Biz Dr Arieh Shalhav liderliğindeki Üroloji Chicago Bölüm Of Üniversitesi ve Ürolojik Araştırma Dr Carrie Rinker-Schaeffer Direktörü destek dolayı teşekkür etmek istiyoruz. Ayrıca Dr Michelle Le Beau liderliğindeki Chicago Kapsamlı Kanser Merkezi (UCCCC) Üniversitesi desteği kabul etmek istiyorum. Ayrıca Dr Mark Lingen liderliğindeki İnsan Doku Kaynak Merkezi çekirdek odası ve Leslie Martin ve Mary Jo Fekete yardımı uzman teknik yardım teşekkür ile. Ayrıca Terri Li tarafından yürütülen İmmünohistokimya Çekirdek Tesis teşekkür ederim. Bu çalışma Cerrahi Chicago Dalı, Üroloji Bölüm Üniversitesi tarafından finanse edildi; bir Amerikan Kanser Derneği Kurumsal Araştırma Bursu (ACS-IRG, # IRG-58-004), bir Kanser Merkezi Destek Hibe (P30 CA14599); Brinson Vakfı, Alvin Baum Aile Fonu; Chicago Kanser Araştırma Vakfı Kadın Kurulu Üniversitesi; S. Kregel bir HHMI tarafından desteklenmektedir: Med-içine-Grad Fellowskalça (56006772) ve Kanser Biyolojisi Eğitim Grant (T32-CA09594). Son olarak, yazının eleştirel değerlendirilmesi için Robert Clark, Dr VenkateshKrishnan ve Nathan Stadick teşekkür etmek istiyorum.

