Bu çalışma NSF HRD-0630456 tarafından desteklenen, bir NSF CREST Programı ve NSF DMR-0934142 olduğunu.

1. Α sentezi, ω-dihydroxyl Polimer [HO-PEO-P2MS-PEO-OH] <ol><li> Şekil 1 &#39;de gösterildiği gibi, polimerizasyon reaktörünün bir araya getirin. Bu deney için reaktör standart bir dış konik eklem (Chemglass), stopcocks ile iki akış kontrol bağdaştırıcılar (Chemglass), ve bir Teflon karıştırma çubuğu olan 2-boyunlu şişeye, bir 100 ml&#39;lik yuvarlak tabanlı bir oluşur. Adaptör (Şekil 1) atıl sistemine giren hava ve nemin önlenmesi için sistem aracılığıyla ultra yüksek saflıkta (UHP) Azot akımı sağlamak için kullanılmıştır. Adaptör B (Şekil 1) Reaksiyon şişesi içine çözücü, monomer ve başlatıcı enjekte etmek için kullanıldı. </li><li> Kuru azot gazı altında 6 saat arasında, en az, bir göstergesi olarak benzofenon kullanılarak, Na metal zarfında tetrahidrofuran (THF), 200 ml kuru. </li><li> 24 saat boyunca kalsiyum hidrür fazla 2-methoxystyrene 10 mL kuru. </li><li> ° C&#39;de izopropanol bir bir bulamaç kullanarak -78 tutulan bir soğuk banyo sıcaklığı hazırlanmasınd sıvı azot. </li><li> Azot gazı altında, polimerizasyon reaksiyon şişesine (bkz. Şekil 1) içine THF ve 25 ml ekleyin ve bütün polimerizasyon boyunca azot gazı altında reaktör tutmak. </li><li> Bulamaç haline il 100 ml&#39;lik yuvarlak tabanlı bir şişeye. </li><li> Reaksiyon şişesi içine, başlatıcı solüsyonun 2 ml (0,27 mmol / mL) ekleyin. </li><li> Reaksiyon şişesi içine ilk olarak, monomer, 2-methoxystyrene (4 ml) enjekte edilir. </li><li> 40 dakika süreyle devam etmek tepki ver. </li><li> Ikinci monomer, etilen oksit ve 1 ml ilave edilir. </li><li> Polimerizasyon iki gün için oda sıcaklığında devam etmesini sağlayın. </li><li> HCI ile polimer (6 M) / metanol (1/20, hacim / hacim) sona erdirme. </li><li> Heksan ve bir vakumlu fırın içinde kuru polimer içine çökelterek polimer temizler. </li><li> NMR ile polimer karakterize eder. </li></ol> 2. Α, fonksiyonel Polym elde edilir N-2 ,4-DNP-Ε-amino kaproik asit ile ω-dihydroxyl Polimer Fonksiyonlandırmaer, CDNP-PEO-P2MS-PEO-CDNP <ol><li> Bir üç boyunlu bir şişe içinde, α, ω-dihydroxyl polimer (0.05 mmol), N-2 ,4-DNP-e-aminokaproik asit (0.25 mmol), DCC (0.15 mmol) ve DMAP (0.005 mmol) ve koyun 4 saat boyunca vakum hattında kurulayın. </li><li> Balonun içine kuru diklorometan (10 ml) damıtmak. </li><li> Nitrojen altında vakum bırakın ve oda sıcaklığında 12 saat boyunca reaksiyon karıştırın. </li><li> Filtre reaksiyon karışımı ve heksanlar ve metanol içine iki kez çökelterek polimer kurtarabilirsiniz. </li><li> Kuru 40 ° C&#39;da bir vakumlu fırın içinde polimer çökeltildi </li><li> FT-IR ve 1H NMR ile polimer yapısı ve işlevi belirler. </li></ol> 3. Elektrospinning için CDNP-PEO-P2MS-PEO-CDNP/SWCNT Çözüm hazırlanması <ol><li> Klorobenzen yılında CDNP-PEO-P2MS-PEO-CDNP 20 w% çözülür. </li><li> 20% w çözülür ve klorobenzen içinde Polistiren 40% w (MW 800.000) iki çözüm hazırlamak. Daha yüksek moleküler polistiren increas için kullanılıre polimer zincir-zincir dolaşıklık ve elektrospinning için gerekli olan en uygun viskozite elde etmek. </li><li> Polimerlerin 1:1 ve 1:2 oranlarında oluşturur ve karışım, 1 g% Tek karbon nanotüp (SWCNT) eklenir ve CNT daha iyi dağıtılması için gece boyunca karışmaya birlikte 3.1 ve 3.2 &#39;de hazırlanmış olan polimer çözeltileri karıştırılır. </li></ol> 4. Polimer-CNT Kompozit elektrospinning <ol><li> Şekil 2&#39;de gösterildiği gibi ayarlamak elektrospinning birleştirin. Şeklin sağ tarafında Glassman Yüksek Gerilim kaynağıdır. Yanında silikon gofret ekli olduğu bir imbik stand. Sol şırınga monte edilir ve arkasından o ilerledikçe prosedürü görselleştirmek için lamba hangi başka bir imbik stand. </li><li> Bir hipodermik şırınga kullanarak, CDNP-PEO-P2MS-PEO-CDNP/polystyrene/SWCNT karışımı (1 ml), az bir miktar geri çekmek ve imbik standı üzerine monte derialtı enjektör. </li><li> Bir silikon gofret mount10 