Bu çalışma BK ve RG NSERC hibe tarafından finanse edilmektedir. Yazarlar ayrıca, Golgi-Cox boyama uzmanlık için Kehe Xie&#39;yi ve Russell Hosain teşekkür etmek istiyorum.

Tüm deneyler Hayvan Bakımı Kanada Konseyi çerçevesinde yürütülen ve Lethbridge Üniversitesi Hayvan Bakım Komitesi tarafından onaylandı. 1.. Damızlık ve Tactile Uyarım <ol><li> Ortak hayvan tedarikçilerden hamile fareler sipariş veya standart laboratuvar üreme prosedürleri kullanarak evde yavrular doğurmak. </li><li> House, 12:12 saat ışık tutulan bir sıcaklık kontrollü bir yetiştirme odasında (21 ° C), tüm hayvanları: karanlık döngüsü ve yiyecek ve su ad libitum erişim sağlar. </li><li> ayrı ayrı kendi yavruları ile yavrular doğar, ev dişi sıçanlar. </li><li> Doğumdan hemen sonra işleme ilişkin ek stres önlemek için, P3 yavruların dokunsal uyarılması başlar. </li><li> Dokunsal uyarım P3-P21 günde üç kez (09:00, 01:00 ve 16:00) yapılmalıdır ve yavrular P21 annelerinden sütten edilmelidir. </li><li> Çapraz çöp tasarım kullanırken, yavruların yarısı from her çöp, diğer yarısı kontrol olarak hizmet veren dokunsal uyarım uğrayacaktır. Rastgele her grup erkek ve dişi yavruların eşit numaraları atayabilirsiniz. , Dokunsal uyarım ve kontrolleri geçiren yavrular ayırt onların arka ayakları ve kuyruğu üzerinde kalıcı bir kalem ile yavruların bir grup işaretlemek için. İşaretleme her gün tekrar uygulanmalıdır. </li></ol> Tactile Stimülasyon <ol start="7"><li> Onların evde kafes baraj çıkarın ve gıda ve su ile geçici bir kafese koyun. Üreme / konut oda baraj ve geçici kafesini tutun. </li><li> Önce sabah dokunsal uyarım oturumda (9:00) bir grup olarak sıçan yavrular tartılır. Her oturum için, ulaşım sıçan dokunsal uyarılar için ayrı bir test odası evlerine kafesleri yavrular. 24 ° C&#39;ye ayarlanmış bir ısıtma yastığı ev kafes yerleştirin </li><li> Iki parçaya ev kafes bölmek için sert bir tahta kullanın. Diğer yarısında dokunsal uyarım grubu bir buçuk ve kontrol yavrular sıçan yavrular yerleştirin.15 dakika için bir zamanlayıcı ayarlayın. </li><li> Yumuşak tüy gibi toz bezi kullanarak, 15 dakika boyunca arka arkaya aynı anda uyarma dokunsal gruptaki tüm yavrular fırça. Genç sıçan yavrular (~ P3-P12) ususally bir araya toplamak ve bu çok kolay bir kerede tüm yavrular teşvik yapma derin bir uyku döngüsü girmek için görünür. Yavrular yaş olarak, bazı yavrular yürüyüş ve oturum sırasında soruşturma ile, daha aktif hale gelir. Deneyci sürekli her yavru eşit uyarılması almasını sağlamak için gruba dolaşıp yavrular hareket etmelidir. </li><li> 15 dk oturumu tamamlandıktan sonra, geri üreme odasına yavrular taşıma ve kafesine anne dönün. </li><li> Dokunsal stimülasyon 19 gün boyunca bu işlemi, günde üç kez tekrarlayın. P21 de nihai dokunsal uyarım seansından sonra, yavrular annelerinden sütten edilmelidir. Yavrular sonra aynı cinsten 5 ya da 6 sütten başka hayvanlar ile kafeslerde muhafaza edilmelidir. </li><li> Sıçanlar hiçbir ek test geçiyor, bunlar un bırakılmalıdırgıda ve (bir kenara düzenli kafes temizlik ve taşıma itibaren) onlar yaş yaklaşık 100 gün gelene kadar, su ad libitm erişimi olan karanlık döngüsü: Normal ışık, rahatsız. Diğer deney yapılan manipülasyonlar ise, hayvanların bu laboratuar protokollere uygun olarak tedavi edilebilen veya test edilmelidir. </li></ol> 2. Kurban ve Golgi-Cox Boyama <ol><li> Yaklaşık P100, sıçanlara IP enjeksiyon yoluyla sodyum pentobarbital aşırı dozda uygulanması ve% 0.9 tuzlu su içinde, yaklaşık 100 ml intrakardiyak serpmek. </li><li> Perfüzyon tamamlandığında beyinleri ekstrakte edin. Sağlam beyincik tutmak için çaba altında optik sinirlerin kesilmesi, kafatası beyin çıkarın; araştırmacılar koku ampuller tutmak veya kaldırmak için seçebilirsiniz. Golgi-Cox solüsyon 14 20 ml opak Nalgene şişede ekstre beyinleri yerleştirin. </li><li> 14 gün için Golgi-Cox çözelti içinde beyinleri tutun. 14 gün sonra, Golgi-C yerine% 30 sukroz çözeltisi ile öküz çözeltisi. Kesit önce 2-5 gün sukroz çözeltisi içinde beyinleri tutun. </li></ol> Not: beyin sakaroz çözeltisine transferi 14 gün içinde bölümlere edilemiyorsa, araştırmacının% 30 sukroz, yeni bir stok ile sukroz değiştirmek gerekmektedir. Araştırmacı boyama üzerinde hiçbir olumsuz etkisi ile 4 ay boyunca sakaroz iki haftada değiştirebilir. <ol start="4"><li> Bölüm beyin için, beyin kuru lekelenir olmalıdır ve cyanocacrylic yapıştırıcı ile kesit aşamasına giderildi. Yırtılma veya düzensiz bölümlendirilmeleri önlemek için, araştırmacı dikkatli olmak ve tüm beyin sıkıca aşamasına güvenli olduğundan emin olmalısınız. </li><li> Vibratome rezervuar kesit bıçağı kapsayan bir seviyeye% 6 sukroz çözeltisi ile doldurulmalıdır. 5 bir hız ve genlik, (her ikisi de ölçeklerde orta noktası) için vibratome parametrelerini ayarlayın. 200 mikron bölüme beyin dilimleyin ve 2% jelatinleşmiş mikro ilgili bölümleri yerkapsam slayt. Kesit boyunca ıslak bölümleri tutmak için emin olun. </li><li> Ilgi tüm bölümleri toplanmıştır zaman, nemli emici kağıt ile slaytlar basınç uygulayarak slaytlar üzerine bölümleri basın. Onlar lekeli hazır olana kadar nem odasında bir slayt rafa slaytlar saklayın. Bunlar 4 günden daha fazla, en az 12 saat boyunca nem odasında kalır, ancak olmamalıdır. Slaytlar nemli olması gerekir ve kurumasına izin verilmemelidir. </li><li> Boyama işlemine başlamadan önce boyama alayını hazırlayın. Etiket on iki cam boyama tabaklar, aşağıdaki şekilde (10.7 x 8.5 x 6.8 cm) ve işlem: <ol><li> Distile Su - 1 dk </li><li> Amonyum hidroksit - 30 dakika (karanlıkta) </li><li> Distile Su - 1 dk </li><li> (Karanlıkta) - 30 dakika Kodak Film için Fix </li><li> Distile Su - 1 dk </li><li> % 50 Alkol - 1 dk </li><li> % 70 Alkol - 1 dk </li><li> % 95 Alkol - 1 dk </li><li> % 100 Alcohol - 5 dk </li><li> % 100 Alkol - 5 dk </li><li> Çözüm (1/3 Kloroform, 1/3 HemoDe, 1/3 100% Alcohol) - 15 dk </li><li> HemoDe - 15 dk </li></ol></li></ol> * Ksilen HemoDe bölgesinin yerine kullanılabilir. Sürekli boyama kalitesini sağlamak amacıyla, taze solüsyon işlenen her bir slayt raf için kullanılmalıdır. <ol start="8"><li> HemoDe son 15 dakika emersion ardından, Permount ile slaytlar lamel. </li><li> Mikroskopla inceleyerek önce kuru hava slaytlar izin verin. </li></ol>