Bu çalışma, Ulusal Sağlık Enstitüleri Laboratuvar Hayvanları Bakım ve Kullanım Kılavuzu önerileri ile tam uyum içinde gerçekleştirilmiştir. Protokol Chicago Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu Üniversitesi&#39;nde (IACUC, protokol numaraları 72.066 ve 72.231) tarafından onaylanmıştır. Tüm cerrahi anestezi altında yapıldı ve tüm çabaları acı en aza indirmek için yapılmıştır. İnsan embriyonik kök hücre hattı WA01 (H1, NIH-kayıt # 0043) mTeSR1 medya kullanarak besleyici bağımsız protokolünü kullanarak WiCell (Madison, WI) ve kültürlü elde edildi (Hücre Teknolojileri Kök, Vancouver, BC). ES hücrelerinin çözdürme on geçişleri içinde kullanılmıştır. 1. Fare veya Rat Embriyolar gelen Ürogenital Sinüs izolasyonu <ol><li> 5 dakika boyunca CO 2 Solunduğunda bir zamanlı hamile fare (gün 17.5) veya sıçan (gün 18.5) euthanize. Ölüm sıçan vital bulgular kesilmesi ile doğrulanır. Daha sonra insanca boynunu kırmak. RBu noktada ötenazi. Karın cilt ve yanları sterilize etmek için% 70 etanol püskürtün. Karın cilt ve kas tabakaları kesin ve daha sonra, rahim kesmek amniyon kesesi gelen sıçan embriyolar ayrı ve göbek kordonu kesti. Buzla soğutulmuş Hank&#39;in dengeli tuz solüsyonu (HBSS) ihtiva eden 50 ml&#39;lik bir Falcon tüpüne embriyo transferi ve buz üzerinde tutmak. Fetus cerrahi makas ile kesilerek ötenazi. </li><li> 100 mm Petri kabındaki embriyo yerleştirin. Göbek (Şekil 1A) düzeyinde makas ile embriyo ikiye bölmek. Mide ve ince bağırsak çıkarın. Erkek embriyo (Şekil 1B ve 1C) olarak kadın embriyo ve testis yumurtalıklar ortaya koymaktadır. (Yumurtalıklar böbreklerin kaudal kutuplarda yer almaktadır. Testisler yaklaşık mesane düzeyinde bulunmaktadır). Bu gelişimsel aşamada, UGSM hem erkek hem de dişi embriyoların ana mevcudiyetinde bir prostat epitel soy uyarabildiğinden izoletestosteron. 4 Bu gelişme süresi noktadan sonra, ancak, prostat tomurcukları UGSM içine oluşturan başlar ve saf UGSM izolasyonu çok zor. 4 </li><li> Diseksiyon mikroskobu altında, mesane ve karın arka duvar ortaya çıkarmak için Vannas makas ile orta doğrultusunda karın duvarı kesti. Ekleri içermez üst genital sistem (erkek embriyolarda, üreter, Wolf kanal ve Müllerian kanal kesilmiş; kadın embriyolarda, üreter ve Müllerian kanal kesme). Göbek kordonu gelen mesane ücretsiz. Kasık kemiğine ve Dumont ince uçlu forseps ile ürogenital sinüs ön duvarından açıkça ayrı kesin. Son olarak, rektum ürogenital sinüs arka duvar ayırın. Alt ucunda (üretra itibaren) de mesane ile ürogenital sinüs kesin ve buz HBSS ürogenital sinüs en blok (mesane ile) saklayın. </li></ol> 2. Ürogenital Sinüs mezenşimin ayrılması <ol><li&gt; Diseksiyon mikroskobu (Şekil 1D) kapsamında ürogenital sinüs mesane çıkarın. </li><li> 1% Kalsiyum tripsin (Ca 2 +) ve Magnezyum (Mg 2 +) ücretsiz HBSS içeren bir şahin tüp ürogenital sinüs aktarın. 75 dakika boyunca 4 ° C &#39;de bir buzdolabında tüp yerleştirin. </li><li> Tripsin çıkarın ve DMEM/F12 ortamı içinde% 10 Fetal Bovin Serumu (FBS) ile nötralize tripsinizasyon. </li><li> Bu da kök hücre kaynaklı insan ile birlikte oluşturan kemirgen bezleri neden olabilir, dikkatli bir iğne veya Dumont ince uçlu forseps (sağlam epitel tüp mezenşimin epitel hücre kontaminasyon şansını azaltır bakımı ile epitel tüp yapışkan mezenkimal kol kızdırmak glandüler epitel) (Şekil 1D). 12 </li><li> DMEM/F12 ortamı + içeren yeni bir Falcon tüpüne transfer UGSM% 10 FBS +% 1 Penisilin / Streptomisin (pen / strep, 0.5 mg / ml) +% 1 Esansiyel olmayan amino asitler (NEAA) artı 1nM dozu R1881. Plas 37 ° C&#39;de bir inkübatör tüp% 5 CO 2 gece ile. </li><li> 200 xg doku santrifüj ve süpernatant atın. Fosfat tampon tuzu (PBS) (doku pelet rahatsız etmeyin) ile yıkayın. </li><li> Yeniden askıya dokuya% 0.2 kolajenaz (DMEM/F12) ekleyin. 1 saat boyunca hafif bir sallama ile 37 ° C&#39;de inkübe edin. </li><li> Şiddetle girdap sindirim doku üç kez homojen tek hücreli karışımı olur ve DMEM/F12 orta + eklemek kadar% 10 FBS +% 1 P / S +% 1 NEAA + kollajenaz nötralize etmek 1nM dozu R1881. </li><li> 200 x g santrifüj ve sonra HBSS UGSM hücreleri yeniden askıya tarafından yıkayın ve tam UGSM yıkamak için üç kez tekrarlayın. Son olarak DMEM/F12 mezenkimal hücreler askıya ve Hemasitometre veya hücre sayımı cihazı kullanarak hücreleri saymak. </li><li> Bir Accutase sindirim (; Billerica, MA Millipore) kullanılarak; iEK hücreleri mTeSR1 medya (Vancouver, BC Kök Hücre Teknolojileri) ile kültür kullanarak besleyici-ücretsiz protokolü ayırmak. IEK hücreleri yıkayınsıcak DMEM/F12 medya kendi büyüme günlük aşamasında, sonra ılık 1x Accutase çözüm ekleyin ve tek hücre kolonilerden düzgün ayrışmış kadar 15-20 dakika 37 ° C&#39;de inkübe edin. Accutase nötralize ve yavaşça yukarı pipet ve aşağı hücre kümeleri karıştırmak ve parçalamak için; 1x tanımlanan tripsin inhibitör (Grand Island, NY Invitrogen) eşit miktarda ekleyin. Bir santrifüj tüpü ve 3 dakika 200 x g ve DMEM/F12 ortamı içinde yeniden askıya hücre pelletini için santrifüj içine pipetle hücreler. 200 tekrar xg az 3 dakika tüp santrifüj ve süpernatant kaldırmak, daha sonra istediğiniz ses seviyesinde soğuk HBSS veya DMEM/F12 yeniden askıya. </li><li> IEK / mezenkimal hücrelerin 1:2.5 oranı ile iEK hücreleri ekleyin. 3 Bu 10 ml enjeksiyon başına 4E 4 hESC (tek bir fare 2E 6 mezenkimal hücreler hakkında genellikle verim UGS) ile 1E 5 UGSM hücre hücresel bileşimi olacaktır. 5 dakika boyunca 200 x g&#39;de santrifüjden sonra supernatant atın. 75% Matrigel (BD Biosciences ile yeniden askıya,San Jose, CA, daha kolay kullanım için 25% soğuk HBSS ile karıştırılmış) ve alt böbrek kapsülü enjeksiyon için buz tüp yerleştirin. </li></ol> 3. Böbrek Kapsül altında Rekombinant Doku Nakli <ol><li> Bir steril cerrahi zemin hazırlayın. </li><li> Ksilizin / ketamin ip ile bir erkek atimik çıplak fare anestezisi, ketamin bir 01:01:08 oranı içeren yeni bir karışım kullanın: ksilizin: tuzlu. Dozlama 100 mg / kg ketamin ve 2.5 mg / kg &#39;Ksilazin olacaktır. Bir ayak-tutam tepkisiz Hayvanlar tam 20-30 dakika altında olmalıdır. </li><li> Cerrahi betadin çözüm ardından% 70 alkol üç alternatif mendil ile temizlik ve bir cerrahi örtü uygulayarak, cerrahi alan (çıplak bir fareyi kullanarak değilse) tıraş tarafından fare hazırlamak. </li><li> Anestezi sırasında kurumasını önlemek için fare gözünde göze nem merhem (Altalube göz merhemi) koyun. </li><li> Ameliyat sırasında, farelerin solunum hızı ve çekirdek vücut ısısı izlenir. Solunum oranları should istikrarlı ve 40-90 solunum / dakika içinde muhafaza olabilir. Çekirdek vücut ısısı mukoza renk ve ayak pembe tabanı gözlem ile izlenir. </li><li> Arkasında bir 1.0 cm uzunluğunda longitudinal cilt kesi yapmak. 0.5 cm boyuna kesi içinde karın duvarı kesmek için devam edin. </li><li> Yavaşça karın dışında böbrek sıkmak ve steril serum fizyolojik damla kullanarak böbrek yüzeyi nemli tutmak. </li><li> Yavaşça delinme boş bir 27-gauge enjektör iğnesi ile böbrek kapsülü. Çok sığ delik yeterlidir. Eğer cep karışımı enjekte etmek için künt bir iğne takın burada olacak. </li><li> Cep karışımı 10 ul ile 28-gauge künt şırınga iğne doldurun. Yavaş yavaş ponksiyon yerleştirin ve böbrek kapsülü altında bir alana ulaşmak için böbrek parankim nüfuz. Böbrek kapsülü altında böbrek üzerindeki bir kapsül oluşturmak üzere hücresel karışımı 10 ul enjekte edilir. Çekilme iğne. </li><li> Abdo için böbrek dönminal boşluğu. 4-0 naylon sütür ile periton kas tabakası sabitleyin. </li><li> Dikiş veya zımba ya ile cilt kapatın. </li><li> Steril tuzlu su kullanılarak, deriden kan temizleyin. </li></ol> 4. Ameliyat sonrası analjezi ve İzleme <ol><li> Ameliyat sonrası ağrı, ve 37 1 ml hayvan sıcak tutmak için ° C tuzlu ip yönetmek için buprenorfin (0.1 mg / kg, her 12 saat) kadar veya ketoprofen (serum fizyolojik her 12 saat, 3-5 mg / kg) ile hayvan enjekte ve su kaybını önlemek. </li><li> Temiz bir kafeste hayvan koyun ve hafif bir ısıtma yastığı yerleştirin. </li><li> Bu bilinci kazanmak ve kafes içinde hareket bir kez hayvan odasına geri hayvanlar gönder. </li><li> Aşağıdaki üç gün boyunca hastalık ve enfeksiyon belirtileri bakımından günlük olarak beklenmedik bir hayvan dikkate alınmalıdır. Fareler erişen gıda ve su operasyon sonrası 1 gün de dahil olmak üzere kafeslerde faaliyetlerinin gözlem ile takip edilmektedir. Fareler daha az faaliyetleri gösterirseniz, Ketoprofen intraperitoneal reklamdırGünde bir kez daha ministered. </li><li> Cilt zımba veya dikişler 2 hafta sonrası ameliyat çıkarın. </li><li> Xenograft dokular 8 hafta ameliyat sonrası gibi erken hasat edilebilir. Xenografts küçük hayvan ultrason (Şekil 2A) ve sabit dokular kesitli ve immünhistokimya (Şekil 3) kullanarak çeşitli proteinlerin için lekeli olabilir kullanarak in vivo olarak görüntülenebilir. </li></ol>