cm&#39;lik bir mesafeden güvenli bir şırınga ve yüksek voltaj kaynağının toprak küçük karşısında ed buna eklenir. </li><li> Şırınga iğnesi ile uygulanmak üzere yüksek voltaj taşıyan klipsini, dalma piston biraz (iğne ucu üzerinde bir damla askıya) bastırmak ve bu noktada, elektrospinning hazırdır. </li><li> Yüksek gerilim kaynağı Güç ve 10 kV gerilim metre ayarlayın. Bileşik içinde polimer yapısına bağlı olarak, daha yüksek voltajlar çapında bir yüz nanometre altında nanoelyaflar arzu edilir, özellikle de gerekli olabilir. </li><li> Tamamen kurumasını gecede bir desikatöre Unmount silikon gofret ve yer. </li></ol> 5. Nanoliflerin Karakterizasyonu <ol><li> Nanoliflerden başlangıç ​​görüntüleme liflerin genel perspektif gözlemlemek için optik mikroskop ile yapılır. </li><li> Morfolojisi, çap, ortalama gözenek boyutu, vs gibi ince ayrıntıları gözlemlemek için Taramalı Elektron Mikroskobu yararlanın </li><li> Taşımaklifler, vb 3-D topografi gözlemlemek için bir atomik kuvvet mikroskobu ile daha fazla görüntüleme üzerinden </li></ol> 6. Anti-DNP IgE Protein Nanoliflerin bağlama özgünlüğü <ol><li> PBS-BSA (fosfat tamponlu tuzlu su-Bovine Serum Albumin) çözeltisi içinde 4 ug / l fluoresan etiketli, FITC IgE (Fluoresein Isothio-siyanat-IgE) bir çözeltisi hazırlayın. </li><li> Bir Mattek iyi lamel nanolifler vardır hangi silikon gofret küçük bir parça yerleştirin. Bir saat boyunca bu çözelti içinde nanoelyaflar inkübe edin. Kuluçka hafifçe silikon gofret üzerine, 10 ul IgE çözüm pipetleme tarafından yapılır. </li><li> İnkübasyondan sonra, PBS-BSA tampon çözelti ile örnek üç kez yıkanarak bağlanmamış IgE çıkarın. PBS çözeltisi direkt olarak nanoelyaflar üzerine tampon püskürtme önlemek için, Mattek çanak duvarı üzerine nazikçe dağıtılır. Nanoliflerde tampon çözelti dağıtmak için hafifçe elle Swirl tabak. Dikkatli bir pipet ile tampon kaldırmak ve yenidenturba Bu iki kez daha. </li><li> Kontrol için, aynı koşullar altında floresan etiketli IgG (DNP için spesifik olmayan) içinde nanoelyaflar inkübe edilir. </li><li> IgE bağlama gözlemlemek için bir Konfokal Mikroskop ile ilişkili lifler gözünüzde canlandırın. Çalışmamızda için kullanılan mikroskop 63x lens ile Leica konfokal TCS SP2 oldu. </li></ol> 7. Nanoliflerin Akım-Gerilim Davranışı <ol><li class="jove_content"> Keithley 6430 duyarlı sourcemeter gibi çok düşük bir akım kaynağı için iki mikro pozisyonerler bağlayın. Akım gerilim davranış belirlemek için ayarlanmış Şekil 3 &#39;de gösterilmiştir. Bu şekil, nanoliflerden ilk IV özelliklerini belirlemek için kullanılabilir Prob istasyonu gösterilmektedir. Bu Bausch ve Lomb MicroZoom Mikroskop, bir vakum Chuck aşaması, ve sonda olarak kullanılan dört Micropositioners oluşur. Sağ üst üzerinde Agilent 34405A Dijital Multimetre gerilim ölçümünde kullanılan ve aşağıda olduğunu edilir<html> Keithley 6430 Alt-Femtoamp uzak bir kaynaktan Meter kaynak liflerinin içine girilmiştir düşük akımları için kullanılır. </li><li class="jove_content"> Liflerinin temas uçları ile karşıt taraflarda elyaf mat üzerinde mikro pozisyonerleri sonda kolları monte edin. </li><li class="jove_content"> Dijital multimetre başka iki mikro pozisyoner bağlayın, diğer ikisi arasında-in prob silah monte ve elyaf mat üzerine ipuçları arazi. Dört ipuçlarını olabildiğince collinear gibi olduğundan emin olun. </li><li class="jove_content"> Keithley (genellikle nanoamps aralığında) güncel değişen miktarlarda Girdi. </li><li class="jove_content"> Kaynaklı akım her büyüklük için dış ipuçları üzerinde gerilim düşümü, ölçün. </li><li class="jove_content"> Bu değerler Plotting elyaf mat gibi davranır aygıt türünü gösterir. </li></ol> 8. Temsilcisi Sonuçlar Fonksiyonel Polimer &quot;Α sentezi için&gt; yöntem ω-bi [2,4-dinitrofenil kaproik] [poli (etilen oksit)-b-poli (2-methoxystyrene)-b-poli (etilen oksit)] (CDNP-PEO- P2MS-PEO-CDNP) Şekil 4 &#39;de gösterilmiştir. işlevsel polimer 1 yapı FT-IR (Şekil 5) ve 500 