Yazarlar Savunma Bakanlığı aracılığıyla Congressionally Yönetmen Tıbbi Araştırma Programları (# W81XWH-10-1-0445), Ulusal Sağlık Enstitüleri (NIH R21 HL110056) ve Amerikan Kalp Derneği (# 11SDG4890030) finanse edersiniz.

1. Tamponlar ve Test Aracıları Hazırlanması ve Sterilizasyonu <ol><li> 150 mM NaCl tampon: nanopure 500 ml su içinde 4.383 g NaCl kristaller eritilir. </li><li> pH Tamponları: monobazik ve dibazik sodyum fosfat uygun miktarlarda karıştırılarak pH 5.6, 6.2, 6.8 ve 7.4 &#39;de fosfat tamponlar hazırlayın. Örnekleri gibi sitrat tampon olarak daha sonra düşük pH değerleri (yani pH &lt;5.6) daha uygun bir tampon, test edilecek ise, kullanılmalıdır. Tampon tarifleri kolayca kullanılabilir ve bir örnek burada referans verilmiştir. 12 </li><li> Bir şişe üstü vakumlu filtrasyon aparatı ve yeniden kontrol tampon pH aracılığıyla yukarıda belirtilen tüm tamponları sterilize edin. </li><li> % 20 oranında Triton X-100 (pozitif kontrol): Karışım 20 ml saf Triton nanopure 80 ml su içinde X-100. Şiddetle Vortex ve çözülmekte sonikasyon. Kullanımdan önce gece boyunca oda sıcaklığında bırakın. </li></ol> 2. Eritrositler hazırlanması <ol><li> Kan fr 25 ml eldepıhtılaşmayı önlemek için K 2-EDTA kaplı Vacutainer tüpler içine doğrudan çizilmiş om anonim bir insan donör,. </li></ol> NOT: Tüm işlemler uygun Kurumsal İnceleme Kurulu (KİK), ve Damara ve kan toplama tarafından önceden onaylanmalıdır donör riskini en aza indirmek için eğitimli bir Phlebotomist tarafından yapılmalıdır. Standart flebotomi prosedürler yerde yayımlanmamış edilmiştir. 13. <ol start="2"><li> 5 dk, ve hematokrit düzeyleri işareti (kırmızı, alt tabaka) ve plazma (sarımsı, üst tabaka) tüp için 500 xg&#39;de kan santrifüjleyin. </li><li> Bir mikropipet ile hafifçe plazma aspire, çamaşır suyu içine ekleyin ve biyolojik tehlikeli atık içine atın. </li><li> 150 mM NaCl çözeltisi ile işaretlenmiş hattı (plazma orijinal seviyesi) hematokrit tüpü doldurun. Cap ve hafifçe karıştırmak için birkaç kez ters. 5 dakika boyunca 500 xg&#39;de santrifüjleyin. </li><li> Tekrar kan hücreleri yıkayın adım 2,3-2,4 tekrarlayın. Sonra supernat aspirekarınca ve pH 7.4 &#39;de PBS ile değiştirin. Karıştırmak için Invert. </li><li> Test edilecek her bir pH tekabül, eşit dört tüpler içine kan Böl. Test edilecek her bir pH (5.6, 6.2, 6.8, 7.4) &#39;ye göre tüp etiketleyin. </li><li> 5 dakika boyunca 500 xg&#39;de kan tüpleri santrifüjleyin. Borular üzerinde seviyeleri işaretleyin, sonra süpernatant aspire. </li><li> Uygun pH (as 2.6 belirtilir) tamponu ile işaretlenmiş satırı her tüp doldurun. </li><li> Etiket dört 50 ml konik tüpler (test pH başına bir), ve her konik tüp içine uygun pH PBS pipet 49 ml. </li><li> Bir 1:50 seyreltme için gelen tüpe eritrositler (aynı pH) 1 ml ekleyin. Görme bulanık olmalıdır ve bozulmamış bırakılırsa razı olacak seyreltilmiş kan, kontrol edin. Hiçbir pelet formlarda, hücreler lize var. </li></ol> 3. Lizis Testi 96 Şey Levha Kurulumu ve Sayısallaştırma <ol><li> Test edilecek 20x arzu edilen nihai konsantrasyonu, bütün deneysel ilaç aktarma maddelerinin stok çözelti hazırlayın (Assayilaç dağıtım ajan 10 ul + nihai test karışımının içine orijinal ilaç dağıtım aracı bir 1/20 dilüsyon giden 190 ul seyreltilmiş kırmızı kan hücreleri,) alacaktır. 