<ol>
	<li>Mychasiuk, R., Ilnystkyy, S., Kovalchuk, O., Kolb, B., Gibb, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intensity+matters:+Brain,+behaviour,+and+the+epigenome+of+prenatally+stressed+rats.">Intensity matters: Brain, behaviour, and the epigenome of prenatally stressed rats.</a> Neuroscience. 180, 105-110 (2011).</li><li>Muhammad, A., Carroll, C., Kolb, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stress+during+development+alters+dendritic+morphology+in+the+nucleus+accumbens+and+prefrontal+cortex.">Stress during development alters dendritic morphology in the nucleus accumbens and prefrontal cortex.</a> Neuroscience. 216, 103-109 (2012).</li><li>Wiesel, T., Hubel, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+visual+deprivation+on+morphology+and+physiology+of+cells+in+the+cat's+lateral+geniculate+body.">Effects of visual deprivation on morphology and physiology of cells in the cat's lateral geniculate body.</a> Journal of Neurophysiology. 26 (978), 6 (1963).</li><li>Dwyer, J., McQuown, S., Leslie, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dynamic+effects+of+nicotine+on+the+developing+brain.">The dynamic effects of nicotine on the developing brain.</a> Pharmacology &amp; Therapeutics. 122, 125-139 (2009).</li><li>Richards, S., Mychasiuk, R., Kolb, B., Gibb, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tactile+stimulation+during+development+alters+behaviour+and+neuroanatomical+organization+of+normal+rats.">Tactile stimulation during development alters behaviour and neuroanatomical organization of normal rats.</a> Behavioural Brain Research. 231, 86-91 (2012).</li><li>Schanberg, S., Field, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensory+deprivation+stress+and+supplemental+stimulation+in+the+rat+pup+and+preterm+neonate.">Sensory deprivation stress and supplemental stimulation in the rat pup and preterm neonate.</a> Child Development. 58 (6), 1431-1447 (1987).</li><li>Caldji, C., Tannenbaum, J., Sharma, S., Francis, D., Plotsky, P., Meaney, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal+care+during+infancy+regulates+the+development+of+neural+systems+mediating+the+expression+of+fearfulness+in+the+rat.">Maternal care during infancy regulates the development of neural systems mediating the expression of fearfulness in the rat.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 95 (9), 5335-5340 (1998).</li><li>Imanaka, A., Morinobu, S., Toki, S., Yamamoto, S., Matsuki, A., Kozuru, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+tactile+stimulation+reverses+the+effect+of+neonatal+isolation+on+open-field+and+anxiety-like+behavior,+and+pain+sensitivity+in+male+and+female+adult+Sprague-Dawley+rats.">Neonatal tactile stimulation reverses the effect of neonatal isolation on open-field and anxiety-like behavior, and pain sensitivity in male and female adult Sprague-Dawley rats.</a> Behavioural Brain Research. 186, 91-97 (2008).</li><li>Gibb, R., Gonzalez, C., Wegenast, W., Kolb, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tactile+stimulation+promotes+motor+recovery+following+cortical+injury+in+adult+rats.">Tactile stimulation promotes motor recovery following cortical injury in adult rats.</a> Behavioural Brain Research. 214 (1), 102-107 (2010).</li><li>Rodrigues, A., Artneni, N., Abel, C., Zylbersztejn, D., Chazan, R., Viola, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tactile+stimulation+and+maternal+separation+prevent+hippocampal+damage+in+rats+submitted+to+neonatal+hypoxia-ischemia.">Tactile stimulation and maternal separation prevent hippocampal damage in rats submitted to neonatal hypoxia-ischemia.</a> Brain Research. 1002, 94-99 (2004).</li><li>Kolb, B., Gibb, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tactile+stimulation+after+frontal+or+parietal+cortical+injury+in+infant+rats+facilitates+functional+recovery+and+produces+synaptic+changes+in+adjacent+cortex.">Tactile stimulation after frontal or parietal cortical injury in infant rats facilitates functional recovery and produces synaptic changes in adjacent cortex.</a> Behavioural Brain Research. 214, 115-120 (2010).</li><li>Muhammad, A., Hossain, S., Pellis, S., Kolb, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tactile+stimulation+during+development+attenuates+amphetamine+sensitization+and+structurally+reorganizes+prefrontal+cortex+and+striatum+in+a+sex-dependent+manner.">Tactile stimulation during development attenuates amphetamine sensitization and structurally reorganizes prefrontal cortex and striatum in a sex-dependent manner.</a> Behavioral Neuroscience. 125 (2), 161-174 (2011).</li><li>Golgi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sulla+struttura+della+sostanza+grigia+dell+cervello.">Sulla struttura della sostanza grigia dell cervello.</a> Gaz Med Lomb. 33, 244-246 .</li><li>Glaser, E. M., van der Loos, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+thick+brain+sections+by+obverse-reverse+computer+microscopy:+Application+of+a+new,+high+clarity+Golgi-Nissl+stain.">Analysis of thick brain sections by obverse-reverse computer microscopy: Application of a new, high clarity Golgi-Nissl stain.</a> Journal of Neuroscience Methods. 4, 117-125 (1981).</li><li>Gibb, R., Kolb, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+vibratome+sectioning+of+Golgi-Cox+stained+whole+rat+brain.">A method for vibratome sectioning of Golgi-Cox stained whole rat brain.</a> Journal of Neuroscience Methods. 79, 1-4 (1998).</li><li>Meaney, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal+care,+gene+expression,+and+the+transmission+of+individual+differences+in+stress+reactivity+across+generations.">Maternal care, gene expression, and the transmission of individual differences in stress reactivity across generations.</a> Annual Review of Neuroscience. 24, 1161-1192 (2001).</li><li>Robinson, T. E., Kolb, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+plasticity+associated+with+exposure+to+drugs+of+abuse.">Structural plasticity associated with exposure to drugs of abuse.</a> Neuropharmacology. 47, 33-46 (2004).</li></ol>