MHz 1H-NMR (Şekil 6) tarafından teyit edilmiştir. FT-IR tamamen yok olmasını göstermektedir -OH -1 CDNP grup ile kantitatif işlevsellik gösteren 3.500 cm civarında geniş emilmesine neden olur. Bu da Şekil 6&#39;da gösterildiği gibi NMR spektrum ile teyit edilir. NMR spektrum içinde piklerin entegrasyonunu kullanarak olduğu belirlenmiştir CDNP-PEO -P2MS-PEO-CDNP polimerler kantitatif fonksiyonelleştirilmiş edilir. Nanoliflerin Şekil 7&#39;de, CDNP-PEO-P2MS-PEO-CDNP / klorobenzen gelen polistiren / SWCNT elektrospinning elde iletken nanoliflerden bir paspas shkendi. Elde edilen görüntü konfokal protein IgE lif yüzeyi üzerinde DNP ile bağlanır olduğunu gösterdi. 3 Bu IgE antikor karşı elektrospinning DNP-polimerlerin bağlayıcı özgünlüğü bir göstergesidir. Işık yoğunluğu protein fluoresan etiketli olarak nanoliflerde IgE varlığının bir göstergesidir. Şekil 8a bu işlem ve Şekil 8b elde nanoelyaflar bu özel nanolif bir boyut çapı 150 nm civarında gösteren tek bir AFM (atomik kuvvet Mikroskop) görüntüsüdür. Bu işlem tarafından 100-700 nm arasında lifler elde edilmiştir. Bu akım zamanda belirli bir boyutu olan lifler hazırlamak zordur. Bu diğer gruplar tarafından gözlenmiştir ne ile tutarlıdır. CDNP-PEO-P2MS-PEO-CDNP / polistiren / SWCNT nanolifler ve nanoliflerden çapı SEM görüntüleri 9 gösterileri 300 nm ile 200 nm arasında olan 4 Şekil. Üç SEM vardır nanofibe görüntülerirs farklı büyütme gösterildi. Çalışma üç görüntü liflerin morfolojileri ve doğrusal boncuklu olduğunu göstermektedir. Genel amaç çoğunlukla lineer elyaf hazırlamaktır. Şekil 10 CDNP-PEO-P2MS-PEO-CDNP / polistiren / SWCNT hazırlanan nanoliflerden paspaslar IV arsa gösterir. Arsa bir direnç (Rezistif) davranışı göstermektedir. Antijen nanolifler bağlı olduğunda, biz direnç bu değişimin fonksiyonel lifler tek molekül tespiti için sensörler aktif bileşen olarak potansiyel uygulama olduğunu öne sürmektedir karakteristik olarak fiber mat IV davranışta bir değişiklik görmeyi bekliyoruz . <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/4135/4135fig1.jpg" /> Şekil 1. Α, ω-dihydroxyl polimer sentezi için polimerizasyon reaktörü. Akış UHP gaz azot A) enjeksiyon noktası. Çözücü, monomer ve başlatıcı için B) enjeksiyon noktası. C) tepkime kabı. <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/4135/4135fig2.jpg" /> Şekil 2. Bir Glassman yüksek gerilim kaynağı kullanılarak elektrospinning için kullanılan Kur. <img alt="Şekil 3" src="/files/ftp_upload/4135/4135fig3.jpg" /> Şekil 3. Alt-femtoamp Uzaktan Sourcemeter (Keithley) kullanarak IV araziler ölçmek için kullanılan Kur. <img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/4135/4135fig4.jpg" /> Şekil 4,. OH-PEO-P2MS-PEO-OH polimerler hazırlanması için A). Sentetik bir yaklaşım. B) arasında Fonksiyonlandırma α, ω-dihidroksi-[poli (etilenoksit)-b-poli (2-methoxystyrene)-b-poli (etilenoksit)]. <img alt="Şekil 5," src="/files/ftp_upload/4135/4135fig5.jpg" /> Şekil 5. FT-IR spektrumları (A) OH-PEO-P2MS-PEO-OH, CDNP-PEO-P2MS-PEO-CDNP ve (B) CDNP-PEO-P2MS-PEO-CDNP habercisidir. <img alt="Şekil 6"src = &quot;/ files/ftp_upload/4135/4135fig6.jpg&quot; /&gt; Şekil 6. CDNP-PEO-P2MS-PEO-CDNP 500 MHz Proton NMR. <img alt="Şekil 7" src="/files/ftp_upload/4135/4135fig7.jpg" /> Şekil 7. Klorobenzen gelen CDNP-PEO-P2MS-PEO-CDNP lifler elektrospinning ile FITC-IgE A) Cilt görüntü. Kontrol B) Konfokal mikroskop görüntüsü (IgG ile nanolif). <img alt="Şekil 8," src="/files/ftp_upload/4135/4135fig8.jpg" /> Şekil 8. Klorobenzen ve Şekil 5a gösterilen bir lif B) AFM profili yani boyut CDNP-PEO-P2MS-PEO-CDNP Elyaf elektrospinning A) AFM görüntüsü. <img alt="Şekil 9" src="/files/ftp_upload/4135/4135fig9.jpg" /> Şekil 9. CDNP-PEO-P2MS-PEO-CDNP / polistiren / SWCNT nanoliflerden SEM görüntüleri. <img alt="Şekil 10" src="/files/ftp_upload/4135/4135fig10.jpg"/&gt; Şekil 10. CDNP-PEO-P2MS-PEO-CDNP / polistiren / SWCNT hazırlanan nanoliflerden paspaslar IV arsa.