20, 100, ve 800 ug / ml &#39;lik Stoklar, sırasıyla 1, 5, ve 40 ug / mL, nihai deney konsantrasyonu ile sonuçlanır önerilmektedir. </li><li> V-dibine her stok solüsyonu 96-kuyucuğu pipetleyin 10 ul. En iyi sonuçlar için, üç kopya halinde her bir numune yüklemek veya dört misli. </li></ol> NOT: kolaylığı için, ayrı bir 96-plaka plaka başına n&#39;deki = 3-4 yüklenen (her konsantrasyonda) Her numune ile test edilecek her pH için hazırlıklı olmak gerektiğini tavsiye edilir. <ol start="3"><li> Pozitif kontrol kuyuları,% 20 Triton X-100, 10 ul ilave edin. </li><li> Negatif kontrol kuyuları fosfat tamponu 10 ul ilave edin. Test edilecek aynı pH tampon kullanın. </li><li> Seyreltilmiş Eritrositlerin Pipet 190 ul her oyuğa (2.10 &#39;a bakın), kalır emin hücre stok solüsyonu yapmatransfer sırasında homojen. İpucu: Bu görevi kolaylaştırmak için kullanın çok kanallı pipet. </li><li> Bir saat (: orbital çalkalayıcı ya da rocker kullanın Opsiyonel) için 37 ° C&#39;de plakaları inkübe edin. </li><li> 500 pelet sağlam eritrositlere xg de 5 dakika plakaları santrifüjleyin. Not: santrifüj plaka kaldırılarak ve bir sonraki adım için taşırken, dikkatli olun ve hücre pelletini bozmaya kesin olmayacak. </li><li> Bir çok kanallı pipet kullanarak, açık, düz tabanlı 96-plaka içine her kuyudan süpernatant 100 ul aktarın. Not: hücre pelletini yanlışlıkla herhangi bir numune (ler) için rahatsız ise, bir süpernatant transferi işlemlerine ardından plakayı tekrar santrifüj ve. </li><li> Bir plaka okuyucu ile yüzer maddelerinin absorbansı ölçülür. Bir dalga boyu aralığı (- 541 nm ilâ 400) kullanılabilir dikkat ediniz. </li></ol> NOT: Farklı plaka okuyucu farklı doygunluk noktaları ve hassasiyetleri olabilir, bu yüzden benim için bir dalga boyu seçimiasurements deterjan tedavisinin yol açtığı gibi deneysel örneklerinden hemoliz veriler güvenilir maksimum hemoliz karşı normalize edilebilir olup olmadığına bağlıdır. Bu pozitif kontrol numunelerinin absorbans değerlerinin doğru bir ölçüm gerektirir. <ol start="10"><li> Microsoft Excel veya benzer bir veri analiz yazılımı kullanarak, her bir pH (adım 3.4) için ayarlanmış negatif kontrol örnekleri arka absorbans ölçümleri ortalama bulabilirsiniz. Bu pH ölçüldü diğer tüm numuneler bu plan absorbans Değ.Çıkar. </li><li> Arka plan çıkarma sonra, pozitif kontrol ortalama absorbans deterjan işlenmiş örnekleri (adım 3.3) bulabilirsiniz. Sonra% 100 hemoliz temsil etmelidir ki, bu ortalama absorbans değeri tüm deneysel veri noktaları normalleştirmek. Nihayet, deterjan kontrolü iyi göreli her oluştu% hemoliz hesaplamak için% 100 her iyi değeriyle çarpın. </li></ol>

