Yazarlar fareler üreme için UC Davis Fare Biyoloji Anabilim Dalı teşekkür etmek istiyorum. Bu araştırma Merck KGaA, Darmstadt, Almanya bir hibe ile desteklenmiştir.

Tüm hayvan çalışmaları ve deneyleri University of California, Davis Kurumsal Hayvan Bakım ve Yönetim Danışma Kurulu kullanın tarafından onaylanmış bir protokol altında yapılmıştır. 1. MUC1.Tg Fare Yetiştirme ve Yayılım <ol><li> Heterozigot MUC1.Tg C57BL / 6 dişi fareler ile UC Davis Fare Biyoloji Programı (MBP) ırkları vahşi tip C57BL / 6 erkek fareler bizim üreme kolonisi kurmak. Gerektiği gibi MUC1.Tg yavrular çalışmalar için teslim edilir. </li><li> MBP personel fare tanımlama için tanımlanmış bir desen (0-99) içinde yavru ayak klibi ve uygulanabilir klip kuyruk. Parmak veya kuyruk doku standart DNA izolasyonu ve Polimeraz Zincir Reaksiyonu (PCR) analizi ile genotip için işlenir. </li></ol> 2. Çalışma Tasarımı <ol><li> Grup Ödevler Eğitim <ol><li> Bir denge ayrı ayrı her bir fare tartılır ve her bir fare için gram cinsinden ağırlığını kaydedin. </li><li> Inv prosedürün bu bölümüÇalışmanın metodolojisi ve tasarım ZEYTİN. Çalışmanın ilk bölümü için, OH-BBN ile mesane kanseri indüksiyon başlatmak için yaştaki MUC1.Tg ve vahşi tip fareler atayın. 8 hafta histoloji ile mesane tümörlerinin varlığını doğrulamak için son OH-BBN dozdan sonra fareler Euthanize. </li><li> Çalışmanın ikinci kısmı için, tedavi ve kontrol gruplarının uygun sayıda içine erkek MUC1.Tg fareler rastgele. Bu fareler 8 hafta son OH-BBN dozdan sonra Çalışmanın bitiminde sonra indüksiyon ve tümör gelişimi sırasında serum sitokin ve T hücre bağışıklık yanıtı için takip ve olacaktır. </li></ol></li><li> Mesane Kanseri İndüksiyon <ol><li> OH-BBN kanserojen ve yüksek derecede toksiktir. Bu kimyasal işleme ve saklama sırasında malzeme güvenlik bilgi formunun kuralları okuyun ve takip edin. </li><li> Ağırlık ve numbe göre, her bir fare için 100 ul bir hacim içinde, uygun bir doz (3 mg) sunmak için gerekli doz solüsyonu hesaplamaHer çalışma ve grup fareler r. </li><li> % 100 etanol içinde OH-BBN seyreltilir. Nihai bir konsantrasyona kadar 30 steril su ile mg / ml &#39;getirin. Son etanol: su konsantrasyonu 20:80 olmalıdır, h / h </li><li> 8 haftalıkken başlayan tedavi grubunda atama dayalı paslanmaz çelik, günlük 20 G sonda iğne, 5 gün / 12 hafta boyunca hafta, kullanarak OH-BBN sözlü yönetmek. </li></ol></li><li> Aşılama Tedaviler <ol><li> % 0.9 steril serum fizyolojik 600 ul ve iyice bir 0,5 inç 27 G iğne 6x ile çözüm çizerek tekrar süspansiyon liyofilize peptid aşı sulandırmak her flakon. İstenen doz 100 ul bir hacim içinde, teslim edilir, böylece tuzlu su kullanılarak, konsantrasyonu ayarlanır. </li><li> OH-BBN son dozdan sonra, bir 25 G iğne (hafta numarası farelerin yaşı gelir) kullanarak 100 ul deri altı enjeksiyonu ile sekiz haftalık döngüsü için haftalık olarak aşı yönetmek, Hafta 20 yılından itibaren. </li></ol></li><li> İzleme ve Örnek Toplama <ol><li> Tüm farenin tartılır ve haftada bir kez, yeni tümör varlığı için elle muayene. Palpe tümörler, idrarda kan ve / veya idrar retansiyonu varsa veya vücut ağırlığının ≥ 20% kaybetmiş herhangi bir fare Euthanize. </li><li> Daha sonra ilk OH-BBN doz öncesinde ve 4 haftalık aralıklarla sonra, submandibular kanamaları ile tam kan toplamak. Serum pıhtılaşma tüpleri (BD mikrokonteyner), kan toplayın, ve kanın pıhtılaşmasına için 30 dakika bekleyin. </li><li> 10 dakika boyunca 3500 x g&#39;de bir mikrosantrifüj içinde kan örnekleri santrifüjleyin. Dikkatli bir pipet kullanarak kapağı cryotubes vida serum aktarın. </li><li> -80 Sıvı azot ve mağaza Flash dondurma ° C multipleks tarafından daha fazla analiz kadar. </li><li> Sekiz hafta OH-BBN son dozdan sonra, CO 2 boğulma tüm fareler euthanize. </li><li> Bir diseksiyon gemide her fare yerleştirin ve dört bacağı ile sıkıştırmak. </li><li> Ma, forseps ve makas kullanılarakke üst karın bölgesinde yatay bir kesi. Epidermal katmanı ve karın duvarı arasında kesi içine makas yerleştirin ve yavaşça forseps yardımı ile temel doku da deriyi kemikten ayır. </li><li> Fare ön sonuna doğru orta ekseni takip eden yatay kesi dikey bir kesi yapmak. Göğüs kafesi karşı cildi ayırın ve 1 ml şırınga ve 22 G iğne, delinme kalp ve düzgün ve istikrarlı beraberlik ile kan toplamak kullanarak. </li><li> Serum izolasyon ve depolama için 2.4.3 ve 2.4.4 adıma bakın. </li><li> Forseps ve makas, kesim ve geri kabuğu epidermal tabakanın kalan kullanma. Karın duvarı ve periton kesti ve aseptik İmmünohistokimya (İHK) ve Western Blot için mesane tümörü çıkarmak. </li><li> Hücre canlılığı analizi (Muse) ve ELISPOT için dalak toplayın. İHK, yer mesane tümör dokusu kaset örnek ve oda sıcaklığında soğutulmuş formalin gecede düzeltmek için. </li&gt; <li> Ertesi gün,% 70 etanol ile formalin değiştirin. </li><li> Tümör Western blot analizi için, tümör homojenize protein ekstraksiyon tamponu artı proteaz inhibitörleri durdur ekleyin ve bir 1.5 ml mikrosantrifüj tüplerine aktarılır. </li><li> 30-60 saniye Vortex ve 5 dakika boyunca buz üzerinde tutun. Flaş ortam su sıvı azot ve çözülme de dondurma. , Vorteks dondurma ve iki kez çözülme süreci tekrarlayın. </li><li> 10 dakika 4 ° C&#39;de 10,000 xg&#39;de örnekleri santrifüj ve yeni işaretlenmiş tüplere hücresel ekstraktlar aktarın. </li><li> Protein ölçümleri için bisinkoninik asit Protein Deneyi (BCA) gerçekleştirerek konsantrasyonunu ölçmek. Mağaza örnekleri Western Blot analizi için -80 ° C kadar hazır. </li></ol></li></ol> 3. Moleküler Biyoloji / Batı Aşağıdaki prosedürler standart Western Blot protokolü kullanarak fare mesane tümörü dokusunda MUC1 ifade doğrulamak için yapıldı (verileri göstermiyorn) içerir. <ol><li> Yarı kuru aygıtı kullanılarak PVDF membran üzerine aktarmak daha sonra, SDS-poliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE) ile protein ekstreleri ayırınız ve. </li><li> % 0.1 içinde% 5 yağsız süt ile bloke membran proteini transfer Fosfat Tween-20, oda sıcaklığında bir orbital çalkalayıcı üzerinde 1 saat boyunca tuzlu su (PBS-T), pH 7.4 Tamponlu. </li><li> % 0.1 PBS-T içinde anti-MUC1 ya da anti-β-aktin antikoru ile bir çalkalayıcı içinde oda sıcaklığında 1 saat boyunca inkübe membran. </li><li> Çözelti aktarma ve% 0.1 PBS-T ekleyerek membran yıkayın. 