Yazarlar biz hiçbir rakip mali çıkarlarını olmadığını beyan ederim.

Gelişmekte olan beynin açık plastisite nedeniyle, erken deneyimleri içeren deneysel prosedürleri iyice gözden geçirilir ve girişimleri tüm müdahale değişkenler için kontrol yapılmış olması önemlidir. Bu nedenle, bir çapraz çöp tasarım yavruların gelişiminin tüm diğer etki benzer deneyimleri almalarını sağlamak için dokunsal uyarım işlemi sırasında kullanılır. Buna ek olarak, çok sayıda litre birden yavrular etkiler, tek bir yavru veya çöp bir önyargı sonucu olasılığını önlemek için analiz için seçilir olması da önemlidir. Dokunsal uyarım yalama ve yavru gelişimi için yararlı olduğu düşünülmektedir ki, tımar, doğal olarak oluşan annelik davranışlarını taklit inanılmaktadır. Önceki bir araştırma yaşamın ilk haftası (P0-P7) 16 yalama ve bakım için kritik bir dönem olduğu vurgulanmaktadır olmasına rağmen, değişim sırf büyüklüğü ta 18 gün sonra tespitctile stimülasyon duyarlı kez bulunmasına rağmen, uzun pozlama üstün olduğunu ima edebilir. Bu deneysel paradigma dokunsal uyarım alan yavrular da dolayısıyla dokunsal uyarım anne tarafından yönetilen normal bir uyarılmaya ek olarak, anneleri tarafından yalama ve damat yaşamaya dikkat etmek de önemlidir. Son olarak, aynı zamanda bölge bağımlı değişikliklerin farkında olmalıdır. Gelişimi sırasında dokunsal uyarım prefrontal korteks dendritik karmaşıklığı artmasına rağmen, bu nitelikteki yapısal değişiklikleri tüm beyin bölgelerinde belirgin olacağını garanti etmez. Bu tür parietal korteks gibi diğer beyin bölgelerinde nöronal morfoloji, aynı deneyimi için çarpıcı farklı bir şekilde tepki olasıdır. Dokunsal uyarım prosedür kolayca uygulanır ve yavrular ya da baraj için hiçbir risk teşkil çünkü Ancak, kalkınmayı geliştirmeyi amaçlayan pek çok araştırma için değerli bir araç olarak hizmet potansiyeline sahiptiral belirsizdir. Aşağıdaki gibi beyin dokusu Golgi-Cox boyanması ile ilgili olarak, nöronal hücre başarılı bir görünüm için önemli adımlar şunlardır: 1) tuz çözeltisi ile, beynin yeterli perfüzyon olmalıdır. Ayrıca lekeli nöronlar fotoğraflamak için yeteneği zorlaştıran ise zor aslında, kan damarlarının labirent aracılığıyla nöronal hücreleri görselleştirmek için yapmak kan damarı eserler beyin dokusu sonuçlarının yanlış veya yetersiz perfüzyon. 2) perfüze beyinleri Golgi-Cox çözeltisi ve karanlıkta sukroz çözeltisi içinde saklanmalıdır. Karanlıkta beyin dokusu depolanması daha başarılı bir şekilde kaliteli bir nöronal hücrelerini görselleştirme şansı artan doku arka plan boyama azaltır. 3) Beyin dokusu Golgi-Cox çözelti içinde, 14 günlük depolama aşağıdaki sakroz çözeltisi içinde saklanır. Doku 2-5 gün için% 30 sukroz çözeltisi içine daldırıldığında, beyin ve yıkıcı bölme yırtılmasını engeller yumuşadığı zamankesim. Bu (sükroz solüsyonu sürekli olarak taze çözelti ile değiştirildiği sürece) sukroz içinde uzun süreli depolama boyama kalitesini düşürür artış nedeniyle zaman dönemleri için sakroz çözeltisi içinde kalan beyin dokusu önlemek için önemlidir. Slaytlar lekeli edilmiş ve kapağı kayması kez 4) Son olarak, bir mikroskop ile görselleştirme önce kuruması için yeterli zaman verilmelidir. Slaytlar yeterince kuru hava için izin verilmediği takdirde, doku kortikal nöronların başarılı görselleştirme azaltarak, koyulaşabilir. Deneyimlere tepki olarak ortaya psikolojik işleyişi ve davranışsal tepkilerin istikrarlı değişiklikler nöronal morfoloji ve sinaptik bağlantı 17 Reorganizasyon kolaylaştırdı olduğuna inanılmaktadır. Bu yapısal değişiklikler deneyim-bağımlı plastisite için ölçülebilir bir kaynak sağlamak gibi, güvenilir bir boyama prosedürünün kullanımı önemlidir. Bu vibratome göre Golgi-Cox boyama işlemi güvenilir bir leke sağlarBöyle celloidin-gömme gibi diğer protokolleri ile belirgin olmayabilir ince dalları ve dendritik dikenler ING. Golgi-Cox prosedürün açıklık sadece uzun mesafeler için tek bir izleme nöronlarının nöronal izin elemanları (% 1-10), küçük bir kısmını leke kapasitesi kaynaklanmaktadır. Nöron sadece küçük bir kısmı leke ile emprenye edilir gerçeğine rağmen, görünür işlenen hücreler, hücre gövdesi, dendrit dendritik dikenler ve akson dahil olmak üzere tüm özellikleri taşır. Diğer kortikal yapılar unstained ve şeffaf kalır çünkü Ayrıca, boyama prosedür doğru yapıldığında, lekeli hücreler şeffaf bir arka plana karşı açık ve seçik olarak göze çarpıyor. Dışa doğru işleyişi kalıcı değişiklikler, sinir sisteminin plastisite ile ilişkili olması gerektiğini gerçekleştirilmesi nedeniyle, yapı ve bağlantı değiştirmek için nöronların yeteneği, yani, Golgi-Cox boyama işlemi ile araştırmacılar sağlayan birBu plastisitesini görselleştirmek ve ölçmek için güvenilir bir tekniktir.

