Yazarlar yazının düzenleme için mali destek ve Dr Fanie Barnabé-Heider ADIR (İkametgah aux Insuffisants Respiratoires à Aide) ve Fondation de l&#39;Avenir kabul etmek istiyorum.

1.. Koku Mukozası ve Koku Ampuller İlköğretim Kültürleri <ol><li> Diseksiyon önce <ol><li> 44 ml ilave etmek suretiyle, 50 ml, orta Make kalsiyum içermeyen Dulbecco Modifiye Eagle / Fetal Sığır Serumu (FBS), 5 ml ve penisilin / streptomisin, 1 ml ile takviye edilmiş Ham F12 ortamı (DMEM/F12). </li><li> Coat 75 cm, poli-L-lisin (50 ug / ml, 1.5 ug / cm 2), oda sıcaklığında 1 saat ile 2 şişe hazırlanmıştır. </li><li> PBS 1x şişeler durulayın. </li><li> 1 hafta kadar buzdolabında kaplı şişeler saklayın. </li></ol></li><li> Teşrih <ol><li> Ötenazi herhangi bir yöntem kurumun hayvan bakımı ve kullanımı komitesi tarafından önceden onaylanan ve kalifiye personel tarafından yapılmalıdır. </li><li> Böyle Fischer sıçanlar gibi tabii fareleri seçin. </li><li> Sıçan sodyum pentobarbital veya ketamin / ksilizin gibi anestezi diğer enjekte formları ile derin anestezi girmiş onaylandıktan sonra, onu ve r başını kesmekcildi birikimleri temizlenmelidir. </li><li> Anterior posterior kısmına kafatası açın. </li><li> Meninks önlemek için OB alarak bakım çıkarın. </li><li> Aynı sıçan olarak, burun boşluğu sagittaly açın. </li><li> OM solunum mukozasını önlemek için dikkat çekici Kaldır. OM epitel kolayca sarımsı renk ile tespit edilebilir olduğunu unutmayın. </li><li> OM diseksiyonu hakkında ayrıntılı protokoller bir önceki bulmak olabilir <a href="https://www.jove.com/video/2762/isolating-nasal-olfactory-stem-cells-from-rodents-or-humans">J. Vis. Uzm</a> . yayın 13. </li></ol></li><li> Kültür <ol><li> 37 ° C&#39;de 45 dakika boyunca% 0.1 tripsin içeren Hank tamponlu tuz çözeltisi (HBSS) içinde OB yerleştirin </li><li> 37 ° C&#39;de 45 dakika boyunca% 0.05 kolajenaz A içeren HBSS içinde OM yerleştirin </li><li> Sıcak ortam 2 ml ilave etmek suretiyle enzimatik sindirim durdurun. </li><li> Ortamı ile yıkayın ve 3 dakika boyunca 300 x g&#39;de santrifüj. </li><li> 2 öğütün örnekleriHomojen bir hücre süspansiyonu elde edilene kadar bir P1000 pipet kullanarak orta ml. </li><li> Sıcak ortam, 25 ml önceden kaplanmış cam kaplarda (5-10 x 10 6 hücre / şişe) hücreleri Plate. </li><li> % 5 CO2 ile 37 ° C&#39;de inkübe edilir ve hücreleri kültürü. </li><li> Her 2 günde bir ortamın yarısı değiştirin. </li><li> In vitro 6-8 gün sonra, küçük hücre örneklerinin p75 üzerinde pozitif hücrelerinin oranını kontrol sitometrisi veya immünositokimya akışı ile, kemirgenlerde OECS olduğu varsayılır. Bu analizler için, diğer belirteçler gibi GFAP ve S100β olarak ele alınabilir. </li></ol></li><li> Akış sitometri analizi <ol><li> &quot;Hücresel transplantasyon&quot; (bölüm aşağıdaki 2.2) de tarif edildiği gibi hücreler toplayın. </li><li> 4 ° C&#39;de 15 dakika boyunca p75 primer antikor (1:100) ile inkübe </li><li> PBS-EDTA ile 2 ml hücreleri yıkanır ve 3 dakika boyunca 300 x g&#39;de santrifüj. </li><li> 15 boyunca PE konjüge anti-fare ikincil antikoru ile hücrelerin inkübe(1:200) karanlıkta 4 ° C&#39;de min. </li><li> PBS-EDTA ile 2 ml hücreleri yıkanır ve 3 dakika boyunca 300 x g&#39;de santrifüj. </li><li> PBS-EDTA 500 ul içinde tekrar süspansiyon hücreleri. </li><li> Akış-Sitometre 10-30 x 10 3 hücre analiz. </li></ol></li><li> İmmünositokimya analizi <ol><li> &quot;Kültür&quot; (aşağıda bölüm 1.1.2) de tarif edildiği gibi, 48 saat için kaplanmış, 6 oyuklu plakalar içerisinde hücreleri Plate. </li><li> Hücrelerin PBS ile yıkayın. </li><li> Oda sıcaklığında 15 dakika boyunca% 4 PFA ile hücrelerin düzeltildi. </li><li> Hücrelerin PBS ile yıkayın. </li><li> Oda sıcaklığında 15 dakika boyunca PBS / Triton X100 (% 0.1) ile hücrelerin inkübe edin. </li><li> Hücrelerin PBS ile yıkayın. </li><li> Birincil antikor (1:200) ile hücrelerin inkübe: gece boyunca 4 ° C &#39;de p75, S100β ve GFAP </li><li> Hücrelerin PBS ile yıkayın. </li><li> Karanlıkta oda sıcaklığında 1 saat boyunca, ikincil antikorlar (1:500) ile hücrelerin inkübe edin. </li><li> Hücrelerin PBS ile yıkayın. </li><li> R de Hoechst 10 dakika ile hücreleri inkübeKaranlıkta T. </li><li> Hücrelerin PBS ile yıkayın. </li><li> Bir floresan mikroskop kullanarak hücreleri analiz edin. </li></ol></li><li> GFP etiketleme hücreleri <ol><li> Beş gün önce, transplantasyon, geliştirilmiş GFP 20 (enfeksiyon çokluğu) barındıran lentiviral vektör ile gece boyunca OB ve OM kültürlerini enfekte. </li><li> Küçük örnekler &quot;kültür&quot; (bölüm 1.1) daha önce açıklandığı gibi akış sitometri ile GFP pozitif hücrelerin oranı üzerinde transplantasyon önce check. </li></ol></li></ol> 2. Cerrahi ve Transplantasyon <ol><li> Tekrarlayan sinir anastomoz <ol><li> Hayvanlarla Tüm deneyler kurumun hayvan bakımı ve kullanımı komitesi tarafından önceden onaylanan ve kalifiye personel tarafından yapılmalıdır. </li><li> Önce cerrahi otoklav tüm araçlar ve cerrahi prosedürler boyunca sterilite korumak. </li><li> Ketamin hidroklorür intraperitoneal enjeksiyon (12.5 mg / kg) ve klorpromazin hidroklorür ile (fare anestezisi0.625 mg / kg). Ameliyat öncesi ayak tutam tarafından anestezi yeterliliğini değerlendirmek. </li><li> Dorsal yatar sıçan yerleştirin. </li><li> Bir neşter ile 2 cm dikey orta servikal deri kesi yapmak. </li><li> Medial beyaz çizgi izleyen infrahyoid kasların dikey bir kesi yapmak. </li><li> Infrahyoid kaslar arasındaki autostatic ekartörünü kullanarak Larenksi Açığa. </li><li> Rln Açığa. </li><li> Mikroskobik kontrolünde, yedinci trakeal halka seviyesinde microscissors tam olarak sinir kesti. </li><li> Mikroskopik kontrol altında 11.0 sütür bir noktasını kullanarak anastomoz gerçekleştirin. Bu ameliyat gırtlak belirli bir motor denervasyon yol açar. </li></ol></li><li> Hücre transplantasyonu <ol><li> Sadece transplantasyonundan önce, 37 ° C&#39;de 5 dakika boyunca% 0.05 tripsin EDTA kullanılarak tabaklardan hücreleri çıkarmak </li><li> Sıcak ortam 2 ml