger, G. E., Nash, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+fluorescent+dyes+on+selectin+and+integrin-mediated+stages+of+adhesion+and+migration+of+flowing+leukocytes.">Effects of fluorescent dyes on selectin and integrin-mediated stages of adhesion and migration of flowing leukocytes.</a> J. Immunol. Methods. 239, 109-119 (2000).</li></ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Lökosit-endotel etkileşimi, reaktif oksijen türlerinin üretimi ve kompleman sisteminin aktivasyonu IRI bağlı doku disfonksiyonunun temel özellikleridir. Etkilenen doku 26 mikrosirkülasyon inflamatuar başlangıcı için ayrılmaz yeri olarak kabul edilir. Dışında bu akış odası deneyleri 27, 28, ex vivo deneyler daha da in vivo alaka içinde değerlendirmek intravital görüntüleme köklü modelleri sağlamak zorunludur. IRI çeşitli organ sistemlerine suç...

<table border="1"><tbody><tr><td> Ekipman Adı: </td><td> Şirket: </td><td> Katalog No: </td><td> Yorumlar: </td></tr><tr><td> Forene% 100 (V / V) </td><td> Başrahip </td><td> B506 </td><td> API izofluran </td></tr><tr><td> Terylen Sütür </td><td> Serag Weissner </td><td> OC108000 </td><td></td></tr><tr><td> Portex Güzel Polietilen Boru Bore </td><td> Tıp Smiths </td><td> 800/100/100 </td><td> 0.28 mm iç çapı </td></tr><tr><td> % 0,9 tuz çözeltisi </td><td> Fresinus Kabi </td><td> 808771 </td><td></td></tr><tr><td> Değişim-A-ucu deluxe koter kiti </td><td> Bovie Tıp </td><td> DEL1 </td><td></td></tr><tr><td> Abbocath-T 14G </td><td> Venisystems </td><td> G713- A01 </td><td> objektif tüpü olarak kullanılan </td></tr><tr><td> Servo Vantilatör 900C </td><td> Maquet </td><td></td><td> hayvan ventialtor olarak kullanılan </td></tr><tr><td> Mantıksal basınç dönüştürücü </td><td> Tıp Smiths </td><td> MX1960 </td><td></td></tr><tr><td> Sirecust 404 Monitör </td><td> Siemens </td><td></td><td></td></tr><tr><td> ABL 700 Masaüstü Analyzer </td><td> Radyometre </td><td></td><td> kan gazı ölçümü için </td></tr><tr><td> Isıtma pedi </td><td> Effenberger </td><td> 8319 </td><td></td></tr><tr><td> Alüminyum sahne </td><td> Alfun </td><td> AW7022 </td><td></td></tr><tr><td> Cerrahi mikroskop OPMI 6-SDFC </td><td> Carl Zeiss </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Mikro cerrahi aletlerin laboratuvar set </td><td> S &amp; T </td><td> 767 </td><td></td></tr><tr><td> Biemer damar klip </td><td> Diener </td><td> 64.562 </td><td></td></tr><tr><td> Forseps uygulanması </td><td> Diener </td><td> 64.568 </td><td> Biemer damar klip için </td></tr><tr><td> Rodamin 6G </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> R4127 </td><td></td></tr><tr><td> Vazelin beyaz DAB </td><td> Winthrop </td><td> 2726853 </td><td></td></tr><tr><td> Gözlük Kapak </td><td></td><td></td><td> 32x32 mm </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Intravital kurulum </td></tr><tr><td> Zeiss Axio Kapsam A-1 MAT </td><td> Carl Zeiss </td><td> 490036 </td><td> Epifloresans mikroskop </td></tr><tr><td> 470 nm LED </td><td> Carl Zeiss </td><td> 423052 </td><td> floresan ışık kaynağı </td></tr><tr><td> Colibri 2 Sistem </td><td> Carl Zeiss </td><td> 423052 </td><td></td></tr><tr><td> B Planı-Apochromat 20x / 1,0 DIC </td><td> Carl Zeiss </td><td> 421452 </td><td> suya daldırma hedefi </td></tr><tr><td> AxioCam MRM Rev 3 FireWire </td><td> Carl Zeiss </td><td> 426509 </td><td> yüksek çözünürlüklü dijital kamera </td></tr><tr><td> Axio vizyon LE yazılımı </td><td> Carl Zeiss </td><td> 410130 </td><td> çevrimdışı analiz için kullanmak </td></tr></tbody></table>

real-time digital imaging of leukocyte-endothelial interaction in ischemia-reperfusion injury (iri) of the rat cremaster muscle