<ol>
	<li>Alberts, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Molecular Biology of the Cell. , (2002).</li><li>Boasson, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+Bacteriolysis+by+Lysozyme.">On the Bacteriolysis by Lysozyme.</a> The Journal of Immunology. 34, 281-293 (1938).</li><li>Convertine, A. J., Benoit, D. S., Duvall, C. L., Hoffman, A. S., Stayton, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+novel+endosomolytic+diblock+copolymer+for+siRNA+delivery.">Development of a novel endosomolytic diblock copolymer for siRNA delivery.</a> J. Control. Release. 133, 221-229 (2009).</li><li>Duvall, C. L., Convertine, A. J., Benoit, D. S., Hoffman, A. S., Stayton, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+Delivery+of+a+Proapoptotic+Peptide+via+Conjugation+to+a+RAFT+Synthesized+Endosomolytic.">Intracellular Delivery of a Proapoptotic Peptide via Conjugation to a RAFT Synthesized Endosomolytic.</a> 7, 468-476 (2010).</li><li>Varkouhi, A. K., Scholte, M., Storm, G., Haisma, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endosomal+escape+pathways+for+delivery+of+biologicals.">Endosomal escape pathways for delivery of biologicals.</a> Journal of Controlled Release. 151, 220-228 (2011).</li><li>Plank, C., Oberhauser, B., Mechtler, K., Koch, C., Wagner, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+endosome-disruptive+peptides+on+gene+transfer+using+synthetic+virus-like+gene+transfer+systems.">The influence of endosome-disruptive peptides on gene transfer using synthetic virus-like gene transfer systems.</a> Journal of Biological Chemistry. 269, 12918-12924 (1994).</li><li>Ratner, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+Cells+Are+Sensitive+Detectors+of+Bacterial+Pore-forming+Toxins.">Epithelial Cells Are Sensitive Detectors of Bacterial Pore-forming Toxins.</a> Journal of Biological Chemistry. 281, 12994-12998 (2006).</li><li>Saar, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-penetrating+peptides:+A+comparative+membrane+toxicity+study.">Cell-penetrating peptides: A comparative membrane toxicity study.</a> Analytical Biochemistry. 345, 55-65 (2005).</li><li>Kichler, A., Leborgne, C., Coeytaux, E., Danos, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polyethylenimine-mediated+gene+delivery:+a+mechanistic+study.">Polyethylenimine-mediated gene delivery: a mechanistic study.</a> The Journal of Gene Medicine. 3, 135-144 (2001).</li><li>Behr, J. -. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Proton+Sponge:+a+Trick+to+Enter+Cells+the+Viruses+Did+Not+Exploit.">The Proton Sponge: a Trick to Enter Cells the Viruses Did Not Exploit.</a> CHIMIA International Journal for Chemistry. 51, 34-36 (1997).</li><li>Dawson, R. M. C., Elliot, D. C., Elliot, W. H., Jones, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Data for Biochemical Research. , (1986).</li><li>Ernst, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Applied Phlebotomy. , (2005).</li><li>Bulmus, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+pH-responsive+and+glutathione-reactive,+endosomal+membrane-disruptive+polymeric+carrier+for+intracellular+delivery+of+biomolecular+drugs.">A new pH-responsive and glutathione-reactive, endosomal membrane-disruptive polymeric carrier for intracellular delivery of biomolecular drugs.</a> Journal of controlled release : official journal of the Controlled Release Society. 93, 105-120 (2003).</li><li>Lackey, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemolytic+Activity+of+pH-Responsive+Polymer-Streptavidin+Bioconjugates.">Hemolytic Activity of pH-Responsive Polymer-Streptavidin Bioconjugates.</a> Bioconjugate Chemistry. 10, 401-405 (1999).</li><li>Murthy, N., Campbell, J., Fausto, N., Hoffman, A. S., Stayton, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioinspired+pH-responsive+polymers+for+the+intracellular+delivery+of+biomolecular+drugs.">Bioinspired pH-responsive polymers for the intracellular delivery of biomolecular drugs.</a> Bioconjugate chemistry. 14, 412-419 (2003).</li><li>Murthy, N., Robichaud, J. R., Tirrell, D. A., Stayton, P. S., Hoffman, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+design+and+synthesis+of+polymers+for+eukaryotic+membrane+disruption.">The design and synthesis of polymers for eukaryotic membrane disruption.</a> Journal of controlled release : official journal of the Controlled Release Society. 61, 137-143 (1999).</li><li>Yu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overcoming+endosomal+barrier+by+amphotericin+B-loaded+dual+pH-responsive+PDMA-b-PDPA+micelleplexes+for+siRNA+delivery.">Overcoming endosomal barrier by amphotericin B-loaded dual pH-responsive PDMA-b-PDPA micelleplexes for siRNA delivery.</a> ACS nano. 5, 9246-9255 (2011).</li><li>Nelson, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sustained+local+delivery+of+siRNA+from+an+injectable+scaffold.">Sustained local delivery of siRNA from an injectable scaffold.</a> Biomaterials. 33, 1154-1161 (2012).</li><li>Miozzari, G. F., Niederberger, P., H&#252;tter, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Permeabilization+of+microorganisms+by+Triton+X-100.">Permeabilization of microorganisms by Triton X-100.</a> Analytical Biochemistry. 90, 220-233 (1978).</li><li>Chen, H., Zhang, H., McCallum, C. M., Szoka, F. C., Guo, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unsaturated+Cationic+Ortho+Esters+for+Endosome+Permeation+in+Gene+Delivery.">Unsaturated Cationic Ortho Esters for Endosome Permeation in Gene Delivery.</a> Journal of Medicinal Chemistry. 50, 4269-4278 (2007).</li><li>Roth, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+Measurements+and+Rational+Materials+Design+for+Intracellular+Delivery+of+Oligonucleotides.">Quantitative Measurements and Rational Materials Design for Intracellular Delivery of Oligonucleotides.</a> Biotechnology Progress. 24, 23-28 (2008).</li><li>Blumenthal, R., Seth, P., Willingham, M. C., Pastan, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=pH-dependent+lysis+of+liposomes+by+adenovirus.">pH-dependent lysis of liposomes by adenovirus.</a> Biochemistry. 25, 2231-2237 (1986).</li><li>Moore, N. M., Sheppard, C. L., Barbour, T. R., Sakiyama-Elbert, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+endosomal+escape+peptides+on+in+vitro+gene+delivery+of+polyethylene+glycol-based+vehicles.">The effect of endosomal escape peptides on in vitro gene delivery of polyethylene glycol-based vehicles.</a> The Journal of Gene Medicine. 10, 1134-1149 (2008).</li><li>Panyam, J., Zhou, W. Z., Prabha, S., Sahoo, S. K., Labhasetwar, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+endo-lysosomal+escape+of+poly(DL-lactide-co-glycolide)+nanoparticles:+implications+for+drug+and+gene+delivery.">Rapid endo-lysosomal escape of poly(DL-lactide-co-glycolide) nanoparticles: implications for drug and gene delivery.</a> The FASEB Journal. 16, 1217-1226 (2002).</li></ol>