ilave etmek suretiyle enzimatik sindirim durdurun. </li><li> 3 dakika boyunca 300 x g&#39;de santrifüj. </li><li&gt;, bir mikroskop altında bir hemasitometre kullanarak hücreleri sayın ve belirli bir protokole uygun olarak hücre konsantrasyonunu ayarlamak. Bu modelde, arzu edilen konsantrasyonlar DMEM/F12 30 ul 6 ila 10 x 1.2-6 arasında hücre idi. </li><li> Aşılama önce 1.5 ml bir tüp içinde DMEM/F12-Matrige l 01:02 karışımı (bu deneyde 30 ve 60 ul) ile hücre hazırlık yapmak ve buz üzerine yerleştirin. , Belirsiz etkilerini önlemek Matrigel azaltılmış büyüme faktörü kullanın. </li><li> Sadece transplantasyon öncesinde Matrigel-orta karışımı ısınmak için birkaç saniye için elinizde tüpü tutmak. </li><li> Bir pipet kullanarak anastomoz üzerinde karışımı azletmek ve yaralı sinir üzerinde karışım kendini kurullarının kadar bekleyin. </li><li> Bir 4.0 sütür ile kaslar ve cilt kapatın. </li><li> Ev fareler tek tek ve 24 saat için bir ısıtma lambası altında tutun. </li></ol></li></ol> 3. Değerlendirme <ol><li> Laringoskopide <ol><li> Intraperit tarafından sıçan anestezisiketamin hidroklorür (12.5 mg / kg) ve klorpromazin hidroklorür (0.625 mg / kg) enjeksiyonu oneal. Onay sıçan önceki protokol ile devam bir ayak tutam ile anestezi uygulanmıştır. </li><li> Dorsal yatar sıçan yerleştirin. </li><li> Gırtlak en iyi görünümü sağlamak için ayarlanabilir bir 30 ° videolaryngoscope yerleştirin. Her kayıt için aynı görünüm çoğaltmak anatomik yerler belirleyin. </li><li> Videolaryngoscope (5-10 dizileri / hayvan) kullanılarak vokal kord hareketleri kaydedin. Her hayvan için ardışık maksimal adduksiyonda ve maksimal kaçırılma üç dizileri seçmek. </li><li> Görüntü analizi yazılımı kullanılarak laringeal fonksiyonunu analiz. Maksimal kaçırılması ve ses tellerinin maksimal adduksiyon hareketi arasındaki farkı ölçerek mutlak açısal hareketini belirlemek. Hareket genliği ölçülerek dinamik puanı belirler. Synkinesis ve paradoksal hareketlerini ölçerek fonksiyonel skoru belirleyin. </li></ol></li><li> Elektromiyografi (EMG) <ol><li&gt; elektriksel izolasyonu için sıçanın hamstring kaslar üzerinde bir elektrot yerleştirin. </li><li> &quot;Tekrarlayan sinir anastomoz&quot; (bölüm 2.1) daha önce açıklandığı gibi cilt ve kasların açarak gırtlak ve trakea Açığa. </li><li> Krikotiroid kıkırdak Açığa. </li><li> Microscissors kullanarak posterior krikoaritenoid (PCA) kas maruz krikotiroid kıkırdak açın. </li><li> PCA kas monopolar iğne elektrodu (38 x 0.45 mm) tanıtmak. </li><li> Spontan ventilasyon sırasında bir toplama sistemi kullanılarak PCA kasın elektriksel kas aktivitesini kaydedin. </li><li> Solunum ile zenginliği ve senkronizasyon açısından kas aktivitesini analiz. , Zengin aktivite ile izleme kafiyeli: artan solunum ile izleme kafiyeli, ama kötü tracing (neurogen), 2: ilham, 1 sırasında kafiyesiz aydınger, artış olmadan: 0: EMGs analiz etmek, aşağıdaki ölçeği kullanarak 0-3 nitel bir puan atamak 3: bir i oluşturan, çok zengin izleme kafiyelimaksimal kasıtlı aktivitesine benzer nterference model. </li><li> Gecikme ve potansiyel süresini ölçmek için vagus siniri ortaya. RLN nedeniyle küçük boyutu uyarılması sırasında zarar görebilir çünkü vagus siniri uyarımı yeri olarak seçilir. </li><li> Bir elektrod ile vagus siniri uyarır. </li><li> PCA kas elektrik sinyallerini kaydedin. Gecikme ve potansiyel süresini ölçün. Mümkünse bu tür Powerlab sistemi gibi kas aktivitesini, gecikme ve potansiyel süresini kaydetmek için bir satın alma modülünü kullanabilirsiniz. </li></ol></li><li> Histoloji <ol><li> Pentobarbital doz aşımı ile hayvan Euthanize. </li><li> Mikroskopik kontrol altında RLS distal güdük çıkarın. RLS distal kısmı anastomoz ve gırtlak arasındaki bir parçası olarak tanımlanır. Bu 11.0 sütür emilemeyen dikiş çünkü birkaç hafta cerrahi sonrası anastomoz site bulmak mümkün olduğunu unutmayın. </li><li> 0.1 M fosfat ile% 2 glutaraldehid RLS distal kısmını yerleştirin4 ° C&#39;de 2 saat boyunca (pH = 7.3) </li><li> Dikkatle koronal bölümleri gerçekleştirmek için örnekleri yönlendirmek. </li><li> Fosfat tamponunda örnekleri yıkayın. </li><li> % 1 kakodilat içinde, oda sıcaklığında 60 dakika boyunca küçük parçaları (3-4 mm uzunluk) ve postfix&#39;i in kesin OsO 4 ve etanol ile susuz tamponlu. </li><li> Orient silikon kalıplara örnekler ve, POLYBED 812, DDSA ve MNA olarak oluşan reçineler gömülü hızlandırıcı BDMA% 2 ilave edilmiştir. </li><li> Bir Pyramitome Ultramikrotom Sistemi kullanılarak yarı-ince enine kesitler (1 Pm&#39;lik-kalın) yapmak. </li><li> , 70 ° C&#39;de 75 saniye süre ile% 1 sodyum tetraborat içinde% 0.1 Toluidin Mavisi ile leke </li><li> Bir sayma analiz sistemi ile RLN örnekleri analiz. Elyaf sayısını ve miyelin kılıfının dış ve iç sınır belirleyerek miyelinli sinir lifleri profillerini ölçmek. </li></ol></li><li> Transplantasyon <ol><li> Nakli için hücrelerin hazırlanması ve daha önce tarif hücreleri nakli&quot;hücresel transplantasyon&quot; (bölüm 2.2). </li><li> Analiz </li><li> Pentobarbital doz aşımı ile hayvan Euthanize. Hayvanların bu sabitleme PFA intrakardiyak enjeksiyonu% 4 kullanılarak gerçekleştirilebilir edin. </li><li> RLS yaklaşık 2 cm çıkarın. Proksimal ve RLS distal parçaları kullanın. </li><li> Sıvı azot içinde RLN örnek düzeltildi. </li><li> -80 ° C&#39;de saklayın örnekleri </li><li> Kesim örnekleri boyuna sirostat (10-20 mikron kalınlığında) kullanarak. </li><li> GFP pozitif hücreleri algılamak için floresan mikroskop altında örnekleri analiz. Anti-GFP floresan emisyonu antikor geliştirmek için ve costainings gerçekleştirmek için kullanılabilir unutmayın. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Barraud, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+crest+origin+of+olfactory+ensheathing+glia.">Neural crest origin of olfactory ensheathing glia.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, 21040-21045 (2010).