<ol>
	<li>Taylor, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+human+prostate+tissue+from+embryonic+stem+cells.">Formation of human prostate tissue from embryonic stem cells.</a> Nat. Methods. 3, 179-181 (2006).</li><li>Cunha, G. R., Chung, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stromal-epithelial+interactions--I.+Induction+of+prostatic+phenotype+in+urothelium+of+testicular+feminized+(Tfm/y)+mice.">Stromal-epithelial interactions--I. Induction of prostatic phenotype in urothelium of testicular feminized (Tfm/y) mice.</a> J. Steroid Biochem. 14, 1317-1324 (1981).</li><li>Cunha, G. R., Chung, L. W., Shannon, J. M., Taguchi, O., Fujii, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hormone-induced+morphogenesis+and+growth:+role+of+mesenchymal-epithelial+interactions.">Hormone-induced morphogenesis and growth: role of mesenchymal-epithelial interactions.</a> Recent Prog. Horm. Res. 39, 559-598 (1983).</li><li>Staack, A., Donjacour, A. A., Brody, J., Cunha, G. R., Carroll, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+urogenital+development:+a+practical+approach.">Mouse urogenital development: a practical approach.</a> Differentiation. 71, 402-413 (2003).</li><li>Cunha, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+and+abnormal+development+of+the+male+urogenital+tract.+Role+of+androgens,+mesenchymal-epithelial+interactions,+and+growth+factors.">Normal and abnormal development of the male urogenital tract. Role of androgens, mesenchymal-epithelial interactions, and growth factors.</a> J. Androl. 13, 465-475 (1992).</li><li>Cunha, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+factors+as+mediators+of+androgen+action+during+the+development+of+the+male+urogenital+tract.">Growth factors as mediators of androgen action during the development of the male urogenital tract.</a> World J. Urol. 13, 264-276 (1995).</li><li>Aboseif, S., El-Sakka, A., Young, P., Cunha, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+reprogramming+of+adult+human+epithelial+differentiation.">Mesenchymal reprogramming of adult human epithelial differentiation.</a> Differentiation. 65, 113-118 (1999).</li><li>Marker, P. C., Donjacour, A. A., Dahiya, R., Cunha, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hormonal,+cellular,+and+molecular+control+of+prostatic+development.">Hormonal, cellular, and molecular control of prostatic development.</a> Dev. Biol. 253, 165-174 (2003).</li><li>Cunha, G. R., Sekkingstad, M., Meloy, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterospecific+induction+of+prostatic+development+in+tissue+recombinants+prepared+with+mouse,+rat,+rabbit+and+human+tissues.">Heterospecific induction of prostatic development in tissue recombinants prepared with mouse, rat, rabbit and human tissues.</a> Differentiation. 24, 174-180 (1983).</li><li>Van der Griend, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Role+of+CD133+in+Normal+Human+Prostate+Stem+Cells+and+Malignant+Cancer+Initiating+Cells.">The Role of CD133 in Normal Human Prostate Stem Cells and Malignant Cancer Initiating Cells.</a> Cancer Res. 68, 9703-9711 (2008).</li><li>Van der Griend, D. J., Konishi, Y., De Marzo, A. M., Isaacs, J. T., Meeker, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dual-label+centromere+and+telomere+FISH+identifies+human,+rat,+and+mouse+cell+contribution+to+Multispecies+recombinant+urogenital+sinus+xenografts.">Dual-label centromere and telomere FISH identifies human, rat, and mouse cell contribution to Multispecies recombinant urogenital sinus xenografts.</a> Prostate. , (2009).</li><li>Vander Griend, D. J., Konishi, Y., De Marzo, A. M., Isaacs, J. T., Meeker, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dual-label+centromere+and+telomere+FISH+identifies+human,+rat,+and+mouse+cell+contribution+to+Multispecies+recombinant+urogenital+sinus+xenografts.">Dual-label centromere and telomere FISH identifies human, rat, and mouse cell contribution to Multispecies recombinant urogenital sinus xenografts.</a> Prostate. 69, 1557-1564 (2009).</li><li>Thomson, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+stem+cell+lines+derived+from+human+blastocysts.">Embryonic stem cell lines derived from human blastocysts.</a> Science. 282, 1145-1147 (1998).</li><li>Ludwig, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feeder-independent+culture+of+human+embryonic+stem+cells.">Feeder-independent culture of human embryonic stem cells.</a> Nat. Methods. 3, 637-646 (2006).</li><li>Prokhorova, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Teratoma+formation+by+human+embryonic+stem+cells+is+site+dependent+and+enhanced+by+the+presence+of+Matrigel.">Teratoma formation by human embryonic stem cells is site dependent and enhanced by the presence of Matrigel.</a> Stem Cells Dev. 18, 47-54 (2009).</li><li>Hameed, O., Sublett, J., Humphrey, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunohistochemical+stains+for+p63+and+alpha-methylacyl-CoA+racemase,+versus+a+cocktail+comprising+both,+in+the+diagnosis+of+prostatic+carcinoma:+a+comparison+of+the+immunohistochemical+staining+of+430+foci+in+radical+prostatectomy+and+needle+biopsy+tissues.">Immunohistochemical stains for p63 and alpha-methylacyl-CoA racemase, versus a cocktail comprising both, in the diagnosis of prostatic carcinoma: a comparison of the immunohistochemical staining of 430 foci in radical prostatectomy and needle biopsy tissues.</a> Am. J. Surg. Pathol. 29, 579-587 (2005).</li><li>Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+human+prostatic+epithelial+model+of+hormonal+carcinogenesis.">A human prostatic epithelial model of hormonal carcinogenesis.</a> Cancer Res. 61, 6064-6072 (2001).</li><li>Yao, V., Parwani, A., Maier, C., Heston, W. D., Bacich, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Moderate+expression+of+prostate-specific+membrane+antigen,+a+tissue+differentiation+antigen+and+folate+hydrolase,+facilitates+prostate+carcinogenesis.">Moderate expression of prostate-specific membrane antigen, a tissue differentiation antigen and folate hydrolase, facilitates prostate carcinogenesis.</a> Cancer Res. 68, 9070-9077 (2008).</li><li>Cunha, G. R., Cooke, P. S., Kurita, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+stromal-epithelial+interactions+in+hormonal+responses.">Role of stromal-epithelial interactions in hormonal responses.</a> Arch. Histol. Cytol. 67, 417-434 (2004).</li><li>Xin, L., Ide, H., Kim, Y., Dubey, P., Witte, O. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+regeneration+of+murine+prostate+from+dissociated+cell+populations+of+postnatal+epithelia+and+urogenital+sinus+mesenchyme.">In vivo regeneration of murine prostate from dissociated cell populations of postnatal epithelia and urogenital sinus mesenchyme.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100, 11896-11903 (2003).</li><li>Yu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lentiviral+vectors+with+two+independent+internal+promoters+transfer+high-level+expression+of+multiple+transgenes+to+human+hematopoietic+stem-progenitor+cells.">Lentiviral vectors with two independent internal promoters transfer high-level expression of multiple transgenes to human hematopoietic stem-progenitor cells.</a> Mol. Ther. 7, 827-838 (2003).</li><li>Anderson, J. S., Bandi, S., Kaufman, D. S., Akkina, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+normal+macrophages+from+human+embryonic+stem+(hES)+cells+for+applications+in+HIV+gene+therapy.">Derivation of normal macrophages from human embryonic stem (hES) cells for applications in HIV gene therapy.</a> Retrovirology. 3, 24 (2006).</li><li>Takahashi, K., Yamanaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+pluripotent+stem+cells+from+mouse+embryonic+and+adult+fibroblast+cultures+by+defined+factors.">Induction of pluripotent stem cells from mouse embryonic and adult fibroblast cultures by defined factors.</a> Cell. 126, 663-676 (2006).</li><li>Maherali, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high-efficiency+system+for+the+generation+and+study+of+human+induced+pluripotent+stem+cells.">A high-efficiency system for the generation and study of human induced pluripotent stem cells.</a> Cell Stem Cell. 3, 340-345 (2008).</li></ol>