Böyle perinatal stres 1,2, duyusal yoksunluk 3 ve ilaç toksisitesi 4 olarak beyin olgunlaşması üzerinde olumsuz erken deneyimlerin incelenmesi için birçok rapor ve kullanılan teknikler olmasına rağmen, olumlu deneyimlerin etkilerini incelemek için kullanılan çok az metodolojileri vardır Bu süre. Yanı sıra, çevre zenginleştirmeden, dokunsal uyarım etkileri gösterdi 5 ile tedavi arttırıcı birkaç beyin biridir. Tactile uyarım yalama ve tımar maternal sıçan davranışını taklit eden, deriye duyusal uyarma yöntemidir. Olumlu bir manipülasyon olarak genel kabul dokunsal uyarım prematüre bebeklerde ve yenidoğan ratlarda 6 olgunlaşmasını geliştirilmiş belirten çalışmalardan kaynaklanmaktadır. Buna ek olarak, Meaney laboratuarda 7 araştırma maternal yalama ve bakım daha yüksek seviyeleri yavru olumlu sonuçlarla bağlantılı olduğunu göstermiştir. T sayesindeHese olumlu etkiler, dokunsal uyarım hızla, anksiyete 8 azaltarak beyin hasarı 9-11 ile ilişkili sonuçların iyileştirilmesi ve uyuşturucu hassasiyete 12 alçaltarak amaçlayan bir iyileştirici stratejisi haline. Gibi, dokunsal uyarım dramatik nöronal morfoloji ve gelişmekte olan beynin sinaptik bağlantı yeniden düzenlemek için kanıtlanmış yeteneği ile pozitif erken deneyimleri tanıtımı için değerli bir tekniktir. Incelemek ve nöronal morfoloji değişiklikleri ölçmek amacıyla, bu sağlam nöronlar görselleştirmek için gereklidir. Golgi-Cox boyama işlemi tamamlandı nöronların 13 az sayıda ayrık boyanmasını sağlayan 1800&#39;lerin sonunda yayınlanan Camillo Golgi tekniğinin bir değişikliktir. Prosedür rastgele ve uyarlık yaygın ce de dahil olmak üzere büyük kusur, tüm nöronal elemanın küçük emprenye oranı izinleri görselleştirme, olarak anılan nöronların leke için görünür, ancakll organları, dendritler, dendritik dikenler ve aksonlar. Benzer şekilde, Golgi solüsyonu ile emprenye edilmesi, belirli bir beyin için gereken zaman da bir düşüş olarak atıf edilmiştir. Ancak, boyama, tam doku süresiz korunmuş olabilir, ve bir mikroskop ile nöronların beyin ve görselleştirme perfüzyon arasındaki süre en az 21 gün içinde tamamlanabilir bir kez, süre mantıksız olmadığını verilen. Buna ek olarak, protokol küçük değişikliklerle, Golgi-Cox boyama etkin bir şekilde tüm yaş aralıkları kemirgenler beyinleri emprenye edilmesi için de kullanılabilir. Yapısal düzeyde değişiklikler davranışsal ve psikolojik işleyişi kalıcı değişikliklere bağlı olduğu gibi, Golgi-Cox boyama tekniği nöroplastisiteyi ölçmek için değerli bir araç ile araştırmacılar sağlar.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of Material/ Equipment</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Dichromate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>P188</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mercuric Chloride</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>M1561</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chromate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>P220</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium Hydroxide</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>A669-500</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kodak Rapid Fix</td>
			<td>Vistek</td>
			<td>Kodak 146 4016</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EtOH-95 &amp; Anhydrous</td>
			<td>Commercial Alcohols</td>
			<td>No Cat Numbers</td>
			<td>All other Et-OH are dilutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Swiffers- Soft Feather-Like dusters</td>
			<td>Safeway</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Can be found at most grocery stores</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S-9378</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HemoDe</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>23410</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Permount</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>Sp15</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slides</td>
			<td>VWR</td>
			<td>160004-365</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslips</td>
			<td>VWR</td>
			<td>062011-9</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

visualizing the effects of a positive early experience, tactile stimulation, on dendritic morphology and synaptic connectivity with golgi-cox staining

Davranışlarında uzun dönemli değişiklikleri oluşturmak için, deneyimleri nöronal morfoloji ve sinaptik bağlantı istikrarlı değişiklikleri üreten gerekir. Tactile stimülasyon taklit yalama ve sıçan damat anne olumlu bir erken deneyimdir. Bu olumlu bir deneyim sıçan yavrular açığa böyle bir ev silgi gibi son derece erişilebilir malzemeler kullanılarak kolayca ve maliyet-etkin bir şekilde tamamlanabilir. Çapraz çöp tasarım kullanarak, yavrular ya 15 dakika, perinatal dönem boyunca, günde üç kez, okşadı veya rahatsız bırakılır. Bu olumlu bir erken deneyimle ilişkili nöroplastik değişiklikleri ölçmek için, beyin dokusunun Golgi-Cox boyama kullanılmaktadır. Golgi-Cox emdirme yerine tüm hücreleri daha nöron ayrı bir dizi leke gerçeği nedeniyle, Golgi-Cox çözeltisi ile kemirgen beyin boyama hücre gövdesi, dendrit aksonlar dahil tüm nöronal elementlerin görselleştirme izin verir, ve dendritik dikenler. Boyama işlemi is birkaç gün içinde yürütülen ve araştırmacı detaylara çok dikkat gerektirir. Boyama tamamlandıktan sonra, ancak, tüm beyin emprenye edilmiş ve devam eden analiz için süresiz muhafaza edilebilir. Bu nedenle, Golgi-Cox boyama deneyim-bağımlı plastisitesini eğitim için değerli bir kaynaktır.

