Reaktifler kurma ve jeller dökme ve UCLA Erin Sanders ilham, rehberlik ve destek için ve yazının redaksiyon için UCLA Kris Reddi özel teşekkürler. Ben de GAL3 gen yükseltmek için maya genomik DNA ve primer temini için teşekkürler Giancarlo Costaguta ve Gregory S. Payne istiyorum. 4 - Ben de laboratuar ekipmanları ve rakamlar 2 yapmak için kullanılan reaktiflerin resmini çekmek için Bhairav ​​Şah teşekkür etmek istiyorum. Bu proje için finansman HHMI (HHMI Hibe No 52.006.944) tarafından sağlandı.

<ol>
	<li>Albert, J., Fenyo, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simple+sensitive,+and+specific+detection+of+human+immunodeficiency+virus+type+1+in+clinical+specimens+by+polymerase+chain+reaction+with+nested+primers.">Simple sensitive, and specific detection of human immunodeficiency virus type 1 in clinical specimens by polymerase chain reaction with nested primers.</a> J. Clin. Microbiol. 28, 1560-1564 (1990).</li><li>Baskaran, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uniform+amplification+of+a+mixture+of+deoxyribonucleic+acids+with+varying+GC+content.">Uniform amplification of a mixture of deoxyribonucleic acids with varying GC content.</a> Genome Res. 6, 633-638 (1996).</li><li>Blanchard, M. M., Taillon-Miller, P., Nowotny, P., Nowotny, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PCR+buffer+optimization+with+uniform+temperature+regimen+to+facilitate+automation.">PCR buffer optimization with uniform temperature regimen to facilitate automation.</a> PCR Methods Appl. 2, 234-240 (1993).</li><li>Borer, P. N., Dengler, B., Tinoco, I., Uhlenbeck, O. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stability+of+ribonucleic+acid+double-stranded+helices.">Stability of ribonucleic acid double-stranded helices.</a> J. Mol. Biol. 86, 843-853 (1974).</li><li>Breslauer, K. J., Frank, R., Blocker, H., Marky, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predicting+DNA+duplex+stability+from+the+base+sequence.">Predicting DNA duplex stability from the base sequence.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 83, 3746-3750 (1986).</li><li>Chou, Q., Russell, M., Birch, D. E., Raymond, J., Bloch, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevention+of+pre-PCR+mis-priming+and+primer+dimerization+improves+low-copy-number+amplifications.">Prevention of pre-PCR mis-priming and primer dimerization improves low-copy-number amplifications.</a> Nucleic Acids Res. 20, 1717-1723 (1992).</li><li>Coleman, W. B., Tsongalis, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Diagnostics for the clinical laboration. , (2005).</li><li>D'Aquila, R. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maximizing+sensitivity+and+specificity+of+PCR+by+pre-amplification+heating.">Maximizing sensitivity and specificity of PCR by pre-amplification heating.</a> Nucleic Acids Res. 19, 3749 (1991).</li><li>Dieffenbach, C. W., Lowe, T. M., Dveksler, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=General+concepts+for+PCR+primer+design.">General concepts for PCR primer design.</a> PCR Methods Appl. 3, S30-S37 (1993).</li><li>Don, R. H., Cox, P. T., Wainwright, B. J., Baker, K., Mattick, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term='Touchdown'+PCR+to+circumvent+spurious+priming+during+gene+amplification.">'Touchdown' PCR to circumvent spurious priming during gene amplification.</a> Nucleic Acids Res. 19, 4008 (1991).</li><li>Erlich, H. A., Gelfand, D., Sninsky, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+the+polymerase+chain+reaction.">Recent advances in the polymerase chain reaction.</a> Science. 252, 1643-1651 (1991).</li><li>Frey, U. H., Bachmann, H. S., Peters, J., Siffert, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PCR-amplification+of+GC-rich+regions:+'slowdown+PCR.">PCR-amplification of GC-rich regions: 'slowdown PCR.</a> Nat. Protoc. 3, 1312-1317 (2008).</li><li>Haqqi, T. M., Sarkar, G., David, C. S., Sommer, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specific+amplification+with+PCR+of+a+refractory+segment+of+genomic+DNA.">Specific amplification with PCR of a refractory segment of genomic DNA.</a> Nucleic Acids Res. 16, 11844 (1988).</li><li>Henke, W., Herdel, K., Jung, K., Schnorr, D., Loening, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Betaine+improves+the+PCR+amplification+of+GC-rich+DNA+sequences.">Betaine improves the PCR amplification of GC-rich DNA sequences.</a> Nucleic Acids Res. 25, 3957-3958 (1997).</li><li>Innis, M. A., Gelfand, D. H., Sninsky, J. J., White, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> PCR Protocols: A guide to methods and applications. , (1990).</li><li>King, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods in Molecular Biology. 630, (2010).</li><li>Kleppe, K., Ohtsuka, E., Kleppe, R., Molineux, I., Khorana, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+polynucleotides.+XCVI.+Repair+replications+of+short+synthetic+DNA's+as+catalyzed+by+DNA+polymerases.">Studies on polynucleotides. XCVI. Repair replications of short synthetic DNA's as catalyzed by DNA polymerases.</a> J. Mol. Biol. 56, 341-361 (1971).</li><li>Korbie, D. J., Mattick, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Touchdown+PCR+for+increased+specificity+and+sensitivity+in+PCR+amplification.">Touchdown PCR for increased specificity and sensitivity in PCR amplification.