</li><li>Guerout, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+gene+expression+profiling+of+olfactory+ensheathing+cells+from+olfactory+bulb+and+olfactory+mucosa.">Comparative gene expression profiling of olfactory ensheathing cells from olfactory bulb and olfactory mucosa.</a> Glia. 58, 1570-1580 (1002).</li><li>Honore, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation,+characterization,+and+genetic+profiling+of+subpopulations+of+olfactory+ensheathing+cells+from+the+olfactory+bulb.">Isolation, characterization, and genetic profiling of subpopulations of olfactory ensheathing cells from the olfactory bulb.</a> Glia. 60, 404-413 (2012).</li><li>Franssen, E. H., de Bree, F. M., Verhaagen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+ensheathing+glia:+their+contribution+to+primary+olfactory+nervous+system+regeneration+and+their+regenerative+potential+following+transplantation+into+the+injured+spinal+cord.">Olfactory ensheathing glia: their contribution to primary olfactory nervous system regeneration and their regenerative potential following transplantation into the injured spinal cord.</a> Brain Res. Rev. 56, 236-258 (2007).</li><li>Lakatos, A., Franklin, R. J., Barnett, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+ensheathing+cells+and+Schwann+cells+differ+in+their+in+vitro+interactions+with+astrocytes.">Olfactory ensheathing cells and Schwann cells differ in their in vitro interactions with astrocytes.</a> Glia. 32, 214-225 (2000).</li><li>Woodhall, E., West, A. K., Chuah, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cultured+olfactory+ensheathing+cells+express+nerve+growth+factor,+brain-derived+neurotrophic+factor,+glia+cell+line-derived+neurotrophic+factor+and+their+receptors.">Cultured olfactory ensheathing cells express nerve growth factor, brain-derived neurotrophic factor, glia cell line-derived neurotrophic factor and their receptors.</a> Brain Res. Mol. Brain Res. 88, 203-213 (2001).</li><li>Dombrowski, M. A., Sasaki, M., Lankford, K. L., Kocsis, J. D., Radtke, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelination+and+nodal+formation+of+regenerated+peripheral+nerve+fibers+following+transplantation+of+acutely+prepared+olfactory+ensheathing+cells.">Myelination and nodal formation of regenerated peripheral nerve fibers following transplantation of acutely prepared olfactory ensheathing cells.</a> Brain Res. 1125, 1-8 (2006).</li><li>Guerout, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+olfactory+ensheathing+cells+promotes+axonal+regeneration+and+functional+recovery+of+peripheral+nerve+lesion+in+rats.">Transplantation of olfactory ensheathing cells promotes axonal regeneration and functional recovery of peripheral nerve lesion in rats.</a> Muscle Nerve. 43, 543-551 (2011).</li><li>Guntinas-Lichius, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+olfactory+ensheathing+cells+stimulates+the+collateral+sprouting+from+axotomized+adult+rat+facial+motoneurons.">Transplantation of olfactory ensheathing cells stimulates the collateral sprouting from axotomized adult rat facial motoneurons.</a> Exp. Neurol. 172, 70-80 (2001).</li><li>Makoukji, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lithium+enhances+remyelination+of+peripheral+nerves.">Lithium enhances remyelination of peripheral nerves.</a> Proc. Natl. Acad. Sci U.S.A. 109, 3973-3978 (2012).</li><li>Guerout, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-transplantation+of+olfactory+ensheathing+cells+from+mucosa+and+bulb+origin+enhances+functional+recovery+after+peripheral+nerve+lesion.">Co-transplantation of olfactory ensheathing cells from mucosa and bulb origin enhances functional recovery after peripheral nerve lesion.</a> PloS one. 6, 22816 (2011).</li><li>Paviot, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficiency+of+laryngeal+motor+nerve+repair+is+greater+with+bulbar+than+with+mucosal+olfactory+ensheathing+cells.">Efficiency of laryngeal motor nerve repair is greater with bulbar than with mucosal olfactory ensheathing cells.</a> Neurobiol. Dis. 41, 688-694 (2011).</li><li>Girard, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolating+nasal+olfactory+stem+cells+from+rodents+or+humans.">Isolating nasal olfactory stem cells from rodents or humans.</a> J. Vis. Exp. , (2011).</li><li>Nash, H. H., Borke, R. C., Anders, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+method+of+purification+for+establishing+primary+cultures+of+ensheathing+cells+from+the+adult+olfactory+bulb.">New method of purification for establishing primary cultures of ensheathing cells from the adult olfactory bulb.</a> Glia. 34, 81-87 (2001).</li><li>Bianco, J. I., Perry, C., Harkin, D. G., Mackay-Sim, A., Feron, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurotrophin+3+promotes+purification+and+proliferation+of+olfactory+ensheathing+cells+from+human+nose.">Neurotrophin 3 promotes purification and proliferation of olfactory ensheathing cells from human nose.</a> Glia. 45, 111-123 (2004).</li><li>Paviot, A., Bon-Mardion, N., Duclos, C., Marie, J. P., Guerout, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Although+olfactory+ensheathing+cells+have+remarkable+potential+to+sustain+nerve+regeneration,+they+cannot+be+applied+to+a+severe+vagus+nerve+section/resection+model.">Although olfactory ensheathing cells have remarkable potential to sustain nerve regeneration, they cannot be applied to a severe vagus nerve section/resection model.</a> Muscle Nerve. 43, 919-920 (2011).</li></ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Burada sunulan teknikler OECS periferik sinir hasarı modellerinde hücresel nakli incelemek için yararlı bir model olun. Hücre kültürü protokol nispeten basittir ve kolayca gerçekleştirilebilir. Öte yandan, cerrahi işlemler, RLS belirli bir bölüm / anastomozlarda, deneyim gerektiren ve kalifiye personel tarafından yapılmalıdır. Bu protokol açıklanan prosedürler mümkün olan en iyi sonuçları elde etmek için odaklanmak önemli faktörler vurgulayın. İlk olarak, OM ayr...