Bu boyama işlemi uygun takip edildiğinde, tutarlı ve düzgün dendritler boyama ve dikenleri oluşturulur. Golgi-Cox nöronal lekelenme bir temsili için Şekil 1&#39;e bakınız. Bu prosedür kesintisiz şu doku gömme dendritik alanların yeni in vitro yöntemler geliştirilmiş ve izin verebilir görselleştirme karşılaştırılabilir boyanma üretir. Golgi-Cox boyanması için vibratome temelli bir yöntem ile boyanarak göre terminal şube ve piramidal nöronlar daha yaygın boyama üretmek için bulunmuştur ya celloidin gömülmüş ve kriyostat kesit doku, 15. Boyanma bu yöntem tüm beyin impregnates çünkü Ayrıca, tüm bölümleri hemen ya da ileride analiz edilebilir. Morfolojik değişim yeri özgün bir hipotez oluşturma sırasında her zaman açık değildir gibi, bu işlem ek beyin bölgelerinde keşif için izin veren bird gelecekte yararlı olabilir doku bertaraf önler. Bu boyama yöntemi herhangi bir yaşlı sıçan beyinlerinde (P0-yaşlılık) güvenilir boyanması için kullanılabilir. Genç beyinleri (&lt;1 gram) boyama, ancak, beyin yalnızca yerine yetişkin beyin için tavsiye edilen 14 gün, 6 gün için Golgi-Cox çözelti içinde kalması gerekir, tüm diğer işlemler sabit tutulur. Bu Golgi-Cox boyama işlemi sırasında karşılaşılabilecek ana zorluk talamus dahil olmak üzere merkezi beyin bölgelerinde, yüksek kaliteli boyamayı üretmek için yetersizliğidir. Tüm beyin aynı anda emprenye edilmiş olduğu gibi, orta bölgelerinde leke ideal konsantrasyonları alamazlar. Bu bulguya rağmen, Golgi-Cox teknik, hipokampus ve striatum gibi subkortikal bölgelerin olağanüstü boyama üretir. Prosedürün son bir sınırlama perfüzyon işlemi sırasında beyin kan tamamlanmamış ayrılması ile ortaya çıkar. Kan beyin dokusunda eserler üretebilirBu zor nöronlar fotoğraflamak ve iz yapar. Golgi-Cox boyama teknikleri nöronal düzeyde değişiklikleri incelemek için tasarlanmış çalışmaların geniş bir yelpazede için yararlıdır dendritik morfoloji ve nöroanatomisi güvenilir bir ölçüsünü sağlar. Erken doğum sonrası dönemde dokunsal stimülasyonunu izleyen prefrontal kortekste nöronal yapısı incelendiğinde, Golgi-Cox boyama dendritik karmaşıklığı dramatik bir artış ortaya koymuştur. Erken dokunma uyarısına ilgili anatomik değişimler (bkz. Şekil 1) dokunma uyarım uygulanan bir sıçandan piramidal nöronlar için bir kontrol sıçan piramidal nöronların omurga yoğunluğu karşılaştırılarak görsel olarak gösterilebilir. Buna ek olarak, bu tür dendritik arborization, dendritik uzunluğu ve omurga yoğunluk gibi parametreler hesaplanmıştır ve hayvanlar arasında istatistiksel olarak karşılaştırılabilir sürekli veri üretmek için analiz edilebilir. Güvenilir sonuçlar üretmek için, analiz am yapılmalıdırTedavi grubu başına üç hayvan ve hemisfer başına yaklaşık beş nöronların yayilan rastgele analiz edilen her bir beyin bölgesi için seçilmelidir. Şekil 2, bu dendritik karmaşıklığı dokunma stimülasyon olup mi hayvanlar almış olan hayvanların (dendrit dikenleri / um x um) göstermektedir . MPFC (CG3) analiz nöronların hem apikal ve baziler alanlarında, dokunsal nöronal uyarım parametrelerinin çoğalmasına neden olmuştur. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/50694/50694fig1.jpg" /> Şekil 1. Golgi Cox A. Temsilcisi fotoğraf geliştirme sırasında dokunsal uyarım alınan bir sıçan alan CG3 tabakası III piramidal nöron boyandı. B. Örnek CG3 baziler alanında Terminal dendritler dendritik dikenler (1.000 X) fotoğraf büyütülmüş , soldaki açık bir görüntü, kontrol grubunda ise bir sıçan ve ri üzerinde koyu bir resim içinGHT dokunsal uyarılmamış bir sıçan değil. <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/50694/50694fig2.jpg" /> Şekil 2. Ya da (* p &lt;0.01) gelişimi sırasında dokunma stimülasyon alınan veya vermedi yetişkin farelerin CG3 alanında nöronlar için ortalama apikal ve baziler dendritik karmaşıklığı (dikenler / um x um) açıklayıcı gösterimi.

Watch this Scientific Journal Video about Visualizing the Effects of a Positive Early Experience, Tactile Stimulation, on Dendritic Morphology and Synaptic Connectivity with Golgi-Cox Staining at JoVE

Visualizing the Effects of a Positive Early Experience, Tactile Stimulation, on Dendritic Morphology and Synaptic Connectivity with Golgi-Cox Staining

Bu kağıt sıçan yavrularının dokunsal uyarım ve nöronal morfoloji sonraki Golgi-Cox boyama işlemleri anlatılmaktadır. Dokunsal uyarım bir ev silgi ile yavrular okşayarak tarafından perinatal dönemde uygulanır olumlu bir deneyim olduğunu. Golgi-cox boyama tüm nöronların görüntülenmesine olanak güvenilir bir işlemdir.