5 dakika ve süzün için çalkalayıcı girdap membran. Bu adımı iki kez tekrarlayın. </li><li> Bir yaban turbu peroksidaz (HRP) konjuge sekonder antikor ile oda sıcaklığında 1 saat boyunca inkübe membran. </li><li> 3x (3.4 adıma bakın) yıkayın. </li><li> Flüorografi etkinleştirmek ve okumak için Gelişmiş Chemiluminesence (ECL) kiti için protokol izleyin. </li></ol> 4. Multiplex Florimetrik microbead İmmünoassay &lt;ol&gt; <li> Kurulum ve Hesaplamalar <ol><li> Bir 96-plaka haritası kullanarak, kuyulara boşlukları, standartlar, kontroller ve bilinmeyenler atayın. Sayısı ve analitlerin hacmi hesaplamak antikorlar, yakalama ve Streptavidin-Fikoeritrin (SA-PE) tahlili için gerekli. </li><li> Tüm tamponlar ve seyrelticiler oda sıcaklığına izin verin. Boş bir 96-plaka kullanarak standart ve numune dilüsyonları hazırlayın. </li><li> Üreticinin protokolü ve 96 oyuklu plaka içinde, uygun bir seyreltici ile standart 01:05 seri dilüsyonları için uygun serum matrisi ve liyofilize standart çözün. Boş kaplar için, uygun bir seyreltici kullanın. </li><li> 96-kuyulu plakanın geri kalan uygun bir seyreltici içinde tüm kontrol ve bilinmeyen numunelerin 1:02 seyreltin. </li><li> Boncuk karışımı, bir 15 ml tüp içinde uygun seyreltici gerekli hacmi pipetle. 20 saniye ve pipetle 15 ml&#39;lik bir tüp içine, her bir analitin gerekli hacmi vorteksleyin her boncuk şişe. </li&gt; <li> Her zaman photobleaching önlemek için ışıktan boncuk korumak. Esneklik ile örnek kaybını önlemek için emici materyal üzerinde 96 plaka koymayın. </li></ol></li><li> Tahlil Protokolü <ol><li> Tahlil Tamponu 200 ul ile 96 oyuklu filtre alt plaka Prewet ve filtrenin tamamen ıslatma için izin verir. Yavaşça 96-plaka vakum cihazı kullanarak drenaj ve bir kağıt havlu ile plakanın alt kuru kurulayın. </li><li> Bir çok kanallı pipet, boşlukları ve standartlar ve kontroller ve bilinmeyenler için atanan kuyulara analiz tamponunu pipet 25 ul için atanan kuyulara serum matris pipet 25 ul kullanma. </li><li> Pipet 25 boş ul, standartlar, kontroller ve ilgili atanan kuyulara bilinmeyenler. Vortex boncuk 20 saniye boyunca karıştırın ve bir rezervuar için boncuk aktarın. </li><li> Her kuyuya boncuk karışımı Pipet 25 ul. Alüminyum folyo veya ışıktan korumak için opak bir plaka kapağı ile plaka Kapak. </li><li&gt; bir levha sarsıcı üzerinde oda sıcaklığında iki saat boyunca 500 rpm&#39;de plaka çalkalayın. Boşaltın ve 0.1% 200 ul Fosfat içinde Tween 20 ile plaka yıkayın iki kez (PBS-T) Tuzlu Tamponlu. Boşaltın ve kuru kurulayın. </li><li> Yakalama antikor çözüm hazırlayın. % 0.1 PBS-T gerekli miktarda pipet ve 10 saniye boyunca 15 ml&#39;lik bir tüp ve girdap içine yakalama antikoru. Her kuyuya bir rezervuar ve pipet 25 ul yakalama antikor karışımı aktarın. </li><li> Bir levha sarsıcı üzerinde oda sıcaklığında bir saat boyunca 500 rpm&#39;de plaka çalkalayın. Iki boşaltın ve% 0.1 PBS-T 200 ul ile plaka yıkayın. Boşaltın ve kuru kurulayın. </li><li> SA-PE çözeltisi hazırlayın. 15 ml tüp ve 10 saniye girdabına% 0.1 PBS-T ve SA-PE gerekli hacmi pipetle. Her kuyuya bir rezervuar ve pipet 25 ul çözüm aktarın. </li><li> Bir levha sarsıcı üzerinde oda sıcaklığında 30 dakika boyunca 500 rpm&#39;de plaka çalkalayın. Iki boşaltın ve% 0.1 PBS-T 200 ul ile plaka yıkayın. Drenaj ve bçok kuru. </li><li> Pipet 100% 0.1 PBS-T ul ve süspanse boncuklar için en az iki dakika boyunca 500 rpm&#39;de bir levha sarsıcı üzerinde çalkalayın. LUMINEX LX200 makinede plaka okuma ve analiz. </li></ol></li></ol> 5. IFN-γ/IL-4 ELISPOT Hazırlama ve Analiz <ol><li> Bir biyolojik güvenlik kabininde, 100 mikron Naylon doku ile dalak işlemek 5 ml steril fosfat içine elekler Salin (PBS) steril Petri kapları içinde tamponlu. Steril 15 ml tüp içinde, lenfosit ayırma ortamı, 3 ml üzerine tabaka splenositler. </li><li> Kırmızı kan hücreleri, lenfositlerin ayırmak için 15 dakika boyunca 600 x g&#39;de santrifüj tüpleri. Yeni bir steril 15 ml tüpler için degrade yukarıda katmanlı lenfositler aktarın. </li><li> Steril PBS ile 10 ml&#39;ye ses seviyesini ayarlayın. Pelet hücreleri 10 dakika boyunca 600 x g&#39;de santrifüj süspansiyon. </li><li> Süpernatan aspire ve hücre canlılığı, 1 ml PBS içinde tekrar süspansiyon hücreleri ve Muse saymakanalizörü. Muse Sayısı ve Canlılık Kiti protokolü izleyin. </li><li> 1.5 ml vidalı kapaklı santrifüj 1:10 seyreltme faktörleri de tüpler: 1:20, ve Kont ve Canlılık Reaktif (en az toplam hacmi 300 ul) 01:40 (ya da gerektiği gibi) en lenfositlerinin seri dilüsyonları olun. Muse karıştırın ve analiz etmek için birkaç kez her seyreltme pipet ve aşağı yukarı. </li><li> ELISPOT plaka için örnekleri ve koşulları bir tabak haritası hazırlayın. Üreticinin protokolü ve orta pipetle 100 ul peptid (10 ug / ml) ya da karıştıran her bir peptit (10 ug / ml) göre ELISPOT plakası hazırlayın. </li><li> De her 1,0 x 10 6 hücre teslim ve 37 ° C gecede plaka inkübe hücre süspansiyonu Pipet 100 ul,. </li><li> ELISPOT testi için üreticinin protokol izleyin. Bir diseksiyon mikroskobu kullanarak gelişmiş ELISPOT plaka analiz edin. </li><li> Renkli noktalar sayısı correspondi sayarak sonuçları sayısalHer iyi her analit için ng. Noktaları her bir spot-oluşturucu hücrelerin sayısı (SFC) karşılık gelir. </li></ol> 6. Immünhistokimyasal (İHK) ve Hematoksilen ve Eosin (H &amp; E) Boyama <ol><li> Immünohistokimyasal analizi için 4 mikron parafin ve adım bölümünde embed yukarıda açıklandığı gibi korunmuş mesane tümör dokusu (Bölüm 2.4.11), alın. </li><li> MUC1 tandem tekrar bölgede tanıyan bir MUC1 antikor kullanarak IHC gerçekleştirin. Dokuda mevcut endojen immünoglobülin ile ikincil fare antikorunun reaktivitesini en aza indirmek için Animal Research takımı peroksidaz kullanın. </li><li> Standart protokolleri kullanarak H &amp; E boyama yapın. </li></ol> 7. İstatistiksel Yöntemler Multiplex Florimetrik microbead İmmünoassay için, ortalama tedavi ve kontrol grubu arasında serum sitokin konsantrasyonları gözlenen karşılaştırmak için bir iki kuyruklu Student t-testi kullanın. ELISPOT için, bir tek-W kullanımımedya kontrolü arasındaki koloniler oluşturan nokta karşılaştırmak ay ANOVA, peptid ve peptid grupları şifreli. Bir yanlış pozitif sonuç olasılığını azaltmak için Dunnett Çoklu Karşılaştırma Testi. ≤ 0.05 p-değeri tüm analizler için önemli ölçüde farklı olarak kabul edilir.