</a> Nat. Protoc. 3, 1452-1456 (2008).</li><li>Kramer, M. F., Coen, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enzymatic+amplification+of+DNA+by+PCR:+standard+procedures+and+optimization.">Enzymatic amplification of DNA by PCR: standard procedures and optimization.</a> Curr. Protoc. Toxicol. Appendix 3, 1-14 (2001).</li><li>Kramer, M. F., Coen, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+polymerase+chain+reaction.">The polymerase chain reaction.</a> Curr. Protoc. Protein Sci. Appendix 4, Appendix 4J (2002).</li><li>Kreader, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relief+of+amplification+inhibition+in+PCR+with+bovine+serum+albumin+or+T4+gene+32+protein.">Relief of amplification inhibition in PCR with bovine serum albumin or T4 gene 32 protein.</a> Appl. Environ. Microbiol. 62, 1102-1106 (1996).</li><li>Kwok, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+human+immunodeficiency+virus+sequences+by+using+in+vitro+enzymatic+amplification+and+oligomer+cleavage+detection.">Identification of human immunodeficiency virus sequences by using in vitro enzymatic amplification and oligomer cleavage detection.</a> J. Virol. 61, 1690-1694 (1987).</li><li>McConlogue, L., Brow, M. A., Innis, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure-independent+DNA+amplification+by+PCR+using+7-deaza-2'-deoxyguanosine.">Structure-independent DNA amplification by PCR using 7-deaza-2'-deoxyguanosine.</a> Nucleic Acids Res. 16, 9869 (1988).</li><li>Mullis, K. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+unusual+origin+of+the+polymerase+chain+reaction.">The unusual origin of the polymerase chain reaction.</a> Sci. Am. 262, 56-65 (1990).</li><li>Mullis, K. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Target+amplification+for+DNA+analysis+by+the+polymerase+chain+reaction.">Target amplification for DNA analysis by the polymerase chain reaction.</a> Ann. Biol. Clin. (Paris). 48, 579-582 (1990).</li><li>Mullis, K. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+polymerase+chain+reaction+in+an+anemic+mode:+how+to+avoid+cold+oligodeoxyribonuclear+fusion).">The polymerase chain reaction in an anemic mode: how to avoid cold oligodeoxyribonuclear fusion).</a> PCR Methods Appl. 1, 1-4 (1991).</li><li>Mullis, K. B., Faloona, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specific+synthesis+of+DNA+in+vitro+via+a+polymerase-catalyzed+chain+reaction.">Specific synthesis of DNA in vitro via a polymerase-catalyzed chain reaction.</a> Methods Enzymol. 155, 335-350 (1987).</li><li>Paabo, S., Gifford, J. A., Wilson, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+DNA+sequences+from+a+7000-year+old+brain.">Mitochondrial DNA sequences from a 7000-year old brain.</a> Nucleic Acids Res. 16, 9775-9787 (1988).</li><li>Rees, W. A., Yager, T. D., Korte, J., von Hippel, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Betaine+can+eliminate+the+base+pair+composition+dependence+of+DNA+melting.">Betaine can eliminate the base pair composition dependence of DNA melting.</a> Biochemistry. 32, 137-144 (1993).</li><li>Roux, K. H., Hecker, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=One-step+optimization+using+touchdown+and+stepdown+PCR.">One-step optimization using touchdown and stepdown PCR.</a> Methods Mol. Biol. 67, 39-45 (1997).</li><li>Rychlik, W., Spencer, W. J., Rhoads, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+the+annealing+temperature+for+DNA+amplification+in+vitro.">Optimization of the annealing temperature for DNA amplification in vitro.</a> Nucleic Acids Res. 18, 6409-6412 (1990).</li><li>Saiki, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primer-directed+enzymatic+amplification+of+DNA+with+a+thermostable+DNA+polymerase.">Primer-directed enzymatic amplification of DNA with a thermostable DNA polymerase.</a> Science. 239, 487-491 (1988).</li><li>Saiki, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enzymatic+amplification+of+beta-globin+genomic+sequences+and+restriction+site+analysis+for+diagnosis+of+sickle+cell+anemia.">Enzymatic amplification of beta-globin genomic sequences and restriction site analysis for diagnosis of sickle cell anemia.</a> Science. 230, 1350-1354 (1985).</li><li>Sambrook, J. A. R., David, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Molecular Cloning A Laboratory Manual. 2, (2001).</li><li>Sarkar, G., Kapelner, S., Sommer, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formamide+can+dramatically+improve+the+specificity+of+PCR.">Formamide can dramatically improve the specificity of PCR.</a> Nucleic Acids Res. 18, 7465 (1990).</li><li>Smit, V. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KRAS+codon+12+mutations+occur+very+frequently+in+pancreatic+adenocarcinomas.">KRAS codon 12 mutations occur very frequently in pancreatic adenocarcinomas.</a> Nucleic Acids Res. 16, 7773-7782 (1988).</li><li>Wilson, I. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+and+facilitation+of+nucleic+acid+amplification.">Inhibition and facilitation of nucleic acid amplification.</a> Appl. Environ. Microbiol. 63, 3741-3751 (1997).</li><li>Wu, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods in Enzymology. 218, (1993).</li></ol>