Koku mukoza (OM), merkezi sinir sistemindeki, periferik sinir sistemi ve koku ampul (OB) in, birinci koku alma sistemi, iki ayrı parçadan oluşmaktadır. Birincil koku alma sistemi, memeli türlerinde ömrü boyunca kendini yenilemek için birincil koku nöronların (PON) kapasitesi ile karakterize edilir. Bu özellik nedeniyle OM nöral kök hücrelerin varlığına mümkün olmaktadır. OM gelen OB PON büyüme ve büyütme koku ensheathing hücreleri olarak adlandırılan özel glial hücreler (OECS) tarafından kolaylaştırılır. OECS 1 OB OM gelen PON nöron için olumlu bir mikroortam oluşturmak nöral krest hücreleri vardır. Bu şekilde, hücre OECS 2,3 farklı alt-popülasyonunu oluşturan OM ve OB bulunabilir. OECS farklı özellikleri çeşitli sinir sistemi lezyonu paradigmalar 4 hücresel nakillerinde için bunları kullanmak kurşun bilim adamları var. Nitekim, OECS üretmek büyüme faktörleri, pr, glial korkuturuz azaltmakomote aksonal yeniden büyüme ve özgürce astrocytes 5,6 ile iç içe olabilir. Ancak, bu çalışmaların büyük çoğunluğu spinal kord yaralanması (SKY) dayalı, bunlardan birkaç periferik sinir hasarı (PNI) 7,8 sonra OECS kullandık. Periferik sinir sistemi, sinir yaralanmasından sonra yenilemek için büyük bir kapasiteye sahip olmasına rağmen, tam bölümleri anormal aksonal büyütme neden. Nitekim, (RLN) yüz veya rekürren laringeal sinirlerin tam kesilirken sonra misrouted akson synkinesis denilen kas cocontractions neden olur. Bu nedenle akson büyümesini ölçmek için değil, aynı zamanda kas kasılmaları etkinliğini değerlendirmek için PNI bir model önermek için birincil önem taşımaktadır. Literatürde tarif edilen en yaygın model fasyal sinir lezyonu 9,10 dayanmaktadır. Bu modelde, fonksiyonel değerlendirmeler bıyık hareketleri 10 kurtarma dayanmaktadır. Ancak MOV etkinliğini göstermek için karmaşık, anahtar kelimeleri ve kas cocontractions fenomenleri ayrımcılık. Biz burada bir RLN lezyon dayalı bir model öneriyoruz. Bu model aksonal yeniden büyümesi ve ses tellerinin hareketleri değil, aynı zamanda hücresel nakillerinde 11,12 sonra bu hareketlerin verimliliği ve fonksiyonelliği değil sadece değerlendirilmesini sağlar. Bu protokol bir RLN bölüm / anastomoz modelinde OM ve OB kültür ve nakli OECS için adım prosedürü bir adım sağlar ve ameliyat sonrası hayvanları değerlendirmek için.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="591">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:240px;">DMEM/F12</td>
			<td style="width:155px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:197px;">E3521T</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">FBS</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>E3387M</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Penicilin/streptomycin</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>1152-8876</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">HBSS</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>M3467Y</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypsin-EDTA</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>M3513P</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cacodylate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.03256.0100</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DDSA</td>
			<td>BIOVALLEY</td>
			<td>00563-450</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MNA</td>
			<td>BIOVALLEY</td>
			<td>00886-450</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BDMA</td>
			<td>BIOVALLEY</td>
			<td>00141-100</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">POLYBED 812</td>
			<td>BIOVALLEY</td>
			<td>08791-500</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PE anti-mouse&#160;</td>
			<td>BD Bioscience&#160;</td>
			<td>550589</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Matrigel GFR</td>
			<td>BD Bioscience&#160;</td>
			<td>356231</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Collagenase A</td>
			<td>Roche</td>
			<td>10103586001</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mouse anti P75</td>
			<td>Chemicon</td>
			<td>MAB 365</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">11.0 Wire</td>
			<td>Ethicon&#160;</td>
			<td>FG 2881</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Toluidine Blue&#160;</td>
			<td>RAL DIAGNOSTICS</td>
			<td>361590-0025</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Centrifuge</td>
			<td>Sigma&#160;</td>
			<td>Sigma 2-16PK</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Incubator&#160;</td>
			<td>Thermo scientific</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Laminar flow hood</td>
			<td>Faster</td>
			<td style="width:197px;">BH-EN 2003 S</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Flow cytometer</td>
			<td>BD Bioscience&#160;</td>
			<td>FACSCalibur</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Videolaryngoscope</td>
			<td>Karl Storz Endoskope</td>
			<td>Telecam SL NLSC 20212120</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Acquisition system</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>Powerlab system</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pyramitome Ultramicrotomy System&#160;</td>
			<td style="width:155px;">Leica</td>
			<td>Ultracut S</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Image analysis system</td>
			<td>Explora Nova</td>
			<td>Mercator</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