<ol>
	<li>Siegel, R., Naishadham, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> CA Cancer J. Clin. 63, 11-30 (2013).</li><li>Lynch, C. F., Davila, J. A., Ries, L. A. G., Young, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+23.+Cancer+of+the+urinary+bladder.">Chapter 23. Cancer of the urinary bladder.</a> SEER Survival Monograph: Cancer Survival Among Adults: U.S. SEER Program, 1988-2001, Patient and Tumor Characteristics. , 07-6215 (2007).</li><li>Jacobs, B. L., Lee, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bladder+cancer+in+2010:+how+far+have+we+come.">Bladder cancer in 2010: how far have we come.</a> CA Cancer J. Clin. 60 (4), 244-272 (2010).</li><li>Sexton, W. J., Wiegand, L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bladder+cancer:+a+review+of+non-muscle+invasive+disease.">Bladder cancer: a review of non-muscle invasive disease.</a> Cancer Control. 17 (4), 256-268 (2010).</li><li>Bohle, A., Jocham, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravesical+bacillus+Calmette-Guerin+versus+mitomycin+C+for+superficial+bladder+cancer:+a+formal+meta-analysis+of+comparative+studies+on+recurrence+and+toxicity.">Intravesical bacillus Calmette-Guerin versus mitomycin C for superficial bladder cancer: a formal meta-analysis of comparative studies on recurrence and toxicity.</a> J. Urol. 169 (1), 90-95 (2003).</li><li>Shokeir, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Squamous+cell+carcinoma+of+the+bladder:+pathology,+diagnosis+and+treatment.">Squamous cell carcinoma of the bladder: pathology, diagnosis and treatment.</a> BJU Int. 93 (2), 216-220 (2004).</li><li>Rosenberg, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progress+in+human+tumour+immunology+and+immunotherapy.">Progress in human tumour immunology and immunotherapy.</a> Nature. 411 (6835), 380-384 (2001).</li><li>Joudi, F. N., Smith, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Final+results+from+a+national+multicenter+phase+II+trial+of+combination+bacillus+Calmette-Guerin+plus+interferon+alpha-2B+for+reducing+recurrence+of+superficial+bladder+cancer.">Final results from a national multicenter phase II trial of combination bacillus Calmette-Guerin plus interferon alpha-2B for reducing recurrence of superficial bladder cancer.</a> Urol. Oncol. 24 (4), 344-348 (2006).</li><li>Lau, S. K., Weiss, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+expression+of+MUC1,+MUC2,+and+MUC5AC+in+carcinomas+of+various+sites:+an+immunohistochemical+study.">Differential expression of MUC1, MUC2, and MUC5AC in carcinomas of various sites: an immunohistochemical study.</a> Am. J. Clin. Pathol. 122 (1), 61-69 (2004).</li><li>Hollingsworth, M. A., Swanson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mucins+in+cancer:+protection+and+control+of+the+cell+surface.">Mucins in cancer: protection and control of the cell surface.</a> Nat. Rev. Cancer. 4 (1), 45-60 (2004).</li><li>Scholfield, D. P., Simms, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MUC1+mucin+in+urological+malignancy.">MUC1 mucin in urological malignancy.</a> BJU Int. 91 (6), 560-566 (2003).</li><li>Devine, P. L., McKenzie, I. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mucins:+structure,+function,+and+association+with+malignancy.">Mucins: structure, function, and association with malignancy.</a> Bioessays. 14 (9), 619-625 (1992).</li><li>Jerome, K. R., Barnd, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytotoxic+T-lymphocytes+derived+from+patients+with+breast+adenocarcinomas+recognize+an+epitope+present+on+the+protein+core+of+a+mucin+molecule+preferentially+expressed+by+malignant+cells.">Cytotoxic T-lymphocytes derived from patients with breast adenocarcinomas recognize an epitope present on the protein core of a mucin molecule preferentially expressed by malignant cells.</a> Cancer Res. 51 (11), 2908-2916 (1991).</li><li>Takahashi, T., Makiguchi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+MUC1+on+myeloma+cells+and+induction+of+HLA-unrestricted+CTL+against+MUC1+from+a+multiple+myeloma+patient.">Expression of MUC1 on myeloma cells and induction of HLA-unrestricted CTL against MUC1 from a multiple myeloma patient.</a> J. Immunol. 153 (5), 2102-2109 (1994).</li><li>Choi, C., Witzens, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enrichment+of+functional+CD8+memory+T+cells+specific+for+MUC1+in+bone+marrow+of+patients+with+multiple+myeloma.">Enrichment of functional CD8 memory T cells specific for MUC1 in bone marrow of patients with multiple myeloma.</a> Blood. 105 (5), 2132-2134 (2005).</li><li>Barnd, D. L., Lan, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specific,+major+histocompatibility+complex-+unrestricted+recognition+of+tumor-associated+mucins+by+human+cytotoxic+T-cells.">Specific, major histocompatibility complex- unrestricted recognition of tumor-associated mucins by human cytotoxic T-cells.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 86 (18), 7159-7163 (1989).</li><li>Ioannides, C. G., Fisk, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytotoxic+T-cells+from+ovarian+malignant+tumors+can+recognize+polymorphic+epithelial+mucin+core+peptides.">Cytotoxic T-cells from ovarian malignant tumors can recognize polymorphic epithelial mucin core peptides.</a> J. Immunol. 151 (7), 3693-3703 (1993).</li><li>Tang, C. K., Katsara, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategies+used+for+MUC1+immunotherapy:+human+clinical+studies.">Strategies used for MUC1 immunotherapy: human clinical studies.</a> Expert Rev. Vaccines. 7 (7), 963-975 (2008).</li><li>Mukherjee, P., Ginardi, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MUC1-specific+cytotoxic+T+lymphocytes+eradicate+tumors+when+adoptively+transferred+in+vivo.">MUC1-specific cytotoxic T lymphocytes eradicate tumors when adoptively transferred in vivo.</a> Clin. Cancer Res. 7, 848-855 (2001).</li><li>Acres, B., Limacher, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MUC1+as+a+target+antigen+for+cancer+immunotherapy.">MUC1 as a target antigen for cancer immunotherapy.</a> Expert Rev. Vaccines. 4 (4), 493-502 (2005).</li><li>Butts, C., Murray, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Randomized+phase+IIB+trial+of+BLP25+liposome+vaccine+in+stage+IIIB+and+IV+non-small-cell+lung+cancer.">Randomized phase IIB trial of BLP25 liposome vaccine in stage IIIB and IV non-small-cell lung cancer.</a> J. Clin. Oncol. 23 (27), 6674-6681 (2005).