Tersinmez önlenmesi için gerekli süre işemi-reperfüzyon yaralanması (IRI), serebral inme, miyokard enfarktüsü, bağırsak iskemi yanı sıra, daha önce iskemik doku transplantasyonu ve kardiyovasküler cerrahi. 1 Reperfüzyon aşağıdaki gibi patolojik durumların büyük bir dizi rolü de ortaya konmuştur doku hasarı, etkilenen doku aşırı enflamasyon ortaya çıkarır. Reaktif oksijen türlerinin, tamamlayıcı sisteminin aktivasyonu üretimine ve mikrovasküler geçirgenliğin artış bitişik, lökositlerin aktivasyonu reperfüzyon esnasında inflamatuar doku hasarının patolojik basamağında prensibi oyuncular biridir. 2, 3 Leukocyte aktivasyonu kapsayan çok aşamalı bir işlemdir , haddeleme firma adezyon ve göçü ve bu tür tamamlayıcı faktörleri, kemokinleri veya trombosit aktive edici faktör olarak chemoattractants yanıt olarak adezyon molekülleri arasındaki karmaşık bir etkileşim aracılık eder. 4 &lt;p class = &quot;jove_content&quot;&gt; postkapiller venlerde lökosit yuvarlanmasını ağırlıklı olarak kendi sayacı ligandlar, endotele lökositlerin sıkı adezyon adezyon molekülleri (ICAM) ve vasküler hücresel bağlama yoluyla selektin-kontrollü ile selektinler 5 etkileşimi aracılık ederken yapışma molekülleri (VCAM). 6, 7 Lökosit-endotel etkileşimi in vivo gözlem için altın standart olarak ilk kez 1968 yılında tanımlanan intravital mikroskopi tekniğidir. 8 IRI (iskemi-reperfüzyon) çeşitli modelleri çeşitli organları için tarif edilmiş olsa da, 9-12 sadece birkaç görüntü kalitesi yüksek bir seviyede mikrovasküler yatakta lökosit göçünün doğrudan görüntülenmesi için uygundur. 8 Biz burada kremasterik mikrosirkülasyonda postkapiller venül sayısal intravital Epifloresans mikroskopi teşvikkalitatif ve kantitatif olarak çizgili kas dokusunda IRI-araştırma için lökosit göçünün analiz ve tekniği gerçekleştirmek için ayrıntılı bir el kitabı sunmak için uygun bir yöntem olarak sıçan 13. Biz daha fazla ortak tuzaklar göstermek ve okuyucu gerçekten takdir sağlamak ve güvenli bir yöntem yapmalıdır yararlı ipuçları sunmaktadır. Adım protokol tarafından bir adımda biz daha uzun süre için hayvan sıkıca anestezi altında tutmak için yeterli gözetim altında solunum kontrollü anestezi ile başlamak nasıl betimliyor. Daha sonra üstün optik çözünürlük için bir ince düz bir levha olarak kremasterik hazırlık tanımlamak ve iyi laboratuarımızda kurulmuştur IRI lökosit görüntüleme için bir protokol sağlar.

Watch this Scientific Journal Video about Real-time Digital Imaging of Leukocyte-endothelial Interaction in Ischemia-reperfusion Injury IRI of the Rat Cremaster Muscle at JoVE.com

Real-time Digital Imaging of Leukocyte-endothelial Interaction in Ischemia-reperfusion Injury IRI of the Rat Cremaster Muscle

Kremasterik mikrosirkülasyonda postkapiller venüllerde Dijital intravital Epifloresans mikroskopi lökosit-endotel etkileşimi içgörü kazanmak için uygun bir yöntemdir<em&gt; In vivo</em&gt; Çizgili kas dokusunda iskemi-reperfüzyon (IRI) içinde. Biz burada güvenle tekniği gerçekleştirmek ve uygulamaları ve sınırlamaları tartışmak için ayrıntılı bir protokol sağlar.