<ol>
	<li>Sannigrahi, B., Sil, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+and+Characterization+of+&#945;,&#969;-bi[2,4-dinitrophenyl+(DNP)]+poly(2-methoxystyrene)+Functional+Polymers.+Preliminary+Evaluation+of+the+Interaction+of+the+Functional+Polymers+with+RBL+Mast+Cells.">Synthesis and Characterization of &#945;,&#969;-bi[2,4-dinitrophenyl (DNP)] poly(2-methoxystyrene) Functional Polymers. Preliminary Evaluation of the Interaction of the Functional Polymers with RBL Mast Cells.</a> Journal of Macromolecular Science, Part A. 45, 664-671 (2008).</li><li>Gordon, K., Sannigrahi, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+Optically+Active+Helical+Poly(2-methoxystyrene).+Enhancement+of+HeLa+and+Osteoblast+Cell+Growth+on+Optically+Active+Helical+Poly(2-methoxystyrene)+Surfaces.">Synthesis of Optically Active Helical Poly(2-methoxystyrene). Enhancement of HeLa and Osteoblast Cell Growth on Optically Active Helical Poly(2-methoxystyrene) Surfaces.</a> Journal of Biomaterials Science. 2, 2055-2072 (2009).</li><li>Baird, E. J., Holowka, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+Effective+Poly(Ethylene+Glycol)+Architectures+for+Specific+Inhibition+of+Immune+Receptor+Activation.">Highly Effective Poly(Ethylene Glycol) Architectures for Specific Inhibition of Immune Receptor Activation.</a> Biochemistry. 2, 12739-12748 (2003).</li><li>Ramakrisna, S., Fugihara, K., Lim, W. -. E., Ma, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Introductions to Electrospinning and Nanofibers. , (2005).</li><li>Kameoka, J., Craighead, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fabrication+of+Oriented+Polymeric+Nanofibers+on+Planar+Surfaces+by+Electrospinning.">Fabrication of Oriented Polymeric Nanofibers on Planar Surfaces by Electrospinning.</a> Applied Physics Letters. 83, 371-3773 (2003).</li><li>Ramakrishna, S., Lala, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polymer+Nanofibers+for+Biosensor+Applications.">Polymer Nanofibers for Biosensor Applications.</a> Topics in Applied Physics. 109, 377-392 (2007).</li><li>Reuven, D., Sil, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Archetypical+Conductive+Polymer+Structure+for+Specific+Interaction+with+Proteins.">Archetypical Conductive Polymer Structure for Specific Interaction with Proteins.</a> Journal of Macromolecular Science Part A: Pure and Applied Chemistry. , (2012).</li><li>Ogunro, O., Karunwi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chiral+Asymmetry+of+Helical+Polymer+Nanowire.">Chiral Asymmetry of Helical Polymer Nanowire.</a> The Journal of Physical Chemistry Letters. 1, 704-707 (2010).</li></ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Bu yazıda, biofunctional nanolifler hazırlamak için güçlü bir yaklaşım sergilediler. Nanoelyaflar bir model protein özgü bir işlevsel grup ile dekore edilir. Bu iletişim de bildirilen prosedür ve yaklaşımı genel türde ve arzu edilen herhangi bir işlevsel grup ile dekore nanoelyaflar hazırlamak için kullanılabilir. Anyonik yaşayan polimerizasyon kovalent olarak özel ilgi biyo özgü ilginç işlevsel ya da fonksiyonel grupların herhangi bir sayıda bağlı kontrollü bir polimer yapıları sentezl...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td></tr><tr><td> Sodyum Metal </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 282065 </td></tr><tr><td> Benzofenon </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 239852 </td></tr><tr><td> 2-methoxystyrene </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 563064 </td></tr><tr><td> Tetrahidrofuran </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 178810 </td></tr><tr><td> Klorobenzen </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 319996 </td></tr><tr><td> Tek duvarlı CNT </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 704113 </td></tr><tr><td> Polisitren </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 81416 </td></tr><tr><td> Silikon Gofret </td><td> Silikon Görev Int&#39;l </td><td> 720200 </td></tr><tr><td> Zeiss FESEM </td><td> Carl Zeiss A.Ş. </td><td> Ultra 60 </td></tr><tr><td> Bausch &amp; Lomb MicroZoom II Yüksek Performans Mikroskop ile Probestation </td><td> Bausch ve Lomb </td><td></td></tr><tr><td> Leica Tarama Konfokal Sistemi </td><td> Leica Microsystems </td><td> TCS SP2 </td></tr><tr><td> Alt-femtoamp Uzaktan Sourcemeter </td><td> Keithley Aletleri </td><td> 6430 </td></tr><tr><td> Dijital Multimetre Otomatik Kademe </td><td> Keithley Aletleri </td><td> 175A </td></tr><tr><td> Şırınga Pompası </td><td> Chemyx A.Ş. </td><td> Füzyon 200 </td></tr><tr><td> Zeiss Optik Mikroskop </td><td> Carl Zeiss A.Ş. </td><td> Zeiss / Axiotech </td></tr></tbody></table>