Ben ifşa hiçbir şey yok.

PCR biyolojik bilim cephanelik vazgeçilmez bir araç haline gelmiştir. PCR genomlar ve çeşitliliğin yanı sıra, daha fazla biyokimyasal analiz için sadece klonlama genler ilgili bilgi sağlamak, özel ve doğru bir klinik test sağlayan, biyologlar genomlarını gücü verim ve yeni fonksiyonları ile hibrid genlerin yapmak için izin bilim elbette değiştirdi. PCR uygulaması sadece kendi gücünü kullanır bilim adamı hayal gücü ile sınırlıdır. Orada PCR yeni özel kullanır tanımlayan pek çok kitap ve makaleler, ve daha birçok biyolojik bilim nesil içinde geliştirilecektir. Ancak, ne olursa olsun, beklenen yaklaşımlar, temel çerçeve aynı kalmıştır. PCR, tüm Haşmetli, DNA segment belirli bir miktarda elde etmek için bir in vitro bir uygulamadır. PCR deney tasarlama düşünce ve sabır gerektirir. Şekil 3&#39;te gösterilen sonuçlar büyük CH biri örneklendirmekPCR için bir optimizasyon stratejisini tasarlarken allenges. PCR ile bir parametre olarak değişir, bu, başka bir etkileyebilir. İlk PCR optimal bir Mg 2 2.0 mM + konsantrasyonu ile optimal tavlama sıcaklığında (58 ° C) gerçekleştirilmiştir halinde, örnek olarak, daha sonra Sonuç Şekil 3c &#39;de görüldüğü gibi, bir yayma üretecektir. Smear çözmek için bir girişimde 2.0 mM MgCl2 içeren reaksiyonlar PCR koşulları kurma ve 61 ° C&#39;ye tavlama sıcaklığının ayarlanması içerebilir Bununla birlikte, Şekil 3a de görüldüğü gibi, bu herhangi bir ürünü vermek olmaz. Sonuç olarak, daha ziyade istenmeyen sonuçlar giderme olduğunda, tek bir reaksiyon için bir konsantrasyonda eklenmesi dışında, reaktifler titre tavsiye edilir. Ayrıca, bir PCR deneyi optimize etmek için gerekli olan en yaygın ayarlamalar Mg 2 + konsantrasyonu değiştirmek için ve tavlama düzeltmek için bulunmaktadır. Ancak, bu değişiklikler en aza indirmek veya anormal sonuçlar feshetmek, katk titrasyonu yoksaves ve / veya Tablo 2-6 açıklanan bisiklet koşulu protokolleri değiştirerek sorunu hafifletmek olabilir. Tümü başarısız olursa, astar yeniden tasarlamak ve denemek, yeniden deneyin.