Sıçan Cremaster&#39;ın kas iskemi-reperfüzyon Hasarı içinde Lökosit-endotelyal Etkileşim Gerçek zamanlı Dijital Görüntüleme (IRI)

Ischemia-reperfusion injury (IRI) has been implicated in a large array of pathological conditions such as cerebral stroke, myocardial infarction, ...

real-time-digital-imaging-leukocyte-endothelial-interaction-ischemia

Research

JoVE Journal

Medicine

Real-time Digital Imaging of Leukocyte-endothelial Interaction in Ischemia-reperfusion Injury (IRI) of the Rat Cremaster Muscle

15.0K Görüntüleme.  University of Freiburg Medical Centre. Kremasterik mikrosirkülasyonda postkapiller venüllerde Dijital intravital Epifloresans mikroskopi lökosit-endotel etkileşimi içgörü kazanmak için uygun bir yöntemdir In vivo Çizgili kas dokusunda iskemi-reperfüzyon (IRI) içinde. Biz burada güvenle tekniği gerçekleştirmek ve uygulamaları ve sınırlamaları tartışmak için ayrıntılı bir protokol sağlar.

Video: Real-time Digital Imaging of Leukocyte-endothelial Interaction in Ischemia-reperfusion Injury IRI of the Rat Cremaster Muscle

In situ Transverse Rectus Abdominis Myocutaneous Flap: A Rat Model of Myocutaneous Ischemia Reperfusion Injury

Free tissue transfer is the gold standard of reconstructive surgery to repair complex defects not amenable to local options or those requiring composite tissue. Ischemia reperfusion injury (IRI) is a known cause of partial free flap failure and has no effective treatment. Establishing a laboratory model of this injury can prove costly both financially as larger mammals are conventionally used and in the expertise required by the technical difficulty of these procedures typically requires employing an experienced microsurgeon. This publication and video demonstrate the effective use of a model of IRI in rats which does not require microsurgical expertise. This procedure is an in situ model of a transverse abdominis myocutaneous (TRAM) flap where atraumatic clamps are utilized to reproduce the ischemia-reperfusion injury associated with this surgery. A laser Doppler Imaging (LDI) scanner is employed to assess flap perfusion and the image processing software, Image J to assess percentage area skin survival as a primary outcome measure of injury.

In situ Transverse Rectus Abdominis Myocutaneous Flap: A Rat Model of Myocutaneous Ischemia Reperfusion Injury

Free tissue transfer is widely employed in reconstructive surgery to restore form and function following oncological resection and trauma. Preconditioning this tissue prior to surgery may improve outcome. This article describes an in situ transverse rectus abdominis myocutaneous flap (TRAM) in rats as a means for testing preconditioning strategies.

Miyokutanöz İskemi Reperfüzyon Hasarı Rat Modeli: in situ Enine Rektus abdominis kas deri Flap

Free tissue transfer is the gold standard of reconstructive surgery to repair complex defects not amenable to local options or those requiring composite ...

Tıp

Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often unreported mortality rates that may confound analyses. Bilateral renal pedicle clamping is commonly used to induce IR-AKI, but differences between effective clamp pressures and/or renal responses to ischemia between kidneys often lead to more variable results. In addition, shorter clamp times are known to induce more variable tubular injury, and while mice undergoing bilateral injury with longer clamp times develop more consistent tubular injury, they often die within the first 3 days after injury due to severe renal insufficiency. To improve post-injury survival and obtain more consistent and predictable results, we have developed two models of unilateral ischemia-reperfusion injury followed by contralateral nephrectomy. Both surgeries are performed using a dorsal approach, reducing surgical stress resulting from ventral laparotomy, commonly used for mouse IR-AKI surgeries. For induction of moderate injury BALB/c mice undergo unilateral clamping of the renal pedicle for 26 min and also undergo simultaneous contralateral nephrectomy. Using this approach, 50-60% of mice develop moderate AKI 24 hr after injury but 90-100% of mice survive. To induce more severe AKI, BALB/c mice undergo renal pedicle clamping for 30 min followed by contralateral nephrectomy 8 days after injury. This allows functional assessment of renal recovery after injury with 90-100% survival. Early post-injury tubular damage as well as post injury fibrosis are highly consistent using this model.

We describe models of moderate and severe ischemia-reperfusion-induced kidney injury in which the mice undergo unilateral renal pedicle clamping followed by simultaneous or delayed contralateral nephrectomy, respectively. These models consistently give rise to renal dysfunction and post-injury fibrosis, but injury severity and survival are dependent on mouse background, age and surgical equipment.

Farelerde Akut Böbrek Hasarı ve Post Yaralanma Fibrozis iskemi-reperfüzyon Model

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often ...