procedure for fabricating biofunctional nanofibers

Elektroeğirme fonksiyonel grupları ile dekore nanoelyaflar hazırlanması için bir işlem etkili bir yöntemdir. Fonksiyonel grupları ile dekore Nanoliflerin tek molekül detektörleri gibi potansiyeli olan biyosensör olarak hareket yani maddi-biyolojik etkileşimleri çalışmak için kullanılan olabilir. Biz işlevselliği bir model protein ile özellikle bağlama kapasitesine sahip işlevsel polimerler hazırlamak için etkili bir yaklaşım geliştirdik. Bizim model sistem olarak, işlevsel grup 2,4-dinitrofenil (DNP) ve protein anti-DNP IgE (IgE) &#39;dir. Işlevsel polimer, α, ω-bi [2,4-dinitrofenil kaproik] [poli (etilen oksit)-b-poli (2-methoxystyrene)-b-poli (etilen oksit)] (CDNP-PEO-P2MS-PEO- CDNP), anyonik canlı polimerizasyonu ile hazırlanmıştır. Polimerizasyonda kullanılan iki fonksiyonlu başlatıcı α-metilstiren, elektron transfer reaksiyonu ve potasyum (ayna) metal kullanılarak hazırlandı. 2-methoxystyrene monomerin eklenmesindenbaşlatıcı ile birinci, ikinci monomer, etilen oksit ilave edildi ve son olarak bir oturma polimer metanol ile sona erdirildi. Α, ω-dihydroxyl polimer [HO-PEO-P2MS-PEO-OH] α, ω-bi oluşumu ile sonuçlanan DCC bağlanması ile N-2 ,4-DNP-∈-amino kaproik asit, ile reaksiyona sokulmuştur [ 2,4-dinitrophenylcaproic] [poli (etilenoksit)-b-poli (2-methoxystyrene)-b-poli (etilen oksit)] (CDNP-PEO-P2MS-PEO-CDNP). Polimerler FT-IR, 1H NMR ve Jel Geçirgenlik Kromatografisi (GPC) ile karakterize edildi. Polimerlerin molekül ağırlığı dağılımı dar olan (1.1-1.2) ve 50.000 &#39;in moleküler ağırlığa sahip polimerler bu çalışmada kullanılmıştır. Polimerlerin sarı tozlar ve tetrahidrofuran içinde çözünmüştür. Bir suda çözünür CDNP-PEO-P2MS-PEO-CDNP / DMEG (dimethoxyethylene glikol) karmaşık bağlar ve birkaç saniye içinde çözüm IgE ile kararlı durum bağlama ulaşır. Daha yüksek moleküler ağırlık (yaklaşık 50.000 suda çözünmez ie) CDNP-PEO-P2MS-PEO-CDNP polimerler,% 1 tek duvar karbon nanotüpler içeren (SWCNT) silikon tabana Elektroaktif nanolifler (100 nm çapında 500 nm) işlenmiştir. Flüoresans spektroskopisi, anti-DNP IgE dekorasyon DNP fonksiyonel gruplar elyaf bağlayıcı ile nanoelyaflar ile etkileşime girer göstermektedir. Bu gözlemler, uygun Fonksiyonlu nanolifler biyomarker algılama cihazı geliştirmek için söz tutun öneririz.

Watch this Scientific Journal Video about Procedure for Fabricating Biofunctional Nanofibers at JoVE.com

Procedure for Fabricating Biofunctional Nanofibers

Özellikle proteinleri ile etkileşim yeteneğine fonksiyonel grupları ile dekore nanoelyaflar hazırlamak için etkili bir yaklaşım tarif edilmektedir. Yaklaşım, ilk olarak uygun bir fonksiyonel grup ile fonksiyonelleştirilmiş bir polimerin hazırlanmasını gerektirmektedir. Işlevsel polimer elektroeğirme nanoelyaflar içine imal edilir. Bir protein ile nanoliflerden bağlanma etkinliği konfokal mikroskopi ile incelenmiştir.

Biofunctional Nanoliflerin Yapımı İçin Prosedür

Electrospinning is an effective processing method for preparing nanofibers decorated with functional groups. Nanofibers decorated with functional groups ...

procedure-for-fabricating-biofunctional-nanofibers

Research

JoVE Journal

Biology

12.5K Görüntüleme.  Clark Atlanta University. Özellikle proteinleri ile etkileşim yeteneğine fonksiyonel grupları ile dekore nanoelyaflar hazırlamak için etkili bir yaklaşım tarif edilmektedir. Yaklaşım, ilk olarak uygun bir fonksiyonel grup ile fonksiyonelleştirilmiş bir polimerin hazırlanmasını gerektirmektedir. Işlevsel polimer elektroeğirme nanoelyaflar içine imal edilir. Bir protein ile nanoliflerden bağlanma etkinliği konfokal mikroskopi ile incelenmiştir.