</li><li>Butts, C., Maksymiuk, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Updated+survival+analysis+in+patients+with+stage+IIIB+or+IV+non-small-cell+lung+cancer+receiving+BLP25+liposome+vaccine+(L-BLP25),+phase+IIB+randomized,+multicenter,+open-label+trial.">Updated survival analysis in patients with stage IIIB or IV non-small-cell lung cancer receiving BLP25 liposome vaccine (L-BLP25), phase IIB randomized, multicenter, open-label trial.</a> J. Cancer. Res. Clin. Oncol. 137 (9), 1337-1342 (2011).</li><li>Agrawal, B., Krantz, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+induction+of+primary+human+CD4++and+CD8++T+cell+responses+against+cancer-associated+MUC1+peptide+epitopes.">Rapid induction of primary human CD4+ and CD8+ T cell responses against cancer-associated MUC1 peptide epitopes.</a> Int. Immunol. 10 (12), 1907-1916 (1998).</li><li>Palmer, M., Parker, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phase+I+study+of+the+BLP25+(MUC1+peptide)+liposomal+vaccine+for+active+specific+immunotherapy+in+stage+IIIB/IV+non-small-cell+lung+cancer.">Phase I study of the BLP25 (MUC1 peptide) liposomal vaccine for active specific immunotherapy in stage IIIB/IV non-small-cell lung cancer.</a> Clin. Lung Cancer. 3 (1), 49-57 (2001).</li><li>Walsh, M. D., Hohn, B. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mucin+expression+by+transitional+cell+carcinomas+of+the+bladder.">Mucin expression by transitional cell carcinomas of the bladder.</a> Br. J. Urol. 73 (3), 256-262 (1994).</li><li>Murray, A., Simms, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+and+characterization+of+rhenium-188-C595+antibody+for+radioimmunotherapy+of+transitional+cell+bladder+cancer.">Production and characterization of rhenium-188-C595 antibody for radioimmunotherapy of transitional cell bladder cancer.</a> J. Nucl. Med. 42 (5), 726-732 (2001).</li><li>Hughes, O., Bishop, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+superficial+bladder+cancer+by+the+intravesical+administration+of+67copper-labelled+anti-MUC1+mucin+monoclonal+antibody+C595.">Targeting superficial bladder cancer by the intravesical administration of 67copper-labelled anti-MUC1 mucin monoclonal antibody C595.</a> J. Clin. Oncol. 18 (2), 363-370 (2000).</li><li>Conn, I. G., Crocker, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HMFG-2+as+a+prognostic+indicator+in+superficial+bladder+cancer.">HMFG-2 as a prognostic indicator in superficial bladder cancer.</a> J. Clin. Pathol. 41 (11), 1191-1195 (1988).</li><li>Hughes, O., Denley, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MUC1+mucin+expression+in+transitional+cell+carcinoma+of+the+bladder:+a+target+for+diagnosis+and+therapy+with+monoclonal+antibody+C595.">MUC1 mucin expression in transitional cell carcinoma of the bladder: a target for diagnosis and therapy with monoclonal antibody C595.</a> J. Urol. Pathol. 12, 185-197 (2000).</li><li>Rowse, G. J., Tempero, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tolerance+and+immunity+to+MUC1+in+a+human+MUC1+transgenic+murine+model.">Tolerance and immunity to MUC1 in a human MUC1 transgenic murine model.</a> Cancer Res. 58 (2), 315-321 (1998).</li><li>Mukherjee, P., Madsen, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mucin-1+specific+immunotherapy+in+a+mouse+model+of+spontaneous+breast+cancer.">Mucin-1 specific immunotherapy in a mouse model of spontaneous breast cancer.</a> J. Immunother. 26 (1), 47-62 (2003).</li><li>McCormick, D. L., Ronan, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+total+dose+and+dose+schedule+on+induction+of+urinary+bladder+cancer+in+the+mouse+by+N-butyl-N-(4-hydroxy-butyl)nitrosamine.">Influence of total dose and dose schedule on induction of urinary bladder cancer in the mouse by N-butyl-N-(4-hydroxy-butyl)nitrosamine.</a> Carcinogenesis. 2 (3), 251-254 (1981).</li><li>Wurz, G. T., Gutierrez, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antitumor+effects+of+L-BLP25+antigen-specific+tumor+immunotherapy+in+a+novel+human+MUC1+transgenic+lung+cancer+mouse+model.">Antitumor effects of L-BLP25 antigen-specific tumor immunotherapy in a novel human MUC1 transgenic lung cancer mouse model.</a> J. Transl. Med. 11, 10-1186 (2013).</li><li>Kunze, E., Schauer, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stages+of+transformation+in+the+development+of+N-butyl-N-(4hydroxybutyl)-nitrosamine-induced+transitional+cell+carcinomas+in+the+urinary+bladder+of+rats.">Stages of transformation in the development of N-butyl-N-(4hydroxybutyl)-nitrosamine-induced transitional cell carcinomas in the urinary bladder of rats.</a> Z Krebsforsch Klin. Onkol. Cancer Res. Clin. Oncol. 87 (2), 139-160 (1976).</li><li>Crallan, R. A., Georgopoulos, N. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+models+of+human+bladder+carcinogenesis.">Experimental models of human bladder carcinogenesis.</a> Carcinogenesis. 27 (3), 374-381 (2006).</li><li>Samma, S., Uemura, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+induction+of+carcinoma+in+situ+in+dog+urinary+bladder+by+sequential+treatment+with+N-methyl-N'-nitrosourea+and+N-butyl-N-(4-hydroxybutyl)-nitrosamine.">Rapid induction of carcinoma in situ in dog urinary bladder by sequential treatment with N-methyl-N'-nitrosourea and N-butyl-N-(4-hydroxybutyl)-nitrosamine.</a> Gann. 75 (5), 385-387 (1984).</li><li>Bornhof, C., Wolfrath, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+urinary+bladder+urothelial+cancers+in+the+rabbit+by+dibutylnitrosamine+with+an+artificial+bladder+calculus+as+cocarcinogen.">Induction of urinary bladder urothelial cancers in the rabbit by dibutylnitrosamine with an artificial bladder calculus as cocarcinogen.</a> Urologe A. 28 (6), 339-343 (1989).</li><li>Irving, C. C., Tice, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+N-n-butyl-N-(4-hydroxybutyl)nitrosamine-induced+urinary+bladder+cancer+in+rats+by+administration+of+disulfiram+in+the+diet.">Inhibition of N-n-butyl-N-(4-hydroxybutyl)nitrosamine-induced urinary bladder cancer in rats by administration of disulfiram in the diet.</a> Cancer Res. 39 (8), 3040-3043 (1979).</li><li>Mehta, N. R., Wurz, G. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=L-BLP25+vaccine+plus+letrozole+induces+a+TH1+immune+response+and+has+additive+antitumor+activity+in+MUC1-expresssing+mammary+tumors+in+mice.">L-BLP25 vaccine plus letrozole induces a TH1 immune response and has additive antitumor activity in MUC1-expresssing mammary tumors in mice.</a> Clin. Cancer Res. 18 (10), 2861-2871 (2012).</li></ol>