Induction and Assessment of Ischemia-reperfusion Injury in Langendorff-perfused Rat Hearts

The biochemical events surrounding ischemia reperfusion injury in the acute setting are of great importance to furthering novel treatment options for myocardial infarction and cardiac complications of thoracic surgery. The ability of certain drugs to precondition the myocardium against ischemia reperfusion injury has led to multiple clinical trials, with little success. The isolated heart model allows acute observation of the functional effects of ischemia reperfusion injury in real time, including the effects of various pharmacological interventions administered at any time-point before or within the ischemia-reperfusion injury window. Since brief periods of ischemia can precondition the heart against ischemic injury, in situ aortic cannulation is performed to allow for functional assessment of non-preconditioned myocardium. A saline filled balloon is placed into the left ventricle to allow for real-time measurement of pressure generation. Ischemic injury is simulated by the cessation of perfusion buffer flow, followed by reperfusion. The duration of both ischemia and reperfusion can be modulated to examine biochemical events at any given time-point. Although the Langendorff isolated heart model does not allow for the consideration of systemic events affecting ischemia and reperfusion, it is an excellent model for the examination of acute functional and biochemical events within the window of ischemia reperfusion injury as well as the effect of pharmacological intervention on cardiac pre- and postconditioning. The goal of this protocol is to demonstrate how to perform in situ aortic cannulation and heart excision followed by ischemia/reperfusion injury in the Langendorff model.

The isolated rat heart is an enduring model for ischemia reperfusion injury. Here, we describe the process of harvesting the beating heart from a rat via in situ aortic cannulation, Langendorff perfusion of the heart, simulated ischemia-reperfusion injury, and infarct staining to confirm the extent of ischemic insult.

Langendorff-perfüze sıçan Hearts indüksiyon ve İskemi-reperfüzyon Hasarı Değerlendirilmesi

The biochemical events surrounding ischemia reperfusion injury in the acute setting are of great importance to furthering novel treatment options for ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, hypotension, necrotizing enterocolitis, bowel transplantation, trauma and chronic inflammation. Intestinal ischemia-reperfusion (IR) injury is a consequence of acute mesenteric ischemia, caused by inadequate blood flow through the mesenteric vessels, resulting in intestinal damage. Reperfusion following ischemia can further exacerbate damage of the intestine. The mechanisms of IR injury are complex and poorly understood. Therefore, experimental small animal models are critical for understanding the pathophysiology of IR injury and the development of novel therapies.
Here we describe a mouse model of acute intestinal IR injury that provides reproducible injury of the small intestine without mortality. This is achieved by inducing ischemia in the region of the distal ileum by temporally occluding the peripheral and terminal collateral branches of the superior mesenteric artery for 60 min using microvascular clips. Reperfusion for 1 hr, or 2 hr after injury results in reproducible injury of the intestine examined by histological analysis. Proper position of the microvascular clips is critical for the procedure. Therefore the video clip provides a detailed visual step-by-step description of this technique. This model of intestinal IR injury can be utilized to study the cellular and molecular mechanisms of injury and regeneration.

Here we describe the detailed procedure of intestinal ischemia-reperfusion in mice which results in reproducible injury without mortality to encourage the standardization of this technique across the field. This model of intestinal ischemia-reperfusion injury can be utilized to study the cellular and molecular mechanisms of injury and regeneration.

Bağırsak İskemi-reperfüzyon Hasarı Murin Modeli

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

Inducing Ischemia-reperfusion Injury in the Mouse Ear Skin for Intravital Multiphoton Imaging of Immune Responses

Ischemia-reperfusion injury (IRI) occurs when there is transient hypoxia due to the obstruction of blood flow (ischemia) followed by a subsequent re-oxygenation of the tissues (reperfusion). In the skin, ischemia-reperfusion (IR) is the main contributing factor to the pathophysiology of pressure ulcers. While the cascade of events leading up to the inflammatory response has been well studied, the spatial and temporal responses of the different subsets of immune cells to an IR injury are not well understood. Existing models of IR using the clamping technique on the skin flank are highly invasive and unsuitable for studying immune responses to injury, while similar non-invasive magnet clamping studies in the skin flank are less-than-ideal for intravital imaging studies. In this protocol, we describe a robust model of non-invasive IR developed on mouse ear skin, where we aim to visualize in real-time the cellular response of immune cells after reperfusion via multiphoton intravital imaging (MP-IVM).

This protocol describes the induction of an ischemia-reperfusion (IR) model on mouse ear skin using magnet clamping. Using a custom-built intravital imaging model, we study in vivo inflammatory responses post-reperfusion. The rationale behind the development of this technique is to extend the understanding of how leukocytes respond to skin IR injury.