transplantation of olfactory ensheathing cells to evaluate functional recovery after peripheral nerve injury

<html> Olfaktor ensheathing hücreleri (OECS) primer koku nöronların büyüme ve büyütme sağlayan nöral krest hücreleri vardır. Gerçekten de, birinci koku alma sistemi bile yetişkin hayvanlarda yeni nöron doğuran yeteneği ile karakterize edilmektedir. Bu özel yeteneği nöron için uygun bir mikro-ortam oluşturmak OECS varlığına kısmen kaynaklanmaktadır. OECS bu özelliği spinal kord yaralanması modellerde olduğu gibi hücresel nakli için kullanılmaktadır. Periferik sinir sistemi, merkezi sinir sistemi dışındaki sinir yaralanmasından sonra yeniden daha büyük bir kapasiteye sahip olmasına rağmen, tam bölümleri laringeal sinir kesisi yüz sonra özellikle aksonal yeniden gelişiminde sırasında yanlış iletilmesi neden. Özellikle, rekürren laringeal sinir (RLN) tam kesit ses tellerinin synkinesis sonuçlanan anormal aksonal çıkma neden olur. Bu özel modelde, OECS nakli akson büyümesini etkin bir şekilde arttırdığını göstermiştir. ve_content &quot;&gt; OECS koku mukoza (OM-OECS) ve koku ampuller (OB-OECS) hem de, birden fazla alt popülasyonlarının oluşmaktadır. Burada içinde OECS bu farklı alt popülasyonlarının kullanımına dayanan hücresel nakli için bir model mevcut RLN yaralanma modeli. bu paradigmayı kullanarak, OB-OECS ve OM-OECS birincil kültürleri RLS bölümü ve anastomoz sonrası Matrigel&#39;de nakledilmiştir. İki ay ameliyat sonrası, biz videolaryngoscopy dayalı tamamlayıcı analizler tarafından nakledilen hayvanların değerlendirildi, elektromiyografi (EMG) ve histolojik çalışmalar. Birincisi, videolaryngoscopy özellikle kas cocontractions fenomen. Ardından, EMG gösterdi zenginliği ve kas faaliyetleri senkronizasyonu analizleri. Nihayet, toluidin mavisi boyama dayalı histolojik çalışmalar numarası ve profil ölçümü izin, bize laringeal fonksiyonlarını değerlendirmek için izin miyelinli lif. Hep birlikte, biz, kültür, ide izole etmek için nasıl burada açıklamakOM ve OB ntify ve nakli OECS RLN bölüm-anastomoz ve nasıl aksonal büyütme ve laringeal fonksiyonları bu nakledilen hücrelerin etkinliğini değerlendirmek ve analiz etmek sonra.

Kontrol ve (bölüm / anastomoz) hayvanlar innerve olmuş sahip çizimler sonuçları (OM, OB veya OM + OB) gerçekleştirilen hücre nakillerinde bağlı olarak değişebilir olarak seçilmiştir. Hücre kültürü Hücreler plastik yüzeye yapışır ve hızlı bir şekilde uzatılmış ya da gittikçe incelen, üçgen, çok kutuplu veya iğ şeklinde olan hücrelerin paralel parçaya içine ayrılmış oldu (Şekil 1A ve 1B). Sitometri anali...

Watch this Scientific Journal Video about Transplantation of Olfactory Ensheathing Cells to Evaluate Functional Recovery after Peripheral Nerve Injury at JoVE.com

Transplantation of Olfactory Ensheathing Cells to Evaluate Functional Recovery after Peripheral Nerve Injury

Koku ensheathing hücreleri (OECS), birincil koku nöronların büyümesine izin vermek nöral tepe hücreleri bulunmaktadır. Bu özel özellik, hücresel nakli için de kullanılabilir. Burada bir gırtlak sinir yaralanması modelinde OECS kullanımına göre hücre transplantasyonu bir model mevcut.