Yazarlar çalışma sundu ile herhangi bir çıkar çatışması var.

UGSM kullanarak doku rekombinasyon prostat gelişimi ve prostat kanseri inisiyasyon yol açan moleküler olayları araştırmak için inanılmaz faydalı bir tekniktir. UGSM bir endüktif potansiyel prostat araştırma çok çeşitli uygulamalar için kullanılmıştır; bu arttırıcı tümör stromal-epitelyal etkileşimler eğitim ve türler arası prostat rekombinantlar oluşturan, prostat hücre hatları ve tümörlerin almak dahil UGSM bir 7,17-20 doğru hazırlanması. Bununla birlikte, kemirgen epitel...

Prostat kanserinin daha iyi insan modeli sistemleri için çok büyük bir ihtiyaç vardır. Özellikle, genetik olarak, prostat kanseri başlatılmasında belirli genlerin rolünü anlamak için manipüle edilebilir, normal, habis olmayan prostat dokularında ilgili insan modeli sistemler çok bilgilendirici olacaktır. Genomik çağın habercisi kanser oluşumunda rol olabilir çok sayıda gen tespit etti. Deneysel insan modeli sistemlerinin eksikliği, ancak, ciddi fonksiyonel test etmek ve aday prostat kanseri yatkınlık genleri karakterize yeteneğimizi bozar. İdeal bir model sistem uygun transgenik kemirgen model sistemler ile birlikte kanser duyarlılık genlerin hızlı ve daha hızlı fonksiyonel analiz kolaylaştıracaktır. Ayrıca, bu tür bir insan modeli sistemine yeni tedavilerin keşfi ve doğrulama doğru kanser prostat sinyal mekanizmalarının moleküler karakterizasyonu sağlayacakprostat kanseri oluşumunu önler. İnsan embriyonik kök hücreleri (hESC) xenogreftler insan prostat dokusu oluşturma yeteneğine sahiptir. 2006, Taylor et al. HESC 8-12 haftalık bir süre içinde kemirgen ürogenital sinüs mezenşim (UGSM) ile tekrar kombine edildiğinde in vivo olarak prostat epitel oluşturmak için uyarılabilir bildirmiştir. 1 Bu çalışmalar ile daha önceki çalışmaları dayandırılsaydı Bu kemirgen embriyonik UGSM gösteren Cunha laboratuvar 2,3 Prostat ürogenital sinüs (UGS) olarak adlandırılan bir embriyonik anlagen gelişir. kök hücre ve in vivo olarak embriyonik epitel hücre popülasyonlarının prostat farklılaşma teşvik ve önce embriyonik gün 17 (fare E17 olabilir , sıçan gün E18) UGS kaldırılır ve fiziksel olarak bölünmüş epitel (UGSE) içine ve mezenşimin (UGSM) 4 Bu doku rekombinasyon yaklaşım önemli ölçüde prostat gelişimi ve kanser, özellikle anlayışımızı artırmıştır edilebilir.ly büyüme faktörü ve hormonal sinyal iletim yolakları ve prostat stroma, epitel arasındaki moleküler ilişkilerin. 5-8 Bu yöntem, kök ya da aynı ya da farklı türlerden epitel hücreleri ile UGSM arasında ex vivo kombinasyonu içerir ve bu hücre / doku rekombinantlar implante ve yetiştirilen ve fare konak içinde ksenograftları. 4,9 in vivo büyüme döneminden sonra, implant stromal doku içinde gömülü prostat epitelyal glandüler yapılar içerir. Ayrıca boyama gibi yapılar gerçekten prostat ve insan kaynaklı olup olmadığını belirlemek için yapılabilir. 10,11