Golgi-Cox Boyama ile dendritik morfoloji ve sinaptik bağlantı üzerinde olumlu bir Erken Deneyimi, Tactile uyarılması Etkileri, görselleştirme

To generate longer-term changes in behavior, experiences must be producing stable changes in neuronal morphology and synaptic connectivity. Tactile ...

visualizing-effects-positive-early-experience-tactile-stimulation-on

Research

JoVE Journal

Neuroscience

17.9K Görüntüleme.  University of Lethbridge.  Bu kağıt sıçan yavrularının dokunsal uyarım ve nöronal morfoloji sonraki Golgi-Cox boyama işlemleri anlatılmaktadır. Dokunsal uyarım bir ev silgi ile yavrular okşayarak tarafından perinatal dönemde uygulanır olumlu bir deneyim olduğunu. Golgi-cox boyama tüm nöronların görüntülenmesine olanak güvenilir bir işlemdir. 

Video: Visualizing the Effects of a Positive Early Experience, Tactile Stimulation, on Dendritic Morphology and Synaptic Connectivity with Golgi-Cox Staining

State-Dependency Effects on TMS:  A Look at Motive Phosphene Behavior

Transcranial magnetic stimulation (TMS) is a non-invasive neurostimulatory and neuromodulatory technique that can transiently or lastingly modulate cortical excitability (either increasing or decreasing it) via the application of localized magnetic field pulses.1,2 Within the field of TMS, the term state dependency refers to the initial, baseline condition of the particular neural region targeted for stimulation. As can be inferred, the effects of TMS can (and do) vary according to this primary susceptibility and responsiveness of the targeted cortical area.3,4,5

In this experiment, we will examine this concept of state dependency through the elicitation and subjective experience of motive phosphenes. Phosphenes are visually perceived flashes of small lights triggered by electromagnetic pulses to the visual cortex. These small lights can assume varied characteristics depending upon which type of visual cortex is being stimulated. In this particular study, we will be targeting motive phosphenes as elicited through the stimulation of V1/V2 and the V5/MT+ complex visual regions.6

In this article, we examine the effects of visually relevant state dependency on TMS induced motive phosphenic presentations.

TMS Devlet Bağımlılık Etkileri: Motive Phosphene Davranış Bir Bakış

Transcranial magnetic stimulation (TMS) is a non-invasive neurostimulatory and neuromodulatory technique that can transiently or lastingly modulate ...

Nörobilim

In Vivo Two-photon Imaging Of Experience-dependent Molecular Changes In Cortical Neurons

The brain's ability to change in response to experience is essential for healthy brain function, and abnormalities in this process contribute to a variety of brain disorders1,2. To better understand the mechanisms by which brain circuits react to an animal's experience requires the ability to monitor the experience-dependent molecular changes in a given set of neurons, over a prolonged period of time, in the live animal. While experience and associated neural activity is known to trigger gene expression changes in neurons1,2, most of the methods to detect such changes do not allow repeated observation of the same neurons over multiple days or do not have sufficient resolution to observe individual neurons3,4. Here, we describe a method that combines in vivo two-photon microscopy with a genetically encoded fluorescent reporter to track experience-dependent gene expression changes in individual cortical neurons over the course of day-to-day experience. 
One of the well-established experience-dependent genes is Activity-regulated cytoskeletal associated protein (Arc)5,6. The transcription of Arc is rapidly and highly induced by intensified neuronal activity3, and its protein product regulates the endocytosis of glutamate receptors and long-term synaptic plasticity7. The expression of Arc has been widely used as a molecular marker to map neuronal circuits involved in specific behaviors3. In most of those studies, Arc expression was detected by in situ hybridization or immunohistochemistry in fixed brain sections. Although those methods revealed that the expression of Arc was localized to a subset of excitatory neurons after behavioral experience, how the cellular patterns of Arc expression might change with multiple episodes of repeated or distinctive experiences over days was not investigated. 
In vivo two-photon microscopy offers a powerful way to examine experience-dependent cellular changes in the living brain8,9. To enable the examination of Arc expression in live neurons by two-photon microscopy, we previously generated a knock-in mouse line in which a GFP reporter is placed under the control of the endogenous Arc promoter10. This protocol describes the surgical preparations and imaging procedures for tracking experience-dependent Arc-GFP expression patterns in neuronal ensembles in the live animal. In this method, chronic cranial windows were first implanted in Arc-GFP mice over the cortical regions of interest. Those animals were then repeatedly imaged by two-photon microscopy after desired behavioral paradigms over the course of several days. This method may be generally applicable to animals carrying other fluorescent reporters of experience-dependent molecular changes4.

In Vivo Two-photon Imaging Of Experience-dependent Molecular Changes In Cortical Neurons

Experience-dependent molecular changes in neurons are essential for the brain's ability to adapt in response to behavioral challenges. An in vivo two-photon imaging method is described here that allows the tracking of such molecular changes in individual cortical neurons through genetically encoded reporters.

Kortikal Nöronlar In Vivo İki foton Of Görüntüleme Deneyimi bağımlı Moleküler Değişiklikler

The brain's ability to change in response to experience is essential for healthy brain function, and abnormalities in this process contribute to a variety ...

Fast Micro-iontophoresis of Glutamate and GABA: A Useful Tool to Investigate Synaptic Integration

One of the fundamental interests in neuroscience is to understand the integration of excitatory and inhibitory inputs along the very complex structure of the dendritic tree, which eventually leads to neuronal output of action potentials at the axon. The influence of diverse spatial and temporal parameters of specific synaptic input on neuronal output is currently under investigation, e.g. the distance-dependent attenuation of dendritic inputs, the location-dependent interaction of spatially segregated inputs, the influence of GABAergig inhibition on excitatory integration, linear and non-linear integration modes, and many more.
With fast micro-iontophoresis of glutamate and GABA it is possible to precisely investigate the spatial and temporal integration of glutamatergic excitation and GABAergic inhibition. Critical technical requirements are either a triggered fluorescent lamp, light-emitting diode (LED), or a two-photon scanning microscope to visualize dendritic branches without introducing significant photo-damage of the tissue. Furthermore, it is very important to have a micro-iontophoresis amplifier that allows for fast capacitance compensation of high resistance pipettes. Another crucial point is that no transmitter is involuntarily released by the pipette during the experiment.
Once established, this technique will give reliable and reproducible signals with a high neurotransmitter and location specificity. Compared to glutamate and GABA uncaging, fast iontophoresis allows using both transmitters at the same time but at very distant locations without limitation to the field of view. There are also advantages compared to focal electrical stimulation of axons: with micro-iontophoresis the location of the input site is definitely known and it is sure that only the neurotransmitter of interest is released. However it has to be considered that with micro-iontophoresis only the postsynapse is activated and presynaptic aspects of neurotransmitter release are not resolved. In this article we demonstrate how to set up micro-iontophoresis in brain slice experiments.