DPV, AYKA, SMG, CJK, AMG, ve GKH herhangi bir çıkar çatışması beyan ederim. MWD Merck KGaA alınan bir hibe Baş Araştırmacı ve MW Merck KGaA bir çalışanıdır.

Insan MUC1.Tg farelerde invaziv geçiş ve skuamöz hücreli mesane kanserinin başarılı indüksiyon immünoterapi gelişimi için klinik öncesi model sunuyor. Immünoterapötik çalışmalar zaman yanı sıra immünoterapi için bağışıklık yanıtı üzerinde tümör ilerlemesi için inflamatuvar yanıt değerlendirmek için bir spontan, bağışıklık sağlam modelinin kullanılmasını gerektirir. Kendiliğinden bir tümör geliştirme modelinde, tümör mikro bozulmadan kalır ve tümörlerin tedavi antitüm...

Mesane kanseri kanser dördüncü en sık görülen ve Amerikan erkeklerde kanser ölümlerinin sekizinci önde gelen nedenidir. Amerika Birleşik Devletleri&#39;nde, mesane kanserinden tahmini 72.500 yeni olgu ve 15.000 ölüm 2013 1 kombine erkek ve kadınlar arasında bekleniyor. Mesane kanseri insidansı kadınlara göre yaklaşık üç kat erkeklerde yüksek olduğunu. Vakaların% 90&#39;ından için Amerika Birleşik Devletleri&#39;nde, geçiş hücreli karsinom (TTK) hesap, skuamöz hücreli karsinom (SCC)% 2&#39;den az 2 oranı varken. Papiller TTK için genel nispi 5-yıllık sağkalım oranı SCC 2 için 30.9% ile karşılaştırıldığında% 91.5 olduğunu. Noninvaziv papiller TCCS bile hastaların% 50 daha tedavi daha fazla kas invaziv hastalığa 3,4 ilerleyen bu hastaların% 30 kadar ile, 5 yıl içinde nüks yaşayacaksınız ile, tanı sırasında vakaların yaklaşık% 75 için hesap da . Kas olmayan inv için tipik bir tedavi rejimleriAsive hastalığı intravezikal kemoterapi takiben transüretral rezeksiyon (TUR) içerir. Yüksek dereceli Ta veya T1 tümörlü hastalarda, tekrar TUR kemoterapi 3,4 öncesinde yapılabilir. Düşük dereceli Ta nüks veya yüksek dereceli Ta ya da T1 lezyonu olan hastalar için, TUR Calmette-Guerin (BCG), 3,4 kullanılabilir Bacillus şeklinde kemoterapi veya immünoterapi izledi. İntravezikal BCG nüks 5 zamana göre intravezikal mitomisin C üstün olduğu gösterilmiştir. T2 kas invaziv hastalık için, neoadjuvan kemoterapi olan veya olmayan radikal sistektomi tedavi 3 için önerilen bir derstir. SCC olan hastalarda, sistektomi en etkili tedavi 6 gibi görünmektedir. En iyi tedaviler mevcuttur rağmen nüks çok yüksek oranda göz önüne alındığında, mesane kanseri için yeni, daha etkili tedaviler için ihtiyaç açıkça vardır. Bladd için yeni immünoterapiler genişletilmesier kanseri hastalıksız sağkalım uzatmak için söz tutabilir olası bir yaklaşımdır. Tarihsel olarak, BCG mesane kanseri için tek etkili immünoterapi olmuştur. Tesir mekanizması artan interlökin-2 düzeyleri (IL-2) ve interferon gama (IFN-γ) 4 ile bir T-yardımcı 1 (Th1) tipi immün cevabın non-spesifik indüksiyonu dahil olduğu düşünülmektedir. Hücresel veya Th1 bağışıklık, hümoral veya Th2 olarak kanser immünoterapisi için kritik olan, bağışıklık sistemi büyüme faktörü reseptörleri 7 karşı antikor hariç olmak üzere, katı tümörler karşı etkili olduğu gösterilmiştir olmamıştı. BCG monoterapi yararları geliştirmek için bir girişim, IFN-α 2B/BCG kombinasyonu immünoterapi kesin sonuçları 8 ile bir faz II klinik çalışmada değerlendirilmiştir. Mesane kanseri immünoterapisi için alternatif bir yaklaşım 7 kanser immünoterapisi daha özel yapmıştır belirlenmesini arasında tümör ilişkili antijenler (TAAS), hedef olabilir, </s&gt; kadar. Böyle bir TAA, mesane, göğüs, akciğer, ve pankreas kanseri 9,10 gibi birçok epitelyal hücre kanserleri aşırı eksprese bir hücre yüzeyi glikoproteini musin 1 (MUC1) &#39;dir. MUC1 ifadesi ve değiştirilmesi de önemli ölçüde kanser sırasında değiştirildiği, öyle ki underglycosylation peptid çekirdeği üzerine birbiri ardına dizilmiş tekrar bölgesinin değişken sayıda (VNTR) olarak bilinen amino asit dizileri arasında antijenik ortaya koyar. MUC1 kendi kendine moleküldür da, bu immünodominant VNTR bölgelerde normalde Çok kapsamlı glikozilasyon maruz değildir ve bu nedenle yabancı 11,12 olarak bağışıklık sistemi tarafından görülür. Özellikle MUC1 epitopları tanır sitotoksik T lenfositleri (CTL &#39;ler) bir MUC1 için potansiyel bir hedef alma, meme kanseri olan hastalarda 13, hem de miyelom hastaları 14,15 kan ve kemik iliği, tümör-lenf düğümlerinden izole edilmiştir hücresel bağışıklık tepkisi. Underglycosylate bir immünodominant VNTR dizileriMUC1 D formunda 16-19 tümör hücrelerinin imha sonuçlanan CTL &#39;ler tarafından tanınır. Kanserli MUC1 özgü hücresel ve / veya humoral bağışıklık yanıtları, ancak, tümörler ortadan kaldırmak için yeterince güçlü değildir. MUC1 için mevcut zayıf bağışıklık yanıtı artırmak için, sentetik immünodominant peptidler klinik yarar 18,20 olması kadar güçlü bir CTL yanıt oluşturmak için aşılama yoluyla sokulabilir. Bir MUC1 lipozomal aşı halen akciğer kanseri hastalarında 21,22 hayatta kalma oranları MUC1-pozitif tümör hücrelerini öldürme yeteneğine sahip CTL&#39;lerin oluşturmak ve bir Th1 sitokin tepkisi polarize 23,24 üretmek için gösterilmiştir. MUC1 ifade 9,11,25 bir yüksek düzeyde, mesane kanseri MUC1-yönelik immünoterapi 26,27 test etmek için mantıklı bir adaydır. Ayrıca, MUC1 kanser 28, TTK MUC1 ifade önemli evresi ve derecesi ile ilişkili mesane bir prognostik faktör olarak potansiyele sahip ve metastatik TCCMUC1 29 ifade etmeye devam ettiği gösterilmiştir. Mesane kanseri MUC1 yönlendirilmiş immünoterapi potansiyel kullanımını değerlendirmek amacıyla, bir bağışıklık bozulmamış insan MUC1 (hMUC1)-ifade C57BL / 6 arka plan 30 mesane kanseri congenic transgenik (MUC1.Tg) fare modeli geliştirilmiştir. İnsan MUC1 30,31 insanlarda gözlenen ile tutarlı bir desen doku ekspresyonu ile sonuçlanan, kendi promotörünün kontrolü altında bir kendi kendine protein olarak ifade edilir. Fareler daha sonra, bilinen mesane kanserojen N-bütil-N-(4-hidroksibutil) nitrozamin (OH-BBN) 32 ve sonuçta ortaya çıkan tümörlerin hMUC1 ekspresyonu ile tümör tipi ve derecesi açısından değerlendirildi ile indüklenmiştir. Tümör gelişimi sırasında Th1/Th2 sitokin düzeyleri üzerindeki kanserojen etkisini değerlendirmek için serum örnekleri multipleks analiz için periyodik olarak toplanmıştır. Fareler daha sonra, bir MUC1 hedefli bir peptid aşı ile muamele edilmiş ve sitokin ve bağışıklık tepkileri değerlendirmesine edildimultipleks florometrik microbead immunoassay ve ELISPOT tarafından ted.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Reagent&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-butyl-N-(4-hydroxybutyl)-nitrosamine (OH-BBN)</td>
			<td>TCI America</td>
			<td>B0938</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 G Gavage Needles</td>
			<td>Popper &#38; Sons, Inc.</td>
			<td>7921</td>
			<td>Stainless steel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peptide Vaccine</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>investigational agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Microtainers</td>
			<td>BD</td>
			<td>365957</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Cassettes</td>
			<td>Simport</td>
			<td>M490-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% Neutral Buffered Formalin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>SF100-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lysis Buffer</td>
			<td>Pierce</td>
			<td>87787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Halt Protease &#38; Phosphatase inhibitor cocktail</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>78444</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pierce BCA Protein Assay Kit</td>
			<td>Pierce</td>
			<td>23225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Cytokine 20plex Kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>LMC006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic Microsphere Beads</td>
			<td>Luminex</td>
			<td>MC100xx-01</td>
			<td>xx is the bead region</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse TNF- Capture Antibody</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>551225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse TNF- Detection Antibody</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>554415</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse IFN- Capture Antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab10742</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse IFN- Detection Antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab83136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS, pH 7.4</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P3813-10PAK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween-20</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BP337-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Assay Buffer</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>L-MAB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytokine Standard</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>MXM8070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi-screen HTS 96well filter plates</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>MSBVN1210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SA-PE</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>SA10044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 m Nylon Tissue Sieves</td>
			<td>BD</td>
			<td>352360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Splenocyte Separation Media</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>17-829E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TNF- /IL-4 ELISpot plates</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>ELD5217</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit Anti-MUC1 monoclonal antibody</td>
			<td>Epitomics</td>
			<td>2900-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat Anti-actin monoclonal antibody</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A1978</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-rabbit HRP antibody</td>
			<td>Promega</td>
			<td>W401B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-mouse HRP antibody</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology, Inc.</td>
			<td>SC-2005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PVDF membrane</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>162-0174</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini Protean TGX Precast Gels</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>456-1083</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Muse Count &#38; Viability Kit</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>MCH100104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MUC1 Antibody</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>550486</td>
			<td>IHC antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal Research Peroxidase Kit</td>
			<td>Dako</td>
			<td>K3954</td>
			<td>IHC staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>[header]</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment and Software</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millipore plate vaccum apparatus</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>MSVMHTS00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luminex Lx200</td>
			<td>Millipore / Luminex</td>
			<td>40-013</td>
			<td>Manufactured by Luminex, distributed by Millipore</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luminex Xponent Software</td>
			<td>Millipore / Luminex</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Version 3.1; included with Luminex Lx200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Milliple Analyst Software</td>
			<td>Milliplex / VigeneTech</td>
			<td>40-086</td>
			<td>Version 5.1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Muse Cell Analyzer</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>0500-3115</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Muse Software</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Version 1.1.0.0; included with Analyzer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting Microscope</td>
			<td>Unitron</td>
			<td>Z730</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graphpad Prism Software</td>
			<td>Graphpad Software Inc.</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Version 5.1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini Protean Tetra Cell Gel apparatus</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>165-8001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trans Blot SD Cell and PowerPac</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>170-3849</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