Video: Procedure for Fabricating Biofunctional Nanofibers

A Craniotomy Surgery Procedure for Chronic Brain Imaging

Imaging techniques are becoming increasingly important in the study brain function. Among them, two-photon laser scanning microscopy has emerged as an extremely useful method, because it allows the study of the live intact brain. With appropriate preparations, this technique allows the observation of the same cortical area chronically, from minutes to months. In this video, we show a preparation for chronic in vivo imaging of the brain using two-photon microscopy. This technique was initially pioneered by Dr. Karel Svoboda, who is now a Howard Hughes Medical Institute Investigator at Janelia Farm. Preparations like the one shown here can be used for imaging of neocortical structure (e.g., dendritic and axonal dynamics),  to record neuronal activity using calcium-sensitive dyes, to image cortical blood flow dynamics, or for intrinsic optical imaging studies. Deep imaging of the neocortex is possible with optimal cranial window surgeries. Operating under the most sterile conditions possible to avoid infections, together with using extreme care to do not damage the dura mater during the surgery, will result in successful and long-lasting glass-covered cranial windows.


This video and protocol demonstrate how to implant a glass-covered cranial window in rodents. These preparations can be used for chronic in vivo two-photon imaging of the neocortex over time scales of months. It may also be used for other types of imaging, including optical intrinsic signal imaging.

Kronik Beyin Görüntüleme Kraniyotomi Cerrahi Prosedür

Imaging techniques are becoming increasingly important in the study brain function. Among them, two-photon laser scanning microscopy has emerged as an ...

Biyoloji

Murine Renal Transplantation Procedure

Renal orthotopic transplantation in mice is a technically challenging procedure. Although the first kidney transplants in mice were performed by Russell et al over 30 years ago (1) and refined by Zhang et al years later (2), few people in the world have mastered this procedure. In our laboratory we have successfully performed 1200 orthotopic kidney transplantations with &gt; 90% survival rate. The key points for success include stringent control of reperfusion injury, bleeding and thrombosis, both during the procedure and post-transplantation, and use of 10-0 instead of 11-0 suture for anastomoses.
Post-operative care and treatment of the recipient is extremely important to transplant success and evaluation. All renal graft recipients receive antibiotics in the form of an injection of penicillin immediately post-transplant and sulfatrim in the drinking water continually. Overall animal health is evaluated daily and whole blood creatinine analyses are performed routinely with a portable I-STAT machine to assess graft function.

Renal transplantation in mice is a technically challenging procedure that requires careful post-operative care and treatment for success.

Murin Böbrek Nakli Prosedürü

Renal orthotopic transplantation in mice is a technically challenging procedure. Although the first kidney transplants in mice were performed by Russell ...

Bioluminescence Imaging of Heme Oxygenase-1 Upregulation in the Gua Sha Procedure

Gua Sha is a traditional Chinese folk therapy that employs skin scraping to cause subcutaneous microvascular blood extravasation and bruises. The protocol for bioluminescent optical imaging of HO-1-luciferase transgenic mice reported in this manuscript provides a rapid in vivo assay of the upregulation of the heme oxygenase-1 (HO-1) gene expression in response to the Gua Sha procedure. HO-1 has long been known to provide cytoprotection against oxidative stress. The upregulation of HO-1, assessed by the bioluminescence output, is thought to represent an antioxidative response to circulating hemoglobin products released by Gua Sha. Gua Sha was administered by repeated strokes of a smooth spoon edge over lubricated skin on the back or other targeted body part of the transgenic mouse until petechiae (splinter hemorrhages) or ecchymosis (bruises) indicative of extravasation of blood from subcutaneous capillaries was observed. After Gua Sha, bioluminescence imaging sessions were carried out daily for several days to follow the dynamics of HO-1 expression in multiple internal organs.

Gua Sha, traditional Chinese therapeutic skin scraping, causes subcutaneous microvascular blood extravasation. We report a protocol of bioluminescence imaging of HO-1-luciferase transgenic mice to demonstrate that Gua Sha upregulates heme oxygenase-1 (HO-1) in multiple organs.

Hem oksijenaz-1 ekspresyonunun Gua Sha Usul Biyoparlaklık Görüntüleme

Gua Sha is a traditional Chinese folk therapy that employs skin scraping to cause subcutaneous microvascular blood extravasation and bruises. The protocol ...

Mammary Epithelial Transplant Procedure

This article describes and compares the fat pad clearance procedure developed by DeOme KB et al.1 and the sparing procedure developed by Brill B et al.2, followed by the mammary epithelial transplant procedure. The mammary transplant procedure is widely used by mammary biologists because it takes advantage of the fact that significant development of the mammary epithelium doesn't occur until after puberty. At 3 weeks of age, growth of the mammary epithelial tree is confined to the vicinity of the nipple and the fat pad is largely devoid of mammary epithelium, but by 7 weeks of age the epithelial ductal tree extends throughout the entire fat pad. Therefore, if this small portion of the fat pad containing epithelium, the region between the nipple and the lymph node, is removed at 3 weeks of age, the endogenous epithelium will never populate the mammary fat pad and the fat pad is described as "cleared". At this time, mammary epithelium from another source can be transplanted in the cleared fat pad where it has the potential to extend mammary ductal trees through out the fat pad. This procedure has been utilized in many experimental models including the examination of tumor phenotype in transgenic mammary epithelial tissue without the confounding effects of genotype on the entire animal3, in the identification of mammary stem cells by transplanting cells in limited dilution4,5, determining if hyperplastic nodules proceed to mammary tumors6, and to assess the effect of prior hormone exposure on the behavior of the mammary epithelium7,8.
Three week old host mice are anesthetized, cleaned and restrained on a surgical stage. A mid-sagittal incision is made through the skin, but not the peritoneum, extending from the pubis to the sternum. Oblique cuts are made through the skin from the mid-sagittal incision across the pelvis toward each leg. The skin is pulled away from the peritoneum to expose the 4th inguinal mammary gland. The fat pad is cleared by removing the fat pad tissue anterior to the lymph node. Epithelium fragments or epithelial cells are transplanted into the remaining cleared fat pad and the mouse is closed.