IRB onayı: İnsan denekleri Usul Vanderbilt Üniversitesi Kurumsal İnceleme Kurulu (KİK; Protokolü # 111251) tarafından onaylanmıştır. Çıkar çatışması ilan etti.

endosomolitik fonksiyon için tasarlanmış pH duyarlı polimerler ya da diğer maddeler gibi hızla ve etkili bir şekilde endosome karşılaşılan pH değerlerinde kırmızı kan hücrelerinin lizisi (Şekil 1 esas taranmış olabilir; pH 6.8 - erken endosome, pH 6.2 - geç endosome, pH 5,6 - Lizozom). 14-17 pH bağımlı hemoliz biomacromolecular tedavi (örn. peptidler, siRNA, ODN&#39;ler, proteinler) endozomal serbest arabuluculuk taşıyıcılar yeteneği taranması için kull...

Hücre içinde birçok potansiyel yüksek etkili tedavi hedefleri olmasına rağmen, maddelerin hücre içi teslimat önemli bir sorun teşkil etmektedir. Sık sık, ilaçlar, özellikle biyolojik, ekzositoz yoluyla hücreler tarafından içselleştirilmesi ve veziküller içine kaçırılan ya endo-lizozom yolağı yoluyla içindekiler bozulmaya yol açan veya hücrenin geri shuttled vardır vardır. Ikincisi süreçte 1, iç pH veziküllerin enzim aktivitesi için optimum pH olan yaklaşık olarak 5-6 olana kadar asitleştirildi, bu gibi lisozim gibi bu bölme içinde işlev. 2 Son zamanlarda, malzemeleri bir dizi özel bir asitleştirme kendi kargo sitozolik teslim kolaylaştırmak için endozomlar kaldıraç için tasarlanmış edilmiştir. Bu yaklaşımın bir örneği olan temel fizyolojik pH (yani 7.4) zwitteriyonik ve şarj nötr sentetik polimer misel nanopartiküller kullanır. Bununla birlikte, pH 6.0 &#39;- 6.5, polimerler protonlanır olmak ve misel çekirdek oynattığını net pozitif yük kazanma, ve maruz kalan polimer segmentleri ile etkileşim ve endozomal zarı bozar. Bu aktivite, onların sitosolik hedefleri erişim imkanı sağlayan, peptid ve nükleik asit-bazlı terapötiklerin endozomal kaçış teşvik etmek için gösterilmiştir. Membran bariyeri bozmak endozomal kaçış aracılık için geliştirilmiş yöntemlerin diğer örnekleri ya da 3,4 &#39;füzojenik&#39; peptitler yer fosfolipid çift-katlı membran füzyonu veya geçici gözenek oluşumuna aracılık eden proteinlerdir. örneğin poli (propylacrylic asit) gibi anyonik alkil akrilik asit homopolimerleri 5 diğer bir iyi incelenmiş olan bir yaklaşım, ve bu polimerler de, kolye karboksilik asit protonasyon durum geçiş belirler Endo-Lizozomal pH aralıkları bir hidrofobik, membran-yıkıcı devlet. 6,7 Endosomolitik davranışı tarama için yararlı bir model sistem ex in vivo pH bağımlı hemoliz testi. 8 Bu model sistem olarak, eritrosit membranı endo-lizozomal veziküller içine iki tabakalı lipid membran için bir vekil olarak hizmet vermektedir. Bu genellenebilir modeli hücre delici peptidler ve diğer polimerik gen aktarım sistemlerinin endosomolitik davranışlarını değerlendirmek için başkaları tarafından kullanılmaktadır. 