Bağışıklık Yanıtları intravital multiphoton Görüntüleme Fare Kulak Skin uyaran İskemi-reperfüzyon yaralanması

Ischemia-reperfusion injury (IRI) occurs when there is transient hypoxia due to the obstruction of blood flow (ischemia) followed by a subsequent ...

Evaluation of Coronary Flow Reserve After Myocardial Ischemia Reperfusion in Rats

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via recanalization of the coronary artery is the most effective strategy for reducing the size of ischemic myocardium. The coronary microvasculature cannot be visualized and imaged&#160;in vivo, but there are several invasive and noninvasive techniques that can be used to assess parameters which depend directly on coronary microvascular function. The endothelial function after ischemia reperfusion can be assessed also at the level of the coronary circulation via the coronary flow reserve (CFR).&#160;In this study, peak velocity of left anterior descending (LAD) coronary arteries was measured in rats in vivo via Transthoracic Doppler Echocardiography during resting and stress challenge (induced by Dobutamine). A normal heart can increase its coronary blood flow up to four times above the resting values during stress induction. Following ischemia reperfusion, we found a significantly diminished CFR, which can be used as a marker of coronary microvascular dysfunction. CFR has opened a window on the importance of microvascular dysfunction and has been shown to predict cardiovascular risk independent of whether the severe obstructive disease is present.

Coronary flow reserve (CFR), is defined as the ratio of maximal coronary blood flow to the resting coronary blood flow. We present a protocol for evaluating CFR in rats via ultrasound, which offers the opportunity to predict cardiovascular risk factors in the absence of obstructive coronary disease.

Farelerde miyokardiyal Iskemi reperfüzyon sonrası koroner akış rezervi değerlendirilmesi

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via ...

A Pre-clinical Rat Model for the Study of Ischemia-reperfusion Injury in Reconstructive Microsurgery

Ischemia-reperfusion injury is the main cause of flap failure in reconstructive microsurgery. The rat is the preferred preclinical animal model in many areas of biomedical research due to its cost-effectiveness and its translation to humans. This protocol describes a method to create a preclinical free skin flap model in rats with ischemia-reperfusion injury. The described 3 cm x 6 cm rat free skin flap model is easily obtained after the placement of several vascular ligatures and the section of the vascular pedicle. Then, 8 h after the ischemic insult and completion of the microsurgical anastomosis, the free skin flap develops the tissue damage. These ischemia-reperfusion injury-related damages can be studied in this model, making it a suitable model for evaluating therapeutic agents to address this pathophysiological process. Furthermore, two main monitoring techniques are described in the protocol for the assessment of this animal model: transit-time ultrasound technology and laser speckle contrast analysis.

Here, we describe a pre-clinical animal model for studying the pathophysiology of ischemia-reperfusion injury in reconstructive microsurgery. This free skin flap model based on the superficial caudal epigastric vessels in the rat may also allow for the evaluation of different therapies and compounds to counteract ischemia-reperfusion injury-related damage.

Rekonstrüktif Mikrocerrahide İskemi-Reperfüzyon Hasarı Nın İnceleştirilmesinde Klinik Öncesi Sıçan Modeli

Ischemia-reperfusion injury is the main cause of flap failure in reconstructive microsurgery. The rat is the preferred preclinical animal model in many ...

Delayed Intramyocardial Delivery of Stem Cells after Ischemia Reperfusion Injury in a Murine Model

There is significant interest in the use of stem cells (SCs) for the recovery of cardiac function in individuals with myocardial injuries. Most commonly, cardiac stem cell therapy is studied by delivering SCs concurrently with the induction of myocardial injury. However, this approach presents two significant limitations: the early hostile pro-inflammatory ischemic environment may affect the survival of transplanted SCs, and it does not represent the subacute infarction scenario where SCs will likely be used. Here we describe a two-part series of surgical procedures for the induction of ischemia-reperfusion injury and delivery of mesenchymal stem cells (MSCs). This method of stem cell administration may allow for the longer viability and retention around damaged tissue by circumventing the initial immune response. A model of ischemia reperfusion injury was induced in mice accompanied by the delivery of mesenchymal stem cells (3.0 x 105), stably expressing the reporter gene firefly luciferase under the constitutively expressed CMV promoter, intramyocardially 7 days later. The animals were imaged via ultrasound and bioluminescent imaging for confirmation of injury and injection of cells, respectively. Importantly, there was no added complication rate when performing this two-procedure approach for SC delivery. This method of stem cell administration, collectively with the utilization of state-of-the-art reporter genes, may allow for the in vivo study of viability and retention of transplanted SCs in a situation of chronic ischemia commonly seen clinically, while also circumventing the initial pro-inflammatory response. In summary, we established a protocol for the delayed delivery of stem cells into the myocardium, which can be used as a potential new approach in promoting regeneration of the damaged tissue.