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td>Name</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalogue Number</td>
 <td>Comments</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Hank's Balanced Salt Solution (HBSS)</td>
 <td>GIBCO</td>
 <td>14170</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>DMEM/F12</td>
 <td>GIBCO</td>
 <td>11330</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>R1881</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>965-93-5</td>
 <td>Mix to 1 ug/ml in Ethanol (1,000x stock)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>NEAA</td>
 <td>GIBCO</td>
 <td>11140</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Pen-Strep Solution</td>
 <td>GIBCO</td>
 <td>15070</td>
 <td>100x stock</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Matrigel</td>
 <td>BD Biosciences</td>
 <td>354230</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>KETASET (ketamine hydrochloride) </td>
 <td>Fort Dodge Animal Health</td>
 <td>NDC 0856-2013-01</td>
 <td>100 mg/ml; dilute 1:10 in sterile saline </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>AnaSed (xylazine) </td>
 <td>VET-A-MIX, Inc.</td>
 <td>NADA 139-236</td>
 <td>20 mg/ml; dilute 1:10 in sterile saline</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Trypsin</td>
 <td>BD Biosciences</td>
 <td>215240</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Collagenase </td>
 <td>Sigma</td>
 <td>C2014</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ketoprofen </td>
 <td>Fort Dodge</td>
 <td>NDC 0856-4396-01</td>
 <td>100 mg/ml; dilute 1:1,000 in sterile saline</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Altalube eye ointment </td>
 <td>Altaire Pharmaceuticals, Inc.</td>
 <td>NLC 56641-19850</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Leica MZ16 F Stereomicroscope</td>
 <td>Leica</td>
 <td></td>
 <td>Any good dissecting scope can be used.</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Vannas spring scissors</td>
 <td>Fine Science Tools</td>
 <td>15001-08</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Syringe</td>
 <td>Hamilton</td>
 <td>84855</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Hamilton Needle, Small RN, 28 gauge, 0.5inches, Point Style #3 (Blunt)</td>
 <td>Hamilton</td>
 <td>7803-02 </td>
 <td>Custom Needle </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ethanol Prep Pads</td>
 <td>Fisher Scientific</td>
 <td>06-669-62 </td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Sterile Gauze Pads</td>
 <td>Fisher Scientific</td>
 <td>22-415-469 </td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ethicon Vicryl Suture (4-0 FS-2)</td>
 <td>MedVet International</td>
 <td>J392H </td>
 <td>Needle-in, dissolvable suture </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Autoclip 9 mm Wound Clips</td>
 <td>Becton Dickenson</td>
 <td>427631</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>PVP Iodine Prep Pads</td>
 <td>Fisher Scientific</td>
 <td>06-669-98 </td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Dissector scissor with blunt end</td>
 <td>Fine Science Tools</td>
 <td>14072-10</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Dumont fine tip forceps</td>
 <td>Fine Science Tools</td>
 <td>11252-50</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Needle holder with Scissor</td>
 <td>Fine Science Tools</td>
 <td>12002-14</td>
 <td></td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

formation of human prostate epithelium using tissue recombination of rodent urogenital sinus mesenchyme and human stem cells

Prostat kanseri araştırmalarında ilerleme ciddi prostat hastalığın başlangıcında altta yatan genetik ve moleküler olayları anlamak için yeteneğimizi sınırı insan kaynaklı ve hormon-naif model sistemler, durumu ile sınırlıdır. Kanser insan prostat çalışmak için daha iyi bir model sistemlerinin geliştirilmesi doğru, biz ve diğerleri, embriyonik kemirgen prostat stromanın eşsiz yanlısı prostat endüktif potansiyel yararlanmaktadır ürogenital sinüs mezenşimin (UGSM) olarak adlandırdığı. Embriyonik kök hücreleri gibi belirli pluripotent hücre popülasyonu ile rekombine olduğunda, UGSM bir testosteron bağımlı bir şekilde normal bir insan prostat epitel oluşumuna neden olur. Böyle bir insan modeli sistemi araştırmak ve deneysel olarak tipik bir kemirgen transgenik çalışmalara kıyasla daha hızlı bir biçimde aday prostat kanserine yatkınlık genlerinin yeteneğini test etmek için de kullanılabilir. İnsan embriyonik kök hücreleri (hESC) genetik kültür istimal olarak değiştirilebilir yanadoku rekombinasyon önce g indüklenebilir gen veya siRNA knock-down vektörler, böyle bir model genlerin fonksiyonel sonuçları test kolaylaştırır, ya da teşvik ya da kanser önlemek için düşünülen gen kombinasyonları,. UGSM hücre saf nüfus izole tekniği, ancak zordur ve genellikle öğrenme önceki uzmanlık kimse ile kişisel olarak öğretmek gerekir. Dahası, immün sistemi baskılanmış ana böbrek kapsülü altında hücre karışımlarının aşılama teknik zor olabilir. Burada anahat ve kemirgen embriyo ve insan prostat epitel oluşturmak için doku karışımları böbrek kapsül implantasyon gelen UGSM uygun izolasyon göstermektedir. Böyle bir yaklaşım, mevcut aşamada, embriyonik kök hücrelerin xenografting in vivo gerektirir; gelecekteki uygulamalar potansiyel in vitro bezi oluşumu veya uyarılmış pluripotent kök hücre popülasyonlarının (iPSCs) kullanımı dahil olabilir.