In this article we introduce fast micro-iontophoresis of neurotransmitters as a technique to investigate integration of postsynaptic signals with high spatial and temporal precision.

Glutamat ve GABA hızlı Micro-iyontoforez: Synaptic Entegrasyon Araştırma yararlı bir araç

One of the fundamental interests in neuroscience is to understand the integration of excitatory and inhibitory inputs along the very complex structure of ...

Deriving the Time Course of Glutamate Clearance with a Deconvolution Analysis of Astrocytic Transporter Currents

The highest density of glutamate transporters in the brain is found in astrocytes. Glutamate transporters couple the movement of glutamate across the membrane with the co-transport of 3 Na+ and 1 H+ and the counter-transport of 1 K+. The stoichiometric current generated by the transport process can be monitored with whole-cell patch-clamp recordings from astrocytes. The time course of the recorded current is shaped by the time course of the glutamate concentration profile to which astrocytes are exposed, the kinetics of glutamate transporters, and the passive electrotonic properties of astrocytic membranes. Here we describe the experimental and analytical methods that can be used to record glutamate transporter currents in astrocytes and isolate the time course of glutamate clearance from all other factors that shape the waveform of astrocytic transporter currents. The methods described here can be used to estimate the lifetime of flash-uncaged and synaptically-released glutamate at astrocytic membranes in any region of the central nervous system during health and disease.

We describe an analytical method to estimate the lifetime of glutamate at astrocytic membranes from electrophysiological recordings of glutamate transporter currents in astrocytes.

Astrositik Transporter Akımlar bir Dekonvolüsyon Analizi ile Glutamat Gümrükleme gün Dersin türetilmesi

The highest density of glutamate transporters in the brain is found in astrocytes. Glutamate transporters couple the movement of glutamate across the ...

Imaging Neurons within Thick Brain Sections Using the Golgi-Cox Method

The Golgi-Cox method of neuron staining has been employed for more than two hundred years to advance our understanding of neuron morphology within histological brain samples. While it is preferable from a practical perspective to prepare brain sections at the greatest thickness possible, in order to increase the probability of identifying stained neurons that are fully contained within single sections, this approach is limited from a technical perspective by the working distance of high-magnification microscope objectives. We report here a protocol to stain neurons using the Golgi-Cox method in mouse brain sections that are cut at 500 &#956;m thickness, and to visualize neurons throughout the depth of these sections using an upright microscope fitted with a high-resolution 30X 1.05 N.A. silicone oil-immersion objective that has an 800 &#956;m working distance. We also report two useful variants of this protocol that may be employed to counterstain the surface of mounted brain sections with the cresyl violet Nissl stain, or to freeze whole brains for long-term storage prior to sectioning and final processing. The main protocol and its two variants produce stained thick brain sections, throughout which full neuron dendritic&#160;trees and dendrite spines may be reliably visualized and quantified.

We present a protocol for using the Golgi-Cox staining method in thick brain sections, in order to visualize neurons with long dendritic&#160;trees contained within single tissue samples. Two variants of this protocol are also presented that involve cresyl violet counterstaining, and the freezing of unprocessed brains for long-term storage.

Golgi-Cox Yöntemiyle Kalın Beyin Bölümler içinde Görüntüleme Nöronlar

The Golgi-Cox method of neuron staining has been employed for more than two hundred years to advance our understanding of neuron morphology within ...

Analyzing Dendritic Morphology in Columns and Layers

In many regions of the central nervous systems, such as the fly optic lobes and the vertebrate cortex, synaptic circuits are organized in layers and columns to facilitate brain wiring during development and information processing in developed animals. Postsynaptic neurons elaborate dendrites in type-specific patterns in specific layers to synapse with appropriate presynaptic terminals. The fly medulla neuropil is composed of 10 layers and about 750 columns; each column is innervated by dendrites of over 38 types of medulla neurons, which match with the axonal terminals of some 7 types of afferents in a type-specific fashion. This report details the procedures to image and analyze dendrites of medulla neurons. The workflow includes three sections: (i) the dual-view imaging section combines two confocal image stacks collected at orthogonal orientations into a high-resolution 3D image of dendrites; (ii) the dendrite tracing and registration section traces dendritic arbors in 3D and registers dendritic traces to the reference column array; (iii) the dendritic analysis section analyzes dendritic patterns with respect to columns and layers, including layer-specific termination and planar projection direction of dendritic arbors, and derives estimates of dendritic branching and termination frequencies. The protocols utilize custom plugins built on the open-source MIPAV (Medical Imaging Processing, Analysis, and Visualization) platform and custom toolboxes in the matrix laboratory language. Together, these protocols provide a complete workflow to analyze the dendritic routing of Drosophila medulla neurons in layers and columns, to identify cell types, and to determine defects in mutants.

Here, we show how to analyze dendritic routing of Drosophila medulla neurons in columns and layers. The workflow includes a dual-view imaging technique to improve the image quality and computational tools for tracing, registering dendritic arbors to the reference column array and for analyzing the dendritic structures in 3D space.

Sütunlar ve Katmanlar dendritik Morfoloji Analizi

In many regions of the central nervous systems, such as the fly optic lobes and the vertebrate cortex, synaptic circuits are organized in layers and ...

Assessment of Hippocampal Dendritic Complexity in Aged Mice Using the Golgi-Cox Method

Dendritic spines are the protuberances from the neuronal dendritic shafts that contain&#160; excitatory synapses. The morphological and branching variations of the neuronal dendrites within the hippocampus are implicated in cognition and memory formation. There are several approaches to Golgi staining, all of which have been useful for determining the morphological characteristics of dendritic arbors and produce a clear background. The present Golgi-Cox method, (a slight variation of the protocol that is provided with a commercial Golgi staining kit), was designed to assess how a relatively low dose of the chemotherapeutic drug 5-flurouracil (5-Fu) would affect dendritic morphology, the number of spines, and the complexity of arborization within the hippocampus. The 5-Fu significantly modulated the dendritic complexity and decreased the spine density throughout the hippocampus in a region-specific manner. The data presented show that the Golgi staining method effectively stained the mature neurons in the CA1, the CA3, and the dentate gyrus (DG) of the hippocampus. This protocol reports the details for each step so that other researchers can reliably stain tissue throughout the brain with high quality results and minimal troubleshooting.