Periferik Sinir Hasarı Sonrası Fonksiyonel Kurtarma Değerlendirmesinde Koku Ensheathing Hücre Nakli

Olfactory ensheathing cells (OECs) are neural crest cells which allow growth and regrowth of the primary olfactory neurons. Indeed, the primary olfactory ...

transplantation-olfactory-ensheathing-cells-to-evaluate-functional

Research

JoVE Journal

Neuroscience

11.7K Görüntüleme.  University of Rouen.  Koku ensheathing hücreleri (OECS), birincil koku nöronların büyümesine izin vermek nöral tepe hücreleri bulunmaktadır. Bu özel özellik, hücresel nakli için de kullanılabilir. Burada bir gırtlak sinir yaralanması modelinde OECS kullanımına göre hücre transplantasyonu bir model mevcut. 

Video: Transplantation of Olfactory Ensheathing Cells to Evaluate Functional Recovery after Peripheral Nerve Injury

An Optic Nerve Crush Injury Murine Model to Study Retinal Ganglion Cell Survival

Injury to the optic nerve can lead to axonal degeneration, followed by a gradual death of retinal ganglion cells (RGCs), which results in irreversible vision loss. Examples of such diseases in human include traumatic optic neuropathy and optic nerve degeneration in glaucoma. It is characterized by typical changes in the optic nerve head, progressive optic nerve degeneration, and loss of retinal ganglion cells, if uncontrolled, leading to vision loss and blindness.
The optic nerve crush (ONC) injury mouse model is an important experimental disease model for traumatic optic neuropathy, glaucoma, etc. In this model, the crush injury to the optic nerve leads to gradual retinal ganglion cells apoptosis. This disease model can be used to study the general processes and mechanisms of neuronal death and survival, which is essential for the development of therapeutic measures. In addition, pharmacological and molecular approaches can be used in this model to identify and test potential therapeutic reagents to treat different types of optic neuropathy.
Here, we provide a step by step demonstration of (I) Baseline retrograde labeling of retinal ganglion cells (RGCs) at day 1, (II) Optic nerve crush injury at day 4, (III) Harvest the retinae and analyze RGC survival at day 11, and (IV) Representative result.

This protocol shows how to retrogradely label retinal ganglion cells, and how to subsequently make an optic nerve crush injury in order to analyze retinal ganglion cell survival and apoptosis. It is an experimental disease model for different types of optic neuropathy, including glaucoma.

Retina Ganglion Hücre Survival Eğitim Bir Optik Sinir Crush Yaralanma murin Modeli

Injury to the optic nerve can lead to axonal degeneration, followed by a gradual death of retinal ganglion cells (RGCs), which results in irreversible ...

Nörobilim

Dorsal Root Ganglia Neurons and Differentiated Adipose-derived Stem Cells: An In Vitro Co-culture Model to Study Peripheral Nerve Regeneration

Dorsal root ganglia (DRG) neurons, located in the intervertebral foramina of the spinal column, can be used to create an in vitro system facilitating the study of nerve regeneration and myelination. The glial cells of the peripheral nervous system, Schwann cells (SC), are key facilitators of these processes; it is therefore crucial that the interactions of these cellular components are studied together. Direct contact between DRG neurons and glial cells provides additional stimuli sensed by specific membrane receptors, further improving the neuronal response. SC release growth factors and proteins in the culture medium, which enhance neuron survival and stimulate neurite sprouting and extension. However, SC require long proliferation time to be used for tissue engineering applications and the sacrifice of an healthy nerve for their sourcing. Adipose-derived stem cells (ASC) differentiated into SC phenotype are a valid alternative to SC for the set-up of a co-culture model with DRG neurons to study nerve regeneration. The present work presents a detailed and reproducible step-by-step protocol to harvest both DRG neurons and ASC from adult rats; to differentiate ASC towards a SC phenotype; and combines the two cell types in a direct co-culture system to investigate the interplay between neurons and SC in the peripheral nervous system. This tool has great potential in the optimization of tissue-engineered constructs for peripheral nerve repair.

Dorsal Root Ganglia Neurons and Differentiated Adipose-derived Stem Cells: An In Vitro Co-culture Model to Study Peripheral Nerve Regeneration

Dorsal root ganglia (DRG) are structures containing the sensory neurons of the peripheral nervous system. When dissociated, they can be co-cultured with SC-like adipose-derived stem cells (ASC), providing a valuable model to study in vitro nerve regeneration and myelination, mimicking the in vivo environment at the injury site.

Kök Ganglia Nöronlar ve Farklılaştırılmış Yağ-türetilmiş Kök Hücreler Dorsal: bir<em&gt; İn Vitro</em&gt; Co-kültür Modeli Periferik Sinir Rejenerasyon Eğitim

Dorsal root ganglia (DRG) neurons, located in the intervertebral foramina of the spinal column, can be used to create an in vitro system facilitating the ...

Functional Evaluation of Olfactory Pathways in Living Xenopus Tadpoles

Xenopus tadpoles offer a unique platform to investigate the function of the nervous system. They provide multiple experimental advantages, such as accessibility to numerous imaging approaches, electrophysiological techniques and behavioral assays. The Xenopus tadpole olfactory system is particularly well suited to investigate the function of synapses established during normal development or reformed after injury. Here, we describe methodologies to evaluate the processing of olfactory information in living Xenopus larvae. We outline a combination of in vivo measurements of presynaptic calcium responses in glomeruli of the olfactory bulb with olfactory-guided behavior assays. Methods can be combined with the transection of olfactory nerves to study the rewiring of synaptic connectivity. Experiments are presented using both wild-type and genetically modified animals expressing GFP reporters in central nervous system cells. Application of the approaches described to genetically modified tadpoles can be useful for unraveling the molecular bases that define vertebrate behavior.

Functional Evaluation of Olfactory Pathways in Living Xenopus Tadpoles

Xenopus tadpoles offer a unique platform to investigate the function of the nervous system in vivo. We describe methodologies to evaluate the processing of olfactory information in living Xenopus larvae in normal rearing conditions or after injury.