Taylor ve ark. Tarafından heyecan verici rapor üzerine inşa, bizim laboratuar yaygın olarak kullanılan H1 (NIH-tahsis edilmiş WA01, genetik olarak erkek) insan embriyonik kök hücre hattı. 1 Bu satır sıkı kalite kontrol için test edilmiş ve kullanarak bir yerleştirilmesiyle protokolü geliştirdi karyotipik normaldir 13 uygun kültüre zaman, embriyonik kök hücreleri genişletilmiş, muhafaza ve besleyici içermeyen kültür yöntemi (Kök Hücre Teknolojileri ile ticari be...

Watch this Scientific Journal Video about Formation of Human Prostate Epithelium Using Tissue Recombination of Rodent Urogenital Sinus Mesenchyme and Human Stem Cells at JoVE.com

Formation of Human Prostate Epithelium Using Tissue Recombination of Rodent Urogenital Sinus Mesenchyme and Human Stem Cells

Prostat kanseri başlangıcı, yeni ve yenilikçi insan model sistemler ve yaklaşımlar altında yatan en erken moleküler mekanizmaları umutsuzca ihtiyaç vardır çözülmeye. Insan prostat epitel oluşturmak için pluripotent kök hücre popülasyonlarının ikna etmek için önceden prostat ürogenital sinüs mezenşimin (UGSM) potansiyel prostat araştırma güçlü deneysel bir araçtır.

Kemirgen Ürogenital Sinüs mezenşimin ve İnsan Kök Hücre Doku Rekombinasyon kullanarak İnsan Prostat epiteli oluşumu

Progress in prostate cancer research is severely  limited by the availability of human-derived and hormone-na&iuml;ve model systems,  which limit our ...

formation-human-prostate-epithelium-using-tissue-recombination-rodent

Research

JoVE Journal

Medicine

13.6K Görüntüleme.  University of Chicago. Prostat kanseri başlangıcı, yeni ve yenilikçi insan model sistemler ve yaklaşımlar altında yatan en erken moleküler mekanizmaları umutsuzca ihtiyaç vardır çözülmeye. Insan prostat epitel oluşturmak için pluripotent kök hücre popülasyonlarının ikna etmek için önceden prostat ürogenital sinüs mezenşimin (UGSM) potansiyel prostat araştırma güçlü deneysel bir araçtır.

Video: Formation of Human Prostate Epithelium Using Tissue Recombination of Rodent Urogenital Sinus Mesenchyme and Human Stem Cells

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

Stem cell transplantation protocols are finding their way into clinical practice1,2,3. Getting better results, making the protocols more robust, and finding new sources for implantable cells are the focus of recent research4,5. Investigating the effectiveness of cell therapies is not an easy task and new tools are needed to investigate the mechanisms involved in the treatment process6. We designed an experimental protocol of ischemia/reperfusion in order to allow the observation of cellular connections and even subcellular mechanisms during ischemia/reperfusion injury and after stem cell transplantation and to evaluate the efficacy of cell therapy. H9c2 cardiomyoblast cells were placed onto cell culture plates7,8. Ischemia was simulated with 150 minutes in a glucose free medium with oxygen level below 0.5%. Then, normal media and oxygen levels were reintroduced to simulate reperfusion. After oxygen glucose deprivation, the damaged cells were treated with transplantation of labeled human bone marrow derived mesenchymal stem cells by adding them to the culture. Mesenchymal stem cells are preferred in clinical trials because they are easily accessible with minimal invasive surgery, easily expandable and autologous. After 24 hours of co-cultivation, cells were stained with calcein and ethidium-homodimer to differentiate between live and dead cells. This setup allowed us to investigate the intercellular connections using confocal fluorescent microscopy and to quantify the survival rate of postischemic cells by flow cytometry. Confocal microscopy showed the interactions of the two cell populations such as cell fusion and formation of intercellular nanotubes. Flow cytometry analysis revealed 3 clusters of damaged cells which can be plotted on a graph and analyzed statistically. These populations can be investigated separately and conclusions can be drawn on these data on the effectiveness of the simulated therapeutical approach.

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

We demonstrate how to set up an in vitro ischemia/reperfusion model and how to evaluate the effect of stem cell therapy on postischemic cardiac cells.

Bir Kök Hücre Nakli In vitro Simüle İskemi / Reperfüzyon Modeli

Stem cell transplantation protocols are finding their way into clinical practice1,2,3. Getting better results, making the protocols more robust, and ...

Tıp

Subretinal Injection of Gene Therapy Vectors and Stem Cells in the Perinatal Mouse Eye

The loss of sight affects approximately 3.4 million people in the United States and is expected to increase in the upcoming years.1 Recently, gene therapy and stem cell transplantations have become key therapeutic tools for treating blindness resulting from retinal degenerative diseases. Several forms of autologous transplantation for age-related macular degeneration (AMD), such as iris pigment epithelial cell transplantation, have generated encouraging results, and human clinical trials have begun for other forms of gene and stem cell therapies.2 These include RPE65 gene replacement therapy in patients with Leber's congenital amaurosis and an RPE cell transplantation using human embryonic stem (ES) cells in Stargardt's disease.3-4 Now that there are gene therapy vectors and stem cells available for treating patients with retinal diseases, it is important to verify these potential therapies in animal models before applying them in human studies. The mouse has become an important scientific model for testing the therapeutic efficacy of gene therapy vectors and stem cell transplantation in the eye.5-8 In this video article, we present a technique to inject gene therapy vectors or stem cells into the subretinal space of the mouse eye while minimizing damage to the surrounding tissue.

This surgical technique illustrates the injection of gene therapy vectors and stem cells into the subretinal space of the mouse eye.

Fare Göz içine Gen Terapisi Vektörler ve Kök Hücre Subretinal Enjeksiyon

The loss of sight affects approximately 3.4 million people in the United States and is expected to increase in the upcoming years.1 Recently, gene therapy ...