8-11 Bu deneyde, insan kırmızı kan hücreleri ve test materyalleri taklit tanımlanan pH&#39;da tampon birlikte kuluçkaya vardır ekstraselüler (7.4), erken (6.8) endozomal ve endo-lizozomal geç (&lt;6.8) ortamları. Kuluçka dönemi sırasında serbest hemoglobin miktar deterjan ile lize pozitif kontrol örneklerinde serbest hemoglobin miktar ile normalize edilir kırmızı kan hücrelerinin lizisi, bir ölçüsü olarak ölçülür. Potansiyel endosomolitik malzemeleri test küçük bir kütüphane tarama itibaren, bir pH 7.4 hiç hemoliz üretmek örnekleri anlaması, ancak önemli ölçüde yükselmiş etek olabilirpH &lt;6.5 olan olysis, sitozolik ilaç dağıtım için en etkili ve cytocompatible adayları olacak. Bu kriterlere uyan malzemeler gelişigüzel endo-lizozomal bölmeye içselleştirilmesi sonrasında yerel pH bir düşüş maruz kadar iki tabakalı lipid membranlar (sitotoksisite neden olabilir yani) yok eylemsiz değil kalması beklenir. Bu protokolde, eritrositler bir insan donör izole edilir ve pH 5.6, 6.2, 6.8, ya da deneysel endosomolitik ilaç dağıtım ajanları ile 7.4 &#39;de co-inkübe. Bozulmamış eritrositler peletlenmiş, ve süpernatan (erimiş eritrositler serbest hemoglobin ihtiva eden) bir plaka okuyucu (Şekil 1) vasıtasıyla hemoglobin karakteristik absorbans için analiz edilir.

<table border="1"><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar (isteğe bağlı) </td></tr><tr><td> BD Vacutainer - K2EDTA Vacutainer Tüpler </td><td> Fisher Scientific </td><td> 22-253-145 </td><td> Kan toplama için </td></tr><tr><td> BD Vacutainer Kan Toplama İğneler, 20.5-ölçer </td><td> Fisher Scientific </td><td> 02-665-31 </td><td> Kan toplama için </td></tr><tr><td> BD Vacutainer Tüp Tutucu / İğne Adaptörü </td><td> Fisher Scientific </td><td> 22-289-953 </td><td> Kan toplama için </td></tr><tr><td> BD Marka İzopropil Alkol Swablar </td><td> Fisher Scientific </td><td> 13-680-63 </td><td> Kan toplama için </td></tr><tr><td> BD Vacutainer Lateks-Alerjik Turnike </td><td> Fisher Scientific </td><td> 02-657-6 </td><td> Kan toplama için </td&gt; </tr><tr><td> Hidroklorik asit (kons.) </td><td> Fisher Scientific </td><td> A144-500 </td><td> D-PBS, pH ayarlaması için. </td></tr><tr><td> Triton X-100 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> T8787 </td><td> Pozitif kontrol </td></tr><tr><td> Dulbecco PBS </td><td> Invitrogen </td><td> 14190 </td><td></td></tr><tr><td> SFCA Membranlı Nalgene MF75 Steril Disposable Şişe Üstü Filtre Ünitesi </td><td> Fisher Scientific </td><td> 09-740-44A </td><td></td></tr><tr><td> BD 96-kuyucuğu, düz dipli, doku kültürü ile tedavi edilen polistiren </td><td> Fisher Scientific </td><td> 08-772-2C </td><td> Testin sonunda, plaka okuma için. </td></tr><tr><td> BD 96-kuyucuğu, yuvarlak dipli, doku kültürü ile tedavi edilen polistiren </td><td> Fisher Scientific </td><td> 08-772-17 </td><td> Deneysel ajanlar ile kırmızı kan hücrelerinin kuluçka için. </td></tr></table&gt;

ex vivo red blood cell hemolysis assay for the evaluation of ph-responsive endosomolytic agents for cytosolic delivery of biomacromolecular drugs