induction of invasive transitional cell bladder carcinoma in immune intact human muc1 transgenic mice:  a model for immunotherapy development

Invaziv mesane kanseri bir klinik öncesi modeli insan müsin 1 (MUC1) immünoterapi ve / veya sitotoksik kemoterapi değerlendirmek amacıyla transgenik (MUC1.Tg) farelerde geliştirilmiştir. Mesane kanseri, C57BL / 6 fareleri (MUC1.Tg ve yabani tip) 3.0 mg / gün dozunda kanserojen N-bütil-N-(4-hidroksibutil) nitrozamin (OH-BBN) ile oral olarak tedavi edildi, 5 gün / haftada teşvik etmek için 12 hafta boyunca. Tümör gelişimi sırasında sitokin profili üzerinde, OH-BBN etkilerini değerlendirmek için, tam kan submandibuler tedavi öncesinde kanamaları ve her dört haftada ile toplanmıştır. Buna ek olarak, MUC1 hedefli bir peptid, aşı ve plasebo sekiz hafta boyunca haftalık fareler gruplara uygulandı. Tümör gelişimi ve aşağıdaki aşılama sırasında serum sitokin Multiplex florometrik microbead immunoanalyses yapıldı. Çıkışta, interferon gamma (IFN-γ) / MUC1 spesifik T-hücresi bağışıklık tepkisi ve tümör Çeşidi histopatolojik değerlendirme için interlökin-4 (IL-4) ELISPOT analizive sınıf yapıldı. Sonuçlar göstermiştir ki: (1) MUC1.Tg ve vahşi hem tip farelerde mesane kanseri insidansı% 67 idi, (2) 2:1 oranında geliştirilen geçiş hücreli karsinom (TCC) skuamöz hücreli karsinom (SCC) ile karşılaştırıldığında , (3), inflamatuvar sitokinlerin tümör gelişimi sırasında zamanla arttığı ve (4) peptid aşılama, Th1-polarize sitokin profili ve bir MUC1 spesifik T-hücresi tepkisi indükler. MUC1.Tg farenin tüm tümörlerde MUC1 ifadesi için pozitiftir ve MUC1.Tg ve vahşi tip farelerde tüm tümörlerin yaklaşık yarısı invaziv. Sonuç olarak, farmakolog, immünologlar, patologlar ve moleküler biyologların çabalarının koordinasyonu ile bir ekip yaklaşımı kullanarak, biz hMUC1 ifade mesane kanseri bağışıklık sağlam transgenik fare modeli geliştirdik.

Mesane kanserinde yeni immünoterapi ve kombinasyonları etkilerinin klinik öncesi değerlendirme uygun bir hayvan modelinin geliştirilmesi gerekir. Bizim transgenik fare modelinde, kimyasal kanserojen OH-BBN ile indüksiyon insanlarda mesane kanseri benzer bazı SCC, ağırlıklı olarak TTK mesane kanseri insidansı yüksek oranda sonuçlandı. Tümörün tipi, MUC1 ifadesi durumu ve peptid aşı tedavisi için bağışıklık yanıtı belirlemek için, 21 ve 18 MUC1.Tg vahşi tip farenin OH-BBN indüksiyon sonrası...

Watch this Scientific Journal Video about Induction of Invasive Transitional Cell Bladder Carcinoma in Immune Intact Human MUC1 Transgenic Mice:  A Model for Immunotherapy Development at JoVE.com

Induction of Invasive Transitional Cell Bladder Carcinoma in Immune Intact Human MUC1 Transgenic Mice:  A Model for Immunotherapy Development

Bir N-bütil-N-(4-hidroksibutil) nitrozamin bağımlı mesane kanseri modelinde insan müsin 1 (MUC1), test amacıyla MUC1 yönlendirilmiş immünoterapi için transgenik farenin olarak geliştirilmiştir. Bir MUC1 hedefli bir peptid aşının sonra, MUC1 bir sitotoksik T-lenfosit yanıt sitokin seviyeleri ve T-hücresi spesifik aktivitesi ölçülerek teyit edilmiştir.

Bağışıklık Sağlam İnsan MUC1 Transgenik Farelerde İnvaziv Geçici Hücre Mesane Karsinomu indüksiyon: immünoterapi Kalkınma İçin Bir Model

A preclinical model of invasive bladder cancer was developed in human mucin 1 (MUC1) transgenic (MUC1.Tg) mice for the purpose of evaluating immunotherapy ...

induction-invasive-transitional-cell-bladder-carcinoma-immune-intact

Research

JoVE Journal

Medicine

21.1K Görüntüleme.  University of California, Davis. Bir N-bütil-N-(4-hidroksibutil) nitrozamin bağımlı mesane kanseri modelinde insan müsin 1 (MUC1), test amacıyla MUC1 yönlendirilmiş immünoterapi için transgenik farenin olarak geliştirilmiştir. Bir MUC1 hedefli bir peptid aşının sonra, MUC1 bir sitotoksik T-lenfosit yanıt sitokin seviyeleri ve T-hücresi spesifik aktivitesi ölçülerek teyit edilmiştir.

Video: Induction of Invasive Transitional Cell Bladder Carcinoma in Immune Intact Human MUC1 Transgenic Mice:  A Model for Immunotherapy Development

Establishment and Propagation of Human Retinoblastoma Tumors in Immune Deficient Mice

Culturing retinoblastoma tumor cells in defined stem cell media gives rise to primary tumorspheres that can be grown and maintained for only a limited time. These cultured tumorspheres may exhibit markedly different cellular phenotypes when compared to the original tumors. Demonstration that cultured cells have the capability of forming new tumors is important to ensure that cultured cells model the biology of the original tumor. 
Here we present a protocol for propagating human retinoblastoma tumors in vivo using Rag2-/- immune deficient mice. Cultured human retinoblastoma tumorspheres of low passage or cells obtained from freshly harvested human retinoblastoma tumors injected directly into the vitreous cavity of murine eyes form tumors within 2-4 weeks. These tumors can be harvested and either further passaged into murine eyes in vivo or grown as tumorspheres in vitro. Propagation has been successfully carried out for at least three passages thus establishing a continuing source of human retinoblastoma tissue for further experimentation. 
Wesley S. Bond and Lalita Wadhwa are co-first authors.

A method is described to propagate human retinoblastoma tumors in mice. Tumor cells are directly injected into the eyes of immune deficient mice. Secondary tumors have been successfully established using both cells directly harvested from human tumors and cultured tumorspheres.