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human pulp-derived stem cells (hDPSCs) possess high proliferation potential with multi-lineage differentiation capacity compare to the ordinary source of adult stem cells1-8; therefore, hDPSCs could be the good candidates for autologous transplantation in tissue engineering and regenerative medicine. Along with these benefits, possessing the mesenchymal stem cells (MSC) features, such as immunolodulatory effect, make hDPSCs more valuable, even in the case of allograft transplantation6,9,10. Therefore, the primary step for using this source of stem cells is to select the best protocol for isolating hDPSCs from pulp tissue. In order to achieve this goal, it is crucial to investigate the effect of various isolation conditions on different cellular behaviors, such as their common surface markers &amp; also their differentiation capacity.
Thus, here we separate human pulp tissue from impacted third molar teeth, and then used both existing protocols based on literature, for isolating hDPSCs,11-13 i.e. enzymatic dissociation of pulp tissue (DPSC-ED) or outgrowth from tissue explants (DPSC-OG). In this regards, we tried to facilitate the isolation methods by using dental diamond disk. Then, these cells characterized in terms of stromal-associated Markers (CD73, CD90, CD105 &amp; CD44), hematopoietic/endothelial Markers (CD34, CD45 &amp; CD11b), perivascular marker, like CD146 and also STRO-1. Afterwards, these two protocols were compared based on the differentiation potency into odontoblasts by both quantitative polymerase chain reaction (QPCR) &amp; Alizarin Red Staining. QPCR were used for the assessment of the expression of the mineralization-related genes (alkaline phosphatase; ALP, matrix extracellular phosphoglycoprotein; MEPE &amp; dentin sialophosphoprotein; DSPP).14

The method described isolation and characterization of human Dental Pulp Stem Cells (hDPSCs) by using either enzymatic dissociation of pulp (DPSC-ED) or direct outgrowth of stem cells from pulp tissue explants (DPSC-OG). Then followed by in vitro comparative differentiation of both types of hDPSCs into odontoblasts.

İnsan Diş Pulp Kök Hücre İzolasyonu, Karakterizasyonu ve Karşılaştırmalı Farklılaşma İki Farklı Yöntemler Kullanılarak Daimi Dişler türetilen

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

An Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer Metastasis

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but rather the formation of distinct metastasis, the ability to effectively model this progression pre-clinically is of high value. In this model, cells are directly implanted into the ventral lobe of the prostate in Balb/c athymic mice, and allowed to progress for 4-6 weeks. At experiment termination, several distinct endpoints can be measured, such as size and molecular characterization of the primary tumor, the presence and quantification of circulating tumor cells in the blood and bone marrow, and formation of metastasis to the lung. In addition to a variety of endpoints, this model provides a picture of a cells ability to invade and escape the primary organ, enter and survive in the circulatory system, and implant and grow in a secondary site. This model has been used effectively to measure metastatic response to both changes in protein expression as well as to response to small molecule therapeutics, in a short turnaround time.

This orthotopic model of human prostate cancer allows for quantification of tumor size, circulating tumor cells, and formation of distinct metastasis to the lung. As cells must escape the primary organ, enter the blood stream, and implant into a secondary site, this model effectively recapitulates the scenario in humans.

İnsan Prostat Kanser metastaz Ortotopik fare modeli

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of  human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but  ...

Isolation of Cancer Stem Cells From Human Prostate Cancer Samples

The cancer stem cell (CSC) model has been considerably revisited over the last two decades. During this time CSCs have been identified and directly isolated from human tissues and serially propagated in immunodeficient mice, typically through antibody labeling of subpopulations of cells and fractionation by flow cytometry. However, the unique clinical features of prostate cancer have considerably limited the study of prostate CSCs from fresh human tumor samples. We recently reported the isolation of prostate CSCs directly from human tissues by virtue of their HLA class I (HLAI)-negative phenotype. Prostate cancer cells are harvested from surgical specimens and mechanically dissociated. A cell suspension is generated and labeled with fluorescently conjugated HLAI and stromal antibodies. Subpopulations of HLAI-negative cells are finally isolated using a flow cytometer. The principal limitation of this protocol is the frequently microscopic and multifocal nature of primary cancer in prostatectomy specimens. Nonetheless, isolated live prostate CSCs are suitable for molecular characterization and functional validation by transplantation in immunodeficient mice.

The isolation of cancer stem cells (CSCs) directly from human tissues is requisite for their biological characterization. This manuscript describes a methodology for the isolation of prostate CSCs from human tissues, while also providing tips on troubleshooting difficult steps.

İnsan Prostat Kanseri Örneklerinden Kanser Kök Hücreleri İzolasyon

The cancer stem cell (CSC) model has been considerably revisited over the last two decades. During this time CSCs have been identified and directly ...

Laser-capture Microdissection of Human Prostatic Epithelium for RNA Analysis

The prostate gland contains a heterogeneous milieu of stromal, epithelial, neuroendocrine and immune cell types. Healthy prostate is comprised of fibromuscular stroma surrounding discrete epithelial-lined secretory lumens and a very small population of immune and neuroendocrine cells. In contrast, areas of prostate cancer have increased dysplastic luminal epithelium with greatly reduced or absent stromal population. Given the profound difference between stromal and epithelial cell types, it is imperative to separate the cell types for any type of downstream molecular analysis. Despite this knowledge, the bulk of gene expression studies compare benign prostate to cancer without micro-dissection, leading to stromal bias in the benign samples. Laser-capture micro-dissection (LCM) is an effective method to physically separate different cell types from a specimen section. The goal of this protocol is to show that RNA can be successfully isolated from LCM-collected human prostatic epithelium and used for downstream gene expression studies such as RT-qPCR and RNAseq.

The goal of this protocol is to use laser-capture micro-dissection as an effective method to isolate pure populations of cell types from heterogeneous prostate tissues for downstream RNA analysis.

RNA Analizi İnsan Prostat Epitelinin Lazer yakalama mikrodiseksiyon

The prostate gland contains a heterogeneous milieu of stromal, epithelial, neuroendocrine and immune cell types.  Healthy prostate is comprised of ...