This article demonstrates the procedure developed by DeOme KB et al. (1959) and the sparing procedure developed by Brill B et al. (2008) for clearing the 4th inguinal mammary fat pad of a pubescent mouse in preparation for transplantation of mammary fragments, mammary epithelial cells, or mammary tumor cells.

Meme Epitel Nakli Prosedürü

This article describes and compares the fat pad clearance procedure developed by DeOme KB et al.1 and the sparing procedure developed by Brill B et al.2, ...

A Chemical Screening Procedure for Glucocorticoid Signaling with a Zebrafish Larva Luciferase Reporter System

Glucocorticoid stress hormones and their artificial derivatives are widely used drugs to treat inflammation, but long-term treatment with glucocorticoids can lead to severe side effects. Test systems are needed to search for novel compounds influencing glucocorticoid signaling in vivo or to determine unwanted effects of compounds on the glucocorticoid signaling pathway. We have established a transgenic zebrafish assay which allows the measurement of glucocorticoid signaling activity in vivo and in real-time, the GRIZLY assay (Glucocorticoid Responsive In vivo Zebrafish Luciferase activitY). The luciferase-based assay detects effects on glucocorticoid signaling with high sensitivity and specificity, including effects by compounds that require metabolization or affect endogenous glucocorticoid production. We present here a detailed protocol for conducting chemical screens with this assay. We describe data acquisition, normalization, and analysis, placing a focus on quality control and data visualization. The assay provides a simple, time-resolved, and quantitative readout. It can be operated as a stand-alone platform, but is also easily integrated into high-throughput screening workflows. It furthermore allows for many applications beyond chemical screening, such as environmental monitoring of endocrine disruptors or stress research.

We describe the procedure and data analysis of a chemical screening system for glucocorticoid stress hormone signaling using zebrafish larvae: the Glucocorticoid Responsive In vivo Zebrafish Luciferase activitY (GRIZLY) assay. The assay sensitively and specifically detects effects on glucocorticoid signaling by compounds that require metabolization or affect endogenous glucocorticoid production.

Bir Zebra balığı Larva Lusıferaz Muhabir Sistemi ile glukokortikoid Signaling&#39;den için bir Kimyasal Tarama Prosedürü

Glucocorticoid stress hormones and their artificial derivatives are widely used drugs to treat inflammation, but long-term treatment with glucocorticoids ...

Isolation of Human Hepatocytes by a Two-step Collagenase Perfusion Procedure

The liver, an organ with an exceptional regeneration capacity, carries out a wide range of functions, such as detoxification, metabolism and homeostasis. As such, hepatocytes are an important model for a large variety of research questions. In particular, the use of human hepatocytes is especially important in the fields of pharmacokinetics, toxicology, liver regeneration and translational research. Thus, this method presents a modified version of a two-step collagenase perfusion procedure to isolate hepatocytes as described by Seglen 1.
Previously, hepatocytes have been isolated by mechanical methods. However, enzymatic methods have been shown to be superior as hepatocytes retain their structural integrity and function after isolation. This method presented here adapts the method designed previously for rat livers to human liver pieces and results in a large yield of hepatocytes with a viability of 77&plusmn;10%. The main difference in this procedure is the process of cannulization of the blood vessels. Further, the method described here can also be applied to livers from other species with comparable liver or blood vessel sizes.

A modified two-step collagenase perfusion procedure for isolation of human hepatocytes is described. This method can also be applied to other mammalian livers. The isolated hepatocytes are available in high yield and viability, making them a suitable model for scientific research in areas such as liver regeneration, pharmacokinetics and toxicology.

Bir iki aşamalı kolajenes perfüzyon prosedür ile insan Hepatositlerin İzolasyonu

The liver, an organ with an exceptional regeneration capacity, carries out a wide range of functions, such as detoxification, metabolism and homeostasis. ...

Procedure to Evaluate the Efficiency of Flocculants for the Removal of Dispersed Particles from Plant Extracts

Plants are important to humans not only because they provide commodities such as food, feed and raw materials, but increasingly because they can be used as manufacturing platforms for added-value products such as biopharmaceuticals. In both cases, liquid plant extracts may need to be clarified to remove particulates. Optimal clarification reduces the costs of filtration and centrifugation by increasing capacity and longevity. This can be achieved by introducing charged polymers known as flocculants, which cross-link dispersed particles to facilitate solid-liquid separation. There are no mechanistic flocculation models for complex mixtures such as plant extracts so empirical models are used instead. Here a design-of-experiments procedure is described that allows the rapid screening of different flocculants, optimizing the clarification of plant extracts and significantly reducing turbidity. The resulting predictive models allow the identification of robust process conditions and sets of polymers with complementary properties, e.g. effective flocculation in extracts with specific conductivities. The results presented for tobacco leaf extracts can easily be adapted to other plant species or tissues and will thus facilitate the development of more cost-effective downstream processes for commodities and plant-derived pharmaceuticals.