Stems cells are continuously investigated as potential treatments for individuals with myocardial damage, however, their decreased viability and retention within injured tissue can impact their long-term efficacy. In this manuscript we describe an alternative method for stem cell delivery in a murine model of ischemia reperfusion injury.

Bir Murine Modelinde İskemi Reperfüzyon Yaralanması Sonrası Kök Hücrelerin Gecikmiş İntramiyokardiyal Teslimi

There is significant interest in the use of stem cells (SCs) for the recovery of cardiac function in individuals with myocardial injuries. Most commonly, ...

Organ Ischemia-Reperfusion Injury by Simulating Hemodynamic Changes in Rat Liver Transplant Model

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats is a tried and proven animal model used for preoperative, intraoperative, and postoperative studies, including ischemia-reperfusion injury (IRI) of extrahepatic organs. This model requires numerous experiments and devices. The duration of anhepatic phase is closely related to the time to develop IRI after transplantation. In this experiment, we used hemodynamic changes to induce extrahepatic organ damage in rats and determined the maximum tolerance time. The time until the most severe organ injury varied for different organs. This method can easily be replicated and can also be used to study IRI of the extrahepatic organs after liver transplantation.

This paper provides a detailed description of how to build an animal model of the anhepatic phase (liver ischemia) in rats to facilitate basic research into ischemia-reperfusion injury after liver transplantation.

Sıçan Karaciğer Nakli Modelinde Hemodinamik Değişiklikleri Simüle Ederek Organ İskemi-Reperfüzyon Yaralanması

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats is a tried and proven animal model used for preoperative, intraoperative, and postoperative studies, ...

Real-Time Assessment of Spinal Cord Microperfusion in a Porcine Model of Ischemia/Reperfusion

Spinal cord injury is a devastating complication of aortic repair. Despite developments for the prevention and treatment of spinal cord injury, its incidence is still considerably high and therefore, influences patient outcome. Microcirculation plays a key role in tissue perfusion and oxygen supply and is often dissociated from macrohemodynamics. Thus, direct evaluation of spinal cord microcirculation is essential for the development of microcirculation-targeted therapies and the evaluation of existing approaches in regard to spinal cord microcirculation. However, most of the methods do not provide real-time assessment of spinal cord microcirculation. The aim of this study is to describe a standardized protocol for real-time spinal cord microcirculatory evaluation using laser-Doppler needle probes directly inserted in the spinal cord. We used a porcine model of ischemia/reperfusion to induce deterioration of the spinal cord microcirculation. In addition, a fluorescent microsphere injection technique was used. Initially, animals were anesthetized and mechanically ventilated. Thereafter, laser-Doppler needle probe insertion was performed, followed by the placement of cerebrospinal fluid drainage. A median sternotomy was performed for exposure of the descending aorta to perform aortic cross-clamping. Ischemia/reperfusion was induced by supra-celiac aortic cross-clamping for a total of 48 min, followed by reperfusion and hemodynamic stabilization. Laser-Doppler Flux was performed in parallel with macrohemodynamic evaluation. In addition, automated cerebrospinal fluid drainage was used to maintain a stable cerebrospinal pressure. After completion of the protocol, animals were sacrificed, and the spinal cord was harvested for histopathological and microsphere analysis. The protocol reveals the feasibility of spinal cord microperfusion measurements using laser-Doppler probes and shows a marked decrease during ischemia as well as recovery after reperfusion. Results showed comparable behavior to fluorescent microsphere evaluation. In conclusion, this new protocol might provide a useful large animal model for future studies using real-time spinal cord microperfusion assessment in ischemia/reperfusion conditions.

Spinal cord microcirculation plays a pivotal role in spinal cord injury. Most methods do not allow real-time assessment of spinal cord microcirculation, which is essential for the development of microcirculation-targeted therapies. Here, we propose a protocol using Laser-Doppler-Flow Needle probes in a large animal model of ischemia/reperfusion.

İskemi/Reperfüzyon Porsin Modelinde Omurilik Mikroperfüzyonunun Gerçek Zamanlı Değerlendirilmesi

Spinal cord injury is a devastating complication of aortic repair. Despite developments for the prevention and treatment of spinal cord injury, its ...