Bağışıklık Eksik Fare Kuruluş ve İnsan Retinoblastom Tümörler yayılımı

Culturing retinoblastoma tumor cells in defined stem cell media gives rise to primary tumorspheres that can be grown and maintained for only a limited ...

Tıp

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient management strategies. Orthotopic mouse models of oral cancer have been developed to facilitate the study of factors that impact invasion and serve as model system for evaluating anti-tumor therapeutics. In these systems, visualization of disseminated tumor cells within oral cavity tissues has typically been conducted by either conventional histology or with in vivo bioluminescent methods. A primary drawback of these techniques is the inherent inability to accurately visualize and quantify early tumor cell invasion arising from the primary site in three dimensions. Here we describe a protocol that combines an established model for squamous cell carcinoma of the tongue (SCOT) with two-photon imaging to allow multi-vectorial visualization of lingual tumor spread. The OSC-19 head and neck tumor cell line was stably engineered to express the F-actin binding peptide LifeAct fused to the mCherry fluorescent protein (LifeAct-mCherry). Fox1nu/nu mice injected with these cells reliably form tumors that allow the tongue to be visualized by ex-vivo application of two-photon microscopy. This technique allows for the orthotopic visualization of the tumor mass and locally invading cells in excised tongues without disruption of the regional tumor microenvironment. In addition, this system allows for the quantification of tumor cell invasion by calculating distances that invaded cells move from the primary tumor site. Overall this procedure provides an enhanced model system for analyzing factors that contribute to SCOT invasion and therapeutic treatments tailored to prevent local invasion and distant metastatic spread. This method also has the potential to be ultimately combined with other imaging modalities in an in vivo setting.

A comprehensive overview of the techniques involved in generating a mouse model of oral cancer and quantitative monitoring of tumor invasion within the tongue through multi-photon microscopy of labeled cells is presented. This system can serve as a useful platform for the molecular assessment and drug efficacy of anti-invasive compounds.

Oral Skuamöz Hücre Karsinomu Ortotopik Fare Modeli Tümör Hücre Invasion Multi-foton Görüntüleme

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

Protocol for Long Duration Whole Body Hyperthermia in Mice

Hyperthermia is a general term used to define the increase in core body temperature above normal. It is often used to describe the increased core body temperature that is observed during fever. The use of hyperthermia as an adjuvant has emerged as a promising procedure for tumor regression in the field of cancer biology. For this purpose, the most important requirement is to have reliable and uniform heating protocols. We have developed a protocol for hyperthermia (whole body) in mice. In this protocol, animals are exposed to cycles of hyperthermia for 90 min followed by a rest period of 15 min. During this period mice have easy access to food and water. High body temperature spikes in the mice during first few hyperthermia exposure cycles are prevented by immobilizing the animal. Additionally, normal saline is administered in first few cycles to minimize the effects of dehydration. This protocol can simulate fever like conditions in mice up to 12-24 hr. We have used 8-12 weeks old BALB/Cj female mice to demonstrate the protocol.

This paper describes a protocol for whole body hyperthermia in mice that can stimulate fever like conditions up to 12-24 hr.

Farelerde Uzun Süre Whole Body Hipertermi için protokol

Hyperthermia is a general term used to define the increase in core body temperature above normal. It is often used to describe the increased core body ...

The Use of Cystometry in Small Rodents: A Study of Bladder Chemosensation

The lower urinary tract (LUT) functions as a dynamic reservoir that is able to store urine and to efficiently expel it at a convenient time. While storing urine, however, the bladder is exposed for prolonged periods to waste products. By acting as a tight barrier, the epithelial lining of the LUT, the urothelium, avoids re-absorption of harmful substances. Moreover, noxious chemicals stimulate the bladder's nociceptive innervation and initiate voiding contractions that expel the bladder's contents. Interestingly, the bladder's sensitivity to noxious chemicals has been used successfully in clinical practice, by intravesically infusing the TRPV1 agonist capsaicin to treat neurogenic bladder overactivity1. This underscores the advantage of viewing the bladder as a chemosensory organ and prompts for further clinical research. However, ethical issues severely limit the possibilities to perform, in human subjects, the invasive measurements that are necessary to unravel the molecular bases of LUT clinical pharmacology. A way to overcome this limitation is the use of several animal models2. Here we describe the implementation of cystometry in mice and rats, a technique that allows measuring the intravesical pressure in conditions of controlled bladder perfusion.
	After laparotomy, a catheter is implanted in the bladder dome and tunneled subcutaneously to the interscapular region. Then the bladder can be filled at a controlled rate, while the urethra is left free for micturition. During the repetitive cycles of filling and voiding, intravesical pressure can be measured via the implanted catheter. As such, the pressure changes can be quantified and analyzed. Moreover, simultaneous measurement of the voided volume allows distinguishing voiding contractions from non-voiding contractions3.
	Importantly, due to the differences in micturition control between rodents and humans, cystometric measurements in these animals have only limited translational value4. Nevertheless, they are quite instrumental in the study of bladder pathophysiology and pharmacology in experimental pre-clinical settings. Recent research using this technique has revealed the key role of novel molecular players in the mechano- and chemo-sensory properties of the bladder.

Cystometry is an efficient technique to measure bladder function of small animals in vivo. The bladder is continuously infused at rates controlled through an intravesical catheter, whereas the urethra is left free for micturition. This allows for repetitive filling and emptying of the bladder, while intravesical pressure and voided volume are recorded.

Küçük Kemirgenler sistometri ve Kullanımı: Mesane Chemosensation Çalışması

	The lower urinary tract (LUT) functions as a  dynamic reservoir that is able to store urine and to efficiently expel it at a  convenient time. While ...

Generation of Subcutaneous and Intrahepatic Human Hepatocellular Carcinoma Xenografts in Immunodeficient Mice

In vivo experimental models of hepatocellular carcinoma (HCC) that recapitulate the human disease provide a valuable platform for research into disease pathophysiology and for the preclinical evaluation of novel therapies. We present a variety of methods to generate subcutaneous or orthotopic human HCC xenografts in immunodeficient mice that could be utilized in a variety of research applications. With a focus on the use of primary tumor tissue from patients undergoing surgical resection as a starting point, we describe the preparation of cell suspensions or tumor fragments for xenografting. We describe specific techniques to xenograft these tissues i) subcutaneously; or ii) intrahepatically, either by direct implantation of tumor cells or fragments into the liver, or indirectly by injection of cells into the mouse spleen. We also describe the use of partial resection of the native mouse liver at the time of xenografting as a strategy to induce a state of active liver regeneration in the recipient mouse that may facilitate the intrahepatic engraftment of primary human tumor cells. The expected results of these techniques are illustrated. The protocols described have been validated using primary human HCC samples and xenografts, which typically perform less robustly than the well-established human HCC cell lines that are widely used and frequently cited in the literature. In comparison with cell lines, we discuss factors which may contribute to the relatively low chance of primary HCC engraftment in xenotransplantation models and comment on technical issues that may influence the kinetics of xenograft growth. We also suggest methods that should be applied to ensure that xenografts obtained accurately resemble parent HCC tissues.

Human tumor xenografts in immunodeficient mice are valuable tools to study cancer biology. Specific protocols to generate subcutaneous and intrahepatic xenografts from human hepatocellular carcinoma cells or tumor fragments are described. Liver regeneration induced by partial hepatectomy in recipient mice is presented as a strategy to facilitate intrahepatic engraftment.

Bağışıklık yetersizliği olan farelere subkutan olarak ve intrahepatik insan hepatoselüler karsinoma ksenograftlarının Üretimi

In  vivo experimental models of hepatocellular carcinoma (HCC) that recapitulate  the human disease provide a valuable platform for research into disease  ...