Here we present a Golgi-Cox protocol in extensive detail. This reliable tissue stain method allows for a high-quality assessment of the cytoarchitecture in the hippocampus, and throughout the entire brain, with minimal troubleshooting.

Yaşlı Bir Farede Hipokampal Dendritik Karmaşıklığın Golgi-Cox Yöntemi ile Değerlendirilmesi

Dendritic spines are the protuberances from the neuronal dendritic shafts that contain&#160; excitatory synapses. The morphological and branching ...

Effects of Transcranial Alternating Current Stimulation on the Primary Motor Cortex by Online Combined Approach with Transcranial Magnetic Stimulation

Transcranial Alternating Current Stimulation (tACS) is a neuromodulatory technique able to act through sinusoidal electrical waveforms in a specific frequency and in turn modulate ongoing cortical oscillatory activity. This neurotool allows the establishment of a causal link between endogenous oscillatory activity and behavior. Most of the tACS studies have shown online effects of tACS. However, little is known about the underlying action mechanisms of this technique because of the AC-induced artifacts on Electroencephalography (EEG) signals. Here we show a unique approach to investigate online physiological frequency-specific effects of tACS of the primary motor cortex (M1) by using single pulse Transcranial Magnetic Stimulation (TMS) to probe cortical excitability changes. In our setup, the TMS coil is placed over the tACS electrode while Motor Evoked Potentials (MEPs) are collected to test the effects of the ongoing M1-tACS. So far, this approach has mainly been used to study the visual and motor systems. However, the current tACS-TMS setup can pave the way for future investigations of cognitive functions. Therefore, we provide a step-by-step manual and video guidelines for the procedure.

Transcranial Alternating Current Stimulation (tACS) allows the modulation of cortical excitability in a frequency-specific fashion. Here we show a unique approach which combines online tACS with single pulse Transcranial Magnetic Stimulation (TMS) in order to "probe" cortical excitability by means of Motor Evoked Potentials.

Transkraniyal manyetik stimülasyon ile transkranyal alternatif akım stimülasyon Online kombine yaklaşım tarafından birincil Motor korteks üzerinde etkileri

Transcranial Alternating Current Stimulation (tACS) is a neuromodulatory technique able to act through sinusoidal electrical waveforms in a specific ...

Combining Optogenetics with Artificial microRNAs to Characterize the Effects of Gene Knockdown on Presynaptic Function within Intact Neuronal Circuits

The purpose of this protocol is to characterize the effect of gene knockdown on presynaptic function within intact neuronal circuits. We describe a workflow on how to combine artificial microRNA (miR)-mediated RNA interference with optogenetics to achieve selective stimulation of manipulated presynaptic boutons in acute brain slices. The experimental approach involves the use of a single viral construct and a single neuron-specific promoter to drive the expression of both an optogenetic probe and artificial miR(s) against presynaptic gene(s). When stereotactically injected in the brain region of interest, the expressed construct makes it possible to stimulate with light exclusively the neurons with reduced expression of the gene(s) under investigation. This strategy does not require the development and maintenance of genetically modified mouse lines and can in principle be applied to other organisms and to any neuronal gene of choice. We have recently applied it to investigate how the knockdown of alternative splice isoforms of presynaptic P/Q-type voltage-gated calcium channels (VGCCs) regulates short-term synaptic plasticity at CA3 to CA1 excitatory synapses in acute hippocampal slices. A similar approach could also be used to manipulate and probe the neuronal circuitry in vivo.

This protocol provides a workflow on how to combine artificial microRNA-mediated RNA interference with optogenetics to stimulate specifically presynaptic boutons with reduced expression of selective gene(s) within intact neuronal circuits.

Optogenetics gen nakavt etkileri olduğu gibi nöronal devreler içinde Presynaptic işlevi karakterize etmek için yapay mikroRNA'lar birleştirme

The purpose of this protocol is to characterize the effect of gene knockdown on presynaptic function within intact neuronal circuits. We describe a ...

Visualizing Axonal Growth Cone Collapse and Early Amyloid &#946; Effects in Cultured Mouse Neurons

Amyloid-&#946; (A&#946;) causes memory impairments in Alzheimer's disease (AD). Although therapeutics have been shown to reduce A&#946; levels in the brains of AD patients, these do not improve memory functions. Since A&#946; aggregates in the brain before the appearance of memory impairments, targeting A&#946; may be inefficient for treating AD patients who already exhibit memory deficits. Therefore, downstream signaling due to A&#946; deposition should be blocked before AD development. A&#946; induces axonal degeneration, leading to the disruption of neuronal networks and memory impairments. Although there are many studies on the mechanisms of A&#946; toxicity, the source of A&#946; toxicity remains unknown. To help identify the source, we propose a novel protocol that uses microscopy, gene transfection, and live cell imaging to investigate early changes caused by A&#946; in axonal growth cones of cultured neurons. This protocol revealed that A&#946; induced clathrin-mediated endocytosis in axonal growth cones followed by growth cone collapse, demonstrating that inhibition of endocytosis prevents A&#946; toxicity. This protocol will be useful in studying the early effects of A&#946; and may lead to more efficient and preventative AD treatment.

Visualizing Axonal Growth Cone Collapse and Early Amyloid &amp;#946; Effects in Cultured Mouse Neurons

Here a protocol to investigate the early effects of amyloid-&#946; (A&#946;) in the brain is presented. This shows that A&#946; induces clathrin-mediated endocytosis and collapse of axonal growth cones. The protocol is useful in studying early effects of A&#946; on axonal growth cones and may facilitate prevention of Alzheimer's disease.

Aksonal büyüme koni çöküşü ve erken amiloid β sonuç kültürlü fare nöronlar içinde görüntülenmesi

Amyloid-&#946; (A&#946;) causes memory impairments in Alzheimer's disease (AD). Although therapeutics have been shown to reduce A&#946; levels in the ...