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> Taq Polymeras </td><td> Sigma </td><td> D4545-25UN </td><td></td></tr><tr><td> dNTP </td><td> Qiagen </td><td> 201225 </td><td></td></tr><tr><td> 0.2 ml İnce Duvar Tüpler PCR tüpleri </td><td> Bio Rad </td><td> 223-9469 </td><td></td></tr><tr><td> 0.2 ml İnce Duvar Tüp kapakları </td><td> Bio Rad </td><td> 223-9472 </td><td></td></tr><tr><td> TE Tamponu: </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> EDTA disodyum tuzu dihidrat </td><td> Sigma </td><td> E5134 </td><td></td></tr><tr><td> Trizma-HCl </td><td> Sigma </td><td> T-3253 </td><td></td></tr><tr><td> Özel Faj Astar </td><td> Invitrogen </td><td colspan="2"> 25441F_RL6_Contig2_68k TACTGCAACGCGATGTTGCG </td></tr><tr><td> Özel Faj Astar </td><td> Invitrogen </td><td colspan="2"> 26007R_RL6_ Contig2_68k TCACCATCAATCGTGGCGGT </td></tr><tr><td> Özel Maya Astar </td><td> Entegre DNA Teknolojileri </td><td colspan="2"> SacI-Gal3 (-256) ACCTGGAGCTCCTATTT TAACATGTGGATTTCTTGAAAGAATGAAATCG </td></tr><tr><td> Özel Maya Astar </td><td> Entegre DNA Teknolojileri </td><td colspan="2"> Gal3 (1848)-SacI CGGATGGAGCTCGCGT GAAGGTAATTTTTTTTTATGTCTCCG </td></tr><tr><td> Termal Cycler </td><td> Bio Rad </td><td> 170-9703 </td><td> Benim Cycler </td></tr><tr><td> Agaroz </td><td> ISC BioExpress </td><td> E-3120-500 </td><td></td></tr><tr><td> Jel elektroforez </td><td> Hoeffer Bilimsel Aletler </td><td> Model HE33 </td><td></td></tr><tr><td> 1 kb DNA Ladder </td><td> New England Biolabs </td><td> N3232S </td><td></td></tr><tr><td> Bio Rad Power Pack </td><td> Bio Rad </td><td> 164-5050 </td><td> PowerPac Temel </td></tr><tr><td> Gel Doc sistemi </td><td> Fotodyne Incorporated </td><td colspan="2"> FOTO / Analist Araştırmacı FX İstasyonu </td></tr></tbody></table>

polymerase chain reaction: basic protocol plus troubleshooting and optimization strategies