The design-of-experiments procedure presented here allows the evaluation of different flocculants in terms of their ability to aggregate dispersed particles in plant extracts, thus reducing turbidity and the costs of downstream processing.

Prosedür bitki özleri gelen Dağınık Parçacıkların çıkarması için Flokülantlar Verimliliği değerlendirin

Plants are important to humans not only because they provide commodities such as food, feed and raw materials, but increasingly because they can be used ...

Procedure and Key Optimization Strategies for an Automated Capillary Electrophoretic-based Immunoassay Method

New technologies that utilize capillary-based immunoassays promise faster and more quantitative protein assessment compared to traditional immunoassays. However, similar to other antibody-based protein assays, optimization of capillary-based immunoassay parameters, such as protein concentration, antibody dilution, and exposure time is an important prerequisite to the generation of meaningful and reliable data. Measurements must fall within the linear range of the assay where changes in signal are directly proportional to changes in lysate concentration. The process of choosing appropriate lysate concentrations, antibody dilutions, and exposure times in the human bronchial epithelial cell line, BEAS-2B, is demonstrated here. Assay linearity is shown over a range of whole cell extract protein concentrations with p53 and &#945;-tubulin antibodies. An example of signal burnout is seen at the highest concentrations with long exposure times, and an &#945;-tubulin antibody dilution curve is shown demonstrating saturation. In addition, example experimental results are reported for doxorubicin-treated cells using optimized parameters.

A capillary-based immunoassay using a commercial platform to measure target proteins from total protein preparations is demonstrated. In addition, assay parameters of exposure time, protein concentration, and antibody dilution are optimized for a cell culture model system.

Yordam ve anahtar optimizasyon stratejileri için bir otomatik Kapiler elektroforetik tabanlı Immunoassay yöntemi

New technologies that utilize capillary-based immunoassays promise faster and more quantitative protein assessment compared to traditional immunoassays. ...

A Semiautomated ChIP-Seq Procedure for Large-scale Epigenetic Studies

Chromatin immunoprecipitation followed by sequencing (ChIP-Seq) is a powerful and widely used approach to profile chromatin DNA associated with specific histone modifications, such as H3K27ac, to help identify cis-regulatory DNA elements. The manual process to complete a ChIP-Seq is labor intensive, technically challenging, and often requires large-cell numbers (&#62;100,000 cells). The method described here helps to overcome those challenges. A complete semiautomated, microscaled H3K27ac ChIP-Seq procedure including cell fixation, chromatin shearing, immunoprecipitation, and sequencing library preparation, for batch of 48 samples for cell number inputs less than 100,000 cells is described in detail. The semiautonomous platform reduces technical variability, improves signal-to-noise ratios, and drastically reduces labor. The system can thereby reduce costs by allowing for reduced reaction volumes, limiting the number of expensive reagents such as enzymes, magnetic beads, antibodies, and hands-on time required. These improvements to the ChIP-Seq method suit perfectly for large-scale epigenetic studies of clinical samples with limited cell numbers in a highly reproducible manner.

This paper describes a semiautomated, microscaled ChIP-Seq protocol of DNA regions associated with a specific histone modification (H3K27ac) using a ChIP liquid-handler platform, followed by library preparation using tagmentation. The procedure includes control assessment for quality and quantity purposes and can be adopted to other histone modifications or transcription factors.

Büyük Ölçekli Epigenetik Çalışmalar için Yarı Otomatik ChIP-Seq Prosedürü

Chromatin immunoprecipitation followed by sequencing (ChIP-Seq) is a powerful and widely used approach to profile chromatin DNA associated with specific ...

El yetiştirme yaklaşımı kullanarak marmosetlerin hayatta kalmasını ve gelişimini artırmak

Hand-Rearing Method for Infant Marmosets

The common marmoset (Callithrix jacchus) is a small and highly social New World monkey with high reproduction rates, which has been proven to be a compelling non-human primate model for biomedical and neuroscience research. Some females give birth to triplets; however, the parents cannot raise all of them. To save these infants, we have developed a hand-rearing method for raising newborn marmosets. In this protocol, we describe the formula of the food, the time for feeding, the configuration of the temperature and humidity, as well as the adaptation of the hand-reared infants to the colony environment. This hand-rearing method significantly increases the survival rate of marmoset infants (without hand-rearing: 45%; with hand-rearing: 86%) and provides the opportunity to study the development of marmoset infants with similar genetic backgrounds raised in different postnatal environments. As the method is practical and easy to use, we anticipate that it could also be applied to other labs working with common marmosets.

Yazar Gündemi: Marmoset Araştırması - Kapsam ve Zorluklar 

Here, we describe a hand-rearing method for raising infant marmosets in an animal incubator. This method greatly increases the survival rate of marmoset infants, which provides the opportunity to study the development of marmoset infants with similar genetic backgrounds raised in different postnatal environments.