Urinary Bladder Distention Evoked Visceromotor Responses as a Model for Bladder Pain in Mice

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition characterized by increased urgency and frequency of urination, as well as nocturia and general pelvic pain, especially upon bladder filling or voiding. Despite years of research, the cause of IC/BPS remains elusive and treatment strategies are unable to provide complete relief to patients. In order to study nervous system contributions to the condition, many animal models have been developed to mimic the pain and symptoms associated with IC/BPS. One such murine model is urinary bladder distension (UBD). In this model, compressed air of a specific pressure is delivered to the bladder of a lightly anesthetized animal over a set period of time. Throughout the procedure, wires in the superior oblique abdominal muscles record electrical activity from the muscle. This activity is known as the visceromotor response (VMR) and is a reliable and reproducible measure of nociception. Here, we describe the steps necessary to perform this technique in mice including surgical manipulations, physiological recording, and data analysis. With the use of this model, the coordination between primary sensory neurons, spinal cord secondary afferents, and higher central nervous system areas involved in bladder pain can be unraveled. This basic science knowledge can then be clinically translated to treat patients suffering from IC/BPS.

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition characterized in part by pelvic pain. In order to study nervous system contributions to the condition, a physiological model of urinary bladder pain is used in mice and rats.

Farelerde Mesane Ağrı için bir model olarak Mesane Distansiyonunun Uyarılmış Visceromotor Cevapları

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition ...

Facial Nerve Axotomy in Mice: A Model to Study Motoneuron Response to Injury

The goal of this surgical protocol is to expose the facial nerve, which innervates the facial musculature, at its exit from the stylomastoid foramen and either cut or crush it to induce peripheral nerve injury. Advantages of this surgery are its simplicity, high reproducibility, and the lack of effect on vital functions or mobility from the subsequent facial paralysis, thus resulting in a relatively mild surgical outcome compared to other nerve injury models. A major advantage of using a cranial nerve injury model is that the motoneurons reside in a relatively homogenous population in the facial motor nucleus in the pons, simplifying the study of the motoneuron cell bodies. Because of the symmetrical nature of facial nerve innervation and the lack of crosstalk between the facial motor nuclei, the operation can be performed unilaterally with the unaxotomized side serving as a paired internal control. A variety of analyses can be performed postoperatively to assess the physiologic response, details of which are beyond the scope of this article. For example, recovery of muscle function can serve as a behavioral marker for reinnervation, or the motoneurons can be quantified to measure cell survival. Additionally, the motoneurons can be accurately captured using laser microdissection for molecular analysis. Because the facial nerve axotomy is minimally invasive and well tolerated, it can be utilized on a wide variety of genetically modified mice. Also, this surgery model can be used to analyze the effectiveness of peripheral nerve injury treatments. Facial nerve injury provides a means for investigating not only motoneurons, but also the responses of the central and peripheral glial microenvironment, immune system, and target musculature. The facial nerve injury model is a widely accepted peripheral nerve injury model that serves as a powerful tool for studying nerve injury and regeneration.

We present a surgical protocol detailing how to perform a cut or crush axotomy on the facial nerve in the mouse. The facial nerve axotomy can be employed to study the physiological response to nerve injury and test therapeutic techniques.

Farelerde Yüz Sinir Aksotomi: Sakatlık Motonöron Yanıtı Eğitim için Bir Model

The goal of this surgical protocol is to expose the facial nerve, which innervates the facial musculature, at its exit from the stylomastoid foramen and ...

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The "Wire-Injury" Model

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. Moreover, by rupture of the defective vascular wall, atherosclerosis induces occlusive thrombus formation, which represents the main cause of myocardial infarction or stroke and the most frequent cause of death. Despite the advances in the cardiovascular field, many questions remain unanswered, and additional basic research is essential to improve our understanding of the molecular mechanisms during atherosclerosis and its effects. Due to limited clinical studies, there is a need for representative animal models recreating atherosclerotic conditions such as neointima formation after stent implantation, balloon angioplasty, or endarterectomy. Since the mouse presents many advantages and is the most frequently used model for studying molecular processes, the current study proposes an invasive procedure of endothelial denudation, also known as the wire-injury model, which is representative of the human condition of neointima formation in arteries after revascularization procedures.

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The &quot;Wire-Injury&quot; Model

This study describes an invasive procedure for the induction of accelerated atherosclerosis in mice. In comparison to other methods using electric- or cryo-induced injury, mechanical-induced injury mimics the human condition of restenosis after revascularization therapies and is ideal for the study of the molecular mechanisms involved.

Farelerde Hızlandırılmış Ateroskleroz Indüksiyonu: "Tel-Yaralanma" Modeli

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. ...

Technique of Minimally Invasive Transverse Aortic Constriction in Mice for Induction of Left Ventricular Hypertrophy

Transverse aortic constriction (TAC) in mice is one of the most commonly used surgical techniques for experimental investigation of pressure overload-induced left ventricular hypertrophy (LVH) and its progression to heart failure. In the majority of the reported investigations, this procedure is performed with intubation and ventilation of the animal which renders it demanding and time-consuming and adds to the surgical burden to the animal. The aim of this protocol is to describe a simplified technique of minimally invasive TAC without intubation and ventilation of mice. Critical steps of the technique are emphasized in order to achieve low mortality and high efficiency in inducing LVH.
Male C57BL/6 mice (10-week-old, 25-30 g, n=60) were anesthetized with a single intraperitoneal injection of a mixture of ketamine and xylazine. In a spontaneously breathing animal following a 3-4 mm upper partial sternotomy, a segment of 6/0 silk suture threaded through the eye of a ligation aid was passed under the aortic arch and tied over a blunted 27-gauge needle. Sham-operated animals underwent the same surgical preparation but without aortic constriction. The efficacy of the procedure in inducing LVH is attested by a significant increase in the heart/body weight ratio. This ratio is obtained at days 3, 7, 14 and 28 after surgery (n = 6 - 10 in each group and each time point). Using our technique, LVH is observed in TAC compared to sham animals from day 7 through day 28. Operative and late (over 28 days) mortalities are both very low at 1.7%.
In conclusion, our cost-effective technique of minimally invasive TAC in mice carries very low operative and post-operative mortalities and is highly efficient in inducing LVH. It simplifies the operative procedure and reduces the strain put on the animal. It can be easily performed by following the critical steps described in this protocol.

The aim of this protocol is to describe step-by-step the technique of minimally invasive transverse aortic constriction (TAC) in mice. By elimination of intubation and ventilation which are mandatory for the commonly used standard procedure, minimally invasive TAC simplifies the operative procedure and reduces the strain put on the animal.

Minimal invaziv transvers aort daralma farelerde sol ventrikül hipertrofisi indüksiyon için tekniği

Transverse aortic constriction (TAC) in mice is one of the most commonly used surgical techniques for experimental investigation of pressure ...

A Minimally Invasive Model to Analyze Endochondral Fracture Healing in Mice Under Standardized Biomechanical Conditions

Bone healing models are necessary to analyze the complex mechanisms of fracture healing to improve clinical fracture treatment. During the last decade, an increased use of mouse models in orthopedic research was noted, most probably because mouse models offer a large number of genetically-modified strains and special antibodies for the analysis of molecular mechanisms of fracture healing. To control the biomechanical conditions, well-characterized osteosynthesis techniques are mandatory, also in mice. Here, we report on the design and use of a closed bone healing model to stabilize femur fractures in mice. The intramedullary screw, made of medical-grade stainless steel, provides through fracture compression an axial and rotational stability compared to the mostly used simple intramedullary pins, which show a complete lack of axial and rotational stability. The stability achieved by the intramedullary screw allows the analysis of endochondral healing. A large amount of callus tissue, received after stabilization with the screw, offers ideal conditions to harvest tissue for biochemical and molecular analyses. A further advantage of the use of the screw is the fact that the screw can be inserted into the femur with a minimally invasive technique without inducing damage to the soft tissue. In conclusion, the screw is a unique implant that can ideally be used in closed fracture healing models offering standardized biomechanical conditions.

This protocol describes a minimally invasive osteosynthesis technique using an intramedullary screw for standardized stabilization of femur fractures, which can be used to analyze endochondral bone healing in mice.

Endochondral standart biyomekanik koşullar altında farelerde şifa kırık çözümlemek için minimal invaziv bir Model

Bone healing models are necessary to analyze the complex mechanisms of fracture healing to improve clinical fracture treatment. During the last decade, an ...