Biyolojik bilimler keşfin altın çağına disiplin mancınık teknolojik gelişmeler olmuştur. Örneğin, mikrobiyoloji alanında bilim adamları ilk kez prokaryotlarda görselleştirmek için izin Anton van Leeuwenhoek en mikroskop, gelişine dönüştürüldü. Polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) geliştirilmesi etkisini biyolojinin sayısız alt disiplinleri kapsayan ile moleküler bilimin gidişatını değiştiren bu yeniliklerden biri. Teorik süreci 1971 yılında Keppe ve arkadaşları tarafından ana hatlarıyla ortaya koydu; tam PCR yöntemi Balina Corporation, 1985 yılında ise Kary Mullis tarafından açıklanan ve deneysel olarak uygulanmıştır kadar ancak, başka bir 14 yıl oldu. Bu tekniğin Otomasyon ve arıtma bakteri Thermus aquaticus, dolayısıyla adı Taq DNA polimeraz bir termal dayanıklı DNA polimeraz tanıtımıyla ilerledi. PCR powe olduğunuBaşlangıç ​​malzemesi sadece küçük bir miktarı (yani, DNA şablonu veya hedef dizisi) DNA (yani, bir amplikon) belirli bir bölümü, zengin bir besleme oluşturabilir rful amplifikasyon tekniği. Basit ve genel olarak sorunsuz olsa da, sahte sonuçlar üreten reaksiyon komplike tuzaklar vardır. PCR başarısız olduğunda bunu agaroz jel üzerindeki bantların bir merdiven ya da smear olarak görünür büyüklü küçüklü birçok non-spesifik DNA ürünlere de yol açabilir. Bazen herhangi bir ürün hiç oluştururlar. Mutasyonlar istemeden PCR ürünlerinin heterojen nüfus sonuçlanan amplikonlar başlatıldığında diğer bir olası sorun oluşur. Sabır ve dikkatli bir sorun giderme sıralamak ve sorun (lar) çözmek için istihdam sürece PCR hataları sinir bozucu hale gelebilir. Bu protokol, PCR temel ilkelerini özetlenmektedir en hedef dizilerinin amplifikasyonu ile sonuçlanacaktır bir yöntem sağlar, ve bir reaksiyon optimize etmek için stratejiler sunar. Bu PCR kılavuzu, st takip ederekudents gerekir: <ul><li> Geleneksel PCR deney için reaksiyonlar ve ısıl koşulları ayarlama </li><li> Çeşitli reaksiyon bileşenlerinin fonksiyonu ve PCR deney üzerindeki genel etkisi Anlayın </li><li> Herhangi bir DNA örneğinin bir PCR deney tasarlayın ve optimize </li><li> Başarısız PCR deneyler giderme </li></ul>

Watch this Scientific Journal Video about Polymerase Chain Reaction: Basic Protocol Plus Troubleshooting and Optimization Strategies at JoVE.com

Polymerase Chain Reaction: Basic Protocol Plus Troubleshooting and Optimization Strategies

PCR birçok moleküler biyoloji laboratuvarlarında yaygın bir teknik olarak ortaya çıkmıştır. Pek çok geleneksel PCR protokolleri için hızlı bir kılavuzdur burada sağlanan. Her bir reaksiyon benzersiz bir deneyde, bir ürün üretmek için gerekli değişir uygun koşullar olmasıdır. Bir reaksiyonla değişkenlerini anlama büyük ölçüde böylece istenilen sonucu elde etmek şansı artan giderme verimi artıracaktır.

Polimeraz Zincir Reaksiyonu: Temel Protokol Plus, Sorun ve Optimizasyon Stratejileri

In the biological sciences there have been technological advances that catapult the discipline into golden ages of discovery. For example, the field of ...

polymerase-chain-reaction-basic-protocol-plus-troubleshooting

Research

JoVE Journal

Biology

399.3K Görüntüleme.  University of California, Los Angeles. PCR birçok moleküler biyoloji laboratuvarlarında yaygın bir teknik olarak ortaya çıkmıştır. Pek çok geleneksel PCR protokolleri için hızlı bir kılavuzdur burada sağlanan. Her bir reaksiyon benzersiz bir deneyde, bir ürün üretmek için gerekli değişir uygun koşullar olmasıdır. Bir reaksiyonla değişkenlerini anlama büyük ölçüde böylece istenilen sonucu elde etmek şansı artan giderme verimi artıracaktır.