Pre-clinical Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer

To study the multifaceted biology of prostate cancer, pre-clinical in vivo models offer a range of options to uncover critical biological information about this disease. The human orthotopic prostate cancer xenograft mouse model provides a useful alternative approach for understanding the specific interactions between genetically and molecularly altered tumor cells, their organ microenvironment, and for evaluation of efficacy of therapeutic regimens. This is a well characterized model designed to study the molecular events of primary tumor development and it recapitulates the early events in the metastatic cascade prior to embolism and entry of tumor cells into the circulation. Thus it allows elucidation of molecular mechanisms underlying the initial phase of metastatic disease. In addition, this model can annotate drug targets of clinical relevance and is a valuable tool to study prostate cancer progression. In this manuscript we describe a detailed procedure to establish a human orthotopic prostate cancer xenograft mouse model.

Prostate cancer is the second most common cause of cancer-related deaths in the United States. An orthotopic cancer model provides a useful approach to understand the biology of prostate cancer and to evaluate the efficacy of therapeutic regimens. This protocol describes detailed steps necessary to establish an orthotopic prostate cancer mouse model.

İnsan Prostat Kanseri klinik öncesi Ortotopik murin modeli

To study the multifaceted biology of prostate cancer, pre-clinical in vivo models offer a range of options to uncover critical biological information ...

Generation of a Humanized Mouse Liver Using Human Hepatic Stem Cells

A novel animal model involving chimeric mice with humanized livers established via human hepatocyte transplantation has been developed. These mice, in which the liver has been repopulated with functional human hepatocytes, could serve as a useful tool for investigating human hepatic cell biology, drug metabolism, and other preclinical applications. One of the key factors required for successful transplantation of human hepatocytes into mice is the elimination of the endogenous hepatocytes to prevent competition with the human cells and provide a suitable space and microenvironment for promoting human donor cell expansion and differentiation. To date, two major liver injury mouse models utilizing fumarylacetoacetate hydrolase (Fah) and uroplasminogen activator (uPA) mice have been established. However, Fah mice are used mainly with mature hepatocytes and the application of the uPA model is limited by decreased breeding. To overcome these limitations, Alb-toxin receptor mediated cell knockout (TRECK)/SCID mice were used for in vivo differentiation of immature human hepatocytes and humanized liver generation. Human hepatic stem cells (HpSCs) successfully repopulated the livers of Alb-TRECK/SCID mice that had developed lethal fulminant hepatic failure following diphtheria toxin (DT) treatment. This model of a humanized liver in Alb-TRECK/SCID mice will have functional applications in studies involving drug metabolism and drug-drug interactions and will promote other in vivo and in vitro studies.

Here, we present a novel humanized mouse liver model generated in Alb-toxin receptor mediated cell knockout (TRECK)/SCID mice following the transplantation of immature and expandable human hepatic stem cells.

İnsan Karaciğer Kök Hücreler kullanma Insanlaşmış Fare Karaciğer Üretimi

A novel animal model involving chimeric mice with humanized livers established via human hepatocyte transplantation has been developed. These mice, in ...

Assessment of Human Adipose Tissue Microvascular Function Using Videomicroscopy

While obesity is closely linked to the development of metabolic and cardiovascular disease, little is known about mechanisms that govern these processes. It is hypothesized that pro-atherogenic mediators released from fat tissues particularly in association with central/visceral adiposity may promote pathogenic vascular changes locally and systemically, and the notion that cardiovascular disease may be the consequence of adipose tissue dysfunction continues to evolve. Here, we describe a unique method of videomicroscopy that involves analysis of vasodilator and vasoconstrictor responses of intact small human arterioles removed from the adipose depot of living human subjects. Videomicroscopy is used to examine functional properties of isolated microvessels in response to pharmacological or physiological stimuli using a pressured system that mimics in vivo conditions. The technique is a useful approach to gain understanding of the pathophysiology and molecular mechanisms that contribute to vascular dysfunction locally within the adipose tissue milieu. Moreover, abnormalities in the adipose tissue microvasculature have also been linked with systemic diseases. We applied this technique to examine depot-specific vascular responses in obese subjects. We assessed endothelium-dependent vasodilation to both increased flow and acetylcholine in adipose arterioles (50 - 350 &#181;m internal diameter, 2 - 3 mm in length) isolated from two different adipose depots during bariatric surgery from the same individual. We demonstrated that arterioles from visceral fat exhibit impaired endothelium-dependent vasodilation compared to vessels isolated from the subcutaneous depot. The findings suggest that the visceral microenvironment is associated with vascular endothelial dysfunction which may be relevant to clinical observation linking increased visceral adiposity to systemic disease mechanisms. The videomicroscopy technique can be used to examine vascular phenotypes from different fat depots as well as compare findings across individuals with different degrees of obesity and metabolic dysfunction. The method can also be used to examine vascular responses longitudinally in response to clinical interventions.

Videomicroscopy systems are used to examine functional properties of isolated adipose tissue arterioles in response to physiological and pharmacological stimuli. This technique can be used to examine microvascular phenotypes in different adipose tissue domains in obese humans.

İnsan yağ dokusu mikrovasküler işlevini kullanarak Videomicroscopy değerlendirilmesi

While obesity is closely linked to the development of metabolic and cardiovascular disease, little is known about mechanisms that govern these processes. ...

Characterization of Immune Cells in Human Adipose Tissue by Using Flow Cytometry

Infiltration of immune cells in the subcutaneous and visceral adipose tissue (AT) deposits leads to a low-grade inflammation contributing to the development of obesity-associated complications such as type 2 diabetes. To quantitatively and qualitatively investigate the immune cell subsets in human AT deposits, we have developed a flow cytometry approach. The stromal vascular fraction (SVF), containing the immune cells, is isolated from subcutaneous and visceral AT biopsies by collagenase digestion. Adipocytes are removed after centrifugation. The SVF cells are stained for multiple membrane-bound markers selected to differentiate between immune cell subsets and analyzed using flow cytometry. As a result of this approach, pro- and anti-inflammatory macrophage subsets, dendritic cells (DCs), B-cells, CD4+ and CD8+ T-cells, and NK cells can be detected and quantified. This method gives detailed information about immune cells in AT and the amount of each specific subset. Since there are numerous fluorescent antibodies available, our flow cytometry approach can be adjusted to measure various other cellular and intracellular markers of interest.

This article describes a method to analyze immune cell content of adipose tissue by isolation of immune cells from adipose tissue and subsequent analysis using flow cytometry.