Fonksiyonel yaşam Xenopus kurbağa yavrularını koku yollar değerlendirilmesi

Xenopus tadpoles offer a unique platform to investigate the function of the nervous system. They provide multiple experimental advantages, such as ...

A Preclinical Model to Assess Brain Recovery After Acute Stroke in Rats

The purpose of this study was to establish and validate an animal brain ischemia model in the recovery and sequela stages. A middle cerebral artery occlusion/reperfusion (MCAO/R) model in male Sprague-Dawley rats was chosen. By changing the rat&#39;s weight (260&#8722;330 g), the thread bolt type (2636/2838/3040/3043) and the brain infarct time (2-3 h), a higher Longa&#39;s score, a larger infarct volume and a greater model success ratio were screened using the Longa&#39;s score and TTC staining. The optimum model condition (300 g, 3040 thread bolt, 3 h brain infarct time) was acquired and used in a 1-90 day observation period after reperfusion via assessment of sensorimotor functions and infarct volume. At these conditions, the bilateral asymmetry test had a significant difference from 1 to 90 days, and the grid-walking test had a significant difference from 1 to 60 days; both differences could be a suitable sensorimotor functional test. Thus, the most appropriate condition of a novel rat model in the recovery and sequela stages of brain ischemia was found: 300 g rats that underwent MCAO with a 3040 thread bolt for a 3 h brain infarct and then reperfused. The appropriate sensorimotor functional tests were a bilateral asymmetry test and a grid-walking test.

The&#160;purpose of this study is to establish and validate an animal model for research in the recovery and sequela stages of brain ischemia by testing brain infarction and sensorimotor function after middle cerebral artery occlusion/reperfusion (MCAO/R) after 1-90 days in rats.

Sıçanlarda Akut İnme Sonrası Beyin İyileşmesini Değerlendiren Bir Preklinik Model

The purpose of this study was to establish and validate an animal brain ischemia model in the recovery and sequela stages. A middle cerebral artery ...

3D Kinematic Analysis for the Functional Evaluation in the Rat Model of Sciatic Nerve Crush Injury

Compared to the Sciatic Functional Index (SFI), kinematic analysis is a more reliable and sensitive method for performing functional evaluations of sciatic nerve injury rodent models. In this protocol, we describe a novel kinematic analysis method that uses a three-dimensional (3D) motion capture apparatus for functional evaluations using a rat sciatic nerve crush injury model. First, the rat is familiarized with treadmill walking. Markers are then attached to the designated bone landmarks and the rat is made to walk on the treadmill at the desired speed. Meanwhile, the posterior limb movements of the rat are recorded using four cameras. Depending on the software used, marker tracings are created using both automatic and manual modes and the desired data are produced after subtle adjustments. This method of kinematic analysis, which uses a 3D motion capture apparatus, offers numerous advantages, including superior precision and accuracy. Many more parameters can be investigated during the comprehensive functional evaluations. This method has several shortcomings that require consideration: The system is expensive, can be complicated to operate, and may produce data deviations due to skin shifting. Nevertheless, kinematic analysis using a 3D motion capture apparatus is useful for performing functional anterior and posterior limb evaluations. In the future, this method may become increasingly useful for generating accurate assessments of various traumas and diseases.

We introduce a kinematic analysis method that uses a three-dimensional motion capture apparatus containing four cameras and data processing software for performing functional evaluations during fundamental research involving rodent models.

Siyatik Sinir Ezilme Hasarının Sıçan Modelinde Fonksiyonel Değerlendirme için 3D Kinematik Analiz

Compared to the Sciatic Functional Index (SFI), kinematic analysis is a more reliable and sensitive method for performing functional evaluations of ...

Purification of Fibroblasts and Schwann Cells from Sensory and Motor Nerves in Vitro

The principal cells in the peripheral nervous system are the Schwann cells (SCs) and the fibroblasts. Both these cells distinctly express the sensory and motor phenotypes involved in different patterns of neurotrophic factor gene expression and other biological processes, affecting nerve regeneration. The present study has established a protocol to obtain highly purified rat sensory and motor SCs and fibroblasts more rapidly. The ventral root (motor nerve) and the dorsal root (sensory nerve) of neonatal rats (7-days-old) were dissociated and the cells were cultured for 4-5 days, followed by isolation of sensory and motor fibroblasts and SCs by combining differential digestion and differential adherence methods sequentially. The results of immunocytochemistry and flow cytometry analyses showed that the purity of the sensory and motor SCs and fibroblasts were &#62;90%. This protocol can be used to obtain a large number of sensory and motor fibroblasts/SCs more rapidly, contributing to the exploration of sensory and motor nerve regeneration.

Here, we present a method to purify fibroblasts and Schwann cells from sensory and motor nerves in vitro.

Fibroblastların ve Schwann Hücrelerinin İn vitro duyusal ve motor sinirlerden arındırması

The principal cells in the peripheral nervous system are the Schwann cells (SCs) and the fibroblasts. Both these cells distinctly express the sensory and ...

Intra-Arterial Delivery of Neural Stem Cells to the Rat and Mouse Brain: Application to Cerebral Ischemia

Neural stem cell (NSC) therapy is an emerging innovative treatment for stroke, traumatic brain injury and neurodegenerative disorders. As compared to intracranial delivery, intra-arterial administration of NSCs is less invasive and produces a more diffuse distribution of NSCs within the brain parenchyma. Further, intra-arterial delivery allows the first-pass effect in the brain circulation, lessening the potential for trapping of cells in peripheral organs, such as liver and spleen, a complication associated with peripheral injections. Here, we detail the methodology, in both mice and rats, for delivery of NSCs through the common carotid artery (mouse) or external carotid artery (rat) to the ipsilateral hemisphere after an ischemic stroke. Using GFP-labeled NSCs, we illustrate the widespread distribution achieved throughout the rodent ipsilateral hemisphere at 1 d, 1 week and 4 weeks after postischemic delivery, with a higher density in or near the ischemic injury site. In addition to long-term survival, we show evidence of differentiation of GFP-labeled cells at 4 weeks. The intra-arterial delivery approach described here for NSCs can also be used for administration of therapeutic compounds, and thus has broad applicability to varied CNS injury and disease models across multiple species.