Endo-lizozomal veziküller oluşturan çift katmanlı fosfolipidlerin hücre içi hedeflere biyolojik ilaçların teslim için bir engel teşkil edebilir. Bu engeli aşmak için, sentetik ilaç taşıyıcı bir dizi aktif endozomal zarı bozar ve sitoplazma içine kargo sunmak için tasarlanmış edilmiştir. Burada, hücre içi ilaç dağıtım sistemleri cytocompatibility ve endosomolitik etkinlik için hızlı, yüksek hacimli ekran olarak kullanılabilir hemoliz tahlil, açıklar. Hemoliz testi, insan kırmızı kan hücreleri ve test materyalleri ekstraselüler, erken endozomal ve geç endo-lizozomal ortamlarda taklit tanımlanan pH&#39;da tampon co-inkübe edilir. Pelet bozulmamış kırmızı kan hücreleri santrifüj basamağı sonrasında, orta salınan hemoglobin miktarı, spektrofotometrik (en iyi dinamik aralığı için 405 nm) olarak ölçülür. Yüzde kırmızı kan hücre parçalama sonra pozitif kontrol samp göre ölçülürles bir deterjan ile lize. Bu model sistemde eritrosit membran endo-lizozomal veziküller içine iki tabakalı lipid membran için bir vekil olarak hizmet vermektedir. İstenen sonucu fizyolojik pH (7.4) ve yaklaşık pH 5-6,8 gelen endo-lizozom pH aralığında sağlam hemoliz de ihmal hemoliz olduğunu.

<html> Genellikle, ideal bir pH bağımlı hemolitik davranışı gösteren ilaç ajanları, nükleik asitler ya da biyolojik olarak aktif diğer moleküllerin sitosolik teslimat için yüksek bir potansiyele sahiptir. Bu pH 7.4 &#39;de minimal hemoliz sergiler Şekil 2&#39;de de gösterildiği gibi, Ajan # 1 örneklediği, ama endozomal pH aralıkları (&lt;6.5) de hemolitik davranış keskin bir artış olduğunu. Bu ajanlar hemocompatible olmayabilir ve potansiyel olarak bu konsantrasyonlarda sitotoks...

Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Red Blood Cell Hemolysis Assay for the Evaluation of pH-responsive Endosomolytic Agents for Cytosolic Delivery of Biomacromolecular Drugs at JoVE.com

Ex Vivo Red Blood Cell Hemolysis Assay for the Evaluation of pH-responsive Endosomolytic Agents for Cytosolic Delivery of Biomacromolecular Drugs

Bir hemoliz tahlil hücre içi kargo için ilaç dağıtım sistemleri &#39;cytocompatibility ve endosomolitik aktivite hızlı, yüksek hacimli ekran olarak kullanılabilir. Tahlil çevresel pH bir fonksiyonu olarak eritrosit membran parçalama ölçer.

Biomacromolecular Uyuşturucu Sitozolik Teslimat için pH-duyarlı endosomolitik Ajanlar değerlendirilmesi için Ex Vivo Kırmızı Kan Hücresi Hemoliz Testi

Phospholipid bilayers that constitute endo-lysosomal vesicles can pose a barrier to delivery of biologic drugs to intracellular targets. To overcome this ...

ex-vivo-red-blood-cell-hemolysis-assay-for-evaluation-ph-responsive

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Ex Vivo Red Blood Cell Hemolysis Assay for the Evaluation of pH-responsive Endosomolytic Agents for Cytosolic Delivery of Biomacromolecular Drugs

34.0K Görüntüleme.  Vanderbilt University. Bir hemoliz tahlil hücre içi kargo için ilaç dağıtım sistemleri 'cytocompatibility ve endosomolitik aktivite hızlı, yüksek hacimli ekran olarak kullanılabilir. Tahlil çevresel pH bir fonksiyonu olarak eritrosit membran parçalama ölçer.

Video: Ex Vivo Red Blood Cell Hemolysis Assay for the Evaluation of pH-responsive Endosomolytic Agents for Cytosolic Delivery of Biomacromolecular Drugs