A method for delivering neural stem cells, adaptable for injecting solutions or suspensions, through the common carotid artery (mouse) or external carotid artery (rat) after ischemic stroke is reported. Injected cells are distributed broadly throughout the brain parenchyma and can be detected up to 30 d after delivery.

Nöral Kök Hücrelerin Sıçan ve Fare Beynine İntra-Arteriyel Teslimatı: Serebral İskemiye Uygulama

Neural stem cell (NSC) therapy is an emerging innovative treatment for stroke, traumatic brain injury and neurodegenerative disorders. As compared to ...

Automated Gait Analysis to Assess Functional Recovery in Rodents with Peripheral Nerve or Spinal Cord Contusion Injury

Peripheral and central nerve injuries are mostly studied in rodents, especially rats, given the fact that these animal models are both cost-effective and a lot of comparative data has been published in the literature. This includes a multitude of assessment methods to study functional recovery following nerve injury and repair. Besides evaluation of nerve regeneration by means of histology, electrophysiology, and other in vivo and in vitro assessment techniques, functional recovery is the most important criterion to determine the degree of neural regeneration. Automated gait analysis allows recording of a vast quantity of gait-related parameters such as Paw Print Area and Paw Swing Speed as well as measures of inter-limb coordination. Additionally, the method provides digital data of the rats&#8217; paws after neuronal damage and during nerve regeneration, adding to our understanding of how peripheral and central nervous injuries affect their locomotor behavior. Besides the predominantly used sciatic nerve injury model, other models of peripheral nerve injury such as the femoral nerve can be studied by means of this method. In addition to injuries of the peripheral nervous systems, lesions of the central nervous system, e.g., spinal cord contusion can be evaluated. Valid and reproducible data assessment is strongly dependent on meticulous adjustment of the hard- and software settings prior to data acquisition. Additionally, proper training of the experimental animals is of crucial importance. This work aims to illustrate the use of computerized automated gait analysis to assess functional recovery in different animal models of peripheral nerve injury as well as spinal cord contusion injury. It also emphasizes the method&#8217;s limitations, e.g., evaluation of nerve regeneration in rats with sciatic nerve neurotmesis due to limited functional recovery. Therefore, this protocol is thought to help researchers interested in peripheral and central nervous injuries to assess functional recovery in rodent models.

Automated gait analysis is a feasible tool to evaluate functional recovery in rodent models of peripheral nerve injury and spinal cord contusion injury. While it requires only one setup to assess locomotor function in various experimental models, meticulous hard- and soft-ware adjustment and training of the animals is highly important.

Periferik Sinir veya Spinal Kord Kontüzyonu Yaralanması olan Kemirgenlerde Fonksiyonel İyileşmeyi Değerlendirmek için Otomatik Yürüyüş Analizi

Peripheral and central nerve injuries are mostly studied in rodents, especially rats, given the fact that these animal models are both cost-effective and ...

Coculture of Axotomized Rat Retinal Ganglion Neurons with Olfactory Ensheathing Glia, as an In Vitro Model of Adult Axonal Regeneration

Olfactory ensheathing glia (OEG) cells are localized all the way from the olfactory mucosa to and into the olfactory nerve layer (ONL) of the olfactory bulb. Throughout adult life, they are key for axonal growing of newly generated olfactory neurons, from the lamina propria to the ONL. Due to their pro-regenerative properties, these cells have been used to foster axonal regeneration in spinal cord or optic nerve injury models.
We present an in vitro model to assay and measure OEG neuroregenerative capacity after neural injury. In this model, reversibly immortalized human OEG (ihOEG) is cultured as a monolayer, retinas are extracted from adult rats and retinal ganglion neurons (RGN) are cocultured onto the OEG monolayer. After 96 h, axonal and somatodendritic markers in RGNs are analyzed by immunofluorescence and the number of RGNs with axon and the mean axonal length/neuron are quantified.
This protocol has the advantage over other in vitro assays that rely on embryonic or postnatal neurons, that it evaluates OEG neuroregenerative properties in adult tissue. Also, it is not only useful for assessing the neuroregenerative potential of ihOEG but can be extended to different sources of OEG or other glial cells.

We present an in vitro model to assess olfactory ensheathing glia (OEG) neuroregenerative capacity, after neural injury. It is based on a coculture of axotomized adult retinal ganglion neurons (RGN) on OEG monolayers and subsequent study of axonal regeneration, by analyzing RGN axonal and somatodendritic markers.

Beyazlatılmış Sıçan Retinal Ganglion Nöronlarının Koku Alma Ensheathing Glia ile Birlikte, Yetişkin Aksonal Rejenerasyonun In Vitro Modeli Olarak

Olfactory ensheathing glia (OEG) cells are localized all the way from the olfactory mucosa to and into the olfactory nerve layer (ONL) of the olfactory ...

Motor Dual-Tasks for Gait Analysis and Evaluation in Post-Stroke Patients

Eighteen stroke patients were recruited for this study involving the evaluation of cognition and walking ability and multitask gait analysis. Multitask gait analysis consisted of a single walking task (Task 0), a simple motor dual-task (water-holding, Task 1), and a complex motor dual-task (crossing obstacles, Task 2). The task of crossing obstacles was considered to be equivalent to the combination of a simple walking task and a complex motor task as it involved more nervous system, skeletal movement, and cognitive resources. To eliminate heterogeneity in the results of the gait analysis of the stroke patients, the dual-task gait cost values were calculated for various kinematic parameters. The major differences were observed in the proximal joint angles, especially in the angles of the trunk, pelvis, and hip joints, which were significantly larger in the dual motor tasks than in the single walking task. This research protocol aims to provide a basis for the clinical diagnosis of gait function and an in-depth study of motor control in stroke patients with motor control deficits through the analyses of dual-motor walking tasks.

This paper presents a protocol specifically for dual motor task gait analysis in stroke patients with motor control deficits.

İnme sonrası hastalarda yürüme analizi ve değerlendirmesi için motor ikili görevler

Eighteen stroke patients were recruited for this study involving the evaluation of cognition and walking ability and multitask gait analysis. Multitask ...